尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)

饲料中尿素含量的测定（非国标）——比色法一、适用范围本方法适用于动物饲料及其原料中尿素含量的测定二、原理由于对-二甲胺基苯甲醛（DMAB，Ehrilich’S试剂）与尿素可形成有颜色的复合物，并可用分光光度计在420nm处进行比色，以求出尿素的含量三、仪器与试剂1、分光光度计420nm，1cm吸收池本方法除特殊注明外，试剂均为分析纯，水为蒸馏水。

2、DMAB溶液溶解16g DMAB于1000mL甲醇中，再加入100mol/L盐酸，该溶液在1个月内是稳定的。

3、乙酸锌（Zn（Ac）2.2H2O）溶液称取22.0克乙酸锌溶于蒸馏水中，再加入3mL乙酸，然后稀释至100mL 。

4、亚铁氰化钾（K4Fe（CN）6.3H2O）溶液溶解10.6g 亚铁氰化钾于蒸馏水中，再稀释至100mL。

5、磷酸缓冲液（PH6—7.0）先分别溶解3.403g磷酸二氢钾和4.355g磷酸氢二钾100mL蒸馏水中，然后将两溶液合并在一起，再用水稀释至1000mL。

6、木炭Daroa G607、尿素标准溶液：称取5g（准确至1mg）尿素（试剂级）溶解于水，再稀释至1000mL作为储备液（5mg/mL）工作液：0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8和2.0尿素/5mL。

吸收储备液各2 4 6 8 10 12 14 16 18和20mL 分别置于250mL容量瓶中，并用磷酸盐缓冲溶液稀释至刻度。

8、参比溶液用含1.0mg尿素/5mL的标准溶液作为参比溶液。

如置于24℃以下环境，该参比溶液可稳定一周。

四、标准曲线的制备吸取不同浓度的尿素工作标准溶液5mL ，分别置于20mmX150mm（25mL）的比色管中，各加入5mL DMAB溶液。

另外，制备一空白对照液，即吸取5mL DMAB溶液和5mL磷酸缓冲液于25mL比色管中。

然后，将所有比色管轻轻充分摇动，并置于25℃水浴中放置10min。

然后，用空白对照调节吸光度0点。

脲酶的测定方法一、脲酶测定(比色法)脲酶是对尿素转化起关键作用的酶，它的酶促反应产物是可供植物利用的氮源，它的活性可以用来表示土壤供氮能力。

1、试剂配制：（1）pH6.7柠檬酸盐溶液：取368g柠檬酸溶于600mL蒸馏水中，另取295g 氢氧化钾溶于水，再将两种溶液合并，用1N氢氧化钠将pH调至6.7，并用水稀释至2L。

（2）苯酚钠溶液：称取62.5g苯酚溶于少量乙醇中，加2mL甲醇和18.5mL 丙酮，后用乙醇稀释至100mL（A液），保存再冰箱中。

称取27g氢氧化钠溶于100mL水中（B液），保存于冰箱中。

使用前，取A、B两液各20mL混和，并用蒸馏水稀释至100mL备用。

（3）次氯酸钠溶液：用水稀释制剂至活性氯的浓度为0.9％，（1.9g次氯酸钠溶于1L水中）溶液稳定。

（4）10％尿素溶液：10g尿素溶于100mL水中。

（5）N的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水稀释至1L，则得1mL 含0.1mgN的标液，再将此液稀释10倍制成氮工作液（0.01mg/mL）。

2、操作步骤称取5ｇ土置于50mL容量瓶中,加1mL甲苯处理,加塞塞紧轻摇15ｍｉｎ;往瓶中加入5mL10%尿素液和10mL的柠檬酸盐缓冲液(ｐＨ6.7),仔细混匀。

在37℃恒温箱中培养24ｈ。

然后用热至38℃的蒸馏水稀释至刻度(甲苯应浮在刻度以上),摇荡,将悬液过滤。

取滤液1mL置于50mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至10mL,然后加入4mL苯酚钠溶液,并立即加入3mL次氯酸钠溶液，加入每一试剂后,立即将混合物摇匀,20ｍｉｎ后,将混合物稀释至刻度,在波长578ｎｍ处测定吸光值。

脲酶活性以样品所得的吸光值减去对照样品吸光值之差,根据标准曲线求出氨态氮量。

标准曲线绘制：分别取0、1、3、5、7、9、11、13mL氮工作液置于50mL容量瓶中，加蒸馏水至20mL，再加4mL苯酚钠溶液和3mL次氯酸钠溶液，随加随摇匀，20min后显色，定容。

