色谱分析中的串联技术

２０１８年９月Ｖｏｌ．３６Ｎｏ．９Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ２０１８ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ８４２ ８４９专论与综述ＤＯＩ：１０．３７２４／ＳＰ．Ｊ．１１２３．２０１８．０４０１５收稿日期：２０１８⁃０４⁃１３∗通讯联系人．Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｃｈｅｍｘｕｚｇ＠ｋｍｕｓｔ．ｅｄｕ．ｃｎ．基金项目：国家自然科学基金项目（２１５６５０１８）．Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｉｔｅｍ：ＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ（Ｎｏ．２１５６５０１８）．色谱分析中的串联技术刘育坚１，㊀杜甫佑２，㊀刘智敏１，㊀司小喜３，㊀许志刚１∗（１．昆明理工大学理学院，云南昆明６５０５００；２．桂林理工大学化学与生物工程学院，电磁化学功能物质广西重点实验室，广西桂林５４１００４；３．云南中烟工业有限责任公司技术中心，云南昆明６５０２３１）摘要：样品中物质信息的获取离不开分离和检测，对于复杂样品的分析，简单的一维色谱方法常常难以完成所有组分的分离和鉴定㊂为此，多种色谱串联技术引起了人们的广泛关注㊂色谱串联技术包括柱串联技术㊁检测器串联技术㊁多维色谱等㊂该文详细介绍了以上３种串联技术（不包括色谱⁃质谱联用技术）自２０１０年以来的最新研究进展，以及这些技术在获取样品中更加全面和精准的信息方面的典型应用㊂最后对色谱串联分析技术的发展进行了总结和展望㊂关键词：串联；色谱分析；分离与检测；检测器；多维色谱；综述中图分类号：Ｏ６５８㊀㊀㊀文献标识码：Ａ㊀㊀㊀文章编号：１０００⁃８７１３（２０１８）０９⁃０８４２⁃０８ＴａｎｄｅｍｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓｉｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃａｎａｌｙｓｉｓＬＩＵＹｕｊｉａｎ１，ＤＵＦｕｙｏｕ２，ＬＩＵＺｈｉｍｉｎ１，ＳＩＸｉａｏｘｉ３，ＸＵＺｈｉｇａｎｇ１∗（１．ＦａｃｕｌｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅ，ＫｕｎｍｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ６５０５００，Ｃｈｉｎａ；２．ＧｕａｎｇｘｉＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＥｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎｄＭａｇｎｅｔｏｃｈｅｍｉｃａｌＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＭａｔｅｒｉａｌｓ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＧｕｉｌｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇｕｉｌｉｎ５４１００４，Ｃｈｉｎａ；３．Ｒ＆ＤＣｅｎｔｅｒｏｆＣｈｉｎａＴｏｂａｃｃｏＹｕｎｎａｎＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＣｏ．Ｌｔｄ．，Ｋｕｎｍｉｎｇ６５０２３１，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎｏｆｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｕｎｄｓｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｆｒｏｍｓａｍｐｌｅｓｄｅｐｅｎｄｓｏｎｔｈｅｓｅｐａｒａｔｉｏｎａｓｗｅｌｌａｓｄｅｔｅｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．Ｕｓｕａｌｌｙ，ｉｔｉｓｄｉｆｆｉｃｕｌｔｔｏａｃｈｉｅｖｅｔｈｅｓｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｌｌｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎｃｏｍｐｌｅｘｓａｍｐｌｅｓｂｙａｓｉｍｐｌｅｏｎｅ⁃ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｃｈｒｏｍａｔｏ⁃ｇｒａｐｈｉｃｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｕｓ，ｔａｎｄｅｍｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ｗｈｉｃｈｍａｉｎｌｙｉｎｃｌｕｄｅｃｏｌｕｍｎｔａｎｄｅｍｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，ｄｅｔｅｃｔｏｒｔａｎｄｅｍｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，ａｎｄｍｕｌｔｉｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ｈａｖｅａｒｏｕｓｅｄｗｉｄｅｓｐｒｅａｄｉｎｔｅｒｅｓｔ．Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ａｄｖａｎｃｅｓｉｎｔｈｅｔｈｒｅｅａｆｏｒｅｍｅｎｔｉｏｎｅｄｔａｎｄｅｍｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（ｎｏｔｉｎｃｌｕｄｉｎｇｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｔａｎｄｅｍｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）ｓｉｎｃｅ２０１０ａｒｅｄｉｓ⁃ｃｕｓｓｅｄ．Ｔｙｐｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｆｏｒｏｂｔａｉｎｉｎｇｍｏｒｅｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅａｎｄａｃｃｕｒａｔｅｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｆｒｏｍｓａｍｐｌｅｓａｒｅａｌｓｏｒｅｖｉｅｗｅｄ．Ｆｉｎａｌｌｙ，ｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｔａｎｄｅｍｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓｉｓｓｕｍｍａｒｉｚｅｄａｎｄｆｕｔｕｒｅｐｒｏｓｐｅｃｔｓａｒｅｅｘａｍｉｎｅｄ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｔａｎｄｅｍｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎ；ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃａｎａｌｙｓｉｓ；ｓｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎ；ｄｅｔｅｃ⁃ｔｏｒｓ；ｍｕｌｔｉｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ｒｅｖｉｅｗ㊀㊀色谱法本身是一个高效的分离过程，目前只有与检测器串联才能实现目标组分的分离检测㊂色谱柱是色谱分离的 心脏 ，组分能否分开，关键在于色谱柱，其次在于色谱条件的选择㊂色谱分析中常使用一根色谱柱，然而单根色谱柱的柱效是有限的，面对极为相似的复杂组分，单一色谱柱往往不能满足分离要求㊂采用分离性能不同甚至互补的两根或多根色谱柱串联，可以大大提高分离效果㊂因此，柱串联技术是一种分离技术升级，不是简单的两根色谱柱随机组合㊂而多维色谱技术则进一步改进了单㊀第９期刘育坚，等：色谱分析中的串联技术一色谱溶剂系统难以同时分析组分极性相差甚远成分的难题㊂另外，检测器的串联也可以方便地实现不同种类㊁具有不同响应信号分析物的同时检测㊂㊀㊀本文综合报道了自２０１０年色谱串联技术的研究进展，并且在相关研究［１－３］的基础上聚焦色谱分离中的串联技术，包括柱串联技术㊁检测器串联技术和多维色谱，为广大分离分析工作者提供新的技术选择，最后指出色谱串联技术发展中遇到的困难以及未来的发展趋势㊂１㊀柱串联分离技术１．１㊀液相色谱中的柱串联技术㊀㊀液相色谱固定相种类繁多，已有适用于正相色谱的极性柱㊁适用于反相色谱的非极性柱㊁适用于水相的亲水作用色谱柱㊁适用于高盐溶液的离子色谱柱㊁适用于手性分离的手性柱等㊂液相色谱柱的串联需要考虑流动相与色谱柱的兼容性以及串联柱之间分离性能的互补性㊂㊀㊀反相液相色谱柱与亲水相互作用色谱柱的串联易于实现，可用于分析极性和非极性化合物㊂极性化合物与普通反相色谱柱的固定相结合较弱，通常出现保留时间不稳定的情况，而在亲水作用色谱柱上可以实现极性化合物的保留，但分离效果较弱，将反相液相色谱柱与亲水作用色谱柱进行串联，可实现分离效果互补㊂朱丽波等［４］将Ｃ１８色谱柱与亲水作用色谱柱进行串联，应用超高效液相色谱⁃质谱法同时分离测定了丙烯酰胺㊁己内酰胺㊁联苯胺和苯胺㊂Ｇｒａｎａｆｅｉ等［５］建立了亲水作用色谱柱串联反相色谱柱的方法，分离了大豆中的磷脂混合物㊂Ｆａｌａｓｃａ等［６］采用Ｃ１８色谱柱与亲水作用色谱柱分离从树鼩脑提取物中分离了多种疏水性较大差异的季铵化合物，包括乙酰胆碱，胆碱，肉毒碱，乙酰肉碱和其他７种低极性酰基肉碱㊂反相液相柱串联亲水作用色谱柱，有利于混合物样品中极性与非极性物质的分离，成功应用于葡萄酒中的酚类［７］㊁小鼠血清代谢物［８］㊁药物［９］及啤酒［１０］等样品的分析㊂㊀㊀对于复杂体系中的多类别结构类似化合物的分离，双柱有时难以满足分析的需求，需要多柱串联，以提高色谱分离的容量以及分辨率，以获得更大的分离度㊂对于填充色谱柱，增加色谱柱长度或降低固定相的粒径可以提高色谱的分辨率，但也导致色谱柱柱压会成比例增加㊂Ｓｈａａｂａｎ等［１１］基于３根填充亚２μｍ颗粒的色谱柱串联，同时为了降低色谱柱的柱压，高效分离１３种非甾体抗炎药和１１种磺胺类药物，在８０ħ的柱温下进行分离㊂整体式色谱柱则具有相对较低的色谱柱柱压以及良好的性能，可用于连接多根色谱柱㊂Ｄｅａｒ等［１２］使用６根烷基键合的二氧化硅整体柱，理论塔板数达到４００００，对动物体内的尿液及胆汁体液中尿嘧啶㊁对羟基苯甲酸乙酯㊁对羟基苯甲酸丁酯和蒽等药物代谢物进行分离鉴定㊂在分析大体积的生物流体时，整体柱也表现出良好的稳定性，Ｓａｎｄｒｏｎ等［１３］将１１根整体Ｃ１８柱串联，获得了理论塔板数高达１１００００的高容量色谱柱，分析了海洋溶解有机物中的半极性和非极性组分，证明了主要组分为富含羧基的脂环族分子㊂㊀㊀手性对映体的分离通常需要使用特殊的手性色谱柱，直接使用Ｃ１８柱无法拆分对映体，而手性柱分离不同物质的能力较弱㊂将Ｃ１８柱与手性色谱柱进行串联，结合Ｃ１８柱的分离能力以及手性色谱柱的对映体拆分能力，可实现甲状腺素及其结构类似物三碘甲状腺氨酸对映体的同时拆分［１４］㊂Ｉｗａｓａｋｉ小组［１５，１６］建立了常规硅胶柱和手性柱串联分析单酸二酰基甘油３种异构体以及单酰甘油３种对映异构体的拆分方法㊂Ｐｅｒｅｒａ等［１７］将Ｃ１８柱分别与３种手性柱串联，对１６种手性药物进行了拆分，在使用极性有机溶剂⁃水作为流动相时依旧获得了较高的手性分离的能力㊂本课题组［１８］也用Ｃ１８柱与手性冠醚柱串联，在反相色谱条件下拆分了３种手性芳香族氨基酸的６种对映体（见图１），结果表明：手性柱和流动相的选择是影响串联分离的重要因素，而双柱的串联次序对分离基本没有影响，Ｃ１８柱强化了不同种类氨基酸之间的分离度，也为手性柱进一步对对映体的分离提供了足够的空间距离，两者的串联实现了分离功能的互补㊂１．