高效液相色谱法概述与表现
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高效液相色谱简介及操作
HPLC和经典液相色谱法的比较
3.高效液相色谱法的分类
• 通常将液相色谱法按分离机理分成吸附色谱法、分配色谱法、离子色 谱法和凝胶色谱法四大类。
4.如何阅读色谱图？？
tR：保留时间；tM：死时间； ：调整保留时间； W：峰宽
• 定性分析：在同一色谱系统中相同物质具 有相同的保留值 • 定量分析：组分含量与其响应值（峰高或 面积）成正比
2 色谱柱使用的注意事项
• 色谱柱在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动。 • 当分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存（一般 为甲醇）。 • 每天工作结束后用适当的溶剂来清洗柱。
3 其他注意事项
• 未经提取净化的蛋白样品、血样、生物样品绝对禁 止直接进样分析。 • 要注意流动相的脱气。 • 避免使用高粘度的溶剂作为流动相。 • 使用新鲜配制的流动相，特别是水溶剂或缓冲液建 议不超过两天，最好每天更换。
（5）色谱柱平衡后，打开检测器（开灯） （6）测定样品 （7）清洗仪器
色谱柱及流路清洗 进样阀清洗 进样针清洗
四、主要注意事项
1 泵使用的注意事项
•
• •
• •
防止任何固体微粒进入泵体（用0.22 um或0.45 um 的微孔滤膜过滤） 流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲盐的流 动相不应保留在泵内更不允许留在柱内。 泵工作时防止溶剂瓶内的流动相用完，否则空泵运 转一是会使大量空气进入柱内柱床崩塌、也会磨损柱塞、 密封圈，最终产生漏液。 输液泵的工作压力决不要超过规定的最高压力。 流动相应先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量 的稳定性和分析结果。
c. 荧光检测器 (FLD) 只适用于具有荧光的有机化合物（如多环芳烃、氨基 酸、胺类、维生素和某些蛋白质等）的测定。
高效液相色谱法
2．高效液相色谱法与气相色谱法的比较
（l）气相色谱法：分析对象仅占有机物总数的20％。 高效液相色谱法：分离和分析占有机物总数近80％的那些 高沸点、热稳定性差、离子型化合物及摩尔质量大的物质。
（2）气相色谱：流动相与组分不产生相互作用力，仅起运 载作用。 高效液相色谱法：流动相对组分可产生一定亲和力，并参与 固定相对组分作用的剧烈竞争，流动相对分离起很大作用， 相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数；
高压输液泵应符合下列要求：密封性好，输出 流量恒定，压力平稳，可调范围宽，便于迅速 更换溶剂及耐腐蚀。
高压输液泵
常用的输液泵分为恒流泵和恒压泵两种。 恒流泵特点是在一定操作条件下，输出流量保持恒定而与色谱 柱引起阻力变化无关； 恒压泵是指能保持输出压力恒定，但其流量则随色谱系统阻力 而变化，故保留时间的重视性差。 目前主要使用恒流泵，又称机械泵，它又分机械注射泵和机械 往复泵两种，应用最多的是机械往复泵。
（四）检测系统
两种基本类型的检测器： 溶质型检测器：它仅对被分离组分的物理或化学特性有响应， 属于这类检测器的有紫外、荧光、安培检测器等。 总体检测器：它对试样和洗脱液总的物理或化学性质有响应， 属于这类检测器的有示差折光，电导检测器等。 （l）紫外检测器 （2）荧光检测器 （3）示差折光率检测器 （4）电化学检测器
高效液相色谱法
High Performance Liquid Chromatography，HPLC
§1
概 述
Introduction
一、高效液相色谱法概述
高效液相色谱法（HPLC）吸取了气相色谱与经典液相色谱优 点，并用现代化手段加以改进。
引入了气相色谱的理论;
在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器; 具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点;
高效液相色谱原理
高效液相色谱法（HPLC）一、方法原理1、液相色谱法概述高效液相色谱分析法其工作流程为：高压输液泵将贮液器中的流动相以稳定的流速(或压力)输送至分析体系，在色谱柱之前通过进样器将样品导人，流动相将样品依次带入预柱、色谱柱，在色谱柱中各组分被分离，并依次随流动相流至检测器，检测到的信号送至数据处理系统记录、处理和保存。
