小白鼠染色体标本的制作染色与观察

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染色体标本的制备及组型观察

【实验目的】

1. 掌握染色体标本制作的基本方法；

2. 认识不同生物的染色体的状态，学会做染色体组型图。

【制作染色体标本的意义】

了解染色体的特征（形态、大小、数目）——绘制染色体组型图

【染色体组型图的应用】

① 生物学方面：根据染色体特征鉴别生物及种类：兔44条；小鼠40条；大鼠42条；鸡78条；猫38条；狗78条；人46条；马64条

② 临床医学方面：主要用于遗传性疾病的诊断和研究：

21三体综合症：是21对常染色体多一条，此种人“先天愚型”，或称“伸舌样白痴”

卵巢退化症：45 XO，外貌表现为女性，卵巢发育不全或无，1.5米以下，不能生育。

睾丸退化症：47 XXY ，外貌为男性，比一般男性高，睾丸发育不全，有女性样乳房，智力低下或超常，不能生育，发声尖高。

因此，染色组型实验广泛应用于胎儿遗传性疾病早期诊断中（抽羊水做组型）

【染色体标本制作的原理】

选择活跃的组织：胸腺，骨髓，睾丸，小肠

施加药物使细胞分裂：PHA

设法得到大量的分裂中期细胞：秋水仙素

1. PHA：促进细胞分裂，使淋巴细胞返幼，变成淋巴母细胞。

2. 秋水仙素：破坏微管装配，使纺锤体不能形成，使大量细胞停在分裂中期。

3. 空气干燥：使细胞与染色体展开。

4. 低渗作用：水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体间的距离变大，易于染色体分散开。

5. 固定：用Camoy’s solution,作用使蛋白变性，对染色体内的组蛋白讲，变形后硬度增加，保持了染色体的“即时形态”对细胞膜蛋白讲，变性使细胞膜硬度增强，形成屏障作用，防止了细胞内物质外溢和丢失。

【实验用品】

1. 实验器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心机、小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯

四川大学实验报告

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题目：小鼠细胞染色体染色观察

一． Objectives:

1. Learn the method of preparation of mouse chromosome from

marrow.学习制备从骨髓中制备小鼠染色体的方法。

2. Understand the morphology and amount of mouse mitotic.了解小鼠有丝分裂期细胞染色体的形态和数量。

二． 实验原理

1. 秋水仙碱，一种生物碱，因最初从百合科植物秋水仙中提取出来，故名，也称秋水仙素。纯秋水仙碱呈黄色针状结晶，熔点157℃。易溶于水、乙醇和氯仿。味苦，有毒。秋水仙碱能抑制有丝分裂，破坏纺锤体，使染色体停滞在分裂中期。这种由秋水仙碱引起的不正常分裂，称为秋水仙碱有丝分裂。在这样的有丝分裂中，染色体虽然纵裂，但细胞不分裂，不能形成两个子细胞，因而使染色体加倍。

2. 现今微丝标记方法分为在细胞中标记微丝和活体细胞中标记微丝。固定细胞中的微丝主要是用带荧光探针的抗体或鬼笔环肽标记，需要对样品进行化学固定和膜的通透。活体标记常采用荧光类似物标记的方法和GFP标记方法。

三． 实验材料及设备 四川大学实验报告

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1. 实验材料：

a) 秋水仙素稀释液

b) 小鼠一只

c) 75mM KCl低渗溶液

d) 固定液

e) Giemas染液

2. 实验设备：

a) 普通光学显微镜

b) 载玻片若干，注射器。

c) 酒精灯

d) 离心管若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等

四． 实验方法及步骤

1. 提前3-4h向小鼠腹腔中注射秋水仙素，然后用引颈法处死小鼠。

2. 完整取出小鼠股骨（胫骨），取出骨骼表面肌肉和其他结缔组织。

3. 将胫骨两端剪开，用注射器吸取适量75mM KCI将骨髓冲洗到离心管中。

4. 低渗处理：用约6ml的75mM KCI在37℃下低渗骨髓细胞20min。 四川大学实验报告

小白鼠染色体标本的制作、染色与观察

姓名： 学号： 实验时间：

1. 实验目的

（1） 初步掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和 Giemsa染色法，了解各操作 步骤的原理。