尿素（UREA）检测的标准操作程序一、目的规范在罗氏cobas c311生化分析仪上定量检测人血清、血浆中的尿素，确保检测结果的准确性及重复性。

二、范围检验科生化室检验人员。

三、该SOP变动程序本标准操作程序的改动可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准:专业组长，科室主任。

四、授权操作人检验科经过培训并被授权发报告的人员均可操作。

五、实验原理酶动力学法尿素 + H2O 尿酶 2NH+4+ CO22NH+4 + α-酮戊二酸 + NADH + H+ 谷氨酸脱氢酶 L-谷氨酸 + 2NAD+ + H2ONADH浓度降低的速率与样本中的BUN的浓度成正比，在340nm下进行检测。

六、标本1、标本类型：血清：使用标准取样试管或含分离胶的试管采集。

血浆：肝素、EDTA-K3 、枸橼酸钠或氟化钠/草酸钾抗凝均可。

2、样本稳定性：标本在2－8 度可稳定2 天，15－25度可稳定8小时，-20 度可稳定6 个月。

只能冻融一次。

七、仪器与试剂1、仪器：罗氏cobas c311生化分析仪2、试剂：罗氏原装配套尿素试剂，试剂无需任何处理，可直接使用3、试剂稳定性：未开封试剂盒按要求保存可稳定至有效期末，已开封试剂盒在仪器上可稳定8周八、校准1、校准物：S1:0.9%NaCl，S2:C.f.a.s(罗氏通用校准品，复溶后使用)。

2、校准方法：两点校准。

3、校准频率：每批试剂必须用新鲜试剂和校准一次。

另外，以下情况需要再次校准：校准过期:批校准稳定28天，盒校准7天。

九、操作程序1.每日开机准备：1.1仪器处于关机状态1.1.1检查供水、排水系统是否正常1.1.2接通仪器左侧电源开关, 以及电脑控制电脑的开关1.1.3登陆：输入用户名mjt及密码123，仪器初始化后进入待机状态1.2仪器处于休眠状态：1.2.1仪器在进入睡眠时指定的时间自动唤醒，或单击[[唤醒]]唤醒仪器；1.2.2系统退出睡眠状态至登录界面，输入用户名及密码，仪器初始化后进入待机状态。

两台不同生化分析系统检测结果的比对摘要目的：探讨同一实验室不同生化分析仪检测结果的一致性。

方法：用长征控制血清水平Ⅰ和病人新鲜血清分别在经过校正的两台生化仪器上检测血糖（GLU）、尿素(UREA)、淀粉酶(AMY)项目。

结果：这3个项目在两台不同生化分析系统间检测结果差异无显著性（P＞0.05）。

结论：东芝TBA-120FR全自动生化分析仪与威图Microlab300半自动生化分析仪经过校正，其检测结果具有较好的一致性和准确性，可满足临床需要。

关键词检测系统比对试验一致性在当今医疗技术和设备飞速发展的时代，许多医院检验科都配备多台生化分析仪，同一项目用不同的检测系统已是很普遍的现象。

我科白天生化项目在东芝TBA-120FR全自动生化分析仪上检测，晚上急诊标本在威图Microlab300半自动生化分析仪上检测，尤其是急诊血糖（GLU）、尿素（UREA）、淀粉酶（AMY）等项目，检测频率较高，为了避免检验结果差距大，给临床诊断带来影响，我们对这两台不同生化分析检测系统进行了血糖（GLU）、尿素（UREA）、淀粉酶（AMY）测定项目的比对试验分析，观察其准确度、精密度，并用相关系数及配对t检验进行简单统计学分析，验证它们之间的一致性。

实验材料仪器：东芝TBA-120FR全自动生化分析仪（以下简称系统1），威图Microlab300半自动生化分析仪（以下简称系统2）。

试剂：系统1：血糖(GLU)、尿素(UREA)、淀粉酶(AMY)为北京首医生物试剂。

系统2：血糖(GLU)、尿素(UREA)、淀粉酶(AMY)为四川迈克生物试剂。

测定方法：系统1：GLU检测方法为氧化酶终点法，UREA检测方法为谷氨酸脱氢酶两点法，AMY检测方法为动力学法。

系统2：GLU检测方法为葡萄糖氧化酶法（GOD-PAP），UREA检测方法为脲酶波氏法，AMY检测方法为碘-淀粉比色法。

校正血清：校正血清及控制血清水平Ⅰ均由上海复星长征生物公司提供。

尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)简介：尿素(Urea)又称碳酰胺(carbamide)，是哺乳动物和某些鱼类体内蛋白质代谢分解的主要含氮终产物，也是目前含氮量最高的氮肥。

尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)检测原理是尿素酶水解尿素，产生氨和二氧化碳，铵离子与苯酚反应，生成蓝色吲哚酚，吲哚酚的生成量与尿素含量呈正比，通过分光光度比色法(分光光度计)测定560nm 处吸光度。

该试剂盒可用于检测人体、动物的血浆、血清、尿液等样品中尿素(旧称尿素氮，BUN)含量，但尿液最好经过处理后再行检测。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、 准备样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存。

如为尿液样品，最好处理后检测。

2、 配制标准品工作液：4℃保存1周有效。

3、 配制脲酶工作液：取脲酶溶液，按脲酶溶液：脲酶稀释液=1:99的比例混合，即为脲酶工作液。

4℃避光保存1月有效。

4、 Urea 比色操作：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。

如果样品中的Urea 浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

编号 名称TC1167 100T Storage试剂(A): 尿素标准(100mmol/L) 1ml 4℃ 避光 试剂(B): 脲酶溶液 0.5ml -20℃ 避光 试剂(C): 脲酶稀释液 25ml 4℃ 试剂(D): Urea 显色液 100ml -20℃ 避光 试剂(E): Urea assay buffer 100ml -20℃ 避光 试剂(F): ddH 2O 10mlRT 使用说明书1份加入物空白管 标准管 测定管 ddH 2O/μl10 — — 尿素标准(5mmol/L)/μl — 10 — 待测样品/μl——10脲酶工作液/ml 0.2 0.2 0.2充分混匀，37℃水浴15min。

养殖与饲料2017年第9期摘要尿素氮的检测方法很多，本文对其检测过程和检测结果的准确性及稳定性进行综述，并指出使用方便、推广性较强的检测方法。

关键词奶牛；乳尿素氮；蛋白质；检测方法奶牛尿素氮检测方法王玲玲辽宁省畜牧业经济管理站，沈阳110032收稿日期：2017-06-01王玲玲，女，1984年生，畜牧师。

奶牛生产中所用的尿素氮是指乳尿素氮（milk urea nitrogen ，MUN ），是牛群改良计划必备的日常监测指标，奶牛日粮中蛋白质的需要量和利用率、能量平衡、繁殖率以及诊断代谢疾病已成为世界范围内奶牛科学研究的热点[1]。

测定MUN 的方法主要有二乙酰-肟法、脲酶-波氏比色法、红外光谱法。

自20世纪90年代中期欧美已将测定MUN 作为DHI 检测的重要指标之一[2]，但国内外都没有MUN 的标准方法。

本文总结了4种检测方法，为寻找操作更为简单、检测速度快和实用的MUN 检测方法提供参考。

乳尿素氮（Milk Urea Nitrogen ，MUN ）是指尿素在乳中的浓度，单位为mg/dL ，是评定日粮蛋白质利用率的一个重要指标。

目前我国奶牛MUN 值是15.5mg/dL ，美国MUN 标准浓度为10～14mg/dL ，加拿大MUN 标准浓度为8～14mg/dL ，欧洲MUN 标准浓度为15～30mg/dL [3]。

1监测乳尿素氮的意义根据MUN 的测定值来分析蛋白代谢的有效性和牛群瘤胃中氮代谢的效率，确保奶牛能氮平衡和最大效率地利用饲料蛋白质。

测定值过高，说明饲料中的蛋白质利用率不好，导致能氮不平衡，造成日粮氮的浪费，影响奶牛的繁殖；若测定值过低，说明蛋白质补充不足，影响奶牛的生产性能。

根据MUN 的测定值来限制蛋白质供给量，提高氮的利用率，并监测奶牛场氨的排放。

根据MUN 的测定，了解牛群的整体营养状况与繁殖情况，及时调整奶牛饲料配方，实现对牛群的精细化管理。

2尿素氮的检测方法2.1直接法1）红外法。

一、实验目的1. 掌握尿素快速测定方法的基本原理和操作步骤。

2. 学习使用尿素检测试剂盒进行尿液中尿素含量的快速测定。

3. 熟悉实验数据的处理和分析方法。

二、实验原理本实验采用尿素酶法进行尿液中尿素含量的快速测定。

尿素酶能够将尿素分解为氨和二氧化碳，氨在碱性条件下与水生成氢氧化铵，进而与纳氏试剂中的硫酸铜反应生成黄色的络合物，颜色深浅与尿素含量成正比。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 尿液样本- 尿素检测试剂盒（包括试剂A、试剂B、纳氏试剂、pH缓冲液等）- 试管、移液管、滴定管、量筒等2. 实验仪器：- 酶标仪- 移液器- 恒温水浴锅四、实验步骤1. 样本准备：取适量尿液样本，加入试剂A，混匀后静置5分钟。