HPLC仪器的基本结构2、高效液相色谱法的特点（HPLC）与经典柱色谱原理相同，是由液体流动相将被分离混合物带入色谱柱中，根据各组分在固定相及流动相中吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异来进行分离。
由于高压输液泵、高灵敏度检测器和高效固定相的使用，提高了柱效率，降低了检出限，缩短了分析时间。
特点是选择性高、分离效能高、分析速度快的特点。
高沸点有机物的分析、离子型化合物、高分子化合物、热稳定性差的化合物以及具有生物活性的物质，弥补了气相色谱法的不足。
高效液相色谱法与气相色谱法相比，各有所长，互相补充。
如果能用气相色谱法分析的样品，一般不用液相色谱法，因为气相色谱法分析速度更快、更方便、成本更低。
3、高效液相色谱法的固定相和流动相（1）固定相表面多孔型和全多孔型两大类。
（2）流动相（淋洗液）流动相的选择对改善分离效果产生重要的辅助效应。
从实用，选用的流动相具有廉价、易购的特点外，还应满足下列要求：①与固定相互不相溶，并能保持色谱柱的稳定性。
②高纯度，以防所含微量杂质在柱中积累，引起柱性能的改变。
③与所用的检测器相匹配。
④应对样品有足够的溶解能力，以提高测定的灵敏度。
⑤具有低的黏度（可减少溶质的传质阻力，提高柱效）和适当低的沸点。
⑥应避免使用具有显著毒性的溶剂，以保证工作人员的安全。
液相色谱法中常用的流动相有正己烷、正庚烷、甲醇、乙腈等。
4、高效液相色谱法的主要类型（1）液—固吸附色谱法①分离原理：基于各组分吸附能力的差异来进行混合物分离的。
②固定相：极性和非极性两种。
极性固定相：硅胶、氧化镁。
高效液相色谱-电化学法_概述及解释说明
高效液相色谱-电化学法概述及解释说明1. 引言1.1 概述高效液相色谱-电化学法（简称HPLC-EC）是一种常用的分析技术，利用高效液相色谱技术和电化学检测原理相结合，实现对样品中化合物的分离和定量分析。
此方法具有灵敏度高、选择性好、重复性好等优点，因而在环境科学、生物医药和食品安全等领域得到广泛应用。
1.2 文章结构本文共分五个部分进行阐述。
引言部分是对整篇文章的概述，介绍了HPLC-EC 技术的背景和研究意义。
第二部分将对HPLC技术和电化学法以及它们之间的结合进行简要介绍。
接下来一节将详细讨论HPLC-EC的实验原理与分析过程。
第四部分将探讨HPLC-EC在环境污染物、生物医药和食品安全领域中的应用案例。
最后一节是总结与展望，回顾整篇文章所提到的内容，并展望该技术在未来发展中可能取得的进展。
1.3 目的本文旨在全面介绍高效液相色谱-电化学法的相关知识，深入探讨其原理及其在环境科学、生物医药和食品安全领域的应用。
通过文章阐述，读者可以对HPLC-EC技术有一个全面的了解，并且了解到该技术在不同领域的实际应用和发展趋势。
2. 高效液相色谱-电化学法概述：2.1 高效液相色谱技术简介高效液相色谱(HPLC)是一种广泛应用于分析化学领域的分离技术。
它基于物质在溶剂流动下通过固定相的不同速率进行分离，可用于分析和检测各种化合物。
HPLC技术具有分离效果好、选择性强、重复性好等特点，因此被广泛应用于环境、生物医药和食品安全等领域的样品分析中。
2.2 电化学法简介电化学法是利用电极与溶液中存在的化学反应产生的电流或电势来检测或测定物质的一种方法。
根据所使用的电极类型和测量参数，常见的电化学方法包括极谱法、电化学滴定法、恒定电位法等。
这些方法可以实现对不同种类和浓度范围内的物质进行快速准确的检测和分析。
2.3 结合应用优势高效液相色谱-电化学法(HPLC-EC)是将HPLC技术与电化学方法相结合而形成的一种分析技术。
高效液相色谱HPLC简介.ppt
种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不
同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。
2
操作过程图示
3
色谱分离的机理
分离是一个 物理的过程。
固定相(Stationary Phase) 流动相(Mobile Phase) 样品 (溶解于流动相中的溶质)
4
项目 进样方式 流动相 分离原理 检测器
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液-液分配色谱
