第六章 2微生物的代谢实验
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实验细菌的代谢产物一、摘要细菌是一类微生物,它们具有多样的代谢途径,可以在不同的环境中生存及繁衍。
在本实验中,我们通过对细菌进行培养和筛选,从细菌代谢产物中得到多种有机物质,并通过实验方法进行鉴定和分离。
通过本实验,我们能够更深入地了解细菌的代谢特点和其对人类和自然环境的影响。
二、背景细菌是一类原核生物,其细胞结构简单,具有多样的代谢途径。
细菌能够利用多种有机物和无机物进行代谢,如糖类、蛋白质、脂肪酸、氮气等。
随着科学技术的进步,人们发现了细菌产生的多种代谢产物,包括药物、抗生素、酶类等。
因此,研究细菌的代谢产物和代谢途径,对于药物开发和环境保护等方面都具有重要的意义。
本实验主要研究细菌的代谢产物,并通过实验方法进行鉴定和分离。
本实验重点介绍了实验方法和实验结果,并对实验结果进行了初步分析。
三、材料与方法3.1 实验材料•实验细菌:从实验室库存中挑选4株细菌,包括常见细菌和少见细菌。
•实验培养基:NA培养基、LB培养基等。
•实验试剂:甲醇、乙酸乙酯、氯仿、硫酸铵等。
3.2 实验方法1.细菌培养:将细菌接种于培养基中,放置于恒温箱内培养。
在培养后期,监测菌液中代谢产物的种类和含量。
2.代谢产物提取:将细菌菌株的培养基转移至离心管中,离心后取出上清液。
将上清液和甲醇充分混合,并放置于4℃下静置过夜。
第二天过滤提取的液体,并使用旋转蒸发器将溶液浓缩至一定程度。
3.代谢产物鉴定:将代谢产物溶液加入试管中,加入乙酸乙酯,并充分混合。
离心后取得液体,再加入氯仿充分混合。
待液体分层后,取上层液体用浓硫酸滴定,观察化学反应后液体颜色的变化,初步确定代谢产物的类别。
4.代谢产物分离:将代谢产物液体用层析仪分离,根据不同的极性和分子量进行分离和纯化。
四、结果与分析经过实验,我们得到了4株细菌的代谢产物,并对其进行了鉴定和分离。
我们发现,这些细菌代谢产物种类和含量均不同,有些细菌产生的代谢产物对人类和自然环境具有重要意义。
各章思考题第一章绪论1. 用具体事例说明人类与微生物的关系,为什么说微生物既是人类的敌人,更是我们的朋友?2. 为什么微生物能成为生命科学研究的“明星”?3. 为什么说巴斯德和柯赫是微生物学的奠基人?4.微生物有哪些特点?第二章病毒1、解释下列名词:病毒粒子、前噬菌体、溶源性。
病毒粒子:成熟的病毒感染单位,病毒复制的最后阶段,在宿主脂肪体细胞、血细胞和上皮细胞的核内复制,形成多边形和多角形的包含体,裸露或被囊膜包裹前噬菌体:整合在宿主基因组上的温和噬菌体的核酸溶源性:温和噬菌体DNA具有整合入宿主菌染色质DNA中的特性,成为与宿主菌共生的原噬菌体,能随宿主菌的染色质同步复制而传给子代,这种特性称为溶源性。
2、什么是病毒?病毒有哪些不同于其他微生物之处?(作业1)3、简述病毒的主要化学组成及其结构。
4、试用图示说明下列名词之间的关系:病毒粒子、核芯、衣壳、被膜。
(作业2)5、病毒有哪几种对称类型?每种对称类型病毒的形态是什么?试各举一例。
6、试以T系噬菌体为例说明病毒的增殖过程。
7、病毒是一种致病因子,也是一种具有遗传成分特点的因子,病毒的这种特性有什么生物学意义?(作业3)第三章原核微生物1、试根据细菌细胞结构的特点,分析并举例说明为什么它们能在自然界中分布广泛。
