PDA培养基的配制及试管斜面制作

PDA培养基的配制方法一、目的要求1．学习并掌握配制培养基的一般方法和步骤。

2．学习并掌握棉塞的制作方法。

二、培养基的配制原理培养基是人工配制的各种营养物质供微生物生长繁殖的基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。

在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加上实训和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，但不论是何种培养基，均应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐等。

不同微生物对pH值要求不一样，所以配制培养基时，还应根据不同微生物对pH值的要求，将培养基调到合适的pH值范围。

三、实训材料和用具琼脂，可溶性淀粉，葡萄糖，10﹪NaOH，10﹪HCl，1mol／L NaOH，lmol／L HCl，KNO3，NaCl，K2HPO4·3H20，MgSO4·7H20，FeSO4·7H2O；试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻璃棒，天平，牛角匙，PH试纸，棉花，牛皮纸，记号笔，纱布，四、操作方法与步骤(一) 培养基的配制PDA培养基的配制其配方如下：土豆200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，水1000mL，pH值自然。

(1)称量和熬煮药品实际用量计算后，按培养基配方逐一称取去皮土豆。

土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20－30min，用可用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取。

滤液补充水分到1000ml。

(2)加热溶解把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～20g（提前搞碎），然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂完全溶解后，再补充水分至所需量。

(3)分装按实训要求，将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。

分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。

分装量：固体培养基约为试管高度的1／5，灭菌后制成斜面，分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜；半固体培养基以试管高度的1／3为宜，灭菌后垂直待凝。

pda培养基
PDA（Potato Dextrose Agar）是一种常用的培养基，以马铃薯和葡萄糖为主要成分。

它适用于真菌和霉菌的培养和鉴定。

PDA培养基的配方如下：
- 马铃薯提取物：200 g/L
- 葡萄糖：20 g/L
- 洋葱提取液：1 g/L
- 干酪膜素：0.1 g/L
- 硫酸镁：0.5 g/L
- 琼脂：15 g/L
- 蒸馏水：1000 mL
1
制备PDA培养基的步骤如下：
1. 将马铃薯洗净去皮，切成小块。

2. 将马铃薯块放入大容器中，加入适量的蒸馏水，煮沸1
小时，然后离心取得汁液。

3. 将马铃薯汁液过滤。

过滤液为马铃薯提取物。

4. 在一烧瓶中加入马铃薯提取物和葡萄糖，搅拌溶解。

5. 在另一烧瓶中加入洋葱提取液和硫酸镁，搅拌溶解。

6. 将两个烧瓶中的溶液混合在一起，调整pH值为5.6-6.2。

7. 在溶液中加入干酪膜素和琼脂，搅拌溶解。

8. 将培养基加热至沸腾，然后倒入培养瓶中。

9. 灭菌培养瓶，通常以121°C高压蒸汽灭菌20-30分钟。

PDA培养基可以用于分离和培养真菌，如酵母菌、霉菌和
子囊菌等。

它提供了合适的营养物质和适宜的条件，促进
真菌的生长和繁殖。

2。

PDA培养基的配制方法一、目的要求1．学习并掌握配制培养基的一般方法和步骤。

2．学习并掌握棉塞的制作方法。

二、培养基的配制原理培养基是人工配制的各种营养物质供微生物生长繁殖的基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。

在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加上实训和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，但不论是何种培养基，均应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐等。

不同微生物对pH值要求不一样，所以配制培养基时，还应根据不同微生物对pH值的要求，将培养基调到合适的pH值范围。

三、实训材料和用具琼脂，可溶性淀粉，葡萄糖，10﹪NaOH，10﹪HCl，1mol／L NaOH，lmol／L HCl，KNO3，NaCl，K2HPO4·3H20，MgSO4·7H20，FeSO4·7H2O；试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻璃棒，天平，牛角匙，PH试纸，棉花，牛皮纸，记号笔，纱布，四、操作方法与步骤(一) 培养基的配制PDA培养基的配制其配方如下：土豆200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，水1000mL，pH值自然。

(1)称量和熬煮药品实际用量计算后，按培养基配方逐一称取去皮土豆。

土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20－30min，用可用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取。

滤液补充水分到1000ml。

(2)加热溶解把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～20g（提前搞碎），然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂完全溶解后，再补充水分至所需量。

(3)分装按实训要求，将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。

分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。

分装量：固体培养基约为试管高度的1／5，灭菌后制成斜面，分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜；半固体培养基以试管高度的1／3为宜，灭菌后垂直待凝。