固定相与流动相均为液体（互不相溶）； 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配； 流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定 液的极性（正相 normal phase），反之，流动相的极性大于固定液的极性 （反相 reverse phase）。正相与反相的出峰顺序相反； 固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用； 化学键合固定相：将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的 游离羟基上。反相键合相色谱柱最常用的就是ODS柱，也就是C18柱。
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液相色谱类型
• 正相色谱：固定相为极性，流动相为非极性。 • 反相色谱：固定相为非极性，流动相为极性。用的最多，约占60～70％。
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色谱柱简介
• 正相柱------固定相通常为硅胶以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2） 和氰基团（CN）的键合相填料。 由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离 的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色 谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷，氯仿，二氯 甲烷等。
9
检测器简介（二）
◆ 电导检测器（ECD） 原理：监测溶液的电导率变化的检测器。 特点：选择性检测器、测量时要求恒温、对流动相的组成变化有明显响应、 灵敏度低（10-3g）。适用于离子型化合物。
高效液相色谱法
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特点： 特点： 氰基键合相选择性与硅胶类似 键合相选择性与硅胶类似， ① 氰基键合相选择性与硅胶类似， 但极性更小。相同流动相， 但极性更小。相同流动相，组分保留 时间小于硅胶。 时间小于硅胶。 氨基键合相 主要用于糖类分析， ② 氨基键合相 主要用于糖类分析， 糖类分析专用柱 分析专用柱。 是糖类分析敏度： 紫外、荧光、电化学、 紫外、荧光、电化学、质谱等高灵敏 度检测器使用。 度检测器使用。 最小检测量： 最小检测量： 10-9 ~10-11 g 4. 高度自动化： 高度自动化： 采用色谱专家系统为核心的色谱智 能化和仿真优化技术， 能化和仿真优化技术，使 HPLC不仅能 不仅能 自动处理数据，绘图和打印分析结果， 自动处理数据，绘图和打印分析结果， 而且还可以自动控制色谱条件。 而且还可以自动控制色谱条件。
32
2. 流动相极性与容量因子的关系 流动相极性大，洗脱能力增加， 流动相极性大，洗脱能力增加， k 减小，tR 减小；反之， k 与 tR 均 减小， 减小；反之， 增加。 增加。 极性小的组分先出柱
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四、正、反相色谱法 正相HPLC（normal phase HPLC） （ 正相 ） 固定相： 固定相：极性 常用：改性硅胶 硅胶、 常用：改性硅胶、氰基柱 流动相: 非极性（或弱极性） 流动相 非极性（或弱极性） 常用： 正己烷 常用： 流动相极性小于固定相极性
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第二节 分离机制 一、液-固吸附色谱法 固吸附色谱法
(Liquid-Solid Chromatography)
（一）吸附机理 根据吸附剂对样品中各组分的吸 根据吸附剂对样品中各组分的吸 附能力差异而分离 而分离。 附能力差异而分离。 吸附过程是被分离组分的分子 与流动相分子争夺吸附剂表面活性 中心(active center)的结果。 的结果。 中心 的结果
仪器分析第4讲 高效液相色谱法
经典液相色谱法 75-600 0.01-1.0 1-20 50-200 2-50 1-10
高效液相色谱法 3-50（常用5-10）
