金钗石斛愈伤组织培养

金钗石斛芽组织培养基质的筛选程小爱;郭俊霞【摘要】探明金钗石斛芽组织培养的最佳诱导培养基、生根培养基、移栽基质等,建立金钗石斛芽组织培养技术体系,为金钗石斛资源保护及可持续利用提供有效途径,以金钗石斛芽的诱导率、芽的增殖倍数、芽长势、芽生根率、根条数、组织苗的成活率和长势为指标,进行了金钗石斛芽组织培养最佳诱导培养基、生根培养基、移栽基质的筛选试验.结果表明:金钗石斛芽的最佳诱导培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+NAA0.1 mg/L+3％蔗糖+0.3％琼脂,增殖倍数达3.37倍,且芽多、长势壮;最佳生根培养基为1/2MS+IBA0.8 mg/L+NAA 0.5 mg/L+水蛋白400 mg/L+活性炭8 g/L+3％蔗糖+0.3％琼脂,生根率达33.3％;最适移栽基质为锯木屑,移栽150 d时成活率、生长量分别为46％和4.4 cm.【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2018(046)008【总页数】3页(P113-115)【关键词】金钗石斛;离体快繁;诱导率;增殖倍数【作者】程小爱;郭俊霞【作者单位】山西省太谷县农业委员会,山西太谷030800;四川省中医药科学院,四川成都610041【正文语种】中文【中图分类】S682金钗石斛(Dendrobium nobile Lindl.)为兰科石斛属多年生附生草本植物，以茎入药，具有强阴益精、厚肠胃、壮筋骨、暖水脏、补肾益力和轻身延年的功效，是药典记载药用石斛的主要品种之一，也属兰科主要的观赏花卉植物。

主要分布于长江以南的亚热带海拔700～1 700 m地区，喜温暖、湿润和阴凉的环境，常附生于潮湿的树干和岩石上，在自然条件下，金钗石斛主要以自然分蘖进行营养繁殖和通过形成种子进行有性繁殖方式进行繁衍[1-2]。

因石斛种子很细，需与真菌共生才能萌发[3]，繁殖率较低，对环境的要求较苛刻，加之人工大量采挖，导致其资源日渐贫乏。

为在保护的前提下合理利用这一珍贵资源, 首要解决的是种苗问题，组织培养技术是解决种苗问题的有效方法。

农业科学NONGYEKEXUE金钗石斛组培苗炼苗技术研究卓贵雄　蔡兰英*金钗石斛为兰科石斛属多年生附生草木植物，主要分布在我国四川、贵州、云南、广东、广西、台湾等省区。

金钗石斛是我国传统的名贵中药材，具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳、明目强身的功效。

本文主要结合实际情况，就金钗石斛组织苗炼苗技术开展研究，现将具体内容介绍如下：1　金钗石斛组培苗培育1.1　母液的配制和保存首先，母液分别配成大量元素、微量元素、有机和铁盐。

分别称量用纯净水溶解后定容；其次，激素。

生长素、细胞分裂素。

先用氢氧化钠溶液溶解后定容；再次，调P H。

氢氧化纳、氢氧化钾、盐酸。

称量后用纯净水溶解后定容。

有机和激素保存在冰箱中；最后，考核标准。

能计算配多少倍多少升母液的药品量，正确称量并会溶解。

1.2　培养基的配置分别量取母液、激素、纯净水、蔗糖、琼脂、活性炭、香蕉计、调PH液混合均匀。

按母液、激素、加纯净水、蔗糖、琼脂、活性炭、香蕉汁、加水定容、调PH的先后顺序、并且能准确的量取。

1.3　接种1.3.1　准备阶段。

换衣、鞋，用肥皂水洗手、烘于，开超净工作台，捡好要做的苗，准备好要做的培养基，对工作台用酒棈擦净，开机20分钟后可开始接种。

1.3.2　播种。

首先，新果荚清洗。

在自来水下用肥皂进行刷洗，在用纯净水刷洗1~2次；其次，灭菌。

先用无菌水洗2次，用75%酒精侵泡一分钟，用无菌水洗一次，用0.1%氯化汞溶液侵泡15分钟并不断摇晃，使灭菌液更好接触材料，时间到后，倒出汞溶液，用无菌水淸洗5次，把果荚放在无水酒精中后取出，防在火焰上烧干表皮水份。

用刀剖开把种播在培养基上面。

1.3.3　分苗。

把可以进行分株的苗进行分割为丈、中、小（3个叶片以下的为小）大的和中号的以毎瓶10点做在生根培养基中进行生根培养，小的放在繁殖培养基中培养20点左右，分苗要均匀。

