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国家药品监督管理局关于发布免于临床试验的体外诊断试剂临床评价技术
指导原则的通告
正文：
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国家药品监督管理局通告
2021年第74号
国家药监局关于发布免于临床试验的体外诊断试剂临床评价技术指导原则的通告
为指导体外诊断试剂的临床评价工作，根据《体外诊断试剂注册与备案管理办法》（国家市场监督管理总局令第48号），国家药监局组织制定了《免于临床试验的体外诊断试剂临床评价技术指导原则》
（见附件），现予发布。
特此通告。
附件：免于临床试验的体外诊断试剂临床评价技术指导原则
国家药监局
2021年9月18日
——结束——。
血红蛋白和转铁蛋白联合检测试剂盒（胶体金免疫层析法）适用范围：本产品用于体外定性检测人粪便样中血红蛋白和转铁蛋白的水平。
1.1 包装规格25人份/盒。
1.2 主要组成本试剂盒包括25人份的检测卡、干燥剂和采便器（选配）。
试剂盒的检测卡由一条转铁蛋白检测试纸条、一条血红蛋白检测试纸条和一个双孔板型塑料卡塞组成。
试纸条主要由PVC塑料底板、样品垫、聚酯膜、硝酸纤维素膜和吸水板组合而成。
转铁蛋白试纸条聚酯膜上喷有胶体金标记的鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体，硝酸纤维素膜上分别包被了鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体和羊抗鼠多克隆抗体。
血红蛋白试纸条聚酯膜上喷有胶体金标记的鼠抗人血红蛋白单克隆抗体，硝酸纤维素膜上分别包被了鼠抗人血红蛋白单克隆抗体和羊抗鼠多克隆抗体。
采便器为塑料滴瓶,每个采便器内装有2mL纯化水。
2.1 物理性状2.1.1 外观应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染；材料附着牢固。
2.1.2 膜条宽度应≥2.5 mm。
2.1.3 液体移行速度应≥10 mm/min。
2.2 临界值及重复性2.2.1血红蛋白试纸条临界值及重复性产品的临界值为0.13μg/mL。
a）重复检测0.06μg/mL的血红蛋白样品液20次，结果的阴性率应≥95%。
b）重复检测0.20μg/mL的血红蛋白样品液20次，结果的阳性率应≥95%。
2.2.2转铁蛋白试纸条临界值及重复性产品的临界值为30ng/mL。
a)重复检测40ng/mL的转铁蛋白样品液20次，结果的阳性率应≥95%。
b)重复检测20ng/mL的转铁蛋白样品液20次，结果的阴性率应≥95%。
2.3 特异性2.3.1 血红蛋白试纸条特异性分别检测浓度为500μg/mL的鸡、鸭、猪、牛血红蛋白样品液；结果应均为阴性。
2.3.2 转铁蛋白试纸条特异性分别检测200ng/mL的铁蛋白、200μg/mL的白蛋白样品液，结果应均为阴性。
2.4 HOOK效应2.4.1 血红蛋白试纸条HOOK效应检测浓度为1600μg/mL的血红蛋白样品液，检测结果应为阳性。
血红蛋白/转铁蛋白联合检测试剂盒（胶体金免疫层析法）适用范围：该产品用于体外定性检测人粪便样本中的血红蛋白和转铁蛋白的含量。
1.1 规格和型号板型：1人份/袋；25人份/盒1.2 主要组成成分产品由卡塞，血红蛋白检测试纸条和转铁蛋白检测试纸条组成。
血红蛋白检测试纸条主要由塑料板，吸水板，硝酸纤维素膜，胶体金，吸水纸组成；硝酸纤维素膜由包被有羊抗鼠多克隆抗体的控制线（C线）和包被有鼠抗人血红蛋白单克隆抗体1的反应线（T线）组成；胶体金由鼠抗人血红蛋白单克隆抗体2标记制成。