20-300 0.05-1.0
2-30 104-105 10-6-10-2
2．高效液相色谱法与气相色谱法
（l）气相色谱法分析对象只限于分析气体和 沸点较低的化合物，它们仅占有机物总数 的20％．对于占有机物总数近80％的那些高 沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质， 目前主要采用高效液相色谱法进行分离和 分析．
3. 柱外效应
由于色谱柱之外的因 素引起的色谱峰的展 宽，例如进样系统、 连接管路及检测器的 死体积等。
3-3 高效液相色谱的类型及其分离原理
液—液分配色谱及化学键合相色谱 液—固吸附色谱 离子交换色谱 离子色谱 空间排阻色谱
1、 液-液分配色谱
liquid- liquid partition chromatography
4、 离子色谱
ion chromatography
离子色谱法是由离子交换色谱法派生出来的一种 分离方法。由于离子交换色谱法在无机离子的分 析和应用受到限制。例如，对于那些不能采用紫 外检测器的被测离子，如采用电导检测器，由于 被测离子的电导信号被强电解质流动相的高背景 电导信号掩没而无法检测。
2、 液-固吸附色谱
liquid-solid adsorption chromatography
流动相为液体，固定相为固体吸附剂
分离原理：利用溶质分子占据固定相表面吸附 活性中心能力的差异
分离前提：K不等或k不等
液—固吸附色谱
固体吸附剂主要类型： 极性的硅胶（应用最广） 氧化铝 分子筛 非极性的活性炭
1971年科克兰等人出版了《液相色谱的现代实践》一 书，标志着高效液相色谱法（HPLC）正式建立。
高效液相色谱原理
高效液相色谱法（HPLC）一、方法原理1、液相色谱法概述高效液相色谱分析法其工作流程为：高压输液泵将贮液器中的流动相以稳定的流速(或压力)输送至分析体系，在色谱柱之前通过进样器将样品导人，流动相将样品依次带入预柱、色谱柱，在色谱柱中各组分被分离，并依次随流动相流至检测器，检测到的信号送至数据处理系统记录、处理和保存。
HPLC仪器的基本结构2、高效液相色谱法的特点（HPLC）与经典柱色谱原理相同，是由液体流动相将被分离混合物带入色谱柱中，根据各组分在固定相及流动相中吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异来进行分离。
由于高压输液泵、高灵敏度检测器和高效固定相的使用，提高了柱效率，降低了检出限，缩短了分析时间。
特点是选择性高、分离效能高、分析速度快的特点。
高沸点有机物的分析、离子型化合物、高分子化合物、热稳定性差的化合物以及具有生物活性的物质，弥补了气相色谱法的不足。
高效液相色谱法与气相色谱法相比，各有所长，互相补充。
如果能用气相色谱法分析的样品，一般不用液相色谱法，因为气相色谱法分析速度更快、更方便、成本更低。
3、高效液相色谱法的固定相和流动相（1）固定相表面多孔型和全多孔型两大类。
（2）流动相（淋洗液）流动相的选择对改善分离效果产生重要的辅助效应。
从实用，选用的流动相具有廉价、易购的特点外，还应满足下列要求：①与固定相互不相溶，并能保持色谱柱的稳定性。
②高纯度，以防所含微量杂质在柱中积累，引起柱性能的改变。
③与所用的检测器相匹配。
④应对样品有足够的溶解能力，以提高测定的灵敏度。
⑤具有低的黏度（可减少溶质的传质阻力，提高柱效）和适当低的沸点。
⑥应避免使用具有显著毒性的溶剂，以保证工作人员的安全。
液相色谱法中常用的流动相有正己烷、正庚烷、甲醇、乙腈等。
4、高效液相色谱法的主要类型（1）液—固吸附色谱法①分离原理：基于各组分吸附能力的差异来进行混合物分离的。
②固定相：极性和非极性两种。
极性固定相：硅胶、氧化镁。
高效液相色谱方法及应用
1.1.1 与经典液相色谱法比较：
高速、高效、高灵敏度、高自动化。
1.1.2 与气相色谱法比较
应用范围广、更利于选择最佳分离条件且可在常 温下操作。
1.1.3 高效液相色谱法的特点
（1）分离效能高 （2）选择性高 （3）检测灵敏度高 （4）分析速度快 适合于高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离 分析方法。
1.2 高效液相色谱法的分类
按溶质在两相分离过程中的物理化学原理分类 1.2.1 吸附色谱（Adsorption
Chromatography） 1.2.2 分配色谱（Partition Chromatography） 1.2.3 离子色谱（Ion Chromatography） 1.2.4 体积排阻色谱（Size Exclusion