２㊀气相色谱中的柱串联技术㊀㊀串联气相色谱作为传统一维气相色谱的补充，具有改装简单㊁易于操作和维护的优点，并克服了分辨率不足㊁峰容量不够高的缺点㊂为了减少分析时间，通过调节压力改变流速是气相色谱分离中的关键技术之一㊂Ｓａｃｋｓ小组［１９］在解决气相色谱串联柱选择性方面做了大量工作：一方面通过改变串联柱连接点处的载气压力，影响组分在两根色谱柱上的保留时间，连接点处的载气压力通过计算机进行控制，另一方面采用在两根色谱柱的结合点上施加相对短的压力脉冲，降低组分共洗脱的风险，提高分㊃３４８㊃色谱第３６卷图１㊀Ｃ１８柱串联冠醚手性柱拆分３种氨基酸外消旋体［１８］Ｆｉｇ．１㊀ＳｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｒｅｅａｍｉｎｏａｃｉｄｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓｂｙＣ１８ｃｏｌｕｍｎｔａｎｄｅｍｃｒｏｗｎｅｔｈｅｒｃｈｉｒａｌｃｏｌｕｍｎ［１８］离的选择性［２０，２１］；相比于第一种方法，后者不会影响物质洗脱顺序以及分辨率，同时消除了样品损失和进样口污染的风险㊂该技术进一步应用于农药混合物［２２］㊁柠檬油［２３］㊁挥发性化合物［２４－２６］㊁橙油［２７］的分离㊂另外，该小组［２８］还改进了脉冲加热的方法，通过快速加热和快速冷却第二根色谱柱柱温来改善分离度，应用于大气中１３种物质的分离㊂Ｗｉｔｔｒｉｇ等［２９］通过调节双柱结合处的压力调节气相色谱的分离，在１２ｍｉｎ内实现３６个有机挥发性化合物的分离㊂Ｌｖ等［３０］采用大气压气相色谱电离源串联质谱分析食品中的溴化阻燃剂，将一小段毛细管色谱柱连接到分析柱的末端，用于改善高沸点化合物的色谱行为㊂Ｍａ等［３１］将极性和非极性的色谱柱串联，用于分析冰酒中的香气化合物㊂Ｖｅｓｃｈｅｔｔｉ等［３２，３３］建立了等温下压力可调节的毛细管串联柱分离的理论模型，并且使用新的毛细管连接进行对照实验㊂而Ｊｅｓｐｅｒｓ等［３４］进一步将双柱串联技术应用于气相色谱的中进行程序升温，得到了程序升温气相色谱的动力学图㊂Ｇｕéｇｕｅｎ等［３５］采用双柱气相色谱⁃电子捕获检测器提高选择性，应用于树皮及空气样品中多氯联苯的分析㊂１．３㊀超临界流体色谱中的柱串联技术㊀㊀超临界流体色谱是一种广泛应用于食品和药物分析的分离技术，其流动相主要为超临界ＣＯ２和少量有机溶剂，色谱柱及其串联技术和液相色谱的极为类似㊂Ｄｉ等［３６］使用两根色谱柱测定血浆样品中依泽替米贝的药代动力学特性，Ｗｅｓｔ等［３７］将Ｃ１８柱和亲水作用色谱柱串联分析了２５种合成药物中的杂质，柱串联显示了更高的分离能力和更好的选择性㊂超临界流体色谱柱串联在手性分析方面也有重要的应用，Ｂａｒｎｈａｒｔ等［３８］使用两根不同种类的手性柱串联分析了含有４个对映异构体的手性药物，Ｌｅｓｅｌｌｉｅｒ等［３９］将一根手性填充柱与不同数量的填充柱串联，用于顺式／反式⁃β⁃胡萝卜素的分离，结果表明一根手性色谱柱与５根整体柱串联时获得了最佳的分离效果㊂㊀㊀此外，也有串联柱的快速筛选方法方面的研究㊂Ｗｅｌｃｈ等［４０］使用两个不同软件控制两个六位高压阀，每个阀控制５根不同色谱柱，对商业化的超临界流体仪进行改进，能够从１０根不同的色谱柱中筛选２５种不同的串联方式，用于复杂组分的分离㊂Ｗａｎｇ等［４１］十分关注超临界流体色谱分离中的柱压，深入研究了柱压和串联柱顺序对分离的影响，并通过调节色谱柱的柱压，控制串联色谱柱手性分离的选择性㊂２㊀检测器串联技术㊀㊀检测器是色谱分析系统的核心部件之一，常见的有紫外吸收检测器㊁荧光检测器㊁蒸发光检测器㊁电化学检测器㊁氢火焰离子化检测器㊁质谱检测器㊃４４８㊃㊀第９期刘育坚，等：色谱分析中的串联技术等㊂这些检测器在常规分析中有足够的灵敏度㊁选择性和可靠性㊂然而，对于复杂的生物㊁医学㊁环境㊁食品样品，单个检测技术有时无法响应所有分析物，比如光电二极管阵列检测器在液相色谱中广泛使用，但对于紫外吸收较弱的化合物，如环糊精㊁多糖等，则需要采用蒸发光闪射检测器；采用硫化学发光检测器只能得到硫化物的相关信息㊂因此，使用基于不同原理的两种或多种检测器的串联，通过一次进样分析，即可同时检测样品中性质差异较大或具有不同相应信号的混合物，极大提高工作效率㊂表１中详细介绍了色谱分析中不同检测器的串联技术用于复杂样品的分析㊂此外，色谱与质谱的联用技术已十分成熟，如ＬＣ⁃ＭＳ㊁ＧＣ⁃ＭＳ㊁ＬＣ⁃ＭＳ／ＭＳ等，在此不再赘述㊂检测器的串联技术，为复杂样品的分析提供了一种新的途径，可以更高效的获得更多的样品信息，这项技术的关键在于检测器的串联接口以及不同检测器对流动相的兼容，这也一定程度上增加了仪器的成本㊂表１㊀检测器串联分析不同样品Ｔａｂｌｅ１㊀ＳａｍｐｌｅｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙｔａｎｄｅｍｄｅｔｅｃｔｏｒｓＡｎａｌｙｔｅｓＤｅｔｅｃｔｏｒｓＲｅｆｅｒｅｎｃｅＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓａｎｄｏｒｇａｎｉｃａｃｉｄｓＨＰＬＣ⁃ＤＡＤ⁃ＲＩ［４２］ＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔａｎｄｎｏｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｅｎｄｏｃｒｉｎｅｄｉｓｒｕｐｔｏｒｓＨＰＬＣ⁃ＵＶ⁃ＦＬＤ［４３］ＰｏｌｙｃｙｃｌｉｃａｒｏｍａｔｉｃｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｓＨＰＬＣ⁃ＵＶ⁃ＦＬＤ［４４］ＣｈｉｒａｌａｌｉｐｈａｔｉｃａｍｉｎｅｓＨＰＬＣ⁃ＵＶ⁃ＦＬＤ［４５］Ｒａｃｔｏｐａｍｉｎｅ，ｉｓｏｘｓｕｐｒｉｎｅ，ｆｅｎｏｔｅｒｏｌ，ｃｌｅｎｂｕｔｅｒｏｌ，ａｔｅｎｏｌｏｌ，ｐａｒａ⁃ｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｏｌａｎｄｂｅｎｚｙｌａｌｃｏｈｏｌＨＰＬＣ⁃ＵＶ⁃ＦＬＤ［４６］ＤｉｓｓｏｌｖｅｄｏｒｇａｎｉｃｍａｔｔｅｒａｎｄｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅｏｒｇａｎｉｃｍａｔｔｅｒＨＰＬＣ⁃ＵＶ⁃ＦＬＤ［４７］ＶｉｔａｍｉｎＥａｎｄｖｉｔａｍｉｎＡＨＰＬＣ⁃ＵＶ⁃ＦＬＤ［４８］ＮｉｔｒｏｇｅｎａｎｄｓｕｌｆｕｒｃｏｄｏｐｅｄｃａｒｂｏｎｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓＵＨＰＬＣ⁃ＵＶ⁃ＦＬＤ［４９］ＡｕｒａｐｔｅｎｅａｎｄｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅＨＰＬＣ⁃ＵＶ⁃ＦＬＤ［５０］ｐ，ｐᶄ⁃ＤＤＴ，ｏ，ｐᶄ⁃ＤＤＴ，ｂｅｎｚｏ（ａ）ａｎｔｈｒａｃｅｎｅ，ｂｅｎｚｏ（ｂ）ｆｌｕｏｒａｎｔｈｅｎｅａｎｄｂｅｎｚｏ（ａ）ｐｙｒｅｎｅＨＰＬＣ⁃ＤＡＤ⁃ＦＬＤ［５１］ＤａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎＨＰＬＣ⁃ＵＶ⁃ＥＬＳＤ［５２］Ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃａｃｉｄ，ｃａｆｆｅｉｃａｃｉｄ，ｐｉｎｏｒｅｓｉｎｏｌ⁃ｄｉ⁃Ｏ⁃β⁃ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ，ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ，ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ，ＨＰＬＣ⁃ＤＡＤ⁃ＥＬＳＤ［５３］ｉｓｏｑｕｅｒｃｉｔｒｉｎ，ａｕｃｕｂｉｎ，ｇｅｎｉｐｏｓｉｄｅ，ｇｅｎｉｐｉｎａｎｄｇｅｎｉｐｏｓｉｄｉｃａｃｉｄＯｒｇａｎｏｃｈｌｏｒｉｎｅｐｅｓｔｉｃｉｄｅｓａｎｄｐｏｌｙｃｈｌｏｒｉｎａｔｅｄｂｉｐｈｅｎｙｌｓＧＣ⁃ＥＣＤ⁃ＥＣＤ［５４］Ｌａｃｔｏｓｅ，ｇｌｕｃｏｓｅ，ｇａｌａｃｔｏｓｅ，ｃｉｔｒｉｃａｃｉｄ，ｌａｃｔｉｃａｃｉｄａｎｄｆｏｒｍｉｃａｃｉｄＧＣ⁃ＮＰＤ⁃ＥＣＤ［５５］ＰｅｓｔｉｃｉｄｅｓＧＣ⁃ＥＣＤ⁃ＦＰＤ［５６］Ｂｅｎｚｅｎｅ，ｔｏｌｕｅｎｅ，ｅｔｈｙｌｂｅｎｚｅｎｅ，ｏ⁃ｘｙｌｅｎｅ，ｍ⁃ｘｙｌｅｎｅａｎｄｐ⁃ｘｙｌｅｎｅＧＣ⁃ＦＩＤ⁃ＰＩＤ［５７］㊀ＤＤＴ：ｄｉｃｈｌｏｒｏｄｉｐｈｅｎｙｌｔｒｉｃｈｌｏｒｏｅｔｈａｎｅ；ＤＡＤ：ｄｉｏｄｅａｒｒａｙｄｅｔｅｃｔｏｒ；ＲＩ：ｒｅｆｒａｃｔｉｖｅｉｎｄｅｘ；ＵＨＰＬＣ：ｕｌｔｒａｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ＥＬＳＤ：ｅｖａｐｏｒａｔｉｖｅｌｉｇｈｔｓｃａｔｔｅｒｉｎｇｄｅｔｅｃｔｏｒ；ＥＣＤ：ｅｌｅｃｔｒｏｎｃａｐｔｕｒｅｄｅｔｅｃｔｏｒ；ＮＰＤ：ｎｉｔｒｏｇｅｎｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｄｅｔｅｃｔｏｒ；ＦＰＤ：ｆｌａｍｅｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃｄｅｔｅｃｔｏｒ；ＰＩＤ：ｐｈｏｔｏｉｏｎｉｚａｔｉｏｎｄｅｔｅｃｔｏｒ．３㊀多维色谱㊀㊀多维色谱不仅仅使用多根色谱柱及多个检测器，色谱柱之间通过切换阀或压力平衡装置作为接口㊂多维色谱技术包括二维色谱㊁三维色谱㊁高维色谱㊂分离的维度以正交为依据，串联是实现多维分离的一种重要技术㊂对于天然产物㊁中药药物和蛋白质组分的分离，需要具有更大峰容量和更高分辨率的多维色谱技术来完成㊂㊀㊀二维色谱的方法和技术较为成熟㊂传统二维气相色谱采用中心切割法，通常只能对部分组分进行分离，无法对全部组分进行准确的定性和定量㊂新的处理方法采用连续多次的中心切割方法，将一维分得的大部分色谱峰转移到第二维色谱柱继续分离而无需分馏㊂Ｌｉｐｏｋ等［５８］采用２Ｄ⁃ＧＣ与离子迁移谱和质谱相结合，用于金盏菊和银杏叶样品中化合物的分离，该２Ｄ⁃ＧＣ则需要较长的调制时间（２０ｓ）和较长的第二维毛细管（７ｍ）㊂全二维气相色谱在两支色谱柱之间装有一个接口，起捕集㊁聚集㊁再传送的作用，它是全二维气相色谱中最重要的部件，被称为调制器㊂经第一根色谱柱分离后的每一个色谱峰，均经调制器调制后再以脉冲方式传送到第二根色谱柱进一步分离，全二维气相色谱具有选择性好和峰容量高等优点㊂全二维气相色谱可应用于奶油中脂肪酸［５９］㊁石油中饱和烃组分［６０］㊁植物油中微量脂肪酸烷基酯和甾醇［６１］㊁土壤中多环芳烃［６２，６３］等样品和组分的分析㊂Ｃｈｏｗ等［６４］对第二维分离进行程序控温，色谱柱在柱温箱内通过强制对流冷却，可有效改善分离效果㊂㊀㊀二维液相色谱也可分为中心切割模式和全二维㊃５４８㊃色谱第３６卷液相色谱㊂二维液相色谱与液相色谱柱串联具有相似之处，即可根据分析样品选择不同的色谱分离模式搭建二维液相色谱系统，如：反相色谱与强阳离子交换色谱相结合，用于肽段的分离［６５］；全自动停留系统的尺寸排阻色谱与反相色谱的联用，用于花生肽的分析［６６］；亲水相互作用色谱和反相色谱相结合，在全二维液相色谱模式下分析甘草成分［６７］；反相色谱与手性色谱相结合，将超快速手性色谱应用于第二维色谱分析中，提高手性分离效率［６８］等㊂此外，Ａｐｅｌ等［６９］先使用正相色谱在近临界条件下通过流动相梯度法分离封端不同和支化度不同的聚合物，第二维采用尺寸排阻色谱获得分析物的分子量分布㊂为了降低全二维色谱分离蛋白质的时间，张祥民课题组［７０］将 多维 与 阵列 