（2） 了解常用实验动物染色体的数目及特点。

（3） 认识不同生物染色体的特征。

2. 实验原理

凡处于活跃增殖状态或者经过各种处理，任何动物组织的细胞都可进入分裂时期，

均可用于染色体分析。在正常动物体内，精巢和骨髓均为是活跃分裂的组织。给动物注 射一定剂量的秋水仙素，即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规空气干 燥法制备染色体，即可得到大量可分析的染色体标本。本方法简便、可靠，不需要经体 外培养和无菌操作，易于推广。骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。但在 取材方面，精巢又比骨髓要简易一些，故本实验选用小鼠的精巢为实验材料。

对于小鼠精巢染色体标本的制作，一般包括以下几个要点：①用一定剂量的秋水仙 素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期，使中期染色体停留在赤道面处；②用低 渗法使细胞膨胀，以至于在滴片时细胞胀破，使细胞的染色体铺展到载玻片上；③空气 干燥法可使细胞的染色体在载片上展平,经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。

Giemsa染色是最常用的染色方法之一，适用于多种细胞和染色体染色。主要用Giemsa

染液可以将细胞核染成紫红色或蓝紫色，胞浆染成粉红色，在光镜下呈现出清晰的细胞 及染色体图像。

3. 实验材料和用品

（1） 材料：小白鼠

（2） 试剂：秋水仙素、生理盐水（0.9%的NaCI溶液）、0.3%KCI低渗溶液、固定液（甲

醇：冰醋酸=3: 1）、Giemsa染液

（3） 器材：解剖盘、解剖镊、解剖剪、小烧杯（X 2）、吸管、玻璃刻度离心管、恒温水

浴锅、离心机、铜网、预冷载玻片、记号笔、普通光学显微镜、玻璃等

4. 实验步骤

（1）小白鼠染色体标本制作

① 取雄性小鼠以每克体重4^g注射秋水仙素，经14〜16小时后，断头法杀死小鼠， 取出睾丸用生理盐水（0.9%的NaCI）洗去血污。

小白鼠染色体标本的制作、染色与观察

姓名： 学号： 实验时间：

1.实验目的

（1）初步掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，了解各操作步骤的原理。

（2）了解常用实验动物染色体的数目及特点。

（3）认识不同生物染色体的特征。

2.实验原理

凡处于活跃增殖状态或者经过各种处理，任何动物组织的细胞都可进入分裂时期，均可用于染色体分析。在正常动物体内，精巢和骨髓均为是活跃分裂的组织。给动物注射一定剂量的秋水仙素，即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规空气干燥法制备染色体，即可得到大量可分析的染色体标本。本方法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌操作，易于推广。骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。但在取材方面，精巢又比骨髓要简易一些，故本实验选用小鼠的精巢为实验材料。

对于小鼠精巢染色体标本的制作，一般包括以下几个要点：①用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处；②用低渗法使细胞膨胀,

以至于在滴片时细胞胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上；③空气干燥法可使细胞的染色体在载片上展平,经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。

Giemsa染色是最常用的染色方法之一，适用于多种细胞和染色体染色。主要用Giemsa染液可以将细胞核染成紫红色或蓝紫色，胞浆染成粉红色，在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像。

3.实验材料和用品

（1）材料：小白鼠

（2）试剂：秋水仙素、生理盐水（0.9%的NaCl溶液）、0.3%KCl低渗溶液、固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、Giemsa染液

（3）器材：解剖盘、解剖镊、解剖剪、小烧杯（×2）、吸管、玻璃刻度离心管、恒温水浴锅、离心机、铜网、预冷载玻片、记号笔、普通光学显微镜、玻璃等

4.实验步骤

（1）小白鼠染色体标本制作

①取雄性小鼠以每克体重4μｇ注射秋水仙素，经14～16小时后，断头法杀死小鼠，取出睾丸用生理盐水（0.9%的NaCl）洗去血污。