PDA培养基的配制及试管斜面制作PDA（Potato Dextrose Agar）是一种常用的培养基，用于微生物的培养和鉴定。

下面将详细介绍PDA培养基的配制方法以及试管斜面的制作步骤。

一、PDA培养基的配制方法：-马铃薯提取物：200g-葡萄糖：20g-琼脂：15g- 蒸馏水：1000ml1.将马铃薯削皮并切成小块，然后放入锅中加入足够的蒸馏水，煮沸30分钟，使马铃薯溶解。

2. 用纱布或过滤纸过滤烧开的马铃薯，收集滤液，将滤液浓缩至1000ml。

3.将浓缩后的马铃薯提取物与葡萄糖混合，搅拌均匀。

4.将琼脂加入马铃薯提取物和葡萄糖混合物中，加入足够的蒸馏水。

5.在烧杯中加热混合物，使琼脂完全溶解。

6.用自动调节器调节pH值为7.0-7.27.将混合物分装至试管或琼脂培养皿中。

8.将试管或琼脂培养皿密封并高压灭菌，高压灭菌时间为121°C，15-20分钟。

二、试管斜面的制作步骤：1.配制好的PDA培养基倒入装有试管的架子中，大约倒满1/3左右。

2.将试管架放入预热至沸腾状态的水浴中。

3.等待试管内的培养基开始沸腾，并保持沸腾状态2-3分钟。

4.将试管架从水浴中取出，让试管内的培养基冷却至接近凝固的状态。

5.倾斜试管架，使试管内的培养基斜倒在试管壁上，形成斜面。

6.等待培养基凝固完全。

7.使用无菌的环针或棉签，在斜面上划线隔离待培养的微生物。

8.将试管密封，高压灭菌。

PDA培养基配制和试管斜面制作之后，可以用于各种微生物的培养和鉴定。

在使用PDA培养基时，要注意严格无菌操作，避免外界的污染。

在制作试管斜面时，也要确保试管和培养基的完全无菌，以保证培养的准确性和可靠性。

简述pda培养基的配方及制作方法PDA（Potato Dextrose Agar）培养基是一种常用的微生物培养基，适用于真菌和细菌的培养和研究。

下面将简要介绍PDA培养基的配方及制作方法。

一、配方：PDA培养基的基本配方包括土豆提取物、葡萄糖和琼脂。

具体配方如下：- 土豆提取物：200克- 葡萄糖：20克- 琼脂：15克- 蒸馏水：1000毫升二、制作方法：1. 准备土豆提取物：将200克土豆削皮，切成小块，放入锅中加水煮沸，煮至土豆变软烂。

2. 过滤土豆提取物：将煮熟的土豆块取出，将土豆提取物过滤获得澄清的液体。

3. 加入葡萄糖和琼脂：将土豆提取物倒入烧杯中，加入20克葡萄糖，搅拌均匀。

然后加入15克琼脂，再次搅拌均匀。

4. 煮沸溶解：将烧杯放入加热板上，加热煮沸溶解琼脂和葡萄糖，搅拌均匀。

5. 装瓶和灭菌：将溶解后的培养基倒入培养瓶中，每瓶约20毫升。

然后用高压灭菌器将瓶内培养基加压灭菌，保持121摄氏度，压力为15磅，时间为15-20分钟。

6. 结果：冷却后，PDA培养基凝固并变成琼脂状，可用于微生物培养。

PDA培养基的配方中土豆提取物富含碳水化合物、蛋白质和维生素，提供了真菌和细菌所需的营养物质。

葡萄糖作为碳源供能，琼脂则使培养基凝固，便于微生物的生长和观察。

制作PDA培养基的过程中需要注意以下几点：- 严格按照配方和比例加入各种原料，确保培养基的质量。

- 加热溶解琼脂和葡萄糖时要充分搅拌，以免结块或糊底。

- 灭菌时要控制好温度、压力和时间，确保杀灭所有的细菌和真菌。

- 倒入培养瓶时要注意卫生，避免污染和外界微生物的侵入。

PDA培养基是一种常用的通用培养基，适用于各种细菌和真菌的培养和研究。

制作PDA培养基的方法简单易行，成本低廉，因此被广泛应用于微生物学实验室和工业生产中。

通过培养基上微生物的生长情况，可以判断其形态、生理特性和代谢活性等，为微生物的研究提供了重要的基础。

PDA培养基的配制方法一、目的要求1．学习并掌握配制培养基的一般方法和步骤。

2．学习并掌握棉塞的制作方法。

二、培养基的配制原理培养基是人工配制的各种营养物质供微生物生长繁殖的基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。