转铁蛋白检测试纸条主要由塑料板，吸水板，硝酸纤维素膜，胶体金，吸水纸组成；硝酸纤维素膜由包被有羊抗鼠多克隆抗体的控制线（C线）和包被有鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体1的反应线（T线）组成；胶体金由鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体2标记制成。
2.1外观外观整洁完整、无破损、无污染；材料附着牢固、内容物齐全。
包装完整、标签清晰。
2.2物理检查膜条应宽于2.5mm，液体移行速度应不低于10mm/min。
2.3临界值及重复性血红蛋白检测试纸部分：临界值为0.1μg/mL。
检测浓度为0.2μg/mL的血红蛋白质控品（配制方法见附录A），平行检测20次，检测结果应一致，显色度均一，结果的阳性率应≥95%。
检测浓度为0.05μg/mL的血红蛋白质控品（配制方法见附录A），平行检测20次，检测结果应一致，显色度均一，结果的阴性率应≥95%。
转铁蛋白检测试纸部分：临界值为10ng/mL。
检测浓度为40ng/mL的转铁蛋白质控品（配制方法见附录A），平行检测20次，检测结果应一致，显色度均一，结果的阳性率应≥95%。
检测浓度为5ng/mL的转铁蛋白质控品（配制方法见附录A），平行检测20次，检测结果应一致，显色度均一，结果的阴性率应≥95%。
2.4 特异性血红蛋白检测试纸部分：检测浓度为500μg/mL的牛、猪血红蛋白质控品（配制方法见附录A）以及检测水，检测结果均应为阴性。
血红蛋白测定试剂盒（SLS-Hb法）适用范围：该试剂用于体外定量测定人全血中血红蛋白的含量。
1. 产品型号/规格及其划分说明1.1试剂（R）：100ml×2(200测试)；2. 性能指标【产品性能指标】1 试剂空白试剂空白吸光度值≤0.006。
2 线性区间测量范围[25,200]g/L,相关系数r≥0.99；相对线性偏差≤12%。
3准确度回收率90%～110%4分析灵敏度血红蛋白150g/L测定吸光度≥0.3705 测量精密度a）重复性变异系数≤10%。
b）批间差连续三批血红蛋白试剂盒测定同份血红蛋白液，其测定值的批间差≤10%。
【包装规格】试剂（R）：100ml×2(200测试)【主要组成成分】试剂（R）缓冲液：0.04mol、十二烷基硫酸钠60g/L、稳定剂0.05 mol【产品性能指标】1. 试剂空白：试剂空白吸光度值≤0.0062. 线性区间：测量范围[25,200]g/L,相关系数r≥0.99；相对线性偏差≤12%。
3. 准确度：回收率90%～110%4. 分析灵敏度：血红蛋白150g/L测定吸光度≥0.3705. 精密度：a) 重复性：CV≤10％。
1. 产品型号/规格及其划分说明1.1 试剂（R）：100ml×2(200 测试)；校准品：2ml×1（选配）；质控品：2ml×1（选配）1.2 组成成份：试剂（R）：缓冲液 0.04mol、十二烷基硫酸钠 60g/L、稳定剂 0.05 mol校准品：水基质，氰化高铁血红蛋白浓度为125g/L（目标浓度）。
质控品：水基质，氰化高铁血红蛋白浓度为116.3g-133.8g/L。
注：校准品、质控品浓度具有批差异性，详见标签。
2. 性能指标2.1 外观试剂为无色透明无沉淀及絮状浮物溶液。
校准品质控品为棕褐色液体。
2.2 装量试剂净含量不少于标示值。
2.3 试剂空白试剂空白吸光度值≤0.006。
2.4 线性区间测量范围[25,200]g/L,相关系数 r≥0.99；相对线性偏差≤12%。