2. 滴定：向上述溶液中加入适量的试剂B，混匀后用移液管吸取纳氏试剂，逐滴加入混合溶液中，直至溶液呈现稳定的黄色。

3. 测定：将混合溶液置于酶标仪中，在特定波长下测定吸光度值。

4. 数据处理：根据吸光度值和标准曲线，计算尿液样本中的尿素含量。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：使用已知浓度的尿素标准溶液，按照上述实验步骤进行测定，绘制标准曲线。

2. 尿素含量测定：根据尿液样本的吸光度值，从标准曲线上查得对应的尿素浓度。

六、实验讨论1. 实验结果与理论值的一致性：本实验测定的尿素含量与理论值基本一致，说明实验方法可靠。

2. 影响实验结果的因素：尿液样本的保存、试剂的浓度、操作步骤等均可能影响实验结果。

3. 改进措施：为提高实验结果的准确性，可以采取以下措施：- 严格控制尿液样本的保存条件，避免细菌污染。

- 精确配制试剂，确保试剂浓度准确。

- 严格按照实验步骤进行操作，避免人为误差。

七、实验结论本实验采用尿素酶法对尿液样本中的尿素含量进行了快速测定，结果表明该方法简便、快速、准确，可用于临床检测和健康评估。

八、实验报告（以下为实验报告的详细内容，可根据实际情况进行修改和补充）1. 实验目的：掌握尿素快速测定方法的基本原理和操作步骤，学习使用尿素检测试剂盒进行尿液中尿素含量的快速测定。

一、实验目的1. 了解脲酶的催化作用及其活性测定方法。

2. 掌握通过比色法测定脲酶活性的实验操作。

3. 分析影响脲酶活性的因素。

二、实验原理脲酶是一种以尿素为底物的酶，可以将尿素水解成氨和二氧化碳。

在酸性条件下，氨与苯酚-次甲基蓝试剂发生反应，生成蓝色络合物。

通过测定蓝色络合物的吸光度，可以计算出脲酶的活性。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 脲酶- 尿素- 苯酚-次甲基蓝试剂- 酸性缓冲液- 水浴锅- 分光光度计- 移液器- 容量瓶2. 实验仪器：- 移液器- 容量瓶- 烧杯- 试管- 滴定管- 精密天平四、实验步骤1. 准备工作：- 配制脲酶溶液：将脲酶用磷酸盐缓冲液稀释至适当浓度。

- 配制苯酚-次甲基蓝试剂：按照试剂说明书配制。

2. 实验操作：（1）取一只试管，加入一定量的脲酶溶液。

（2）向试管中加入适量的尿素溶液，混匀。

（3）将试管放入水浴锅中，保持一定温度。

（4）定时取样，用移液器将样品转移至另一只试管中。

（5）向试管中加入苯酚-次甲基蓝试剂，混匀。

（6）用分光光度计测定吸光度。

3. 数据处理：- 计算不同时间点的吸光度，绘制吸光度-时间曲线。

- 根据吸光度-时间曲线，确定脲酶的最大活性时间点。

- 根据最大活性时间点，计算脲酶的活性。

五、实验结果与分析1. 实验结果：- 通过实验，成功制备了脲酶溶液。

- 实验过程中，吸光度随时间逐渐增加，表明脲酶活性逐渐增强。

- 在最大活性时间点，吸光度达到最大值。

2. 分析：- 实验结果表明，脲酶活性受温度、pH值等因素的影响。

- 在一定范围内，温度升高，脲酶活性增强；温度过高，酶活性反而降低。

- 在一定范围内，pH值适宜，脲酶活性增强；pH值过高或过低，酶活性降低。

六、结论1. 成功制备了脲酶溶液，并成功测定了脲酶的活性。

2. 脲酶活性受温度、pH值等因素的影响，在一定范围内，温度升高、pH值适宜，脲酶活性增强。

3. 本实验为脲酶的活性研究提供了实验依据。

尿素测定试剂盒（尿素酶-谷氨酸脱氢酶法）适用范围：用于体外定量测定人血清中尿素的浓度。

1.1.包装规格a) 试剂1：2×60ml，试剂2：2×15ml；b) 试剂1：4×60ml，试剂2：4×15ml；c）试剂1：2×80ml，试剂2：2×20ml；d) 试剂1：2×40ml，试剂2：2×10ml；e）试剂1：2×400ml，试剂2：2×100ml；f) 试剂1：2×72ml，试剂2：2×18ml；g）试剂1：1×40ml，试剂2：1×10ml；h）试剂1：12×16ml，试剂2：12×4ml。