注意用的刀和鑷子不要碰到分苗纸和苗以外的东西（超净台或瓶外壁）。

2　金钗石斛组培苗炼苗2.1　第一次炼苗金钗石斛从培养瓶中出来之前，应该放在窗子旁边进行自然环境适应。

金钗石斛栽培技术
金钗石斛的栽培技术包括离体组织培养繁殖和自然种植。

离体组织培养繁殖中，金钗石斛的叶片、嫩茎和根经过灭菌处理后，切成0.5-1 cm长，作为外植体。

使用MS和B5作为基本培养基，并在培养基中添加不同组合的植物激素，培养基的pH值为5.6-6.0，培养温度为25°C-28°C，每天光照9-10小时，光照强度为1800-1900 lx。

培养19天后，茎和叶出现小芽，约1个月后，小芽伸长，顶端分枝。

2个月后，芽长出4-8片叶，高约2.0-2.7 cm的试管苗。

自然种植中，金钗石斛的植料可以使用蝴蝶兰换下的旧水苔（简单清洗、晾晒）混合一些锯末、火山石。

只要有一定的保湿性和良好的透水性即可。

水苔使用前简单清洗，减少酸度，混入少量火山石或蛋壳粉（或碎屑），可以长期中和植料和植株根系释放的酸性物质。

请根据实际情况选择合适的栽培技术，可咨询专业人士获取具体信息。

金钗石斛的种植养殖方法及注意事项金钗石斛的种植养殖方法及注意事项——金钗石斛为多年生草本，别名吊兰花，是一味常用的名贵中药材。

金钗石斛具有附生性，喜阴暗湿润的环境，要求空气湿度较大且有阔叶疏林遮荫，栽培地宜选择在岩石相对集中，石质松泡粗糙、易吸潮，有苔藓生长的石头；贴树则以黄桷树、卷子树、桐子树等树皮粗厚，有纵向沟槽，树叶茂，树干粗大的活树为附主。

金钗石斛的种植方法1、种苗选择与处理：选种金钗石斛时，应选择无病、无虫危害、无霉变的健壮石斛分蔸苗、组培苗作生产用种苗，种苗还可以用金钗石斛茎中上部的茎节上先长根后长芽而形成新的小植株（带苗茎，农民称之“龙抱柱”）；切忌有病虫危害和采收时间长而发生干烂霉变的种苗作为扩大生产用种，否则将会给生产带来极大的损失。

种苗根据苗源情况进行分蔸，苗源充足，按每窝5-8苗，苗源缺乏按每窝2～3苗或单株或带茎苗。

2、栽培时间：金钗石斛种植宜选在春（2月下旬～3月）、秋（9月下旬～10月）季栽种为好；实践证明，春季栽种比秋季栽种更好。

这主要是充分利用植株休眠，体内积累有机养料充足和阳春3月，气候回升，风和日暖，万物复苏的黄金季节，温湿度、日照、雨水利于金钗石斛迅速萌发。

秋季种植是利用秋天的适宜温度（利用“小阳春”的特殊气候）进行种植。

栽植前的各项准备工作做好后，即可选择最佳种植季节大力发展石斛生产。

3、栽培方法（1）贴石法：将经过科学处理后的小窝种苗基部紧贴石头，然后用线卡固定，将根牢固地固定在石头表面，然后再用腐熟牛粪、苔藓覆盖石斛根部，嫩芽向上，密度30cm×30cm。

（2）贴树法：选择树杆较粗大、沟槽多而深的阔叶树[如黄桷、乌桕（俗称卷子树）、柿子树、桐子树等]，在树体淋雨面，用刀在较平而粗的树枝或树干上砍一浅裂口，将已处理好的石斛，用竹钉或绳索将基部固定在裂口处，然后再用牛粪：泥土（5：1）涂于石斛根部。

贴树栽培的密度一般按30～40cm一窝进行栽种，为防止风吹和雨水冲刷，一般应捆两圈，以固定须根于树干或树丫上，使其新根生出后沿树体紧密攀沿生长。

金钗石斛组培苗炼苗技术金钗石斛为兰科石斛属多年生附生草木，主要分布在四川、贵州、云南、广东、广西、台湾等省（区）。

其以茎入药，是传统名贵药用植物，具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳、明目强身等功效。

现代药理研究表面，石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强机体免疫力、扩张血管及抗血小板凝集等作用。

因此，石斛在临床上及中药复方中被广泛应用，具有广阔的市场前景，现已被国家列为重点保护的珍稀濒危物种。

金钗石斛自然繁殖立极低，生长缓慢加上人为掠夺性采挖，野生资源已严重枯竭。

为提高繁殖系数，减少资源消耗，中国医学科学院药用植物研究所云南分所采用组培快繁技术繁殖种苗，其中“炼苗”是组培育苗全过程中的重要环节，把握不好会直接影响组培苗的成活率。