2.3.3 柱温箱的温度控制要求比较精确，因 为流体的粘度受温度的影响较大。
2.4 检测器
2.4.1 检测器的性能指标 （1）噪声 （2）基线漂移 （3）灵敏度 （4）线性范围 （5）检测器的池体积
2.4.2 检测器的种类
2.4.2.1 紫外吸收检测器
（ultraviolet－visible detector，UVD ）
• 进样系统：进样器，进样阀。 • 分离系统：色谱柱，恒温箱。 • 检测系统记录系统：检测器、记录装置
2.1 高压输液系统
2.1.1 贮液罐 2.1.2 流动相脱气
（1）吹氦脱气法 （2）加热回流法 （3）抽真空脱气法 （4）超声波脱气法 （5）在线真空脱气法
2.1.3 高压输液泵
（1）恒流泵：输出恒定体积流量的流动相 （2）恒压泵：又称气动放大泵，输出恒定压力的泵。
Chromatography） 1.2.5 亲和色谱（Affinity Chromatography）
高速、高效、高灵敏度、高自动化。
1.1.2 与气相色谱法比较
应用范围广、更利于选择最佳分离条件且可在常 温下操作。
1.1.3 高效液相色谱法的特点
（1）分离效能高 （2）选择性高 （3）检测灵敏度高 （4）分析速度快 适合于高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离 分析方法。
1.2 高效液相色谱法的分类
按溶质在两相分离过程中的物理化学原理分类 1.2.1 吸附色谱（Adsorption
Chromatography） 1.2.2 分配色谱（Partition Chromatography） 1.2.3 离子色谱（Ion Chromatography） 1.2.4 体积排阻色谱（Size Exclusion
2.3.3 柱温箱的温度控制要求比较精确，因 为流体的粘度受温度的影响较大。
2.4 检测器
2.4.1 检测器的性能指标 （1）噪声 （2）基线漂移 （3）灵敏度 （4）线性范围 （5）检测器的池体积
2.4.2 检测器的种类
2.4.2.1 紫外吸收检测器
（ultraviolet－visible detector，UVD ）
• 进样系统：进样器，进样阀。 • 分离系统：色谱柱，恒温箱。 • 检测系统记录系统：检测器、记录装置
2.1 高压输液系统
2.1.1 贮液罐 2.1.2 流动相脱气
（1）吹氦脱气法 （2）加热回流法 （3）抽真空脱气法 （4）超声波脱气法 （5）在线真空脱气法
2.1.3 高压输液泵
（1）恒流泵：输出恒定体积流量的流动相 （2）恒压泵：又称气动放大泵，输出恒定压力的泵。
Chromatography） 1.2.5 亲和色谱（Affinity Chromatography）
高效液相色谱法—认识高效液相色谱法(仪器分析课件)
二、高效液相色谱法的基本原理
基本原理：
混合组分的样品在色谱柱中，各组分由于在流动相 和固定相之间溶解、吸附、渗透或离子交换等作用力的 不同，随流动相在两相间进行反复多次分配过程，经过 一定长度的色谱柱，彼此分离开来，最后按一定顺序流 出。
三、高效液相色交换色谱
固定相为离子交换树脂，流动相为无机酸或无机碱的水溶液。各种 离子根据它们与树脂上的交换基团的交换能力的不同而得到分离。
4. 凝胶色谱（空间排阻色谱）
以凝胶为固定相。凝胶是一种经过交联的、具有立体网状结构和不同 孔径的多聚体的通称。如葡聚糖凝胶、琼脂糖等软质凝胶；多孔硅胶、 聚苯乙烯凝胶等硬质凝胶。
以固体吸附剂为固定相，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是5～ 10μm的硅胶吸附剂。流动相可以是各种不同极性的一元或多元溶剂。
2.分配色谱（液-液分配色谱）
早期通过在担体上涂渍一薄层固定液制备固定相，现多为化学键合 固定相，即用化学反应的方法通过化学键将固定液结合在担体表面。
三、高效液相色谱法的主要分离类型
一、高效液相色谱法的基本概念
二、高效液相色谱法的基本原理
三、高效液相色谱法的主要分离类型 四、HPLC与GC的比较
一、高效液相色谱法的基本概念
基本概念：在技术上采用了高效固定相、高压输液系统和高灵 敏度的在线检测器，是一种新型分离分析技术。
特点：分离效率高、分析速度快、应用范围广、操作自动化。
四、HPLC与GC的比较
1）应用范围不同 液相色谱非常适合分子量较大、难气化等物质的分离分析。
