快速液相色谱法与常规高效液相色谱法测定克林霉素磷酸酯及有关物概要

高效液相色谱法测定化妆品中林可霉素类药物陈张好;方继辉;刘小娟【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2014(050)002【总页数】3页(P252-254)【作者】陈张好;方继辉;刘小娟【作者单位】广东省食品药品检验所,广州510180;广东省食品药品检验所,广州510180;广东省食品药品检验所,广州510180【正文语种】中文【中图分类】O657.72林可霉素类药物属抗菌药物中的小类别，临床上广泛用于除神经系统之外的敏感菌所致的各种感染，主要有以盐酸盐或磷酸酯形式存在的林可霉素和克林霉素类制剂。

其不良反应也不容忽视［1］，可引起胃肠道反应、肝脏损害、心血管反应等［2］，我国在《化妆品卫生规范》中已将抗生素类药物列入化妆品禁用组分。

近年来，祛痘或抑制粉刺化妆品中非法添加抗生素事件频发，建立一种快速、简便、稳定的化妆品中林可霉素类药物含量的测定方法对化妆品监管具有重要意义。

目前，林可霉素类药物的检测集中在药品、饲料或食品等行业，主要采用液相色谱法、液相色谱－串联质谱法等［3－7］，多为单组分或针对包括林可霉素、克林霉素在内多组分的测定，克林霉素磷酸酯的检测方法鲜见报道，化妆品中更无相关检测标准。

本工作采用高效液相色谱法（HPLC）同时测定化妆品中林可霉素、克林霉素及克林霉素磷酸酯的含量，并建立了高效液相色谱法－串联质谱（HPLC－MS／MS）确证方法，发现了化妆品中确实存在非法添加上述3种禁用组分的现象，亟需制定法定标准。

1 试验部分1.1 仪器与试剂Alliance e2695型高效液相色谱仪，配2998二极管阵列检测器，API 3000MS／MS型串联质谱检测器；KQ－300DE型数控超声波清洗器，XS 205DU型电子分析天平，Centrifuge 5810R型高速离心机，Direct－Q3型超纯水发生器。

林可霉素（纯度为86.2%，中检所，批号:30432－200407）、克林霉素（纯度为86.5%，中检所，批号:30422－200404）、克林霉素磷酸酯（纯度为79.0%，中检所，批号:130486－200502）。

克林霉素磷酸酯注射HPLC 分析方法确认报告######制药有限公司确认方案审批表确认方案名称: 克林霉素磷酸酯注射液HPLC分析方法确认方案确认方案编号：目录1 概述2 确认目的3 确认范围4 确认小组成员与职责5 确认方案的审核与批准6 进度计划7 确认内容8 变更与偏差9 确认结果与评价报告1 概述克林霉素磷酸酯注射液收载于国家药品标准，含量及有关物质的检验均使用高效液相色谱仪进行检验，两个项目检验参数等条件完全相同，且我公司未对《中国药典》2010年版二部中的方法进行过任何改变，因此按照2010新版GMP要求，需要进行分析方法确认。

本确认方案使用LC600—梯度型高效液相色谱仪对克林霉素磷酸酯注射液采用《中国药典》2010年版二部“含量”、“有关物质”的检验方法进行确认，证明此方法在本公司实验室的适用性。

含量、有关物质需确认项目如下：“是”代表该项内容需确认，“否”代表该项内容不需要确认2确认目的通过对克林霉素磷酸酯注射液含量及有关物质的检验方法的确认，证明此方法在本公司实验室的适用性。

3确认范围本确认方案适用于克林霉素磷酸酯注射液含量、有关物质的检验方法进行确认。

4确认小组成员与职责5确认方案的起草与审批5.1 确认方案的起草与审批：确认方案由检验室起草，确认小组会审，质量负责人批准实施。

5.2 确认方案的培训：确认方案经批准后及实施前，由QC主任对本次确认方案实施的检验人员和相关人员进行培训。

5.3 确认方案的修改：确认方案如需修改，由质量负责人批准实施，在确认报告中体现。

6 进度计划整个确认活动实施时间：确认时间：从_____ 年___月__日至_____ 年__ 月__ 日；7 确认内容7.1确认前仪器及材料检查7.1.1确认前，对下列试验用仪器和材料进行检查7.1.1.1LC600—梯度高效液相色谱仪7.1.1.2.BS21S型分析天平7.1.1.3色谱柱：7.1.1.4对照品和试剂7.1.1.5其他一些辅助的玻璃仪器（如容量瓶、移液管等）7.1.2可接受标准：仪器和用具经校验且在效期内；对照品、试液、试剂与试药符合验证要求且在效期内；色谱柱、色谱仪使用状态正常。