1.2.试剂主要组成成分试剂1主要组成成分Tris缓冲液（PH 6.0-9.0） 115mmol/Lα-酮戊二酸 8mmol/L腺苷二磷酸（ADP） 2mg/L谷氨酸脱氢酶（GLDH）≥0.8KU还原型辅酶I（NADH） 0.35mmol/L试剂2主要组成成分Tris缓冲液（PH 6.0-9.0） 115mmol/Lα-酮戊二酸 8mmol/L 尿素酶（URH）≥40K2.1外观和性状2.1.1 试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。

2.1.2 试剂1应为无色或淡黄色透明溶液;试剂2应为无色或淡黄色透明溶液。

2.2净含量应不低于试剂瓶标示装量。

2.3试剂空白2.3.1 试剂空白吸光度测定试剂空白吸光度，应≥1.0；2.3.2 试剂空白吸光度变化率试剂空白吸光度变化率△A/min≤0.04。

2.4分析灵敏度测试30mmol/L的被测物时，吸光度变化率（△A/min）应不低于0.025。

2.5准确度测定值与靶值相对偏差不超过±15%。

2.6精密度2.6.1批内精密度变异系数（CV）应不超过5％。

2.6.2批间精密度批间相对极差应不大于10%。

尿素（UREA）测定试剂盒（尿素酶-谷氨酸脱氢酶法）适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清中尿素（UREA）的浓度。

1.1包装规格1.2主要组成成分试剂1主要组分：a-酮戊二酸 11 mmol/LNADH0.34mmol/L试剂2主要组分：尿素酶≥1.0KU/L谷氨酸脱氢酶≥1.0KU/L2.1外观2.1.1试剂1应为无色或淡黄色透明溶液，无混浊，无未溶解物。

2.1.2试剂2应为无色或淡黄色透明溶液，无混浊，无未溶解物。

2.2装量液体试剂的净含量应不少于标示值。

2.3试剂空白2.3.1试剂空白吸光度：UREA试剂盒在波长340nm处测定试剂的空白吸光度值，应不小于1.0。

2.3.2试剂空白吸光度变化率：UREA试剂盒在波长340nm处测定试剂的空白吸光度变化率，应不大于0.010。

2.4分析灵敏度试剂盒测试5.0mmol/L被测物时，吸光度的变化率（△A/min）应不小于0.01。

2.5准确度测定国家标准物质GBW09175a，相对偏差应不超过15%。

2.6精密度2.6.1重复性重复测试（5.0±0.5）mmol/L和（10.0±2.0）mmol/L的样本，所得结果的变异系数CV应不大于5%；2.6.2批间差测试（5.0±0.5）mmol/L的样本，所得结果的批间相对极差应不大于10%。

2.7线性范围UREA试剂盒在[0.5，36.0]mmol/L范围内，线性相关系数（r）应不小于0.990；a）在[0.5，20.0]mmol/L区间内，线性绝对偏差应不超过±2mmol/L；b）在(20.0，36.0]mmol/L区间内，线性相对偏差应不超过±10%。

2.8稳定性原包装的试剂盒在2℃～8℃避光保存，有效期为12个月。

在试剂盒有效期满后2个月内，分别检测2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7项，结果应符合各项目的要求。

[产品名称]中文名称：尿素（UREA ）检测试剂盒（速率法） 英文名称：Urea Assay Kit; UREA[包装规格]R 1 4 × 60 ml R 2 4 × 15 mlR 1 4 × 80 ml R 2 4 × 20 ml R 1 4 × 120 ml R 2 2 × 60 ml R 1 8 × 40 ml R 2 2 × 40 ml R 1 4 × 50 ml R 2 2 × 25 ml R 1 2 × 40 ml R 2 2 × 10 ml R 1 4 × 50 ml R 2 4 × 50 ml R 1 1 × 30 mlR 2 1 × 7.5 ml[预期用途]用于临床实验体外定量分析人血清或血浆中的尿素的含量。

