液相色谱-质谱联用技术及使用注意事项

高效液相色谱-质谱（多级）联用技术及应用任三香（中山大学测试中心广州 510275）众所周知，色谱是一种分离复杂混合物的很好手段,而气相色谱-质谱联用仪由于它集分离与定性快速一气呵成及价廉的优点在应用范围广泛的分析检测行业中占质谱拥有量的50% 以上。

但是，气-质联用对样品的要求是来样必须在色谱柱能承受的温度下汽化，对于热不稳定的化合物及汽化不了的样品就得依靠其它分析手段来完成。

在攻克液相色谱与质谱联机接口技术后，应运生产的高效液相色谱-质谱（多级）联用仪作为90年代推出的商品仪器已逐步进入质谱界，并得到迅速发展，成为科研和诸多分析行业的有力工具，扩展了质谱仪分析化合物的范围，可谓当今质谱界最为新颖及活跃的领域。

本文将简要介绍高效液相色谱-质谱（high performance liquid chromatography-mass spectrometry简称HPLC/MS）（包括多级即MS n）联机新技术及应用。

1 高效液相色谱-质谱（多级）联用技术高效液相色谱-质谱（多级）联用仪的在线使用首先要解决的问题是真空的匹配。

质谱工作需在高真空下完成，要与常压下工作的高效液相色谱（即大量流动相的涌入）-质谱接口相匹配并维持足够的真空，只能采取增大真空泵的抽速，分段、多级抽真空的方法，形成真空梯度来满足接口和质谱正常工作的要求。

现有的商品仪器多采用该方法。

在此主要介绍以下二种电离方式：1．电喷雾(Electrospray Ionisation简称 ESI)：其电离过程是“离子雾化”。

当样品溶液流出毛细管的瞬间，在加热温度、雾化气（N2）和强电场（3-5kV）的作用下溶剂迅速雾化并产生高电荷液滴。

随着液滴的挥发，电场增强，离子向表面移动并从表面挥发，产生单电荷或多电荷离子。

通常小分子得到[M+H]+或[M-H]-单电荷离子。

而生物大分子产生Z>1的多电荷离子。

由于质谱仪测量的是质量电荷比（m/Z）。

液相色谱／质谱联用技术李立军色谱是快速灵敏分离有机物的有效手段，各种检测器中，除了应用最广泛的 FID（GC）和UV（LC）外，质谱（MS）尽管价格较昂贵，但是其选择性、灵敏度、分子量及结构信息等优势，已被公认为高级的通用型检测器，把它与各种分离手段联用，将定性、定量结果有机地结合在一起，一直是人们所研究的目标。

GC／MS在我国已有 20多年的应用历史，随着台式小型仪器迅速增长，在色谱研究中已经成为重要的手段，气相色谱质谱技术成熟运用至今，人们越来越不满足仅仅分析那些具有挥发性和低分子量的化合物，面对日益增加的大分子量（特别是蛋白，多肽等）和不挥发化合物的分析任务，迫切需要用液相色谱／质谱联用解决实际间题。

与气相色谱相比，液相色谱的分离能力有着不可比拟的优势，液相色谱／质谱联用技术为人们认识和改造自然提供了强有力的工具。

HPLC可以直接分离难挥发、大分子、强极性及热稳定性差的化合物，LC ／MS联机曾长期为分析界所期待，由于LC流动相与MS传统电离源的高真空难以相容，还要在温和的条件下使样品带上电荷而样品本身不分解，大量的样品不得不采取脱机方式 MS 鉴定，或制成衍生物用 GC／MS分析。

经过努力相继出现了多种液相色谱／质谱联用接口，实现了液相色谱／质谱的联用。

特别是大气压电离质谱（APIMS）的实现为 LC／MS的兼容创造了机会，商品化的小型 LC／MS作为成熟的常规分析仪器在九十年代已经在生物医药实验室发挥着重要的作用。

一．液相色谱／质谱联用适用范围液相色谱／质谱联用的基本流程为：混合的样品经高效液相色谱柱分离后成为多个单一组分，依次通过液相色谱／质谱接口进入质谱仪的离子源，离子化后的样品经过质量分析器分析后由检测系统记录，后经数据系统采集处理，得到带有结构信息的质谱图。