文章编号：1001-8689(2021)05-0423-09 HPLC测定盐酸克林霉素原料和制剂的有关物质沈丹丹1,2吴群 1,2梁涵雁1,2程义3 沈川3,*(1 重庆市食品药品检验检测研究院，重庆 401121；2 重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心，重庆 401121；3 重庆綦江区人民医院，重庆 401420)摘要：目的建立盐酸克林霉素有关物质HPLC测定方法，并比较国产盐酸克林霉素杂质含量的差异。

方法采用CAPCELL PAK C18(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，以0.05mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.5)为流动相A，以乙腈为流动相B，按线性梯度洗脱，柱温为30℃，检测波长为210nm，流速1.0mL/min，测定9批盐酸克林霉素原料及75批制剂中的杂质含量。

结果3种已知杂质[林可霉素、克林霉素B(RRT 0.80)、7-差向克林霉素(RRT 0.89)]和其余未知杂质及克林霉素峰间的分离度大于1.5。

林可霉素校正因子为0.68，采用外标法计算含量。

国内仅1个生产企业不同批次的盐酸克林霉素胶囊杂质水平差异较小，其余生产企业杂质水平批间差异均较大。

结论本方法灵敏度高，分离效果好，能同时测定盐酸克林霉素原料及制剂的杂质。

关键词：盐酸克林霉素；有关物质；高效液相色谱法；林可霉素中国分类号：R978 文献标志码：ADetermination of the related substances in clindamycin hydrochloride and itspreparations by HPLCShen Dan-dan1,2, Wu Qun1,2, Liang Han-Yan1,2, Cheng Yi3 , and Shen Chuan3(1 Chongqing Institute for Food and Drug Control, Chongqing 401121; 2 Chongqing Research Center for Drug Process and QualityControl Engineering, Chongqing 401121；3 Chongqing Qijiang District Hospital, Chongqing 401420)Abstract Objective To establish an HPLC method for the determination of the related substances in cindamycin hydrochloride and its preparations, and evaluate the impurity levels of domestic products. Methods The determination method was developed with the 0.05mol/L phosphate buffer (pH7.5) as the mobile phase A andacetonitrile as the mobile phase B, with CAPCELL PAK C18 (250mm×4.6mm, 5μm) and the gradient elution at aflow rate of 1.0mL/min. The column temperature was 30℃ and the detection wavelength was 210nm. Nine batches of raw materials and 75 batches of preparations were determined. Results The resolutions of the three known impurities[lincomycin, clindamycin B (RRT 0.80), and 7-epimeric clindamycin (RRT 0.89)] and unknown impurities were well separated. The resolutions between the main peak and the peak of impurities were all greater than 1.5. The correction factor for lincomycin was 0.68, and the content was calculated using an external standard method. Capsules in different batches produced by only one manufacturer had a low difference of impurity levels, while those produced by other manufacturers showed a significant difference. Conclusion Impurities of clindamycin hydrochloride and its preparations can be detected simultaneously by this method with high sensitivity and good resolution.Key words Clindamycin hydrochloride; Related substances; HPLC; Lincomycin收稿日期：2020-03-17作者简介：沈丹丹，女，生于1986年，工程师，主要研究方向为药物分析，E-mail:*****************通讯作者，E-mail:*****************盐酸克林霉素是一种半合成的抗生素，是林可霉素的7位羟基被氯原子取代得到的半合成衍生物，抗菌活性较林可霉素强4~8倍，具有抗菌谱广、抗菌活性强的特点，在临床上主要用于治疗革兰阳性球菌和各种厌氧菌引起的感染[1]。