《免于进行临床试验的体外诊断试剂临床评价资料基本要求(试行)》解读免于进行临床试验的体外诊断试剂临床评价资料基本要求(试行)体外诊断试剂在医疗诊断中起到了至关重要的作用，其中包括传统的化学检测方法和生物技术的高通量筛选方法。
为确保这些试剂在临床应用中的安全性和有效性，需要进行一定的临床评价。
然而，在某些情况下，由于一些道德或伦理原因，这些试剂无法在人体上进行临床试验。
因此，如何评估这些试剂的安全性和有效性是一个重要的问题。
本文将介绍免于进行临床试验的体外诊断试剂临床评价资料基本要求。
一、基本原则在免于进行临床试验的情况下，评估试剂的安全性和有效性应遵循以下原则：1. 尽可能利用既有的数据。
2. 利用合适的样本进行比较，以评估新试剂与标准试剂之间的相关性和差异性。
3. 制定合适的试验方案，以获得可靠的数据，并尽可能地减少误差和偏差。
二、临床评价资料基本要求1. 产品信息试剂必须包含以下信息：试剂名称、生产商、生产日期、保质期、试剂成分、贮存和使用条件、使用说明、性能试验参数、预期的诊断结果等。
2. 样品应使用来自临床患者的样品。
为确保细胞、血清或血浆等样品的质量，应尽可能使用科学方法收集和处理样品。
3. 连续性应考虑样品的年龄、性别、临床诊断、治疗史等因素，并在各项参数中识别连续的与试剂使用有关的变化。
4. 理想特性根据诊断的具体要求，识别理想的性能特征，例如试剂的敏感度、特异性、精确性、预测值、稳定性和抗扰动能力等。
5. 比较标准应建立适当的比较标准。
例如：使用代表性的样品进行比较，以便确定相对危险或相对功效，并考虑不同测试在不同时间和地点的变异性。
6. 统计学分析应对数据进行统计学分析，包括适当的假设检验、方差分析、图形分析等，以获得可靠的结果，同时减小错误的机会。
7. 鉴别诊断如果试剂用于鉴别诊断，则必须在临床实践中确认试剂的敏感性、特异性、准确度等性能。
8. 限制和警告应准确描述试剂的限制和警告，例如：要求人工信号处理、样品存储条件或测试时间的约束等。
游离血红蛋白检测试剂盒(邻-甲联苯胺比色法)简介：血红蛋白(Hemoglobin ，Hb 或HGB)是高等生物体内负责运载氧的一种蛋白质，是能使血液呈红色的蛋白。
血红蛋白由四条链组成，两条α链和两条β链，每一条链有一个包含一个铁原子的环状血红素。
Hb 在氧含量高的区域，容易与氧结合；在氧含量低的区域，又容易与氧分离。
血红蛋白的这一特性，使红细胞具有运输氧的功能。
血管溶血时，血浆游离血红蛋白(free hemoglobin)浓度增高。
游离血红蛋白检测试剂盒(邻-甲联苯胺比色法)(Free Hemoglobin Colorimetric Assay Kit 检测原理是血红蛋白中亚铁血红素有类似过氧化物酶的作用，可在氧化剂的作用下催化邻-甲联苯胺(O-tolidine)产生蓝色产物，吸收峰。
在酸性条件下产物呈黄色，吸收峰，产物黄色越深，说明FHB 含量越高，反之则越低，通过分光光度比色法测定处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出血浆游离血红蛋白含量水平。
该试剂盒主要用于血浆样本，亦可用于细胞或组织的裂解液或匀浆液等样品中游离血红蛋白含量。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、 恒温箱2、 96孔板、酶标仪或分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、 配制检测工作液：① 配制显色工作液：取O-tolidine 恢复至室温后，溶解于FHB Assay buffer ，即为显色工作液。
配制好的显色工作液-20℃保存，一般1月内用完。