2、细菌、粘细菌、放线菌、霉菌、酵母在繁殖方式上各有什么特点?3、根据革兰氏阳性菌和阴性菌的细胞壁结构和化学组成,解释为什么革兰氏染色后G+呈紫色,G-呈红色?4、比较细菌和放线细群体培养特征的异同。
5、以产甲烷菌为例,总古细菌的特点及其与细菌的不同之处。
第四章真核微生物1、微生物由于个体微小一般都是以其群体形式进行研究或利用,这必然就要涉及到对微生物的培养。
能否找到一种培养基,使所有的微生物都能良好地生长?为什么?2、试结合微生物学实验课的内容,谈谈在选择、配制和使用培养基时应注意哪些方面的内容。
你们在实验中是如何做的?有何体会?3、试比较营养物质进入微生物细胞的几种方式的基本特点。
与分解代谢有关的生化实验(二)
1、了解各生化实验的原理
2、能配制相应的培养基,选用合适的指示剂
3、能准确判断结果,并进行表示
1、VP试验
2、硫化氢试验
3、尿素酶试验
4、复合生化试验
①动力靛基质尿素酶试验 MIU
②克氏双糖铁培养基试验 KIA
克氏双糖铁培养基试验 KIA
KIA可能出现的四种颜色所表示的意义
讲授为主
实验报告
反复强调微生物实验操作的注意事项
复习:相关理论知识
引入:不同种类的微生物能产生不同的酶类,因此,不同的微生物能够利用的营养物质是不同的。
即使是针对相同的营养物质,不同的微生物有不同的利用方法(导致最终产物不同)。
人为的设计一些培养基和检测方法,可以比较方便的了解微生物的生理过程。
实验二与分解代谢有关的生化试验
5.VP试验
①培养基:葡萄糖蛋白胨水培养基(葡胨水)
②指示剂:VP试剂(VP甲液和VP乙液)
③原理:
④结果判断和表示方法
培养基颜色变红—————— + 培养基颜色不变(或变棕色)——————-
注意:
若滴加甲液和乙液后没有变色,不能马上判断结果为阴性。
乙酰甲基甲醇在碱性条件下被氧化需要一段时间。
再放入培养箱培养2—4h以后,判
断结果。
原理:
含硫氨基酸
2S + Fe 2+
,
+ Pb 2+
7. 尿素酶试验
尿素培养基配方:
蛋白胨 1g NaCl 5g
葡萄糖 1g 磷酸二氢钾 2g
尿素 终浓度2% 酚红溶液 3ml
蒸馏水 1000ml
①培养基:尿素培养基(pH6.8)
②指示剂:酚红
③原理: 尿素3, 指示剂变色,桔黄色红色
④结果判断和表示方法:
培养基颜色变红———— +
培养基颜色不变(桔黄)
————— —
6、硫化氢试验
8、复合生化试验
①动力靛基质尿素酶试验 MIU
MIU培养基配方:
胰蛋白胨 10g
NaCl 5g
葡萄糖 1g
磷酸二氢钾 2g
尿素终浓度2%
酚红溶液 2ml
琼脂 3g
蒸馏水 1000ml
结果判断和表示方法:
看穿刺线:模糊 + 清晰—
看培养基颜色:红色+ 无变化—
加靛基质试剂:红色+ 无变化—
②克氏双糖铁培养基试验 KIA
培养基配方:
蛋白胨 20g 乳糖 10g 牛肉膏 3g 葡萄糖 1g 酵母膏 3g 硫酸亚铁铵 0.3g NaCl 5g 硫代硫酸钠 0.5g 酚红溶液 6ml 琼脂粉 13g 蒸馏水 1000ml
可观察四种生化结果:
①是否利用葡萄糖②是否利用乳糖
③是否产生H2S ④是否产生气体
结果判断和表示方法:
例1:大肠杆菌在KIA上的生化表现为:上层黄色,下层黄色,培养基断裂,无黑色沉淀。
表示方法:AG/AG,-
例2:变形杆菌在KIA上的生化表现为:上层红色,下层黄色,有黑色沉淀,培养基没有断裂,也没有产生气泡。
表示方法?。