1移栽前的准备及栽后管理试管苗养到3~5cm，且生有4~5条根时，即可进行移栽，在移栽之前先要培育壮苗和开瓶炼苗。

移栽时先把苗床基质选好，并搭盖遮荫网防止太阳直照。

1.1组培苗的清洗及消毒轻轻但要彻底地洗掉沾在根上的培养基，以免栽后发霉，注意种苗不受或少受创伤。

清洗干净后用0.1%多菌灵或0.3%~0.5%的高锰酸钾消毒杀菌5分钟。

1.2组培苗的移栽将组培苗小心插入事先准备好的基质内，用手扶平后喷水埋实，再喷0.1%多菌灵或百菌清。

1.3移栽后的管理炼苗后，头3~5天应特别注意做好保温、保湿、遮光等管理工作，以喷雾为主，每天喷雾，基质干可2~3天浇一次透水，小苗移栽一个月后，增喷一些营养元素，2个月调查成活率。

2不同炼苗基质对石斛成活的影响采用甘蔗渣+陶粒、木炭、陶粒三种不同基质进行炼苗（木炭不能用新炭），两个月后统计成活率，结果见表1。

从表中可看出，用甘蔗渣+陶粒的成活率较高，木炭较差。

3不同炼苗时间石斛的生长情况对同一批苗在同一炼苗基质上的生长情况进行调查，定点抽取100株进行观察，结果见表2。

金钗石斛为兰科石斛属多年生附生草木，主要分布在四川、贵州、云南、广东、广西、台湾等省（区）。

园艺学现代农业科技2018年第16期金钗石斛(Dendrobium nobile Lindl )又名万丈须、金钗石、扁金钗、扁黄草、扁草,系兰科石斛属多年生草本植物,因形状像古代妇女头上发钗而得名。

金钗石斛是我国传统的名贵中药,在《神农本草经》中被列为上品。

其性寒,味甘、咸、淡,归胃、肾二经,具有滋阴清热、生津止渴的功效,主要用于热病伤津、口渴舌燥、病后虚热、胃病、干呕等症,被当作石斛的上品,是三大石斛之首。

现代医学和中医药理研究表明,石斛在提高人体免疫力、抗衰老、抑制肿瘤、补五脏虚劳等方面有明显效果,民间有“救命仙草”之称[1]。

金钗石斛喜在温暖、潮湿、半阴半阳的环境中生长,以在年降雨量1000mm 以上、空气湿度>80%、1月平均气温高于8℃的亚热带深山老林中生长为佳。

野生金钗石斛多生长于悬崖峭壁、树干、树枝或岩石缝中,常年接受云露雨雾的滋养,自然遮荫度能达到70%~80%[2]。

金钗石斛多为野生,但因其自然繁殖力低下,加上长期过度采伐利用,野生金钗石斛已濒临灭绝。

根据金钗石斛的野生生长特性,结合湖北三峡职业技术学院农学院生化实验室培养出的大量组培苗,试图探索一条“科技+自然驯化”的途径,一方面能够保证其在山区成功种植,另一方面尽可能模拟其生长的自然环境,以期能保证金钗石斛的品质,确保其药效。

为此,笔者以金钗石斛组培苗为试材,在神农架林区松柏镇盘水村进行了组培苗树干栽植及养护技术试验,探索出了一套较好的金钗石斛组培苗树干栽植及养护技术,现将关键技术总结如下。

1场地选择神农架松柏镇盘水村海拔1000m 左右,全年最高温不超过35℃,空气湿度较大,气候条件非常适合金钗石斛生长。

试验场地选择该村半阴半阳的空地,搭建遮阳网架,网架呈屋脊形结构,中间高度5m ,两边高4m ;遮阳网在栽植金钗石斛苗时盖上,以75%遮光度为宜。

选择当地广泛生长的黄杨树为树种,以主干直径5~8cm 活体大树为金钗石斛种植床,春季移栽,移栽密度以3m×3m 为宜,正常养护,成活后供第2年春季金钗石斛栽植。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810473818.3(22)申请日 2018.05.17(71)申请人 河南福瑞滋生物科技有限公司地址 474350 河南省南阳市内乡县湍东镇罗岗村开发区(罗岗预制厂东)(72)发明人 赵薇　赵野　(74)专利代理机构 郑州知己知识产权代理有限公司 41132代理人 季发军(51)Int.Cl.A01G 24/25(2018.01)A01G 24/10(2018.01)A01G 24/20(2018.01)A01G 24/23(2018.01)A01G 24/28(2018.01)A01H 4/00(2006.01)C05G 3/00(2006.01)(54)发明名称一种金钗石斛的栽培基质及制备方法及组培育苗方法(57)摘要本发明属于石斛栽培技术领域，尤其是涉及一种金钗石斛的栽培基质及制备方法及组培育苗方法。

栽培基质包括各组分的重量百分数为：椰糠4%，碎石片25%，陶粒15％，松树皮45％，泥炭6％，腐熟牛粪4％，微量元素1％。

制备方法：将上述组分高温消毒，消毒后将各组分按重量百分数混合，搅拌均匀制成混合料，混合料添加适量有机肥和适量的水均匀混合，在适宜的环境指标下，保证混合料的含水量为55-65%。