图1 液相色谱／质谱联用的基本流程首先看看气相色谱／质谱联用的特点：·要求样品气化后进入质谱仪·用电子轰击方式（EI）得到的谱图，可与标准谱库对比·用毛细管色谱柱分离化合物，分高效率高·操作条件稳定、使用方法成熟·适宜分析小分子、易挥发、热稳定的化合物液相色谱／质谱联用主要可解决如下几方面的问题：①不挥发性化合物分析测定；②极性化合物的分析测定；③热不稳定化合物的分析测定；④大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多糖、多聚物等）的分析测定；附图清楚地表明了各种接口技术的适用范围。

液相色谱质谱仪安全操作及保养规程液相色谱质谱仪（LC-MS）是一种高档的分析仪器设备，其功能主要是将液相色谱与质谱相结合，能够对样品的组成及结构进行快速、准确的分析。

本文主要介绍液相色谱质谱仪的安全操作和保养规程，以确保仪器的顺畅运行和长期使用。

操作安全1.安全指南在使用液相色谱质谱仪之前，用户必须熟知仪器的安全指南，确保自己的安全和设备的安全。

安全指南通常包括以下内容：•工作场所应清洁、通风良好，无任何杂物；•操作前需要注意静电防护；•在操作过程中，用户应当严格遵守操作步骤，不要随意更改设备的工作状态；•操作过程中不要摆放任何易燃、易爆、有毒、有害物品；•已使用的化学试剂及设备必须正确处理。

2.实验室涉及的安全标识为保证实验室的安全，用户必须熟知实验室内涉及的安全标识。

液相色谱质谱仪实验室通常包括以下安全标识：•电源开关；•高压开关及指示灯；•消防灭火器及应急电话等。

保养规程1.日常维护•屏幕及键盘：每天用干净柔软的布擦拭，防止灰尘与污垢积累；•列管和积分器：应该定期清洗，以免样品残留而污染设备和传感器；•柱温箱：应该定期清洗，并且使用干的清洗布将柱温箱干燥，以免产生水分影响设备；•电脑主机：需要定期清理灰尘，以保持通风良好；•定期检查冷却水的水质和水量，以免反应器过热。

2.工作结束后的清理和保养•清洗并干燥积分器，以免样品残留影响使用；•清理槽内残留的试剂；•将标准品及样品浓缩得到的溶液和残留杂质处理掉，以免污染液相色谱质谱仪；•关闭电源等设备，避免设备过热及短路。

总结液相色谱质谱仪的安全操作和保养规程能够保证设备的顺畅运行，延长其使用寿命。

用户在使用设备之前，必须认真了解安全指南和实验室内涉及的安全标识，以确保自己的安全。

用户还必须按照规程进行日常维护，及时清理设备，确保设备的正常运行。

总之，正确的操作和日常维护，加上仪器的定期检查，都有助于仪器的长期安全运行。

液相⾊谱-质谱联⽤（LC-MS）使⽤指南及注意事项液相⾊谱-质谱联⽤（LC-MS）使⽤指南及注意事项⾼洁⽣物站A308 仪器型号: 岛津LCMS-20201.开机1.1 开机前准备确认氮⽓畅通，液氮罐GAS出⼝压⼒表指针在0.7~0.8MPa之间。

压⼒不够时，将其对⾯的增压阀拧⼤，使压⼒达到要求，若压⼒还不够，说明需要更换液氮。

确认流动相溶剂瓶内液体够⽤（流动相A-娃哈哈⼩瓶装纯净⽔，B为⼄腈，分别加千分之零点三五的HPLC级三氟⼄酸），液⾯要没过吸滤头。

打开UV检测器箱门，将三通与质谱分流接头连接。

1.2 开机过程开机顺序为1 2 3 4 5 6，关机顺序为6 5 4 3 2 1。

1.3 打开电脑之后打开分析程序。

将MS配置到程序中。

⽅法如下：Main→System Configuration→LCMS→上⽅蓝箭头→OK听到“滴”⼀声后，页⾯显⽰液相与质谱绿⾊ready状态，说明LC与MS均与程序连接良好。

2.1样品准备浓度：0.1 mg/ml 左右溶剂：流动相（⼄腈⽔甲醇），若以上均不溶，⽤少量DMSO溶解再稀释到以上溶剂中过滤膜！！样品瓶要确保⽆尘2.2仪器准备打开之前设定好的Method File→Download（⽬的是将仪器参数从程序配置到仪器） ?如果刚刚开机的话，各个部件还未预热，需要把各个部件打开。