② 配制标准品工作液：取出Hb(1mg/ml)恢复至室温，加入ddH 2O ，即为标准品工编号 名称TC0201 100T Storage试剂(A): FHB Assay buffer 30ml 4℃ 避光 试剂(B): O-tolidine 2支 RT 试剂(C): Acid Assay buffer 100μl ×2 RT 试剂(D): Hb(1mg/ml) 10μl ×2-20℃ 使用说明书1份作液(100μg/ml)。
体外诊断试剂临床评价报告产品名称：血红蛋白检测试剂盒（SLS-Hb法）标本类型：全血EDTA-Na抗凝标本(参比与考核一致)方案版本：V1.0方案日期：2020年02月08日试验时间：2020年03月至2020年03月试验地点：*****医院产品注册申请人（盖章）：*****有限公司注册申请联系人：*****注册申请联系人电话：*****报告版本：V1.0报告日期：2020年03月22日保密声明本报告中所包含的所有信息的所有权归*****有限公司。
因此，仅提供给研究者和监督管理部门等相关的医疗机构审阅。
在未得到申办者书面批准的情况下，严禁将任何信息告知与本研究无关的第三方。
研究摘要目的：评价*****有限公司生产的血红蛋白检测试剂盒（SLS-Hb法）用于检测人体样本中血红蛋白的含量时，其诊断检测能力与已上市的同类试剂盒无差异。
方法：本次临床试验采用同步盲法对比试验。
结果：*****医院共检测110例受试者样本，按方案剔除标准共剔除样本1例，其中1例为线性范围外标本，0例为离群值标本，剔除率为0.91%，最终纳入分析109例，其中男性59例，女性50例，平均年龄39.77±14.18岁。
本次临床试验结果的Pearson相关系数接近1，说明两种试剂的相关关系越密切。
回归方程的截距（a）的95%CI包括0，斜率（b）接近1，说明两种试剂的一致性比较好。
根据说明书中对准确度允许偏差的标准，医学决定水平处偏倚均在允许偏差范围内。
考核试剂与参比试剂检测浓度的差值Bland-Altman散点图显示：两种试剂检测浓度差值为0.1798±2.3020g/L（均值±标准差），两种试剂检测浓度差值的均值±1.96SD范围在-4.3322g/L到4.6918g/L之间。
超出置信区间的百分比为：2.75%。
考核试剂与参比试剂检测浓度比值的Bland-Altman散点图显示：两种试剂检测浓度比值为1.0018±0.0167（均值±标准差），两种试剂检测浓度比值的均值±1.96SD范围在0.9690到1.0346之间。
超出置信区间的百分比为：0.00%。
经计算，考核试剂定性检测结果参考范围外标本符合率为96.97%（93.96%,98.50%)，参考范围内标本符合率为98.68%（96.30%,99.54%)，总符合率为98.17%（95.57%,99.25%)。
进行Kappa一致性分析，Kappa值k=0.9565。
对含干扰物质样本的检测，考核试剂和参比试剂检测结果无差异，表明考核试剂和参比试剂的抗干扰性能有较好的一致性。
结论：本中心在本次临床试验共检测109例有效样本，通过对考核试剂和参比试剂检测浓度的Pearson相关系数、回归方程、Bland-Altman图进行分析，显示两种试剂检测血红蛋白浓度有良好的一致性。
符合率及Kappa一致性分析显示考核试剂与参比试剂对结果的判断有良好的一致性。
一、基本内容1.1引言1.1.1临床试验背景血红蛋白是红细胞内运输氧的特殊蛋白质，是使血液呈红色的蛋白，由珠蛋白和血红素组成，其珠蛋白部分是由两对不同的珠蛋白链（α链和β链）组成的四聚体。
现在多统一采用国际单位制，以每升（一千毫升）血液中有血红蛋白多少克为准。