组培育苗的方法包括以下步骤：组织培养；增殖培养；生根培养；炼苗；出瓶移栽。

该方法通过组织培养技术得到的金钗石斛种苗，使其保持野生金钗石斛优良基因，种植的组培苗合格率大大提高，便于进行规模化生产。

权利要求书1页 说明书7页CN 108432599 A 2018.08.24C N 108432599A1.一种金钗石斛的栽培基质，其特征在于：由椰糠、碎石片、陶粒、松树皮、泥炭，腐熟牛粪和微量元素组成，其中各组分的重量百分数为：椰糠4-6%，碎石片15-25%，陶粒5-15％，松树皮45-55％，泥炭6-10％，腐熟牛粪4-6％，微量元素1-3％。

金钗石斛组培苗树干栽植及养护技术作者：张敏易德政来源：《现代农业科技》2018年第16期摘要为满足野生药用石斛人工栽培的需求，以金钗石斛组培瓶苗为试材，模拟金钗石斛的自然生长环境，保证其药性和药效，从场地选择、组培苗选择与驯化、苔藓收集与消毒、幼苗移植、日常管理等方面总结了金钗石斛组培苗树干栽植及养护的关键技术，以期为优化金钗石斛栽培技术提供参考。

关键词金钗石斛；组培苗；树干栽植；日常管理中图分类号 S567.23+9 文献标识码 B 文章编号 1007-5739（2018）16-0074-01金钗石斛（Dendrobium nobile Lindl）又名万丈须、金钗石、扁金钗、扁黄草、扁草，系兰科石斛属多年生草本植物，因形状像古代妇女头上发钗而得名。

金钗石斛是我国传统的名贵中药，在《神农本草经》中被列为上品。

其性寒，味甘、咸、淡，归胃、肾二经，具有滋阴清热、生津止渴的功效，主要用于热病伤津、口渴舌燥、病后虚热、胃病、干呕等症，被当作石斛的上品，是三大石斛之首。

现代医学和中医药理研究表明，石斛在提高人体免疫力、抗衰老、抑制肿瘤、补五脏虚劳等方面有明显效果，民间有“救命仙草”之称[1]。

金钗石斛喜在温暖、潮湿、半阴半阳的环境中生长，以在年降雨量1 000 mm以上、空气湿度>80%、1月平均气温高于8 ℃的亚热带深山老林中生长为佳。

野生金钗石斛多生长于悬崖峭壁、树干、树枝或岩石缝中，常年接受云露雨雾的滋养，自然遮荫度能达到70%～80%[2]。

金钗石斛多为野生，但因其自然繁殖力低下，加上长期过度采伐利用，野生金钗石斛已濒临灭绝。

根据金钗石斛的野生生长特性，结合湖北三峡职业技术学院农学院生化实验室培养出的大量组培苗，试图探索一条“科技+自然驯化”的途径，一方面能够保证其在山区成功种植，另一方面尽可能模拟其生长的自然环境，以期能保证金钗石斛的品质，确保其药效。

为此，笔者以金钗石斛组培苗为试材，在神农架林区松柏镇盘水村进行了组培苗树干栽植及养护技术试验，探索出了一套较好的金钗石斛组培苗树干栽植及养护技术，现将关键技术总结如下。