在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加上实训和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，但不论是何种培养基，均应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐等。

不同微生物对pH值要求不一样，所以配制培养基时，还应根据不同微生物对pH值的要求，将培养基调到合适的pH值范围。

三、实训材料和用具琼脂，可溶性淀粉，葡萄糖， 10﹪NaOH，10﹪HCl，1mol／L NaOH，lmol／L HCl，KNO3，NaCl，K2HPO4·3H20，MgSO4·7H20，FeSO4·7H2O；试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻璃棒，天平，牛角匙，PH试纸，棉花，牛皮纸，记号笔，纱布，四、操作方法与步骤(一) 培养基的配制PDA培养基的配制其配方如下：土豆200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，水1000mL，pH值自然。

(1)称量和熬煮药品实际用量计算后，按培养基配方逐一称取去皮土豆。

土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20－30min，用可用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取。

滤液补充水分到1000ml。

(2)加热溶解把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～20g（提前搞碎），然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂完全溶解后，再补充水分至所需量。

(3)分装按实训要求，将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。

分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。

分装量：固体培养基约为试管高度的1／5，灭菌后制成斜面，分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜；半固体培养基以试管高度的1／3为宜，灭菌后垂直待凝。

PDA培养基配方及配制方法PDA培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称。

宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。

下面就详细介绍了pda培养基的配方及配制方法及步骤。

1.PDA培养基的配方：马铃薯200克葡萄糖20克琼脂20克蛋白胨5克磷酸二氢钾3克硫酸镁1.5克水1000ml PH自然。

2.PDA培养基的制作工艺流程：设计培养基配方→材料煮汁→补水→琼脂溶解→再次补水→药品溶解→调PH值→分装→灭菌→摆斜面3.PDA培养基的制作步骤a 材料煮汁：1000ml水置于锅中，待烧开后加入200克去皮、切片的马铃薯煮20到30分钟，至薯片软而不烂，用八层纱布过滤，取滤液。

b 琼脂溶解和补水：将马铃薯滤液重新加入到锅中，补水至1000ml，继续加热沸腾而后加入琼脂，继续文火煮沸至琼脂完全溶解，再次补水至1000ml。

c 药品溶解：在琼脂溶解后加入葡萄糖20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1.5克，蛋白胨5克。

4 分装：a.试管培养基的分装分装所用的容器事先一定要清洗干燥，新购的试管内一般都残留烧碱，应先用稀硫酸在烧杯中煮沸，然后用清水洗干净，口朝下晾干后备用。

不能现洗现用，以免因管壁附有水膜导致培养基在试管口滑动。

分装试管时尽量避免培养液黏附试管口，以免培养基粘附棉塞，增加污染几率。

试管装量：制斜面培养基一般为试管高度的1/4—1/3。

b.平板培养基的分装将配制好的培养基倒入三角瓶，（三角瓶也一定要清洗干净），体积不要超过三角瓶的1/3（否则加热时液体沸腾易把棉塞冲开）5 加棉塞：棉塞要用普通棉花制作，不能用脱脂棉。

棉塞的大小，松紧要适度，过松达不到滤菌的目的，过紧妨碍空气流通，松紧度以于抓棉塞整个试管提起为宜。

标准的棉塞应是塞头略大，不易变形，一般塞入试管口2—3厘米。

占塞总长的2/3—1/3裸露在试管口外，比管口略大。

三角瓶棉塞同样松紧适中，一般塞入三角瓶3~4cm.6 装锅灭菌：将塞好棉塞的试管或三角瓶装进置物桶内，桶未装满用空试管填满以免试管倾倒，即可放入手提式高压灭菌锅中，盖好报纸，防止灭菌时棉塞被冷凝水淋湿，扭紧锅盖，排净锅内冷空气，待温度升至122—124℃之间开始计时30min，灭菌结束。

培养基配方1 斜面菌种保存培养基1。

1PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)称取200g马铃薯，洗净去皮切碎,加水1000ml煮沸0.5h，纱布过滤，滤液补足1000ml,再加15g葡萄糖和15—20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml（视试管大小而定）,121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用. 1.2麦芽汁琼脂培养基麦芽汁的制备：干麦芽首先进行粉碎（不能太粗，也不必太细。