成分本品主要成分为克林霉素磷酸酯。

性状本品为白色或类白色的疏松块状物或粉末。

适应症1、本品用于革兰氏阳性菌引起的下列各种感染性疾病：（1）扁桃体炎、化脓性中耳炎、鼻窦炎等。

（2）急性支气管炎、慢性支气管炎急性发作、肺炎、肺脓肿和支气管扩张合并感染等。

（3）皮肤和软组织感染：疖、痈、脓肿、蜂窝组织炎、创伤、烧伤和手术后感染等。

（4）泌尿系统感染：急性尿道炎、急性肾盂肾炎、前列腺炎等。

（5）其他：骨髓炎、败血症、腹膜炎和口腔感染等。

2、本品用于厌氧菌引起的各种感染性疾病：（1）脓胸、肺脓肿、厌氧菌性肺炎。

（2）皮肤和软组织感染，败血症。

（3）腹内感染：腹膜炎、腹腔内脓肿。

（4）女性盆腔及生殖器感染：子宫内膜炎、非淋球菌性输卵管及卵巢脓肿、盆腔蜂窝组织炎及妇科手术后感染等。

规格（1）0.3g；（2）0.6g；（3）0.9g。

用法用量1、深部肌肉注射时：使用前需用生理盐水或（5％葡萄糖液）将药品稀释成小于60mg/ml浓度的药液。

2、静脉滴注时，每0.3g需用50-100ml生理盐水或5%葡萄糖溶液稀释成小于6mg/ml浓度的药液。

缓慢滴注，通常每分钟不超过20mg。

3、成人：可经深部肌肉注射或静脉滴注给药：（1）轻中度感染：成人一日0.6-1.2g，分2-4次给药（q12h-q6h）。

（2）重度感染：成人一日1.2-2.7g，分2-4次给药（q12h-q6h）。

4、儿童：静脉滴注给药：（1）轻中度感染：一日按体重15-25mg/kg，分2-4次给药（q12h-q6h）。

（3）重度感染：一日按体重25-40mg/kg，分2-4次给药（q12h-q6h）。

5、或遵医嘱。

临床应用及指南翁德民探讨分析用注射用克林霉素磷酸酯防治剖宫产术后感染的临床效果，得出结论用注射用克林霉素磷酸酯防治剖宫产术后感染的临床效果显著，并且与使用注射用头孢呋辛钠相比，使用注射用克林霉素磷酸酯更加经济，值得在临床上推广应用。

（当代医药论丛,2016,14(03): 84-85.）不良反应1、国外文献显示，克林霉素磷酸酯注射剂不良反应情况如下：（1）胃肠道反应：常见恶心、呕吐、腹痛、腹泻等。

高效液相色谱法测定盐酸林可霉素预混剂中林可霉素的含量作者：朱曦刘引兰董文婷来源：《湖北畜牧兽医》2012年第10期摘要:兽药盐酸林可霉素预混剂含量测定收载于《进口兽药质量标准》1999年版,是采用生物效价管碟法测定,该方法操作步骤复杂,影响因素多,检测时间长。

参考《中国兽药典》2010年版收载的盐酸林可霉素检测方法,利用HPLC法进行检测,使用C18色谱柱,柱温(30±5)℃,以0.05mol/L硼砂溶液∶甲醇(1∶1)为流动相,检测波长为214nm。

林可霉素峰与林可霉素B峰分离良好,林可霉素峰与相邻杂质峰的分离度符合要求,变异系数(RSD)小于1.5%。

结果表明通过高效液相色谱法(HPLC)能快速准确地测定兽药盐酸林可霉素预混剂中林可霉素的含量。

关键词:高效液相色谱;盐酸林可霉素预混剂;含量测定中图分类号:S859.79+6 文献标识码:B 文章编号:1007-273X(2012)10-0004-02盐酸林可霉素(Lincomycin Hydrochloride)又称洁霉素,化学式C18H34N2O6S,为林可胺类药物,属窄谱抗生素。

作用机理为抑制细菌细胞蛋白质的合成,有较好的抗革兰氏阳性菌作用,特别是对葡萄球菌、溶血性链球菌和肺炎链球菌有较强的抑制作用,但其作用效果不及青霉素类和头孢类[1]。

临床主要用于敏感菌引起的各种感染,如呼吸系统、免疫系统、皮肤及泌尿系统等组织的感染。

用作饲料添加剂时可促进肉鸡和育肥猪生长,提高其饲料利用率。

随着兽药行业的发展,其监督制度日益完善,为了适应兽药生产单位质量自控与监督检验机构逐渐增加的监督检验任务的需要,本试验利用高效液相色谱(HPLC)检测原理,建立了快速、准确的用高效液相色谱(HPLC)法测定兽药盐酸林可霉素预混剂中林可霉素含量的方法。

1 材料与方法1.1 主要仪器与试剂2 结果2.1 适应性试验结果适应性试验结果表明林可霉素与林可霉素B两峰完全分离,相邻之间的分离度为4.35(表1)。

用反相高效液相色谱法测定克林霉素磷酸酯注射液中克林霉素及有关物质含量的效果分析董宏伟，李新军，王晓光（福安药业集团烟台只楚药业有限公司，山东　烟台　264002）[摘要]目的：分析用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定克林霉素磷酸酯注射液中克林霉素及有关物质含量的效果。