2）液相色谱能完成难度较高的分离工作 ① 可选用不同比例的两种或两种以上的液体作流动相，增大分离 的选择性。 ② 液相色谱固定相类型多，作为分析时选择余地大。 ③ 液相色谱通常在室温下操作。
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• 超声波脱气法：将溶剂储液瓶置于超声波清洗槽中，以水为介质超声脱 气。一般500ml溶剂约需超声20~30min即可达到驱气目的。此法方便，不 影响溶剂组成，并适用于高各效种液溶相剂色，谱目法前概国述内和表使用较为普遍。
现
高压泵
返回
目前高效液相色谱使用的高压泵分为恒压和恒流泵，恒流 泵使输出的液体流量稳定，而恒压泵则使输出的液体压力稳定。 恒流泵中有往复泵、累积型往复泵、注射泵，恒压泵有气动放 大泵。各种高压泵均具有以下性能：
1-接色谱柱；2-流动高相效入液相口色；谱法3概-高述和压表气入口；4-气体放空 现
梯度洗脱装置
外梯度: 将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入混合 室，用高压输液泵混合液输入色谱柱。
高效液相色谱法概述和表 现
内梯度: 一台高压泵, 通过比例调节阀，将两种或多种不同 极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。
（3）气相色谱一般都在较高温度下进行的，而高效液相色 谱法则经常可在室温条件下工作。
高效液相色谱法概述和表 现
§5-2高效液相色谱仪器结构 返回
色谱仪器的流程由液体流动相的输液系统、进样 系统、分离系统、检测系统、信号放大记录系统组成，
其中高压泵、色谱柱和检测系统是高效液相色谱的主
要部件。
六通阀
水
甲 醇
进样口
复式阀 混合室
压力表 梯度洗脱
色谱控制室
高压泵
高效液相色谱法概述和表 现
柱 记录仪
（计算机）
检测器
回 收 瓶
输液系统 返回
• 包括流动相储液瓶、过滤器、脱气装置、高压泵、压 力脉动阻尼器、梯度洗脱装置等部件组成
高效液相色谱法概述和表 现
脱气装置
返回
脱气就是驱除溶解在溶剂中的气体。(1)脱气是为了防止 流动相从高压柱内流出时，释放出气泡。这些气泡进入检测 器后会使噪声剧增，甚至不能正常检测。(2)溶解氧会与某些 流动相与固定相作用，破坏它们的正常功能。对水及极性溶 剂的脱气尤为重要，因为氧在其中的溶解度较大。
(1) 泵体材料能耐化学腐蚀。通常使用普通耐酸不锈钢或优质耐酸 不锈钢。
(2) 能在高压下连续上作。通常要求耐压40~50MPa·cm-2，能在 8~24h连续上作，压力平稳。
(3) 输出流量范围宽。一般在0.01~10mL/min。
(4) 输出流量稳定可调。高效液相色谱使用的检测器，大多数对流 量变化敏感，高压输液泵应提供无脉冲流量。这样可以降低基 线噪声并获较好的检测下限，流量控制的精密度应小于1％， 最好为0.5％，重复性最好为0.5％。
(2)气相色谱采用流动相是惰性气体，它对组分没有亲和力， 即不产生相互作用力，仅起运载作用。而高效液相色谱法中流 动相可选用不同极性的液体，选择余地大，它对组分可产生一 定亲和力，并参与固定相对组分作用的剧烈竞争。因此，流动 相对分离起很大作用，相当于增加了一个控制和改进分离条件 的参数，这为选择最佳分离条件提供了极大方便。
高效液相色谱仪举例
高效液相色谱法概述和表 现
高效液相色谱法概述和表 现
高效液相色谱法概述和表 现
高效液相色谱法概述和表 现
高效液相色谱法的特点
与经典液相色谱比较（四高） ：
高压： 压力可达150~300Kg/cm2。 高速： 流速为 0.1~10.0 mL/min。 高效： 可达5000块塔板/米。在一根柱中同时分离成份 可达100种。 高灵敏度：紫外检测器灵敏度可达0.01ng(1ng=109g)。 同时消耗样品少。
高效液相色谱法概 述和表现
高效液相色谱法概述和表 现
返回
• 由于气相色谱只能分析M<1000、低沸点、易挥发、 热稳定性好的组分；对于M>1000、高沸点、难挥发、 热稳定差的样品就无能为力了，随着工业生产的需 要，高效液相色谱的研究成为一个迫切课题。
• 液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温 和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱
如用Lichrosorb－ODS色谱柱，采用梯度洗脱，可在不 到0.5h内分离出尿中104个组分.