尿素的测定对肾功能不全的诊断具有重要的意义，通常在尿液排泄障碍，如肾小球功能降低、脱水、浮肿，尿素生成过剩，如高蛋白饮食，组织坏死情况下尿素测定结果均呈现上升趋势。

而在尿素排泄过多，如多尿；尿素生成减少，如低蛋白饮食、肝功能不全情况下呈下降趋势。

[测定原理]脲酶 尿素 + 3H 2O NH 4+ + HCO 3 -+ OH -GLDHNH 4++α-酮戊二酸+NADH 谷氨酸 + NAD + + H 2O [主要组成成份][储存条件及有效期]试剂在2℃~8℃无腐蚀性气体中避光贮存。

有效期12个月。

开瓶后2℃~8℃可稳定30天。

[适用仪器]日立等类型生化分析仪[样本要求]血清、肝素血浆。

[检验方法]测定类型：速率法 主波长：340 nm 副波长：380 nm 温度：37 ℃ 试剂1(R1)：240 µl 标本量：3 µl 试剂2（R2）：60 µl 延迟时间：60S 反应时间：60S[计算]样品中的尿素（mmol/L ）（A 2–A 1）样品= ————————— × UREA 标准液浓度mmol/L（A 2–A 1）标准注：本试剂适用于手工操作或半自动生化仪。

尿素测定方法的概述【摘要】尿素是人体内蛋白质代谢的最终产物，由肝脏合成主要通过肾脏排出。

血清尿素的测定是临床上用于诊断和观察各种肾脏疾病的一项重要指标。

尿素浓度处于各个不同的医学决定水平有着不同的临床意义。

并且尿素的检测对慢性肾脏疾病的病程、病情观察及预后判断均有意义，但它并不是肾功能损伤的特异性指标[1]。

以往测定尿素采用尿素氮报告结果，但无论在生理或病理情况吓，能够确切反映肾功能、体液渗透压等有效成分实为尿素而非为尿素氮。

固现推荐统一采用尿素报告结果。

换算公式为：1mmol/L尿素氮=1/2mmol/L[2]。

【关键词】尿素;脲酶;比色法1 标本血清和肝素抗凝血浆在二乙酰一肟法，脲酶/GLDH，离子导电法中均可应用。

氟化物能抑制脲酶反应，故不能用氟化物作为血清的抗凝剂，肝素铵抗凝剂也不能在脲酶法中使用。

尿标本按照1：20到1：50稀释后，可用以上三种方法测定。

由于尿素易于被细菌降解，故血清和尿样品在分析前应放置在4—8℃。

2 测定方法血清尿素的测定是临床上用来诊断和观察各种肾脏疾病的重要生化指标，尿素的测定方法包括：氨电极法、脲酶-波氏法，脲酶-谷氨酸脱氢酶偶联法，脲酶-亮氨酸脱氢酶偶联法等等[3]2.1 化学法2.1.1 二乙酰一肟显色法：尿素可与二乙酰作用，在强酸加热条件下，生成粉红色的二嗪化合物，在540nm比色，因二乙酰不稳定，常用二乙酰一肟代替，后者遇酸水解成二乙酰。

反应式如下：此法专一性差，线性范围狭窄，且试剂中含有烈性化学物，易腐蚀仪器和污染环境。

2.1.2 邻苯二甲醛比色法：尿素在强酸性环境下，与邻苯二甲醛缩合产生橙红色产物，比色测定之。

2.1.3 二苯吡喃醇比浊法：尿素与二苯吡喃醇结合形成不溶性沉淀，比色测定之。

[5]采用化学法检测尿素，特异性均不高，如瓜氨酸对二乙酰反应有正干扰；甘氨酸、精氨酸、瓜氨酸及磺胺类药物对邻苯二甲醛反应有正干扰。

加之要用强酸或强碱环境，或需要较高温度（90℃）反应，较难实现自动化，故这类方法已经较少使用[5] 。

尿素的检测方法
尿素是一种常见的有机化合物，在医学和农业领域有着重要的应用。

以下是常用的尿素检测方法：
1. 红色试剂法：将待测尿素样品与含有巴比妥酸钠和钡水合物的试剂混合，将其加热至沸腾，通过比色法观察产生的红色沉淀的形成程度来判断样品中尿素的含量。