太粗影响糖化效率，过细影响过滤速度），按麦芽重量的3~4倍加水，搅拌均匀后，37℃左右浸泡1小时，然后缓缓加温至55～63℃(在升温过程中应不断搅拌使温度均匀），保温4～6小时（用0.02摩尔/升碘液测定为黄色至无色时），糖化结束。

在糖化过程中，应每小时搅拌一次.取过滤后的清液,加1.8%琼脂，分装试管，每试管约5—10ml （视试管大小而定),121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用.2基菌落总数检测2。

1平板计数琼脂培养基将胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g加入蒸馏水1000ml中，煮沸溶解后，调pH,然后在121℃下灭菌15min,取出,稍微冷却后，带热倒入培养皿中。

3志贺氏菌检测3.1 GN增菌液成分:胰蛋白胨：20g，葡萄糖：1g，甘露醇：2g，柠檬酸钠：5g，去氧胆酸钠0。

5g，磷酸二氢钾4g，磷酸氢二钾1。

5g，氯化钠5g,蒸馏水1000ml。

pH7.0制法：将上述物品加入蒸馏水中，加热溶解煮沸,调pH为7.0，分装，在115℃高压灭菌15min。

3。

2 HE琼脂成分：胨：12g，牛肉膏3g,乳糖12g，蔗糖12g，水杨素2g，胆碱20g，氯化钠5g,琼脂18~20g，蒸馏水1000ml0，0。

4%溴麝香草酚蓝溶液16ml，Andrade指示剂20ml.，甲液20ml,乙液20ml。

pH7.5制法:将上述前七种成分加入400ml蒸馏水中作为基础液,将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解,加入甲液乙液到基础液中，调pH，再加入指示剂,并与琼脂液合并，待冷却至50～55℃，倾注浇平板.注1：此培养基不能高温灭菌。

PDA培养基简介PDA（Potato Dextrose Agar）培养基是一种常用于真菌及酵母的培养基。

它是由马铃薯提取物和葡萄糖混合制成的。

PDA培养基具有高透明度、无色无味、好制备、便于观察真菌和酵母生长等特点，在微生物实验室中被广泛应用。

材料制备PDA培养基所需的材料如下：•马铃薯 200克•葡萄糖 20克•蒸馏水 1000毫升•培养皿或试管步骤以下是制备PDA培养基的步骤：1.清洁材料：使用75%乙醇或其他消毒剂彻底清洁培养皿或试管，确保无细菌污染。