高效液相色谱法概述和表 现
与气相色谱相比
高沸点、热不稳定有机化合物及生化试样的高效分离分析方 法。
（l)气相色谱法分析对象只限于分析气体和沸点较低的化 合物，它们仅占有机物总数的20％。对于占有机物总数近80％ 的那些高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质，目前主要采 用高效液相色谱法进行分离和分析。
注射泵
返回
注射泵类似于注射器，用一台步进电机驱动注射泵的活塞把
液流从泵腔中挤出．泵腔体积较大(250~500mL)，密封性好的活 塞把泵腔中的液体等速流出.
1-电机；2-涡轮；3-高现螺效液旋相；色谱4法-螺概述杆和；表 5-活塞；6-至色谱柱
气动放大泵
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气动放大泵是利用气体为动力源 。适合于液相 色谱柱的装填，近代的液相色谱仪不用这种泵。
常用的脱气方法有：
• 低压脱气法：电磁搅拌、水泵抽空，可同时加温或向溶剂吹氮。由于抽 空或加热过程中可能引起流动相中低沸点溶剂的挥发而影响其组成，此 法不适于二元以上溶剂组成的流动相脱气。
• 吹氦脱气法：氦气经由一圆筒过滤器通入冲洗剂中，在0.5公斤／厘米压 力下保持10~15分钟，氦气的小气泡可将溶于流动相中的空气带出，此法 简单方便，适用于所有冲洗剂脱气，但由于氦气价格昂贵，在国内尚难 于普及。
法，此方法柱效低、（常有几个小时）。
• 在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期， 气相色谱理论迅速发展以及的研制成功，为 高效液相色谱的发展奠定了基础，高效液相 色谱又称高压液相色谱法(HPLC)，也称现代液 相色谱。
• Stein和Moore获得高效了液相1色9谱7法2概年述的和表诺贝尔化学奖 现
高效液相色谱法概述和表 现
往复泵
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往复泵有两类，一种是活塞式，另一种是隔膜式
形 成 脉 冲 式 供 液
高效液相色谱法概述和表 现
累积型往复泵
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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累积型往复泵有两个泵头，以串联方式连接在一起，这样 可以提供平稳的液流。所以如此是因为两级泵腔排液体积不 同，第一级泵腔是第二级泵控的一倍
1-高压流动相出口；高现效2-液二相级色谱活法塞概；述和3表-一级活塞；4-流动相
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进样系统
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通常使用耐高压的六通阀进样装置和自动进 样系统。分部分进样和整体进样。
现
高压泵
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目前高效液相色谱使用的高压泵分为恒压和恒流泵，恒流 泵使输出的液体流量稳定，而恒压泵则使输出的液体压力稳定。 恒流泵中有往复泵、累积型往复泵、注射泵，恒压泵有气动放 大泵。各种高压泵均具有以下性能：
1-接色谱柱；2-流动高相效入液相口色；谱法3概-高述和压表气入口；4-气体放空 现
梯度洗脱装置
外梯度: 将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入混合 室，用高压输液泵混合液输入色谱柱。
高效液相色谱法概述和表 现
内梯度: 一台高压泵, 通过比例调节阀，将两种或多种不同 极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。
（3）气相色谱一般都在较高温度下进行的，而高效液相色 谱法则经常可在室温条件下工作。
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§5-2高效液相色谱仪器结构 返回
色谱仪器的流程由液体流动相的输液系统、进样 系统、分离系统、检测系统、信号放大记录系统组成，
其中高压泵、色谱柱和检测系统是高效液相色谱的主
要部件。
六通阀
水
甲 醇
进样口
复式阀 混合室
压力表 梯度洗脱
色谱控制室
高压泵
高效液相色谱法概述和表 现
柱 记录仪
（计算机）
检测器
回 收 瓶
输液系统 返回
• 包括流动相储液瓶、过滤器、脱气装置、高压泵、压 力脉动阻尼器、梯度洗脱装置等部件组成
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脱气装置
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脱气就是驱除溶解在溶剂中的气体。(1)脱气是为了防止 流动相从高压柱内流出时，释放出气泡。这些气泡进入检测 器后会使噪声剧增，甚至不能正常检测。(2)溶解氧会与某些 流动相与固定相作用，破坏它们的正常功能。对水及极性溶 剂的脱气尤为重要，因为氧在其中的溶解度较大。
(1) 泵体材料能耐化学腐蚀。通常使用普通耐酸不锈钢或优质耐酸 不锈钢。