2. 氨自由便：将待测尿素样品与较强的碱液（如钠氢氧化物）反应，生成氨气。

可以通过导纸法或气相色谱法来定量测定氨气的含量，从而间接推断尿素的含量。

3. 酚酞法：将待测尿素样品与酚酞溶液混合，酚酞可被尿素催化氧化生成红色产物。

通过比色法测定红色产物的光密度，从而确定尿素的含量。

4. 酶法：使用尿素酶（如尿酸酶），将待测尿素样品与酶反应，通过测定反应中产生的酶促反应产物（如尿酸）的含量来间接测定尿素的含量。

这些方法各有优缺点，在实际应用中可以根据需要和条件选择合适的方法进行尿素的检测。

实验十三血清尿素氮测定（脲酶—Berthelot比色法）一、实验目的与要求1 了解血液尿素氮（BUN）在人体营养学上的生理学意义及其在代谢上的重要性。

2 掌握血液尿素氮测定方法及721分光光度计或AT648半自动生化多用仪的使用方法和现代生化检测试剂盒的应用。

二、实验原理尿素在脲酶作用下分解生成氨。

在碱性条件下，经次氯酸氧化生成的氯胺与苯酚被亚硝基铁氰化钠催化生成蓝色的靛酶。

其反应式为： CH2NH2N尿素O+HOH脲酶NH3彩+CHOH2N氨基甲酸O-2NH3+CO2氨NH3+OCl-NH2Cl+OH-次氯酸氨胺催化剂NH2Cl+OH+OH-Cl-+H2O+HONH2苯酚P胺基苯酚HONH2+OH-+O2==N——O-+H2O酚靛三、实验仪器与试剂1 仪器（1） AT648半自动生化分析仪1台；（2） 4孔恒温水浴锅1个；（3）振动摇床1台。

2 分组及仪器2人一组，每组仪器包括：（1）试管架1个；（2） 2ml试管10个；（3） 20μl微量加样器1个；（4） 1ml移液管1个；（5） 5ml移液管2个；（6）吸耳球1个；（7）搪瓷盘1个；（8）微量加样滴头；（9）吸水纸。

3 本试剂盒内含5种试剂：（1）脲酶（冻干） 2瓶（2） pH 8.0缓冲液：由乙二胺四乙酸二钠盐和磷酸氢二钾组成 1×46ml（3）显色剂Ⅰ：由苯酚和亚硝基铁氰化钠组成 1×225ml（4）显色剂Ⅱ：由氢氧化钠和安替福民组成 1×225ml（5）尿素氮标准液（20mg/dl） 2×2ml四、实验步骤1 血清（1）取脲酶一瓶，用23.0ml pH 8.0缓冲液溶解。

（2）于一系列试管中，按下表加入各溶液。

表131系列反应管中所加溶液的量空白管标准管样品管样品（μl）——20标准液（μl）—20—酶液（μl）0.50.50.5 （3）于37℃水浴中保温15min，然后各管分别加入显色剂Ⅰ和显色剂Ⅱ各2.5ml。

实验十七实验名称：尿素的测定实验目的与要求：掌握测定血清尿素的基本原理实验仪器、试剂：半自动生化分析仪、尿素测定试剂盒实验原理：尿素经脲酶水解生成NH3与CO2,在谷氨酸脱氢酶（GLDH）的作用下，氨与α-酮戊二酸及还原型辅酶Ⅰ（NADH）反应生成谷氨酸和NAD+，NADH在340nm 处的吸光度下降速率与待测样品中尿素的含量成正比。

操作方法：1、将试剂R1：R2=4：1混合，即为工作液2、按下列顺序加入各试剂单位ml 空白标准样本蒸馏水0.01 ——样本－－0.01标准液－0.01 －工作液 1.0 1.0 1.03、混匀各管，340nm,空白管调零，延时30秒，读取初始吸光度A1，60秒后读取A2，计算ΔA实验现象与数据：记录ΔA结果分析与结论：尿素＝ΔA样/ΔA标×C标（8.32 mmol/l）参考范围：1.7-8.3mmol/l临床意义：实验十八实验名称：血清尿酸的测定实验目的与要求：掌握尿酸酶-过氧化物酶耦联法测定尿酸的基本原理实验仪器、试剂：尿酸测定试剂盒，722E/723分光光度计实验原理：尿酸酶氧化尿酸，生成尿囊素和过氧化氢，在过氧化物酶催化下，过氧化氢使ESBmT和4－氨基安替比林缩合成有色化合物，其在546nm吸光度与尿酸浓度成正比。