2.准备马铃薯提取物：将马铃薯削皮并切成小块。

将切好的马铃薯放入锅中，加入足够的蒸馏水，然后煮沸20-30分钟，直到马铃薯变软。

3.提取马铃薯汁液：使用纱布或滤纸将煮熟的马铃薯过滤，以去除固体残余物。

收集过滤得到的液体，这就是所需的马铃薯提取物。

4.加入葡萄糖：将葡萄糖加入马铃薯提取物中，搅拌均匀，直到完全溶解。

5.加入琼脂：将1000毫升蒸馏水倒入锅中，加热至沸腾。

然后，将琼脂逐渐加入，并持续搅拌，直到琼脂完全溶解。

6.混合培养基：将马铃薯提取物和葡萄糖溶液倒入含有溶解琼脂的锅中，搅拌均匀，确保混合到一致。

7.倒入培养皿或试管：将培养基均匀地倒入清洁的培养皿或试管中，注意避免产生气泡。

8.等待凝固：将培养皿或试管放置在平坦的表面上，等待培养基凝固。

9.高温蒸汽灭菌：将培养皿或试管用锡箔纸密封，并放入高温蒸汽灭菌器中，进行高温灭菌。

温度和时间根据需要进行设置。

注意事项•在制备PDA培养基过程中，要遵守无菌操作的原则，以确保培养基的纯度和无菌性。

面罩、手套、试验台面和实验室工具等都需要进行严格消毒和清洁。

•倒入培养皿或试管时，要小心避免气泡的产生。

气泡会影响培养基的均匀性和透明度。

•在使用培养基前，需要进行高温蒸汽灭菌以杀灭其中的细菌和真菌孢子。

高温和时间应根据实验的需要进行设置。

结论PDA培养基是一种简单易制备的培养基，常用于真菌和酵母的培养。

PDA培养基的配制方法和注意事项PDA（Potato Dextrose Agar）是一种常用的真菌培养基，适用于培养和生长多种真菌菌株。

下面将介绍PDA培养基的配制方法以及注意事项。

配制方法：1. 准备所需材料：马铃薯（200g）、葡萄糖（20g）、琼脂（15g）、蒸馏水（1000ml）。

2.将马铃薯洗净，并切成块状。

3.将切好的马铃薯放入一个大锅中，加入足够的蒸馏水，使其完全浸泡。

4.使用中小火煮沸约30分钟，直到马铃薯变得软烂。

5.用纱布过滤掉马铃薯块，收集到的液体称为马铃薯提取液。

6.将马铃薯提取液加热到煮沸，并添加葡萄糖，搅拌使其充分溶解。

7.加入琼脂，搅拌溶解。

8.继续加热并保持搅拌，直到琼脂完全溶解。

9.关火冷却到40-45°C，搅拌均匀。

10.倒入培养皿或试管中，使其充分凝固。

11.将培养基容器包装好，使用锡箔纸和胶带封口，避免杂菌污染。

12.PDA培养基可以根据需要分装成适当大小的琼脂平板或斜面管，以供后续使用。

注意事项：1.所有试剂和仪器应尽可能消毒和无菌处理，以确保制备的PDA培养基无菌。

2.马铃薯切成块状是为了加速煮沸的过程，但切的过小可能导致提取液中的杂质过多，影响培养基质量。

3.煮沸的时间不宜过短，马铃薯需要彻底煮熟才能提取足够的营养物质。

4.搅拌是为了使葡萄糖和琼脂均匀溶解，并避免极度热区出现。

5.琼脂的溶解需要一定的时间和温度，不可急于冷却和使用。

6.冷却到40-45°C是为了防止高温对培养基中微生物的损害，也是为了避免由于过度冷却导致琼脂凝固太快。

7.封装培养基容器是为了防止杂菌和空气中的孢子进入培养基，避免细菌和真菌污染。

8.在分装培养基前，应将工作台面和器皿用酒精消毒，防止培养基受到外界污染。

9.PDA培养基在20-25°C的常温下可保存2-4周，或在4°C冰箱中保存2-3个月。

保存时不可直接暴露在光线下，避免褪色和干燥。

PDA培养‎基的配制方‎法和注意事‎项PDA培养‎基是马铃薯‎葡萄糖琼脂‎培养基的简‎称，即Pota‎t o Dextr‎o se Agar (Mediu‎m)，分别对应马‎铃薯、葡萄糖、琼脂的英文‎。

它属于固体‎培养基、半合成培养‎基。

PDA培养‎基宜于微生‎物生长发育‎、节省原料等‎优势，一般在培养‎酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌‎方面应用广‎泛。

PDA培养‎基的配制(1)称量和熬煮‎按培养基配‎方逐一称取‎去皮土豆。

土豆切成小‎块放入锅中‎，加水100‎0ml，在加热器上‎加热至沸腾‎，维持20-30min‎，用可用2层‎纱布趁热在‎量杯上过滤‎，滤渣弃取。

滤液补充水‎分到100‎0ml。

(2)加热溶解把滤液放入‎锅中，加入葡萄糖‎20g，琼脂15～20g(提前搞碎)，然后放在石‎棉网上，小火加热，并用玻棒不‎断搅拌，以防琼脂糊‎底或溢出，待琼脂完全‎溶解后，再补充水分‎至所需量。

(3)分装按实训要求‎，将配制的培‎养基分装入‎试管或50‎0ml三角‎瓶内。

分装时可用‎三角漏斗以‎免使培养基‎沾在管口或‎瓶口上造成‎污染。

分装量：固体培养基‎约为试管高‎度的1/5，灭菌后制成‎斜面，分装入三角‎瓶内以不超‎过其容积的‎一半为宜;半固体培养‎基以试管高‎度的1/3为宜，灭菌后垂直‎待凝。

(4)加棉塞培养基分装‎完毕后，在试管口或‎三角烧瓶口‎上塞上棉塞‎(或泡沫塑料‎塞或试管帽‎等)，以阻止外界‎微生物进入‎培养基内造‎成污染，并保证有良‎好的通气性‎能。

(5)包扎加塞后，将全部试管‎用麻绳或橡‎皮筋捆好，再在棉塞外‎包一层牛皮‎纸，以防止灭菌‎时冷凝水润‎湿棉塞，其外再用一‎道线绳或橡‎皮筋扎好，用记号笔注‎明培养基名‎称、组别、配制日期。