血红蛋白与红细胞的使用价值近似，血红蛋白的升高和降低可参考红细胞升高与降低的临床意义。
但在各种贫血时红细胞与血红蛋白的减少不一定呈平行关系。
1.生理性增加新生儿、高原居民、剧烈活动、恐惧、冷水浴等。
2.病理性增加真性红细胞增多症、各种原因导致的脱水、先天性心脏病、肺心病等，严重的先天性及后天性心肺疾患和血管畸形，如法氏四联症、发绀型先天性心脏病、阻塞性肺气肿、肺源性心脏病、肺动脉瘘或肺静脉瘘及携氧能力低的异常血红蛋白病等；也见于某些肿瘤或肾脏疾病，如肾癌、肝细胞癌、肾胚胎瘤及肾盂积水、多囊肾。
3.减少各种贫血（如再生障碍性贫血、缺铁性贫血、铁粒幼细胞性贫血、巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、地中海性贫血等）、大量失血（如外伤大出血、手术大出血、产后大出血、急性消化道出血、溃疡所致的慢性失血等）、白血病、产后、化疗、钩虫病等。
现阶段，血红蛋白的检测方法包括：硫酸铜滴定法进行血红蛋白测定，或者采用进口大型生化分析仪进行测定。
前者存在自行配制误差大、易受环境温度影响等缺点，后者仪器价格昂贵，测试成本高。
国外常用的测试方法为试剂盒和干式生化分析法,试剂盒法需要大型生化分析仪，干式生化分析法产品主要有德国的Re-flotronⅣ型全血干式生化分析仪和瑞典的SWELAB 血液分析仪，采用的均是波长比色法，所需采血量较大，测试时间长，成本高。
为验证*****有限公司生产的血红蛋白检测试剂盒（SLS-Hb法）是否具有临床应用价值，根据《免于进行临床试验的体外诊断试剂临床评价资料基本要求》开展临床评价，以验证产品的临床效果。
1.1.2产品的检验原理、方法*****有限公司生产的血红蛋白检测试剂盒（SLS-Hb法）人血红蛋白（硫化血红蛋白除外）与十二烷基硫酸钠作用，生成SLS-Hb棕色化合物，在530nm处的吸光度与浓度成正比，根据测得的吸光度（A）可求得血红蛋白的浓度。
1.1.3预期用途用于检测人体样本中血红蛋白的含量，临床上主要用于各种贫血、失血等的辅助诊断。
1.1.4临床评价单位情况说明根据《免于进行临床试验的体外诊断试剂临床评资料基本要求》，并考核医院该项目的临床开展情况，申办方（*****有限公司）选择*****医院开展临床评价试验。
1.2研究目的评价*****有限公司生产的血红蛋白检测试剂盒（SLS-Hb法）用于检测血红蛋白时，其诊断检测能力与已上市的同类检测试剂盒无差异。
1.3试验管理1.3.1研究监查申办方适时对试验进行监查，以保证研究方案的所有内容和要求都得到严格遵守及执行。
⑴在研究前确认临床研究机构已具有适当的条件，包括人员配备与培训，实验室设备齐全，工作情况良好，估计有足够数量的样本数；⑵确认参加研究人员均已经过统一培训，熟悉临床试验的要求；⑶确认所有临床评价报告表填写正确，并与原始资料一致。
所有错误或遗漏均已改正或注明，经研究者签名并注明日期。
1.3.2实验室质量控制选用配套的质控品进行质量控制。
各实验室建立各自的质控频率和可接受范围值。
当测定结果超出可接受范围时，有必要采取相应措施。
1.3.3研究人员质量控制参加临床试验的研究者都具有临床试验的专业特长、资格和能力，并通过资格审查，人员要求应相对固定。
*****有限公司负责试验开始前的研究人员培训工作，以帮助临床研究人员对于试验总体情况、方案、临床评价报告表等得到充分的理解和认识。
1.3.4研究试剂管理1.3.4.1研究用试剂的贮藏临床试验单位均严格遵守中国相关法规要求。
同时，按照申办者提供的考核试剂使用说明书中的贮藏条件要求对试剂盒进行保存和管理。
1.3.4.2试剂的递送、分发方式本次考核试剂保管在申办者仓库中，使用前，将试剂做好保护措施后，带至实验室。