技术相结合，即第一维采用阴离子交换色谱，第二维采用８根反相液相色谱柱和８根蛋白捕集柱，开展了多循环并行分离血浆中高丰度蛋白㊂第一维和第二维系统溶剂不兼容会影响二维液相的分辨率和灵敏度，Ｓｔｏｌｌ等［７１］采用新型阀技术解决第一维和第二维系统流动相兼容问题，且无需要额外的泵控制㊁操作方便㊂㊀㊀不同类型的色谱分离技术亦能串联，已有液相色谱与气相色谱串联分别用于小鼠体内矿物油饱和烃［７２］㊁橄榄油中三甲基甲硅烷基⁃４，４ᶄ⁃去甲基甾醇［７３］㊁食用油中的甾醇［７４］㊁化妆品中饱和烃和矿物油中芳烃的测定［７５］等相关报道，也有液相色谱串联超临界流体色谱用于芳香油组分的研究［７６］和木质素中的酚类物质的测定［７７］㊂㊀㊀面对极性差异巨大㊁组分含量悬殊的复杂样品，十分有必要构建更高维的色谱系统㊂在强阳离子交换色谱与反相色谱前增加一维色谱用于在线除盐，使得三维色谱系统可获得更准确的蛋白质识别［７８］；Ａｎｄｅｒｓｏｎ等［７９］则在第一维分离中使用凝胶柱，初步分离蛋白质组分，后续进一步对点状念珠藻的蛋白质组进行鉴定；Ｚｈａｎｇ等［８０］将弱阴离子交换和弱阳离子交换材料填充的混合床离子交换柱用于复杂样品的第一维分离，进一步鉴定来自小鼠乳房肿瘤细胞裂解物中的肽㊂尺寸排阻色谱对蛋白质组学样品中分子量范围分布广泛的化合物表现出良好的分离性能，能将不同大小的蛋白分离至各组分中㊂Ｍｏｏｒｅ等［８１］采用尺寸排阻色谱⁃反相色谱⁃毛细管区带电泳分析了鸡卵清蛋白肽㊂Ａｌ⁃Ｄａｇｈｒｉ等［８２］第一步使用高效尺寸排阻色谱分离蛋白质组分，反相色谱收集水解后的混合肽馏分，最后在反相纳米喷雾ＦＴ⁃ＭＳ对馏分进行全血清蛋白质组学分析㊂而Ｓｐｉｃｅｒ等［８３］将３ＤＲＰＬＣ⁃ＭＳ系统用于蛋白质和肽段的分离，相较于低维的色谱系统，高维系统具有更高的分辨率㊂Ｓｏｎｇ等［８４］构建亲水相互作用色谱⁃湍流色谱⁃反相液相（ＨＩＬＩＣ⁃ＴＦＣ⁃ＲＰＬＣ）色谱平台，ＴＦＣ收集ＨＩＬＩＣ分离的非极性化合物并转移至下一维进行分离，进一步将复杂基质中亲水和疏水物质进行分离㊂Ｗａｎｇ等［８５］采用停流界面来实现在线３Ｄ⁃ＬＣ系统，酰胺柱作为第一维柱，将弱极性代谢物和极性代谢物被分离成不同的组分，氟苯基柱和Ｃ１８柱分别作为第二维和第三维分离柱，用于分析大豆提取物中的黄酮化合物㊂Ｇｓｔöｔｔｎｅｒ等［８６］将商用的２Ｄ⁃ＬＣ改造成４Ｄ⁃ＬＣ，第一维分离中使用阳离子交换柱，第二维使用反相色谱柱收集第一维的组分，第三维则对上一维组分进行胰蛋白酶消化，最后一维获得肽的色谱图㊂㊀㊀此外，也有气相色谱㊁液相色谱和超临界流体色谱之间的多维色谱构建㊂Ｅｄａｍ等［８７］在全二维气相色谱前增加一维液相色谱，构建三维系统（ＬＣ⁃ＧＣˑＧＣ），ＬＣ系统可以分离饱和和不饱和烷烃组分，避免ＧＣˑＧＣ出现峰重叠㊂将ＳＦＣ替代ＬＣ与ＧＣˑＧＣ连接可轻松地除去超临界ＣＯ２而不会损失挥发性样品组分，从而消除了共洗脱溶剂的引入以及稀释效应㊂搭建ＳＣＦ⁃ＧＣˑＧＣ可用于复杂样品中烃类化合物的分析［８８，８９］㊂Ｓｙｎｏｖｅｃ小组则采用两个六端口隔膜阀作为接口串联三维气相色谱（ＧＣˑＧＣˑＧＣ），结合化学计量学中的平行因子对全三维气相色谱的分离进行方法评估［９０］；该小组进一步将飞行时间质谱引入到全三维气相色谱中，增加高温隔膜阀，有助于提高操作温度㊁减少样品裂解及有利于谱峰识别［９１］㊂Ｙａｎ等［９２］设计了一种自动化的三维气相色谱分析装置，该装置结合了１ＤＧＣ㊁ＭＤＧＣ（ＧＣ⁃ＧＣ）和ＧＣˑＧＣ，开发植物天然提取物的三维色谱（ＧＣ⁃ＧＣˑＧＣ）分析方法㊂Ｍｉｔｒｅｖｓｋｉ等［９３］将生物燃料油中的含氧化合物通过ＧＣˑＧＣ的方法从基质中分离，然后通过中心切割法将含氧化合物转移到下一维ＧＣ分离，完成（ＧＣˑＧＣ⁃ＧＣ）方法的搭建㊂该项技术进一步应用于（ＧＣˑＧＣ⁃ＧＣ⁃ＧＣ）完成肟的顺反异构及其对映体的分离（见图２）［９４］㊂㊃６４８㊃㊀第９期刘育坚，等：色谱分析中的串联技术图２㊀ＧＣˑＧＣ⁃ＧＣ⁃ＧＣ分离肟的顺反异构及其对映体［９４］Ｆｉｇ．２㊀Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｏｘｉｍｅｃｉｓ⁃ｔｒａｎｓｉｓｏｍｅｒｓａｎｄｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓｂｙＧＣˑＧＣ⁃ＧＣ⁃ＧＣ［９４］４㊀结论与展望㊀㊀分离与检测一直以来都是分析学科的焦点，并且也逐渐成为许多应用型和交叉学科中急需解决的重要问题的关键性技术环节之一㊂传统的色谱技术兼备了分离和检测双重功能，但单一的分离和单一的检测技术，都越来越难以满足超痕量样品分析㊁复杂样品分析㊁组学分析等需求㊂串联技术的运用，极大地加强了分离与检测的幅度和深度，不同的分离方法㊁分离模式的串联可实现分离的优势互补，不同的检测技术㊁检测仪器的串联可实现不同信号响应的同时监测，这为获取更加丰富和更加广泛的物质信息提供了技术保障㊂㊀㊀然而，在色谱分析的串联技术中，也还有诸多的难点㊂（１）不同功能模块的串联，对接口有极高的技术要求，要便于拆卸和连接，也要保证良好的密闭性，同时还必须死体积尽量小；（２）样品㊁色谱固定相和检测器三者相容性好，这需要大量的尝试和样品分析，才能建立高效㊁通用的分析方法；（３）不同检测器的同时配备，增加了仪器成本㊂虽如此，但分离技术㊁检测技术的不断深入㊁融合，依旧是目前获得样品精准信息的最有效途径㊂参考文献：［１］㊀Ａｌｖａｒｅｚ⁃ＳｅｇｕｒａＴ，Ｔｏｒｒｅｓ⁃ＬａｐａｓｉóＪＲ，Ｏｒｔｉｚ⁃ＢｏｌｓｉｃｏＣ，ｅｔａｌ．ＡｎａｌＣｈｉｍＡｃｔａ，２０１６，９２３：１［２］㊀ＸｉａＤ，ＧａｏＬＲ，ＺｈｅｎｇＭＨ．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇ⁃ｒａｐｈｙ，２０１７，３５（１）：９１夏丹，高丽荣，郑明辉．色谱，２０１７，３５（１）：９１［３］㊀ＧａｏＷ，ＳｏｎｇＨＰ，ＹａｎｇＨ，ｅｔａｌ．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏ⁃ｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，２０１７，３５（１）：１２１高雯，宋慧鹏，杨华，等．色谱，２０１７，３５（１）：１２１［４］㊀ＺｈｕＬＢ，ＸｕＮＢ，ＦｅｎｇＪＹ，ｅｔａｌ．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎａ⁃ｌｙｔｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１３，４１（４）：５９４朱丽波，徐能斌，冯加永，等．