(2) 能在高压下连续上作。通常要求耐压40~50MPa·cm-2，能在 8~24h连续上作，压力平稳。
(3) 输出流量范围宽。一般在0.01~10mL/min。
(4) 输出流量稳定可调。高效液相色谱使用的检测器，大多数对流 量变化敏感，高压输液泵应提供无脉冲流量。这样可以降低基 线噪声并获较好的检测下限，流量控制的精密度应小于1％， 最好为0.5％，重复性最好为0.5％。
(2)气相色谱采用流动相是惰性气体，它对组分没有亲和力， 即不产生相互作用力，仅起运载作用。而高效液相色谱法中流 动相可选用不同极性的液体，选择余地大，它对组分可产生一 定亲和力，并参与固定相对组分作用的剧烈竞争。因此，流动 相对分离起很大作用，相当于增加了一个控制和改进分离条件 的参数，这为选择最佳分离条件提供了极大方便。
高效液相色谱仪举例
高效液相色谱法概述和表 现
高效液相色谱法概述和表 现
高效液相色谱法概述和表 现
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高效液相色谱法的特点
与经典液相色谱比较（四高） ：
高压： 压力可达150~300Kg/cm2。 高速： 流速为 0.1~10.0 mL/min。 高效： 可达5000块塔板/米。在一根柱中同时分离成份 可达100种。 高灵敏度：紫外检测器灵敏度可达0.01ng(1ng=109g)。 同时消耗样品少。
高效液相色谱法概 述和表现
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• 由于气相色谱只能分析M<1000、低沸点、易挥发、 热稳定性好的组分；对于M>1000、高沸点、难挥发、 热稳定差的样品就无能为力了，随着工业生产的需 要，高效液相色谱的研究成为一个迫切课题。
• 液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温 和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱
如用Lichrosorb－ODS色谱柱，采用梯度洗脱，可在不 到0.5h内分离出尿中104个组分.
高效液相色谱法概述和表 现
与气相色谱相比
高沸点、热不稳定有机化合物及生化试样的高效分离分析方 法。
（l)气相色谱法分析对象只限于分析气体和沸点较低的化 合物，它们仅占有机物总数的20％。对于占有机物总数近80％ 的那些高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质，目前主要采 用高效液相色谱法进行分离和分析。
注射泵
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注射泵类似于注射器，用一台步进电机驱动注射泵的活塞把
液流从泵腔中挤出．泵腔体积较大(250~500mL)，密封性好的活 塞把泵腔中的液体等速流出.
1-电机；2-涡轮；3-高现螺效液旋相；色谱4法-螺概述杆和；表 5-活塞；6-至色谱柱
气动放大泵
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气动放大泵是利用气体为动力源 。适合于液相 色谱柱的装填，近代的液相色谱仪不用这种泵。
常用的脱气方法有：
• 低压脱气法：电磁搅拌、水泵抽空，可同时加温或向溶剂吹氮。由于抽 空或加热过程中可能引起流动相中低沸点溶剂的挥发而影响其组成，此 法不适于二元以上溶剂组成的流动相脱气。
• 吹氦脱气法：氦气经由一圆筒过滤器通入冲洗剂中，在0.5公斤／厘米压 力下保持10~15分钟，氦气的小气泡可将溶于流动相中的空气带出，此法 简单方便，适用于所有冲洗剂脱气，但由于氦气价格昂贵，在国内尚难 于普及。
法，此方法柱效低、（常有几个小时）。
• 在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期， 气相色谱理论迅速发展以及的研制成功，为 高效液相色谱的发展奠定了基础，高效液相 色谱又称高压液相色谱法(HPLC)，也称现代液 相色谱。
• Stein和Moore获得高效了液相1色9谱7法2概年述的和表诺贝尔化学奖 现
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往复泵
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往复泵有两类，一种是活塞式，另一种是隔膜式
形 成 脉 冲 式 供 液
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累积型往复泵
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累积型往复泵有两个泵头，以串联方式连接在一起，这样 可以提供平稳的液流。所以如此是因为两级泵腔排液体积不 同，第一级泵腔是第二级泵控的一倍
1-高压流动相出口；高现效2-液二相级色谱活法塞概；述和3表-一级活塞；4-流动相
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进样系统
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通常使用耐高压的六通阀进样装置和自动进 样系统。分部分进样和整体进样。