1.3.4.3剩余试剂的回收和销毁试验结束后，考核试剂剩余试剂包装和未使用的试剂盒全部回收至申办方。
申办方或其指定的机构及人员按照相应流程对考核试剂进行回收。
1.3.5文件管理1.3.5.1原始文件原始文件定义为临床研究观察或得到的初始结果。
原始文件包括但不限于，医学记录、电子数据、筛查日志以及自动仪器得出的结果。
涉及本临床试验的原始数据资料，主要包括样本编号、年龄、性别、试验用试剂检测结果、对比试剂检测结果、复核试验结果（如有）、临床诊断信息等。
1.3.5.2研究结果记录通过临床评价报告表对本试验的数据进行收集研究者或授权人员按照方案中的要求将数据信息记载在临床评价报告表中。
研究者在提交临床评价报告表给申办者之前，应该核对其内容的真实性和准确性。
临床评价报告表的填写需使用黑色圆珠笔或中性笔，字迹应清晰，易于辨认。
数据缺失的情况下，要附加合理解释。
临床评价报告表上的内容不应涂改，需要对临床评价报告表数据进行修改或变更时，则在需修正的地方划线，在其附近记录新的数据，所有变更或修改的地方需更正者签字并注明日期（只有研究者及其授权的人员可以修改临床评价报告表）。
1.3.5.3研究单位的文件管理和保留研究者不得处理任何试验相关的记录。
对于试验中所有数据和观察结果的电子或纸质的原始文件，研究者和研究单位有责任对其进行保存，并保证其完整和正确。
研究者必须保留临床评价报告表副本、原始数据，研究者应保存临床试验资料至试验终止后5年。
5年到期之前，研究者要通知申办者，就其后原始资料的保存方式和保存方法做进一步协商。
当不再需要试验记录时，申办方将通知研究者。
如果研究者退出研究，应将记录转交给共同商定的指定人员并将书面转交通知提供给申办方。
1.3.6数据管理研究者根据受试者的原始观察记录，将数据及时、完整、正确、清晰地载入临床评价数据表；申办者监查研究是否遵循研究方案进行。
确认所有临床评价数据表填写正确完整，并与原始资料一致。
如有错误和遗漏，及时要求研究者改正。
修改时需保持原有记录清晰可见，改正处需经研究者签名并注明日期。
1.4试验设计1.4.1试验总体设计及方案的描述前瞻性、盲法检测、方法学对比。
⑴盲法检测：由样本筛选人员对入选样本编号，再由试验操作人员使用考核试剂和参比试剂对同一样本进行同步检测，入选样本的临床诊断等信息在检测前对操作人员保密，以保证盲法；检测完成后，对检测结果进行一致性分析。
⑵与已上市产品进行比较研究：通过选择目前临床普遍认为质量较好的产品作为比对试剂对*****有限公司生产的血红蛋白检测试剂盒（SLS-Hb法）进行评价，以判断其诊断检测能力与已上市的检测试剂盒无差异。
1.4.2试验设计及试验方法选择1.4.2.1样本量及样本量确定的依据按《免于进行临床试验的体外诊断试剂临床评价资料基本要求》，定量产品可选择总样本量不少于100例并分别采用待评价试剂和对比试剂/参考方法进行单次测定的方式。
本临床研究为方法学比对设计，采用相关系数检验(连续变量)计算样本量，根据美国国家临床实验室标准化委员会制定的CLSI EP9-A2标准，考核试剂与参比试剂的检测结果的相关系数不得低于0.975，预计本试验的相关系数=0.975，ρ在0.985以上，故设定参数：α=0.05，s=1(单侧)，β=0.2，ρ=0.985，根据相关系数检验(连续变量)样本量估算公式[3],计算样本量，具体1如下：根据以上公式计算得出样本量为96例，结合法规要求及统计学要求，考虑5%的脱落剔除率，本次临床试验最终样本量确定为不小于100例，若试验过程中有脱落样本或所测量数据不满足分析要求，则需补充样本量，直到满足统计学或法规要求。