分析化学，２０１３，４１（４）：５９４［５］㊀ＧｒａｎａｆｅｉＳ，ＡｚｚｏｎｅＰ，ＳｐｉｎｅｌｌｉＶＡ，ｅｔａｌ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２０１６，１４７７：４７［６］㊀ＦａｌａｓｃａＳ，ＰｅｔｒｕｚｚｉｅｌｌｏＦ，ＫｒｅｔｚＲ，ｅｔａｌ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２０１２，１２４１：４６［７］㊀ＧｒｅｃｏＧ，ＧｒｏｓｓｅＳ，ＬｅｔｚｅｌＴ．ＪＳｅｐＳｃｉ，２０１３，３６（８）：１３７９［８］㊀ＣｈａｌｃｒａｆｔＫＲ，ＭｃＣａｒｒｙＢＥ．ＪＳｅｐＳｃｉ，２０１３，３６（２１／２２）：３４７８［９］㊀ＬｏｕｗＳ，ＰｅｒｅｉｒａＡＳ，ＬｙｎｅｎＦ，ｅｔａｌ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２００８，１２０８（１／２）：９０［１０］㊀ＨａｇｇａｒｔｙＪ，ＯｐｐｅｒｍａｎｎＭ，ＤａｌｂｙＭＪ，ｅｔａｌ．Ｍｅｔａｂｏｌｏ⁃ｍｉｃｓ，２０１５，１１（５）：１４６５［１１］㊀ＳｈａａｂａｎＨ，ＧóｒｅｃｋｉＴ．ＡｎａｌＣｈｉｍＡｃｔａ，２０１１，７０２（１）：１３６［１２］㊀ＤｅａｒＧＪ，ＭａｌｌｅｔｔＤＮ，ＨｉｇｔｏｎＤＭ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉａ，２００２，５５（３／４）：１７７［１３］㊀ＳａｎｄｒｏｎＳ，ＤａｖｉｅｓＮＷ，ＷｉｌｓｏｎＲ，ｅｔａｌ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ⁃ｉａ，２０１８，８１（２）：２０３［１４］㊀ＳａｒｄｅｌｌａＲ，ＬäｍｍｅｒｈｏｆｅｒＭ，ＮａｔａｌｉｎｉＢ，ｅｔａｌ．ＪＳｅｐＳｃｉ，２００８，３１（１０）：１７０２［１５］㊀ＰｉｙａｔｈｅｅｒａｗｏｎｇＷ，ＩｗａｓａｋｉＹ，ＹａｍａｎｅＴ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２００５，１０６８（２）：２４３［１６］㊀ＤｅｎｇＬ，ＮａｋａｎｏＨ，ＩｗａｓａｋｉＹ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２００７，１１６５（１／２）：９３［１７］㊀ＰｅｒｅｒａＲＷＨ，ＬｏｕｇｈＷＪ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２０１１，１２１８（４８）：８６５５［１８］㊀ＬｉｕＹＪ，ＬｉｕＺＭ，ＸｕＺＧ．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎａｌｙｔｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１７，４５（３）：３６９刘育坚，刘智敏，许志刚．分析化学，２０１７，４５（３）：３６９［１９］㊀ＬｅｏｎａｒｄＣ，ＳａｃｋｓＲ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，１９９９，７１（２４）：５５０１［２０］㊀ＶｅｒｉｏｔｔｉＴ，ＭｃＧｕｉｇａｎＭ，ＳａｃｋｓＲ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２００１，７３（２）：２７９［２１］㊀ＶｅｒｉｏｔｔｉＴ，ＳａｃｋｓＲ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２００１，７３（４）：８１３［２２］㊀ＶｅｒｉｏｔｔｉＴ，ＳａｃｋｓＲ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２００１，７３（１３）：３０４５［２３］㊀ＶｅｒｉｏｔｔｉＴ，ＳａｃｋｓＲ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２００１，７３（１８）：４３９５［２４］㊀ＷｈｉｔｉｎｇＪＪ，ＬｕＣＪ，ＺｅｌｌｅｒｓＥＴ，ｅｔａｌ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２００１，㊃７４８㊃色谱第３６卷７３（１９）：４６６８［２５］㊀ＷｈｉｔｉｎｇＪ，ＳａｃｋｓＲ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２００２，７４（１）：２４６［２６］㊀ＬｕＣＪ，ＷｈｉｔｉｎｇＪ，ＳａｃｋｓＲＤ，ｅｔａｌ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２００３，７５（６）：１４００［２７］㊀ＶｅｒｉｏｔｔｉＴ，ＳａｃｋｓＲ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２００２，７４（２１）：５６３５［２８］㊀ＷｈｉｔｉｎｇＪ，ＳａｃｋｓＲ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２００３，７５（１０）：２２１５［２９］㊀ＷｉｔｔｒｉｇＲＥ，ＤｏｒｍａｎＦＬ，ＥｎｇｌｉｓｈＣＭ，ｅｔａｌ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２００４，１０２７（１／２）：７５［３０］㊀ＬｖＳＲ，ＮｉｕＹＭ，ＺｈａｎｇＪ，ｅｔａｌ．ＳｃｉＲｅｐ，２０１７，７：４３９９８［３１］㊀ＭａＹ，ＴａｎｇＫ，ＸｕＹ，ｅｔａｌ．ＪＡｇｒｉｃＦｏｏｄＣｈｅｍ，２０１７，６５：３９４［３２］㊀ＶｅｓｃｈｅｔｔｉＥ，ＮｏｔａｒｄｏｎａｔｏＩ，ＡｖｉｎｏＰ，ｅｔａｌ．ＪＳｅｐＳｃｉ，２０１３，３６（１４）：２２６０［３３］㊀ＶｅｓｃｈｅｔｔｉＥ，ＲｕｓｓｏＭＶ．