金钗石斛的组织培养和快繁技术
孙廷;杨玉珍;胡如善;孙天洲
【期刊名称】《西北农业学报》
【年(卷),期】2004(013)004
【摘要】以宝天曼国家自然保护区野生的金钗石斛茎段为试材,消毒后接种于
MS+6-BA 2.0mg/L+NAA0.5 mg/L+2.0%蔗糖培养基上诱导出新生芽,在MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L+2.0%蔗糖培养基上,增殖系数可达5～6,在
MS+KT 2.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L+2.0%蔗糖培养基上,培养30 d左右,可形成3～4条粗壮的根和6～7 cm的完整植株,移栽到小树皮+小兰基石+椰壳粉(1.5:1.5:1)基质上,成活率可达到95%.
【总页数】4页(P13-16)
【作者】孙廷;杨玉珍;胡如善;孙天洲
【作者单位】南阳农校组培中心,河南,南阳,473005;南阳农校组培中心,河南,南阳,473005;南阳农校组培中心,河南,南阳,473005;南阳农校组培中心,河南,南
阳,473005
【正文语种】中文
【中图分类】S567
【相关文献】
1.金钗石斛的组织培养和快繁技术 [J], 孙廷;杨玉珍;陶杰;胡述晓
2.金钗石斛的组织培养和快繁技术 [J], 孙廷;杨玉珍;胡如善
3.金钗石斛种苗快繁及林下栽培技术的初步研究 [J], 郑建铃
4.芦笋组织培养快繁技术 [J], 张慧
5.楸树无糖组织培养快繁技术初探 [J], 张蕊;石娜;孙玲凌;李艺
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秦巴山区及毗邻地区野生金钗石斛组织培养与快速繁殖江爱明;曹婷【摘要】为建立金钗石斛快速繁殖体系,以金钗石斛茎段为试验材料,对诱导培养基、增殖培养基、生根培养基、炼苗基质等组培苗生产的关键环节因素进行了优化.结果表明:腋芽诱导培养基1/2MS+6-BA (0.9 mg/L)+NAA(0.2 mg/L)为最佳;丛芽诱导培养基1/2MS+ 6-BA(0.5 mg/L)+60％香蕉汁(100 mL/L)为最佳;生根培养基1/2MS+IBA(0.6 mg/L)为最佳;移栽基质为锯末∶树皮∶刨花为2∶4∶4可使幼苗成活率高达90％.【期刊名称】《华中师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2016(050)003【总页数】6页(P417-422)【关键词】金钗石斛;组织培养;快速繁殖【作者】江爱明;曹婷【作者单位】汉江师范学院生化系,湖北十堰 442000;汉江师范学院生化系,湖北十堰 442000【正文语种】中文【中图分类】Q945.51秦巴山区是秦岭山脉和大巴山山脉区域的总称，地形较为复杂，中心是汉中盆地，两侧为巴山山脉和秦岭山脉，呈典型的“两山夹一江”的地势构造[1].该地区处于我国中西结合部和南北气候过渡带，具有温暖湿润、雨热同季的特点，独特的自然条件和地理位置为野生植物资源提供了较好的生长环境.作为秦巴山区的重要组成部分，神农架林区的野生植物资源尤为丰富.本地区位于109°56′～110°58′E，31°15′～31°57′N之间[2]，由大巴山脉东延的余脉组成，山体呈WS-EN走向.神农架平均海拔1 700 m，山峰多在1 500 m以上[3]，其最高峰海拔3 105 m，是华中地区最高点，故称为“华中屋脊”.林区处于北亚热带，年平均气温为12.2℃，极端最高气温38.8℃，极端最低气温-9.8℃，≥ 10℃的有效积温3 200～4 000℃，平均年降雨量在800～2 500 mm之间.年日照时数1 858.3 h，年辐射总量103.7 kcal/m2[4].同时它又是我国西部高原与东部丘陵的过度地区，土壤地理分布差异显著，有山地黄土壤、黄棕壤、粗腐殖质棕壤、棕壤、灰棕壤等多种类型，土壤呈中性或微酸性[5].植物成分与大巴山脉和川东地区的植物成分最为密切，与我国西南区系也有联系，包含着较多的云贵高原、四川盆地尤其是川东山区的类群[6]，是世界中纬度地区植被最完整的地区之一，素有“绿色宝库”、“物种基因库”、“濒危动植物避难所”之美誉.独特的地理环境和气候条件不仅造就了神农架林区植物资源的多样化，也使得本地区的野生药用植物异常丰富.相传上古时代的“神农尝百草，一日遇七十毒”就发生在这一带.这些植物中有很多是国家二级保护物种，具有重要的观赏价值和药用价值.通过多年的科学考察和形态学鉴定，采集到10种名贵中草药(见表1).在上述名贵的野生药用植物中，金钗石斛显得尤为珍稀.金钗石斛对生长基质有严格要求，一般生于岩石或树干，与真菌共生，需要借助真菌提供的营养进行繁殖和生长[7].未见其生长于土壤中，这也是制约人工快速繁殖金钗石斛的关键所在.