操作方法：按以下步骤操作单位ml 标准测定空白样本－0.025 －标准液0.025 －－蒸馏水－－0.025酶试剂 1.0 1.0 1.0混匀37℃温浴5min，以空白管调零。

546nm，0.5cm比色杯，测定各管的A 实验现象与数据：记录各管的A结果分析与结论：血清尿酸浓度＝A样/A标×C标（357μmol/l）参考值：男202－416μmol/L，女142-339μmol/L临床意义：思考题：P223第2题。

黄酒中尿素的检测方法李国龙;丁美珍;金一鸣【摘要】Urea is the main precursor for ethyl carbamate in yellow rice winei Precise and quick detection of urea content is a key factor to control the level of EC in yellow rice wine. In this paper, the common methods for urea detection in food field, especially in fermenting wine, were intro- duced, which could provide useful reference for yellow rice wine manufacturers in urea detection,%尿素是黄酒中氨基甲酸乙酯（EC）的前体物质，对尿素进行准确快速的检测对于黄酒中EC含量的控制非常重要。

综述了在食品领域尤其是发酵酒中常用的尿素检测方法，以期为黄酒企业选择合适的尿素检测方法提供参考。

【期刊名称】《酿酒科技》【年(卷),期】2012(000)011【总页数】4页(P111-114)【关键词】黄酒;尿素;检测方法【作者】李国龙;丁美珍;金一鸣【作者单位】中国绍兴黄酒集团有限公司国家黄酒工程技术研究中心,浙江绍兴312000;中国绍兴黄酒集团有限公司国家黄酒工程技术研究中心,浙江绍兴312000;中国绍兴黄酒集团有限公司国家黄酒工程技术研究中心,浙江绍兴312000【正文语种】中文【中图分类】TS262.4;TS261.4黄酒中的尿素主要是在发酵过程中由酵母代谢产生，会与乙醇反应生成一种对人体有害的物质氨基甲酸乙酯（Ethyl carbamte，简称EC），且随反应温度的升高和反应时间的延长，EC生成量会大幅增加，最终对成品酒的品质造成危害，对消费者造成潜在的威胁[1]。

复方丹参滴丸联合前列地尔治疗对糖尿病肾病患者胱抑素C、β2微球蛋白等影响分析刘祥;唐亮;李春玲;金秀婷【摘要】目的探讨复方丹参滴丸联合前列地尔治疗糖尿病肾病的临床效果.方法选取糖尿病肾病患者120例作为研究对象,采用随机数表法将其分为观察组和常规组,每组60例.两组患者均给予糖尿病相关知识宣教及降糖治疗,常规组患者在此基础上加服前列地尔治疗,观察组患者加用复方丹参滴丸联合前列地尔治疗.比较两组患者治疗前后胱抑素C(Cys c)、β2微球蛋白(β2-MG)、尿素、肌酐水平的变化.结果治疗前,两组患者血肌酐和尿素水平比较差异无统计学意义(P＞0.05).治疗后,两组患者的血肌酐水平明显降低、尿素水平明显升高(P＜0.05);观察组患者血肌酐水平显著低于常规组(P＜0.05).治疗前两组患者血胱抑素C、β2-MG水平比较差异无统计学意义(P＞0.05).治疗后,两组患者血胱抑素C、β2-MG水平均显著降低(P ＜0.05);观察组患者血胱抑素C、β2-MG水平均显著低于常规组(P＜0.01).结论复方丹参滴丸联合前列地尔治疗糖尿病肾病患者临床效果显著,值得临床推广应用.【期刊名称】《内科》【年(卷),期】2016(011)004【总页数】3页(P590-591,594)【关键词】糖尿病肾病;复方丹参滴丸;前列地尔;胱抑素C【作者】刘祥;唐亮;李春玲;金秀婷【作者单位】甘肃省敦煌市中医医院,敦煌市736200;甘肃省敦煌市中医医院,敦煌市736200;甘肃省敦煌市中医医院,敦煌市736200;甘肃省敦煌市中医医院,敦煌市736200【正文语种】中文【中图分类】R587糖尿病肾病是糖尿病患者最主要的并发症之一，患病率呈逐年递增趋势[1]。

糖尿病患者一直处于高血糖与代谢紊乱状态，可导致全身组织器官，特别是眼、肾、心血管及神经系统的损害，功能障碍和衰竭，严重者可引起失水、电解质紊乱和酸碱平衡失调等急性并发症以及酮症酸中毒和高渗昏迷[2]。