ＪＳｅｐＳｃｉ，２０１４，３７（４）：４１２［３４］㊀ＪｅｓｐｅｒｓＳ，ＲｏｅｌｅｖｅｌｄＫ，ＬｙｎｅｎＦ，ｅｔａｌ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２０１６，１４５０：９４［３５］㊀ＧｕéｇｕｅｎＦ，ＳｔｉｌｌｅＰ，ＭｉｌｌｅｔＭ．Ｔａｌａｎｔａ，２０１３，１１１：１４０［３６］㊀ＤｉＭＸ，ＬｉＺＢ，ＪｉａｎｇＱＫ，ｅｔａｌ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＢ，２０１８，１０７３：１７７［３７］㊀ＷｅｓｔＣ，ＬｅｍａｓｓｏｎＥ，ＢｅｒｔｉｎＳ，ｅｔａｌ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２０１８，１５３４：１６１［３８］㊀ＢａｒｎｈａｒｔＷＷ，ＧａｈｍＫＨ，ＴｈｏｍａｓＳ，ｅｔａｌ．ＪＳｅｐＳｃｉ，２００５，２８（７）：６１９［３９］㊀ＬｅｓｅｌｌｉｅｒＥ，ＷｅｓｔＣ，ＴｃｈａｐｌａＡ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２００３，１０１８（２）：２２５［４０］㊀ＷｅｌｃｈＣＪ，ＢｉｂａＭ，ＧｏｕｋｅｒＪＲ，ｅｔａｌ．Ｃｈｉｒａｌｉｔｙ，２００６，１９（３）：１８４［４１］㊀ＷａｎｇＣＬ，ＴｙｍｉａｋＡＡ，ＺｈａｎｇＹＲ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２０１４，８６（８）：４０３３［４２］㊀ＣｏｓｔａＭＰＤ，ＦｒａｓａｏＢＤＳ，ＬｉｍａＢＲＣＤＣ，ｅｔａｌ．Ｔａｌａｎ⁃ｔａ，２０１６，１５２：１６２［４３］㊀ＶｉｄａｌＲＢＰ，ＩｂａñｅｚＧＡ，ＥｓｃａｎｄａｒＧＭ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２０１７，８９（５）：３０２９［４４］㊀ＷａｎｇＭＦ，ＹａｎｇＬＬ，ＨｕＥＹ．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｍａ⁃ｔｏｇｒａｐｈｙ，２０１７，３５（６）：６６９王美飞，杨丽莉，胡恩宇．色谱，２０１７，３５（６）：６６９［４５］㊀ＡｄｈｉｋａｒｉＳ，ＫａｎｇＪＳ，ＬｅｅＷ．Ｃｈｉｒａｌｉｔｙ，２０１６，２８（１２）：７８９［４６］㊀ＸｕＺＧ，ＨｕＹＦ，ＨｕＹＬ，ｅｔａｌ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２０１０，１２１７（２２）：３６１２［４７］㊀ＬｅｅＳＴ，ＹａｎｇＢ，ＫｉｍＪＹ，ｅｔａｌ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２０１５，１４０９：２１８［４８］㊀ＺｈｅｎｇＹＢ，ＨｕａｎｇＢＦ，ＲｅｎＹＰ．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏ⁃ｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，２０１６，３４（７）：６９２郑熠斌，黄百芬，任一平．色谱，２０１６，３４（７）：６９２［４９］㊀ＨｕＱ，ＭｅｎｇＸＰ，ＣｈａｎＷ．ＡｎａｌＢｉｏａｎａｌＣｈｅｍ，２０１６，４０８（１９）：５３４７［５０］㊀ＭｅｒｃｏｌｉｎｉＬ，ＭａｎｄｒｉｏｌｉＲ，ＦｅｒｒａｎｔｉＡ，ｅｔａｌ．ＪＡｇｒｉｃＦｏｏｄＣｈｅｍ，２０１３，６１（８）：１６９４［５１］㊀ＫｕｅｓｅｎｇＰ，ＴｈａｍｍａｋｈｅｔＣ，ＴｈａｖａｒｕｎｇｋｕｌＰ，ｅｔａｌ．ＡｎａｌＬｅｔｔ，２０１１，４４（５）：７８７［５２］㊀ＲｅｓｐａｕｄＲ，ＱｕｅｎｕｍＬ，ＰｌｉｃｈｏｎＣ，ｅｔａｌ．ＰｈａｒｍＢｉｏｍｅｄＡｎａｌ，２０１３，８３：１６４［５３］㊀ＷｅｎｇＺＢ，ＹａｎＣＰ，ＷｕＹ，ｅｔａｌ．ＡｎａｌＬｅｔｔ，２０１４，４７（１２）：１９７８［５４］㊀ＭｏｋｂｅｌＨ，ＤｉｎｅＥＪＡ，ＥｌｍｏｌｌＡ，ｅｔａｌ．ＥｎｖｉｒｏｎＳｃｉＰｏｌｌｕｔＲｅｓ，２０１６，２３（８）：８０５３［５５］㊀ŁｏｚｏｗｉｃｋａＢ．ＥｃｏｔｏｘｉｃｏｌＥｎｖｉｒｏｎＳａｆ，２０１３，９７：２１０［５６］㊀ＬｉＨＰ，ＬｉＧＣ，ＪｅｎＪＦ．ＪＣｈｉｎＣｈｅｍＳｏｃ，２００４，５１（３）：５３１［５７］㊀ＦｒａｎｃｉｏｎｉＥ，ＦｉｌｌｍａｎｎＧ，ＨａｍａｃｈｅｒＣ，ｅｔａｌ．ＥｎｖｉｒｏｎＴｅｃｈｎｏｌ，２００３，２４（６）：６６５［５８］㊀ＬｉｐｏｋＣ，ＨｉｐｐｌｅｒＪ，ＳｃｈｍｉｔｚＯＪ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２０１８，１５３６：５０［５９］㊀ＺｈｏｕＲＺ，ＺｈｏｕＹ，ＭａｏＴ，ｅｔａｌ．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏ⁃ｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，２０１８，３６（１）：４３周瑞泽，周雅，毛婷，等．色谱，２０１８，３６（１）：４３［６０］㊀ＷａｌｔｅｒｓＣＣ，ＷａｎｇＦＣ，ＨｉｇｇｉｎｓＭＢ，ｅｔａｌ．ＯｒｇＧｅｏｃｈｅｍ，２０１８，１１５：５７［６１］㊀ＢａｒｐＬ，ＦｒａｎｃｈｉｎａＦＡ，ＰｕｒｃａｒｏＧ，ｅｔａｌ．Ｔａｌａｎｔａ，２０１７，１６５：５９８［６２］㊀ＴｉｔａｌｅｙＩＡ，ＯｇｂａＯＭ，ＣｈｉｂｗｅＬ，ｅｔａｌ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２０１８，１５４１：５７［６３］㊀Ｅｓｃｏｂａｒ⁃ＡｒｎａｎｚＪ，ＭｅｋｎｉＳ，ＢｌａｎｃｏＧ，ｅｔａｌ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２０１８，１５３６：１６３［６４］㊀ＣｈｏｗＨＹＪ，ＧóｒｅｃｋｉＴ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２０１７，８９（１６）：８２０７［６５］㊀ＬｉｎｋＡＪ，ＥｎｇＪ，ＳｃｈｉｅｌｔｚＤＭ，ｅｔａｌ．ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，１９９９，１７：６７６［６６］㊀ＸｕＪＣ，Ｓｕｎ⁃ＷａｔｅｒｈｏｕｓｅＤＸ，ＱｉｕＣＹ，ｅｔａｌ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２０１７，１５２１：８０［６７］㊀ＭｏｎｔｅｒｏＬ，Ｉｂ ñｅｚＥ，ＲｕｓｓｏＭ，ｅｔａｌ．ＡｎａｌＣｈｉｍＡｃｔａ，２０１７，９８５：２０２［６８］㊀ＢａｒｈａｔｅＣＬ，ＲｅｇａｌａｄｏＥＬ，ＣｏｎｔｒｅｌｌａＮＤ，ｅｔａｌ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２０１７，８９（６）：３５４５［６９］㊀ＡｐｅｌＮ，ＵｌｉｙａｎｃｈｅｎｋｏＥ，ＭｏｙｓｅｓＳ，ｅｔａｌ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２０１８，９０（８）：５４２２［７０］㊀ＨｕａｎｇＺ，ＹａｎＧＱ，ＧａｏＭＸ，ｅｔａｌ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２０１６，８８（４）：２４４０［７１］㊀ＳｔｏｌｌＤＲ，ＳｈｏｙｋｈｅｔＫ，ＰｅｔｅｒｓｓｏｎＰ，ｅｔａｌ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２０１７，８９（１７）：９２６０［７２］㊀ＢａｒｐＬ，ＢｉｅｄｅｒｍａｎｎＭ，ＧｒｏｂＫ，ｅｔａｌ．ＳｃｉＴｏｔａｌＥｎｖｉｒｏｎ，２０１７，５８３：３１９［７３］㊀Ｐéｒｅｚ⁃ＣａｓｔａñｏＥ，Ｓáｎｃｈｅｚ⁃ＶｉñａｓＭ，Ｇ ｚｑｕｅｚ⁃ＥｖａｎｇｅｌｉｓｔａＤ，ｅｔａｌ．ＦｏｏｄＣｈｅｍ，２０１８，２３９：１１９２［７４］㊀ＴｏｌｅｄａｎｏＲＭ，ＣｏｒｔéｓＪＭ，Ｒｕｂｉｏ⁃ＭｏｒａｇａÁ，ｅｔａｌ．ＦｏｏｄＣｈｅｍ，２０１２，１３５（２）：６１０［７５］㊀ＢｉｅｄｅｒｍａｎｎＭ，ＭｕｎｏｚＣ，ＧｒｏｂＫ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２０１７，１５２１：１４０［７６］㊀ＳｔｅｖｅｎｓｏｎＰＧ，ＴａｒａｆｄｅｒＡ，ＧｕｉｏｃｈｏｎＧ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２０１２，１２２０：１７５［７７］㊀ＳｕｎＭ，ＳａｎｄａｈｌＭ，ＴｕｒｎｅｒＣ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２０１８，１５４１：２１［７８］㊀ＷｅｉＪ，ＳｕｎＪ，ＹｕＷ，ｅｔａｌ．ＪＰｒｏｔｅｏｍｅＲｅｓ，２００５，４（３）：８０１［７９］㊀ＡｎｄｅｒｓｏｎＤＣ，ＣａｍｐｂｅｌｌＥＬ，ＭｅｅｋｓＪＣ．ＪＰｒｏｔｅｏｍｅＲｅｓ，２００６，５（１１）：３０９６［８０］㊀ＺｈａｎｇＬＦ，ＹａｏＬ，ＺｈａｎｇＹ，ｅｔａｌ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＢ，２０１２，９０５，９６［８１］㊀ＭｏｏｒｅＡＷ，ＪｏｒｇｅｎｓｏｎＪＷ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，１９９５，６７（１９）：３４５６［８２］㊀Ａｌ⁃ＤａｇｈｒｉＭＭ，Ａｌ⁃ＡｔｔａｓＯＳ，ＪｏｈｎｓｔｏｎＨＥ，ｅｔａｌ．ＪＰｒｏ⁃ｔｅｏｍｅＲｅｓ，２０１４，１３（１１）：５０９４［８３］㊀ＳｐｉｃｅｒＶ，ＥｚｚａｔｉＰ，ＮｅｕｓｔａｅｔｅｒＨ，ｅｔａｌ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２０１６，８８（５）：２８４７［８４］㊀ＳｏｎｇＱＱ，ＺｈａｏＹＦ，ＣｈｅｎＸＪ，ｅｔａｌ．ＲＳＣＡｄｖ，２０１７，７㊃８４８㊃㊀第９期刘育坚，等：色谱分析中的串联技术（５１）：３１８３８［８５］㊀ＷａｎｇＳＹ，ＳｈｉＸＺ，ＸｕＧＷ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２０１７，８９（３）：１４３３［８６］㊀ＧｓｔöｔｔｎｅｒＣ，ＫｌｅｍｍＤ，ＨａｂｅｒｇｅｒＭ，ｅｔａｌ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２０１８，９０（３）：２１１９［８７］㊀ＥｄａｍＲ，ＢｌｏｍｂｅｒｇＪ，ＪａｎｓｓｅｎＨＧ，ｅｔａｌ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２００５，１０８６（１／２）：１２［８８］㊀ＰｏｔｇｉｅｔｅｒＨ，ＷｅｓｔｈｕｉｚｅｎＲＶＤ，ＲｏｈｗｅｒＥ，ｅｔａｌ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２０１３，１２９４：１３７［８９］㊀ＤｕｔｒｉｅｚＴ，ＴｈｉéｂａｕｔＤ，ＣｏｕｒｔｉａｄｅＭ，ｅｔａｌ．Ｆｕｅｌ，２０１３，１０４：５８３［９０］㊀ＷａｔｓｏｎＮＥ，ＳｉｅｇｌｅｒＷＣ，ＨｏｇｇａｒｄＪＣ，ｅｔａｌ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２００７，７９（２１）：８２７０［９１］㊀ＷａｔｓｏｎＮＥ，ＢａｈａｇｈｉｇｈａｔＨＤ，ＣｕｉＫ，ｅｔａｌ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２０１７，８９（３）：１７９３［９２］㊀ＹａｎＤＤ，ＷｏｎｇＹＦ，ＷｈｉｔｔｏｃｋＳＰ，ｅｔａｌ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２０１８，９０（８）：５２６４［９３］㊀ＭｉｔｒｅｖｓｋｉＢ，ＭａｒｒｉｏｔｔＰＪ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２０１２，８４（１１）：４８３７［９４］㊀ＷｏｎｇＹＦ，ＫｕｌｓｉｎｇＣ，ＭａｒｒｉｏｔｔＰＪ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２０１７，８９（１０）：５６２０㊃９４８㊃。