方法：本次实验采用RP-HPLC 法测定克林霉素磷酸酯注射液中克林霉素及有关物质的含量。

本次实验使用的色谱柱为C18色谱柱（150×4.6mm，5 μm），使用的填料为ODS 填料，流动相为pH 2.5的磷酸二氢钾溶液-乙腈（775:225），流动相的流速为1.0ml/min，运行时间为三倍主峰保留时间，加样量为20 μl，检测波长为273 nm。

在该色谱条件下对克林霉素磷酸酯注射液中克林霉素及有关物质的含量进行测定。

结果：克林霉素的含量在0.07475～0.67363 mg/L 区间时，呈现出良好的线性关系，r=0.9992。

本法测得回收率的平均值为99.8%，RSD 值为0.7%。

克林霉素磷酸酯注射液中克林霉素的含量为99.3%～104.4%，相关物质的含量为2.7%～3.0%。

结论：用RP-HPLC 法测定克林霉素磷酸酯注射液中的克林霉素及有关物质含量的效果较为理想。

[关键词]反相高效液相色谱法；克林霉素磷酸酯注射液；克林霉素的含量；有关物质[中图分类号]R446 [文献标识码]A [文章编号]2095-7629-（2021）02-0013-02呼气样品中13C 的含量）。

若结果＞4表示对研究对象进行13C-尿素呼气试验的结果为阳性，若结果≤4表示对研究对象进行13C-尿素呼气试验的结果为阴性。

进行血清Hp 抗体分型检测的方法为：在清晨，采集研究对象的空腹肘静脉血3 ml。

将静脉血静止放置2 h 后进行血清分离。

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法从血清中分离出vacA 基因、cagA 基因、尿素酶A、尿素酶B 等Hp 抗原。

克林霉素磷酸酯乳膏剂的研制及其质量控制沈阳药学院药学系2002级李烨堃摘要：目的：介绍克林霉素磷酸酯乳膏剂的处方工艺研究过程，并对其质量控制方法进行了研究。

方法：以硬脂酸、十八醇等作为油相辅料，制成克林霉素磷酸酯水包油型乳膏剂，确定质量控制方法并进行稳定性研究。

结果：按试验处方工艺制备的样品经温度40℃、相对湿度75%条件下考察6各月，有关物质略有上升，其它项目均无明显变化。

室温留样稳定性考察12个月，有关物质略有上升，所检其它各项目均无明显变化。

结论：工艺可行，所得样品质量可控，具有刺激性小，性质相对稳定的特点。

关键词克林霉素磷酸，乳膏剂，质量控制，稳定性克林霉素磷酸酯乳膏剂主要用于治疗痤疮。

痤疮是一种最常见的皮肤病，11~30岁年龄组发病率较高，严重者可持续数年，甚至导致瘢痕，给病人造成严重的精神损害。

其发病机理是由于皮脂腺管道阻塞，毛囊中皮脂腺产生过量的皮脂及毛囊壁脱落的角质细胞过多。

而厌氧微生物痤疮丙酸杆菌可在过量的皮脂与毛囊细胞的环境中繁殖，产生趋化因子及炎症前介质，引起炎症。

［1］克林霉素磷酸酯作用机制为抑制细菌蛋白质合成，其抗菌谱与盐酸林可霉素相同，抗菌活性比盐酸林可霉素强4-8倍；克林霉素磷酸酯比盐酸克林霉素的脂溶性和渗透性好，刺激性小。

品主要对革兰氏阳性球菌及厌氧菌有很强的抗菌活性，对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血性链球菌、草绿色链球菌、肺炎链球菌、白喉杆菌等革兰氏阳性菌以及消化链球菌、脆弱类杆菌、梭杆菌属、拟杆菌属、丙酸杆菌属、真杆菌等厌氧球菌有抗菌作用。

克林霉素磷酸酯在试管中虽然没有活性，但表皮及粘膜上的磷酸酯酶可将克林霉素磷酸酯水解成克林霉素而发挥作用。

文献报道［2］，克林霉素可抑制所有培养的痤疮丙酸杆菌，其最低抑菌浓度MIC约为0.4mg/ml。

本品与其它外用药物如过氧化二苯甲酰及维甲酸比较疗效相同，但副作用如红肿、脱皮及痕痒等明显减少。

克林霉素于1966年由Magerlein等研制成功，克林霉素磷酸酯于1989年在美国上已开发的剂型有注射剂、溶液剂、凝胶剂等。