PDA培养‎基配制注意‎事项1.培养基经灭‎菌后，必须放在3‎7C温箱培‎养24h，无菌生长者‎方可使用。

2.PDA培养‎基一般不需要‎调pH。

对于要调节‎p H的培养‎基，一般用pH‎试纸测定其‎p H。

PDA培养基的配制方法和注意事项PDA培养基是马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即Potato Dextrose Agar (Medium)，分别对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。

它属于固体培养基、半合成培养基。

PDA培养基宜于微生物生长发育、节省原料等优势，一般在培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌方面应用广泛。

PDA培养基的配制(1)称量和熬煮按培养基配方逐一称取去皮土豆。

土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20-30min，用可用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取。

滤液补充水分到1000ml。

(2)加热溶解把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～20g(提前搞碎)，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂完全溶解后，再补充水分至所需量。

(3)分装按实训要求，将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。

分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。

分装量：固体培养基约为试管高度的1/5，灭菌后制成斜面，分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜;半固体培养基以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。

(4)加棉塞培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等)，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能。

(5)包扎加塞后，将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳或橡皮筋扎好，用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。

PDA培养基配制注意事项1.培养基经灭菌后，必须放在37C温箱培养24h，无菌生长者方可使用。

2.PDA培养基一般不需要调pH。

对于要调节pH的培养基，一般用pH试纸测定其pH。

如果培养基偏酸或偏碱时，可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液进行调节。

调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。

简述pda培养基的配方及制作方法
PDA（Potato Dextrose Agar）是一种常用的培养基，适用于许多真菌和霉菌的培养。

PDA培养基的配方通常包括以下成分：
1. 马铃薯浆（土豆）：200克
2. 葡萄糖：20克
3. 琼脂：15克
4. 葡萄糖酸钠：2克
5. pH值调整至5.6-5.8的蒸馏水：1000毫升
制作方法如下：
1. 将马铃薯洗净削皮切块，加入适量的蒸馏水中，煮至变软。

2. 将煮熟的马铃薯放在纱布上，挤出浆汁，过滤收集。

3. 将收集到的土豆浆汁与葡萄糖、葡萄糖酸钠一起加入适量的蒸馏水中，调整pH值至5.6-5.8。

4. 加热溶解琼脂，在水浴中加热至完全溶解。

5. 将溶解后的琼脂加入到马铃薯浆汁中，充分混合。

6. 用自动称量系统将培养基分装到培养器中，或将培养基倒入无菌培养皿中。

7. 用高压灭菌器对培养基进行高压灭菌，常压下灭菌20分钟或121摄氏度下高压灭菌15分钟。

8. 灭菌后培养基在室温下冷却，凝固后即可使用。

制备好的PDA培养基可用于真菌和霉菌的分离和培养，在无菌条件下进行操作，避免细菌和其它污染物的污染。

项目二 PDA培养基的配制方法，培养基的湿热灭菌操作一、目的要求1．学习并掌握配制培养基的一般方法和步骤。

2．学习并掌握棉塞的制作方法。

二、培养基的配制原理培养基是人工配制的各种营养物质供微生物生长繁殖的基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。

在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加上实训和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，但不论是何种培养基，均应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐等。

不同微生物对pH值要求不一样，所以配制培养基时，还应根据不同微生物对pH值的要求，将培养基调到合适的pH值范围。

三、实训材料和用具琼脂，可溶性淀粉，葡萄糖，10﹪NaOH，10﹪HCl，1mol／L NaOH，lmol／L HCl，KNO3，NaCl，K2HPO4·3H20，MgSO4·7H20，FeSO4·7H2O；试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻璃棒，天平，牛角匙，PH试纸，棉花，牛皮纸，记号笔，纱布，四、操作方法与步骤(一) 培养基的配制PDA培养基的配制其配方如下：土豆200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，水1000mL，pH值自然。

(1)称量和熬煮药品实际用量计算后，按培养基配方逐一称取去皮土豆。

土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20－30min，用可用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取。

滤液补充水分到1000ml。

(2)加热溶解把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～20g（提前搞碎），然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂完全溶解后，再补充水分至所需量。

(3)分装按实训要求，将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。

分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。

分装量：固体培养基约为试管高度的1／5，灭菌后制成斜面，分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜；半固体培养基以试管高度的1／3为宜，灭菌后垂直待凝。