打开顺序为：1234567（7打开后8和9⾃动打开）1）如果⽅法中的分⼦量扫描范围不是你需要的，重新设置：在下图中，Scan（+）Scan（-）分别为正负离⼦扫描设置。

扫描速度=扫描范围/ 扫描周期，扫描速度在1000u/second 左右⽐较好，所以改变扫描范围之后，要相应地改变扫描周期，使扫描速度在1000左右。

扫描范围为m/z 50-2000，⼀般设置100以上起始，因为溶剂中100以下⼩分⼦杂质较多，终⽌分⼦量⼀般为⽬标分⼦量的⼆倍稍⾼。

2）LC洗脱程序设置，设置⽅法与HPLC相似。

VARIAN 液相色谱色谱-质谱联用仪操作规程
一、仪器准备
1.打开氮气确证压力为0.7MPa；打开氩气减压阀确证压力0.05MPa；
2. 打开液相色谱各个模块电源，打开电脑，双击桌面上的
Workstation Toolbar 图标，激活工作站工具栏；双击system
control进入仪器控制界面，等待联机和自检。

3. 开启真空泵，察看真空度，确保真空度达到1×10-6以上。

二、设定色相色谱、质谱条件
点击WorkStation 工具栏上View/Edit Methods 图标，编辑或激活一个采集方法，包括HPLC 参数和MS 相关参数，不同样品，该参数各不相同，具体包括：色谱柱(2.1×150mm,3μm，柱温，流速，进样量，流动相；离子源，扫描方式，喷雾针电压，筛板电压，雾化气温度及压力，干燥气温度及压力，碰撞气压力，检测电压，扫描范围。

三、样品测定
在主控界面下点击Acquisition，在进入数据收集窗口。

点击Active a Method，激活分析方法。

点击File-New Sample List，新建样品分析列表。

待System Control 界面出现Waiting 后，按Begin 键，开始自动采集数据。

四、关机及注意事项
关闭液相色谱所有模块电源；关闭氮气和氩气减压阀及钢瓶阀门
流动相2-3天更换一次；测试样品必须用流动相溶样；用
0.22μm样品过滤膜过滤。

液相色谱与质谱联用操作规程1开机步骤1.1 分别打开质谱、液相色谱和电脑电源，此时质谱内置的CPU会通过网线与电脑主机建立通讯联系，这个时间大约需要1至2分钟。

1.2待液相色谱通过自检，进入Idle状态，依照液相色谱操作程序，依次进行操作。

a.Degasser On(打开脱气机)。

b.Wet Prime(湿灌注)。

c.Purge Injector。

d.平衡色谱柱。

1.3双击桌面上的MassLynx 4.1图标进入质谱软件。

如果进入软件时出现提示：“The embedded system is not responding, The system will run in standalone mode”，则说明质谱内置的CPU（EPC）与电脑主机的通讯联系还未建立，请稍等后再进入软件，如果打开软件仅为处理数据则没有关系（质谱主机电源未开时进入软件也会有同样提示）。