长期以来，由于生态环境的破坏和对植被资源不合理的开发利用等原因造成了野生金钗石斛愈来愈少.为了挽救和有效保护该濒危种质资源，满足药材市场的需求，实现该资源的可持续利用，利用组织培养技术快速大量繁殖试管苗，是解决这一难题的有效途径.目前，国内有关于石斛组培快繁的报道较多，一般是以成熟或未成熟的种子为材料，诱导出原球茎，由原球茎继续扩繁或成苗[8].但是以金钗石斛其他部位作为外植体进行组培快繁鲜有报道，特别是以成熟的茎段作为外植体不仅可以保证遗传的稳定性，还可以一年四季随时取材，十分方便.本实验通过在神农架林区采集金钗石斛，利用金钗石斛的茎段作外植体进行离体培养和快速繁殖的研究，已诱导出丛生芽并发育形成组培苗，组培苗经过炼苗处理，移栽成活.1.1仪器与试剂超净工作台(SW-CJ-2D智能型，苏州博莱尔器械制造有限公司)，恒温箱培养箱(GZ-350型，常州博远医疗器械制造有限公司)，接种灭菌器(YH-JZ-11，上海宇涵生物器械制造有限公司)，1/2MS培养液(杭州木木生物科技有限公司)，6-苄基氨基嘌呤(6-BA，杭州木木生物科技有限公司)，萘乙酸(NAA，杭州木木生物科技有限公司)，活性炭(kermel公司)，香蕉汁(kermel公司).1.2材料2014年6月18日，从神农架林区采集幼嫩的石斛，经鉴定为石斛.种植于营养钵中，其上覆盖一薄层青苔保湿，置于光照培养箱内供实验使用.1.3方法1.3.1腋芽的诱导选用二年生茎段为外植体，茎段洗净、去除叶鞘后切成具有1～3个腋芽、长6～10 cm长茎段，用1～2 g/L的多菌灵溶液浸泡5 h，再用70%乙醇消毒30 s后吸干，用0.1%氯化汞杀菌10～15 min，无菌水冲洗3～5次.取出材料，先去除两端后，切成具有茎节、长度为2 cm左右的小段作为外植体.以1/2MS为基本培养基，均添加30 g/L蔗糖、7.3 g/L琼脂和1 g/L活性炭，pH值5.8.根据各个试验的不同要求添加不同浓度的NAA与6-BA，探索适宜金钗石斛腋芽诱导的生长素和细胞分裂素浓度，筛选出合适的培养基配方.每种培养基接种5瓶，重复3次，每瓶接种 5个茎段.接种好后放入光照培养箱中培养，培养条件为25±1℃、光照1 500～2 000 Lx，光照时间为10 h/d，20 d后统计腋芽诱导数量.1.3.2丛生芽的增殖当金钗石斛的腋芽长到2～4 cm时，切下腋芽接种到增殖培养基.以1/2MS为基本培养基，均添加30 g/L蔗糖、7.3 g/L琼脂和1 g/L活性炭，pH值5.8.根据各个试验的不同要求添加不同浓度的NAA、6-BA，探索适宜金钗石斛丛生芽增殖的生长素和细胞分裂素浓度，筛选出合适的培养基配方.每种培养基接种5瓶，重复3次，每瓶接种5个腋芽.接种好后放入光照培养箱中培养，培养条件为25～28℃、光照强度为1 500～2 000 Lx，光照时间为10 h/d，30 d后统计丛生芽诱导数量.得到最优的培养基后，再比较不加添加物和加入添加物前后的诱导情况，找到适合金钗石斛丛生芽增殖的完全培养基，添加物为香蕉汁，添加量为60%香蕉汁(100 mL/L)，30 d后统计丛生芽增殖数量.1.3.3成苗的诱导当金钗石斛的丛生芽长到5～7 cm时，将健壮的无根苗分成单株，接种到生根培养基，接种数为20株/瓶.以1/2MS为基本培养基，均添加30 g/L蔗糖、7.3 g/L琼脂和1 g/L活性炭，调pH值至5.8.根据各个试验的不同要求添加不同浓度的NAA、IBA，接种好后放光照培养箱中培养，温度25℃，光照强度2 000 Lx，光照为10 h/d， 30 d后观察金钗石斛试管苗不定根生长状况. 1.3.4试管苗驯化与移栽当苗高达到5 cm以上时进行组培苗驯化与移栽，先将培养瓶瓶口打开3～5 d，观察叶子的性状.然后取出组培苗，用清水洗净根系附着的培养基，移栽到经高温消毒的基质中，大小一致，20 株/瓶.用复合肥叶面喷施，在温室大棚中培养，温度为22～25℃，湿度为70%～85%，20 d后进行换盆移栽.1.3.5数据统计分析表型性状数据处理利用Excel对原始数据进行统计分析，SAS8.0软件进行方差分析(α=0.05水平，LSD检测).2.1不同浓度6-BA、NAA的组合对腋芽诱导的影响将6-BA和NAA以表2中的不同浓度组合作为培养基诱导茎段产生腋芽，发现接种在9号培养基中，腋芽诱导的数量最多，达到了每根茎段2.82个(见表5).同时对比各种培养基发现：高浓度细胞分裂素和低浓度生长素组合有利于腋芽的形成，诱导腋芽最佳的激素组合是：6-BA 0.9 mg/L与NAA 0.2 mg/L(见图1A).2.2丛生芽的增殖2.2.1不同浓度6-BA、NAA的组合对丛生芽增殖的影响将腋芽切下放入丛生芽增值培养基中进行培养，采用不同浓度的生长素和细胞分裂素配比对金钗石斛的丛芽诱导明显不同.试验统计结果表明5号培养基丛生芽增殖的数量最多，达到了33.4个/瓶(见表6).在1～6号培养基中，发现丛生芽的数量随6-BA浓度增加而增加，直到6-BA浓度达到0.5 mg/L.