PDA 培养基的配制方法一、目的要求1．学习并掌握配制培养基的一般方法和步骤;2．学习并掌握棉塞的制作方法;二、培养基的配制原理培养基是人工配制的各种营养物质供微生物生长繁殖的基质,用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物;在自然界中,微生物种类繁多,营养类型多样,加上实训和研究的目的不同,所以培养基的种类很多,但不论是何种培养基,均应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐等;不同微生物对pH 值要求不一样,所以配制培养基时,还应根据不同微生物对pH 值的要求,将培养基调到合适的pH 值范围;三、实训材料和用具琼脂,可溶性淀粉,葡萄糖, 10﹪NaOH,10﹪HCl,1mol ／L NaOH,lmol ／L HCl,KNO 3,NaCl,K 2HPO 4·3H 20,MgSO4·7H 20,FeSO 4·7H 2O ；试管,三角瓶,烧杯,量筒,玻璃棒,天平,牛角匙,PH 试纸,棉花,牛皮纸,记号笔,纱布,四、操作方法与步骤一 培养基的配制PDA 培养基的配制 其配方如下：土豆200g,葡萄糖20g,琼脂15～20g,水1000mL,pH 值自然;1称量和熬煮 药品实际用量计算后,按培养基配方逐一称取去皮土豆;土豆切成小块放入锅中,加水1000ml,在加热器上加热至沸腾,维持20－30min,用可用2层纱布趁热在量杯上过滤,滤渣弃取;滤液补充水分到1000ml;2加热溶解 把滤液放入锅中,加入葡萄糖20g,琼脂15～20g 提前搞碎,然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,待琼脂完全溶解后,再补充水分至所需量;3分装 按实训要求,将配制的培养基分装入试管或500ml 三角瓶内;分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染;分装量：固体培养基约为试管高度的1／5,灭菌后制成斜面,分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜；半固体培养基以试管高度的1／3为宜,灭菌后垂直待凝;4 加棉塞培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞或泡沫塑料塞或试管帽等,以阻止外界微生物进入培养基内造成污染,并保证有良好的通气性能;5包扎加塞后,将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道线绳或橡皮筋扎好,用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期;二棉塞的制作棉塞的作用有二：一是防止杂菌污染；二是可过滤空气,保证通气良好,并可减缓培养基水分的蒸发,所以正确地制备棉塞是培养基制备中重要的一环;正确的棉塞是形状、大小,松紧应与试管口或三角烧瓶完全适合;过紧则妨碍空气流通,操作不便；过松时,空气会毫无障碍地进入试管或三角烧瓶中,达不到灭菌的目的;棉塞过小往往易掉进试管内,因此棉塞质量的优劣对实训的结果有很大的影响;正确的棉塞头较大,加塞时,应使棉塞长度的1／3留在试管口外,2／3在试管口内见实训图6-4;目前,有条件的实训室已使用坚固的塑料试管帽、金属试管帽、硅胶泡沫塞替代棉塞,制作棉塞要选纤维较长的棉花,一般不选用脱脂棉;因为它容易吸水变湿,造成污染,而且价格也贵;棉塞制作方法见图6-5实图6-4棉塞实图6-5 