1.4点击质谱调谐图标（MS Tune）进入质谱调谐窗口。

1.5选择菜单“Options > Pump”，这时机械泵将开始工作，同时分子涡轮泵会开始抽真空。

等达到真空要求后，仪器前面板右上角的状态灯“Vacuum”将变绿。

1.6点击真空状态图标，检查真空规的状态，确认真空达到要求。

1.7确认氮气气源输出已经打开，输出压力为90 psi。

1.8设置源温度（Source Temp）到目标温度。

2.质谱调谐窗口各项参数设定2.1大气压化学电离源（APCI）2.2.1在质谱调谐窗口选择要使用的离子模式，Ion Mode>APCI+。

2.2.2进入Source界面，设定Source界面里各项参数。

Corona 高压放电针电流，正离子模式一般在0－10之间优化，负离子模式一般在0－5之间优化。

Source Temp 源温度，一般在120℃－150℃之间优化。

APCI Probe Temp APCI加热器温度，一般在300℃－600℃之间优化。

高效液相色谱质谱联用仪使用说明书一、产品概述高效液相色谱质谱联用仪（以下简称LC-MS/MS）是一种用于分析和检测样品中化合物的仪器。

其基本原理是将样品经过高效液相色谱分离后，再通过质谱进行定性和定量分析，以实现对复杂样品的快速、高灵敏度的检测。

二、安装与调试1. 确保LC-MS/MS仪器平稳放置在水平台面上，并与电源连接。

2. 连接色谱泵、进样器、柱温箱和质谱仪等相关部件，确保连接不松动。

3. 检查气源供应是否稳定，并根据实际情况调整气流流量。

4. 打开仪器电源并按照说明书的步骤进行调试，确保仪器各部件正常工作。

三、仪器操作1. 打开LC-MS/MS软件，在仪器连接界面选择相应的设备并连接。

2. 启动色谱泵和进样器，并设置相关参数，如流速、样品进样体积等。

3. 设置柱温箱温度，并等待温度稳定。

4. 运行质谱仪，设置离子源温度、离子源极性等参数，并选择合适的离子化模式。

5. 在软件界面上设定分析方法，包括色谱梯度程序、离子扫描范围、碰撞能量等。

6. 进行样品进样，并开始运行分析方法。

7. 分析结束后，关闭仪器设备，保存相关数据和设定信息。

四、维护与保养1. 每天检查色谱泵、进样器、柱温箱等部件的连接是否松动，如有松动及时紧固。

2. 每周对色谱柱进行检查和保养，根据使用情况进行废弃柱更换。

3. 定期对离子源进行清洗和校准，确保质谱仪的灵敏度和稳定性。

4. 定期进行仪器的保养和维护，如更换气源过滤器、检查电源线等。

5. 注意将仪器放置在稳定的环境中，避免受到振动和温度波动的影响。

五、故障排除1. 如遇到设备故障，请先检查电源、连接线和气源是否正常。

2. 根据故障代码或警报信息，在说明书或技术支持中心查找相应的解决方案。

3. 如果无法解决故障，请联系售后服务中心进行维修或更换故障零部件。

六、安全注意事项1. 仪器操作应在专业人员指导下进行，严禁非专业人士操作。

2. 在使用仪器时，应佩戴适当的个人防护设备，如实验手套、护目镜等。

高效液相色谱质谱联用仪操作说明书一、仪器介绍高效液相色谱质谱联用仪是一种先进的分析仪器，结合了高效液相色谱和质谱技术，广泛应用于药学、环境分析、食品安全等领域。

本操作说明书将详细介绍该仪器的操作流程和注意事项，以确保用户正确、安全地操作仪器。

二、操作流程1. 启动仪器a. 根据仪器的启动标准操作程序，打开主机电源。

b. 打开联用仪软件，确保软件与仪器的连接稳定。

c. 检查仪器的液氮供应，确保冷却系统工作正常。

2. 样品准备a. 准备需要分析的样品，并进行适当的处理，如提取、稀释等。

b. 将样品注射器与进样口连接，并固定好，确保密封良好。

3. 设置分析方法a. 在联用仪软件中选择或创建适当的分析方法，包括色谱柱类型、流动相组成、进样量等参数。

b. 在软件中设置质谱仪的工作条件，如离子源温度、离子化方式等。

4. 运行分析a. 在进样器中注入待测样品，保持注射器处于关闭状态。

b. 在软件中点击运行按钮，启动仪器运行分析程序。

c. 观察仪器的运行情况，确保色谱和质谱系统正常工作。

d. 根据需要，可以对运行过程中的一些参数进行调整，如温度、流速等。

5. 数据处理a. 分析结果将会在软件中自动显示，可以进行数据处理和分析。

b. 根据需要，可以导出数据报告或图表，用于进一步研究和报告撰写。

三、注意事项1. 操作前必须仔细阅读仪器的操作手册，并遵循相关安全规定。

2. 在使用仪器前，确保所有连接正确、固定，并检查系统中的密封件是否完好。

3. 在操作过程中注意个人防护，如佩戴实验手套、护目镜等。

4. 注意运用化学品和有毒试剂时的安全操作，并妥善处理废液和废品。

5. 定期检查仪器的运行状态和维护要求，确保仪器的长期稳定工作。

四、故障排除1. 若发现异常情况或仪器故障，立即停止使用，并按照操作手册中的故障排除指南进行处理。

2. 如无法解决故障，请联系仪器供应商或生产厂家的技术支持。

五、总结高效液相色谱质谱联用仪是一种非常有用的分析工具，能够提供高分辨率和高灵敏度的分析结果。