在7～10号培养基中，发现NAA抑制了丛生芽的诱导，NAA的浓度越大，丛生芽的数量越少.2.2.2添加物对丛生芽诱导的影响在表3的5号培养基中，进行了不加和添加添加物实验.试验统计结果表明加入香蕉汁对丛生芽的启动和增殖具有明显促进作用(见图2).不添加香蕉汁时，培养第14 d，丛生芽才开始增殖，直到第28 d，达到最大为33个/瓶.加入香蕉汁以后，培养第10 d，丛生芽的增殖就很快，培养到26 d达到最大为40个/瓶(见图1B).2.3不同浓度NAA、IBA的组合对根诱导的影响将单株金钗石斛放入生根培养基中进行诱导培养，由表7可以看出另外，IBA浓度对金钗石斛生根具有明显作用，低浓度的IBA更有利于金钗石斛生根，在IBA浓度为0.6 mg/L的培养基中，金钗石斛生根数均达到最大为67.5个/瓶，平均根长为7.5 cm.随着 IBA浓度的升高，生根数和平均根长都逐渐降低.同时我们也研究了NAA对金钗石斛生根的影响，发现NAA对根的生长有促进作用，但是对根的诱导作用却不明显.综合以上结果，金钗石斛生根培养基中最佳的IBA浓度分别为0.6 mg/L，生根数高达67.5个/瓶，平均根长为7.5 cm(见图1C、图1D).2.4移栽基质的优化将生根苗驯化后移栽在5种不同基质上，1.4个月后统计成活率.从图3可看出，基质锯末∶树皮∶刨花为2∶4∶4效果最好，成活率高达90%，基质刨花∶树皮为3∶7的次之，成活率为76%.而组培苗种植于泥炭∶树皮为3∶7成活率最低为50%.因此，最适合金钗石斛组培苗生长的基质为锯末∶树皮∶刨花为2∶4∶4.金钗石斛自然条件下的繁殖率很低，利用组织培养技术可以进行快速繁殖，是解决种苗的有效途径.影响金钗石斛组织培养的因素主要有基本培养基、激素配比、有机添加物及培养条件等，其中激素配比为最关键因素.已有研究表明，金钗石斛快繁的培养基以1/2MS的效果最好[9]，细胞分裂素有利于芽的诱导和增殖[10].因此，本实验主要采用了1/2MS培养基，重点探讨了6-BA的效应.在培养基中，金钗石斛经过30 d培养后诱导出丛生芽，在一定范围内，随着时间的增加，芽诱导率有所增加.当培养基中的6-BA浓度达到0.5 mg/L时，丛生芽数量达到最大.当再逐渐增大6-BA浓度时，丛生芽的数量出现下降，说明金钗石斛不能忍受较高浓度的6-BA，与曾宋君等[8]的研究结果一致.在金钗石斛丛生芽增殖过程中，本研究中添加了香蕉汁，发现香蕉汁对丛生芽增殖有良好的促进作用，缩短了丛生芽产生的时间，增加了丛生芽的数量，其增殖倍数非常可观，远远高于前人在金钗石斛增殖研究中的结果[11-13].组织培养过程中，试管苗的生根好坏将直接影响到试管苗的质量和移栽成活率.在诱导金钗石斛组培苗生根的过程中，组培苗根系的形成及根的生长速度与IBA浓度密切相关.研究表明随培养基中IBA浓度的提高，植株平均每株生根数也相应增加.当IBA浓度最高达0.6 mg/L时，株平均根数最多，但是NAA对组培苗生根的作用不明显，这也验证了IBA有利于侧根的生长，而NAA只是促进主根的形成[14].金钗石斛组培苗小而弱，根纤细，移栽较其它植物组培苗困难.移栽成活的关键是小环境保湿和基质通气性好，以保证小植株不失水并有利于气生根的生长[15].本研究采用树皮的基质，由于树皮的通透性且富含有机质，幼苗成活率高达90%，幼苗生长快且健壮.因此，本研究从芽再生、增殖培养、生根培养到移栽这4个环节进行了一系列的优化，建立了一套可高效、快速、持续获得优良的金钗石斛组培种苗的技术体系，大大缩短了金钗石斛的繁殖周期，很大程度上满足了生产的需要，有助于金钗石斛种质资源保护和栽培产业化发展.【相关文献】[1] 王月清. 秦巴山区主要野生植物调查与观赏性评价[D].西安：西北农林科技大学， 2013．[2] 刘霞，胡志刚，杜巍，等. 神农架中药资源保护现状与可持续利用策略[J].世界科学技术—中医药现代化， 2014， 16(11)：2331-2335．[3] 郑重. 神农架维管植物区系初步研究[J].武汉植物学研究， 1993， 11(2)：137-148．[4] 陈露，汪正祥，雷耘，等. 1990-2010年神农架林区气候变化特征分析[J].湖北大学学报(自然科学版)， 2013， 35(1)：11-16．[5] 杨兰芳，万梦雪，汪正祥，等. 神农架山地土壤的基本肥力特征[J].湖北大学学报(自然科学版)，2013， 35(1)：1-5．[6] 丛静，尹华群，卢慧, 等. 神农架保护区典型植被的物种多样性和环境解释[J].林业科学，2013， 49(5)：30-35．[7] KE X， YI T， JIA L， et al. 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植物组织培养课程设计专业：生物科学与生物技术班级：B11学号：B11姓名：张。