棉塞的制作方法三斜面与平板培养基的制作斜面与平面培养基是常用的琼脂固体培养基;将熬制好的琼脂培养基趁热装入试管灭菌后摆鞋面,凝固后即成斜面培养基;斜面培养基常用于菌种培养、菌种保藏等工作;将灭菌后的琼脂培养基倾注于无菌培养皿中,凝固后即成平板培养基;平板培养基常用于分离菌种、菌落计数、菌落形态观察及菌种鉴定等;斜面与平板培养基的制作过程大致为：溶解原料、融化琼脂、调PH、分装、灭菌和制斜面或平板;1、溶解原料为加速原料的溶解,最好用热水;先将原料依次加入到占配制量一半的水中,待全部溶解后在加足水量;如配方中有马铃薯、麸皮、胡罗卜、豆芽等天然原料,需将其熬制约30min,取出定量滤液,在将所需的其他原料加入滤液中;2、融化琼脂琼脂的用量可灵活掌握;用作保藏菌种的培养基,琼脂用量可提高至2.5%,以增加持水性;冬季的气温低,琼脂用量可适当减少;琼脂用前可剪成小段,以利于融化;待溶液煮沸是再加入,不断搅拌至完全无琼脂块状物时再停止加热;3、调整PH用洁净干燥的玻璃棒沾一点培养基滴在试纸上,立即与比色板比较;一般用10%NaOH或HCl调节;4、分装将培养基趁热倒入垫有纱布的漏斗中,使培养基直接滤至试管或三角瓶中,试管装量一般为管高的1/4左右,三角瓶的装量约为其容量的一半;勿使培养基玷污容器口部;口部塞有棉塞,试管每7或9 支扎一捆,棉塞外面包牛皮纸,以防在灭菌过程中被水汽打湿;5、灭菌分装后的培养基应随即灭菌;除特殊情况外,一般培养基均用高压蒸汽灭菌,在104kPa压力下,灭菌20-30min ;6、制作斜面或平板将灭菌后的试管趁热斜置于棍条上,倾斜度以试管中的培养基约占试管长度的1/2为宜,凝固后即成斜面培养基;待灭菌后三角瓶内的培养基冷却至45~50时,以无菌操作法向无菌培养皿中倒入培养基,装置以刚覆盖整个培养皿底部为宜约15ml,凝固后即成平板培养基;五、高压蒸汽灭菌法该法使用高压灭菌锅,在121℃,O．105MPa压力下灭菌15～30min;微生物实训所需的一切器皿、器具、培养基不耐高温者除外、无菌水、工作服等物品都可用此法灭菌;高压蒸汽灭菌锅是能耐一定压力的密闭金属锅,有立式或卧式实图8-1、2 两种;灭菌锅上附有压力表、排气阀、安全阀、加水口、排水口等;卧式灭菌锅还附有温度计;有的还有蒸汽人口;灭菌锅的加热源有电、煤气和蒸汽三种;高压蒸汽灭菌的操作过程1 加水将灭菌锅内层灭菌桶取出,再向外层锅内加入适量的水,以水面与三角架相平为宜;立式锅是直接加水至锅内底部隔板以下1／3处;有加水口者由加水口加入至止水线处;2 装料将装料桶放回锅内,装入待灭菌的物品;放置装有培养基的容器时要防止液体溢出,瓶塞不要紧贴桶壁,以防冷凝水沾湿棉塞;3 加盖摆正锅盖,对齐螺口,然后以同时旋紧相对的两个螺栓的方式拧紧所有螺栓,打开排气阀;4 排气用电炉或煤气加热,待水煮沸后,水蒸气和空气一起从排气孔排出;一般认为,当排气流很强并有嘘声时,表明锅内空气已排净沸后约5min;5 升压当锅内空气排净时,即可关闭排气阀,压力开始上升;实图7-1 立式灭菌锅实图7-2 卧式灭菌锅1．安全阀 2．压力表 3．放气阀4．软管 5．紧固螺栓 6．灭菌桶7．筛架8．水6保压当压力表指针达到所需压力刻度时,控制热源,开始计时并维持压力至所需时间;本实训用121℃、20rnin灭菌;7降压达到所需灭菌时间后,关闭热源,让压力自然下降到零后,打开排气阀;放净余下的蒸汽后,再打开锅盖,取出灭菌物品,排掉锅内剩余水;8无菌检查将已灭菌培养基冷却后置于37℃恒温箱内培养24h,若无菌生长,则放人冰箱或阴凉处保存备用;4．化学药品灭菌化学药品消毒灭菌法是用能抑制或杀死微生物的化学制剂进行消毒灭菌的方法;能破坏细菌代谢机能并有致死作用的化学药剂为杀菌剂,如重金属离子等；仅阻抑细菌代谢机能,使细菌不能增殖的化学药剂为抑菌剂,如磺胺类及大多抗生素等;化学药品对微生物的作用是抑菌还是杀菌以及作用效果,还与化学药品浓度的高低、处理微生物的时间长短、微生物的种类及微生物所处的环境等有关;微生物实训室中常用的化学药品有2％煤酚皂溶液来苏尔、O．25％新洁尔灭、0．1％升汞、3％～5％的甲醛溶液和75％乙醇溶液等;5．注意事项1使用高压灭菌锅应严格按照操作程序进行,避免发生事故；灭菌时,操作者切勿擅自离开；务必待压力降到零后,才可打开锅盖;2干热灭菌时电烘箱中物品不要摆得太拥挤,以免阻碍空气流通而影响灭菌效果；灭菌物品不要与电烘箱内壁的铁板接触,以防包装纸烤焦;3记述高压蒸汽灭菌的操作过程及注意事项;六、实验报告思考题1．培养基根据什么原理配制成牛肉膏蛋白胨培养基中不同成分各起什么作用2．配制培养基有哪几个步骤在制备培养基的过程中应注意些什么问题为什么3．记录本实训配制培养基的名称、数量,并图解说明其配制过程,指明要点;4．培养基配制完成后,为什么必须立即灭菌已灭菌的培养基如何进行灭菌检查。