金钗石斛的脱毒、快繁技术植物组织培养脱毒快繁是人工在无菌条件下利用植物体的一部分，在人工控制的营养和环境条件下繁殖植物.脱除病毒得到无毒苗株，继而在大田快速殖的技术。

脱毒及离体快繁，这是日前杭物组织培养应用最多、最广泛和是有效的一个方而.主要是进行茎尖培养脱除病毒。

对于脱毒苗、新育成、新引进、稀缺良种、优良单株、濒危植物和基因工程植株等可通过离体快速繁殖，同时可不受地区和气候的影响。

比传统的繁殖方法快数万倍。

植物组织培养己发展成为一门富有生命力的学科。

脱毒与快繁经过50年世界范围内大规模研究，植物离体快繁的技术体系已相对成熟，其操作程序一般划分为5个阶段：1.无菌培养的建立（包括外植体的选择、培养基、外植体的消毒和接种）2.初代培养；3.继代培养和快速增值；4.诱导生根；5.驯化移栽。

一、无菌培养基的建立1外植体的选择文献报道的外植体有种子、无菌苗幼苗茎段、原球茎及人工种子，其他的外植体的研究还未见报道.据研究，由种子诱导的愈伤组织的分化能力较强，而且由种胚培养的原球茎的质量较高。

在进行金钗石斛组织培养时，初代培养最敏感的因子是材料的部位，其次是激素比例，基本培养基影响较小。

2外植体处理2.1预处理在取材前1 -2周，把母株置于温室内培养，不要给它喷水，在接种前选择健壮无病的当年生长的幼株剪下，置于1000mL烧杯中，然后放在水龙头下，用流动的自来水冲洗10 min，尔后将金钗石斛幼株用无菌水漂洗2次。

2.2外植体表面灭菌操作方法将预处理过的幼株放置于烧杯中，倾入75%的酒精使之没过外植体，并轻晃以除去所附气泡，经过10一15 s后，倾去酒精，用无菌水冲洗外植体.接着再用0.1%的氯化汞水溶液浸泡幼株8一10 min，灭菌结束后，倾出消毒液，再注入适量的无菌水，用无菌镊子搅动数次，再将水倒掉，如此重复3--4次.然后把消毒过的外植体吸干水后包在无菌的滤纸中或放在干燥灭过菌的培养皿里备用。

金钗石斛种植方法是什么金钗石斛种植方法是什么金钗石斛生长环境要求苛刻，要在特殊的地理环境才能种植，喜温暖湿润气候，宜土质含钾量高，保肥保水能力强的地方才能生长。

下面是小编精心为你整理的金钗石斛种植方法，一起来看看。

金钗石斛种植方法繁殖方法组织快繁组培苗栽培前应先进行14~21天的炼苗，具体措施是将组培苗移至炼苗房，使其在开放变化的环境中逐渐适应自然环境，待组培苗叶色浓绿时即可出瓶种植。

出瓶前先将瓶盖打开，让瓶苗在室外空气中放置2~3天，让其适应自然温湿度。

然后进行洗苗，洗苗时将带有培养基的幼苗轻轻取出，置于盆中清洗，污染苗和裸根苗或少根苗应分开放置。

组培苗先用自来水清洗，主要是应洗掉琼脂，以免琼脂发霉引起烂根，而后再用清水漂洗一下。

洗苗时最好根据苗的大小和优劣同步进行分级，以便栽培、管理，提高组培苗的成活率并使其生长整齐。

分株扦插繁殖分株时选择1年生或2年生、色泽嫩绿、健壮、萌发多、根系发达及无病虫害的植株作种株，剪去枯枝、断枝、老枝及过长的须根，将株丛切开，分成小丛，每丛带有叶的茎株5~7根，即可种植。

种子采集与种苗选择每年11月下旬在产地采集成熟的石斛蒴果，利用组织培养技术生产组培苗。

生产用种苗选择无病虫为害，健壮的野生苗或组培苗。

栽种时间春季栽培时间为2月下旬至4月初;秋季栽培时间9月下旬至11月中旬。

田间管理1、水肥管理：腐熟的农家肥1650kg/667m2(亩)，石斛专用肥50 kg/667m2(亩)，石斛营养液400倍液;浇水以基质不干不涝，保持基质湿润为度。

2、除草：随时清除根际周边杂草。

但在高温季节不宜除草，拔除杂草不要伤根。

3、调整郁闭度：石斛生长地的都闭度在60%左右，因此要经常对附生树进行整枝修剪，以免过于荫蔽或郁闭度不够。

4、整枝：每年春天前发新整时，结合采收老茎将丛内的枯茎剪除，并除去病茎、弱茎以及病者根，栽种6~8年后视丛蔸生长情况翻蔸重新分枝繁殖。

5、病虫防治石斛软腐病易在高温高湿的环境中发生，且发病快，严重时，整株腐烂解体呈湿腐状。