副猪嗜血杆菌病原的分离鉴定与药敏试验[1]

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一例副猪嗜血杆菌的分离培养及药敏试验

一例副猪嗜血杆菌的分离培养及药敏试验作者：申识川宋果王冠杰来源：《湖北畜牧兽医》2017年第10期摘要：副猪嗜血杆菌（HPS）主要危害保育猪群，引发以脑膜炎、关节炎、多发性浆膜炎等为主要特征的传染病，猪群一旦发病，病死率较高，给养猪业造成重大经济损失。

从疑似发生副猪嗜血杆菌病的河南濮阳某猪场无菌采集病料，并进行触片镜检、分离培养、生化试验。

结果成功分离到了副猪嗜血杆菌，药敏试验显示，分离菌株对氟苯尼考、泰妙菌素、氟甲砜霉素、头孢菌素、丁胺卡那霉素、头孢噻肟高敏，对红霉素、克林霉素、庆大霉素、环丙沙星、恩诺沙星、链霉素、土霉素低敏。

根据药敏试验结果，对发病猪群进行治疗，取得了良好的治疗效果。

关键词：猪；副猪嗜血杆菌；分离培养；药敏试验中图分类号：S858.28 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2017）010-0013-02副猪嗜血杆菌（HPS）是一种多形态、非溶血性、不运动、NAD依赖型、革兰氏阴性细小杆菌，属于巴斯德杆菌科嗜血杆菌属。

副猪嗜血杆菌只感染猪，有很强的宿主特异性，可以影响2周龄到4月龄的青年猪，主要在断奶后保育舍阶段发病，感染高峰通常见于保育期的4～6周，发病率一般在10%～15%，严重时病死率可达 50%[1]。

该菌在特定的条件下，可以侵入猪机体，引发一种以脑膜炎、关节炎、多发性浆膜炎等为主要特征的传染病，又称为猪革拉斯氏病（Glasser′s disease）[2]，主要临床症状表现为咳嗽、呼吸困难、消瘦、跛行和被毛粗乱；主要剖检病变表现为纤维素性胸膜炎、心包炎、腹膜炎、关节炎和脑膜炎等[3]。

目前，根据免疫扩散试验，确定该菌有15个血清型，全国各地流行的血清型不完全相同。

由于副猪嗜血杆菌血清型多、产生耐药性快，致使临床疫苗免疫和用药效果不理想，给该病的预防和治疗带来很大的困难[4]。

相对于传统用药，分离鉴定该菌并进行药敏试验分析是比较有效的治疗方法。

2016年4月11日，濮阳地区某中小规模猪场出现25头47日龄的猪发病，根据患病猪流行病学调查情况、临床症状和剖检变化，疑似副猪嗜血杆菌病。

副猪嗜血杆菌病原的分离鉴定与药敏试验

（ｘｌ）ｇｎ［］ＩｆｃＩＡｐｌｅｅＪ．ｎｅｔｍｍｕ，９３６（）９７９４１ｎ１９，１３：４ —５．
［］ＢｕｅＫ．ａｈｇｎｓｆｃｉｏａｉｕｌｒｐｅｍｏｉｅ５ｏｋＰｔｏｅｅｉｏｔｂｃｌｓｐｅｏｎｕｎａ；ｓＡｎｌｕ
验和ＰＲ鉴定，定分离的２株茵为副猪嗜血杆茵。药敏试验结果表明，离株对诺氟沙星、氟沙星、Ｃ确分氧环丙沙星、恩诺沙星，以及头孢茵素、四环素和庆大霉素等药物敏感，红霉素、对壮观霉素和洁霉素有抵抗力。
维普资讯
动物医学进展。０７２（２：７２２０，８１）２ — ９
ＰｒｇｅｓｉｔｒｎａｙＭｅｉｉｏｒｓｎＶｅｅｉｒｄｃｎｅ
副猪嗜血杆菌病原的分离鉴定与药敏试验
关键词：副猪嗜血杆菌；离；定；分鉴药敏试验
中图分类号：８２６２￥５．１文献标识码：Ａ文章编号：０７５３（０７１－０７０１０—０８２０）２０２－３
副猪嗜血杆菌（ｅｐｉｓｐｒｓｉ，Ｈｐ）Ｈａｍｏｈｌａａｕｓｕｓ猪表现为多发性浆膜炎、节炎、膜炎等。近年关脑
Ｒｏｅｏｏｉｓａｄｃａａｔｒｚｔｏｆｔｅｌｆｔｘｎｎｈｒｃｅｉａ｜ｎｏｈｖｔｏａｈｓｏｎｏｆｉｒｄｅｉ
［］高永贵，关怡新．７姚善泾，等．包涵体蛋白的变复性研究［］Ｊ．

副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验研究

副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验研究谷禹;张东超;弓建芳;徐继鹏;金天明;李留安;高丰【期刊名称】《天津农学院学报》【年(卷),期】2014(000)004【摘要】副猪嗜血杆菌病是一种猪的传染病，主要引起断奶仔猪和保育猪发病。

试验对天津某规模化猪场疑似副猪嗜血杆菌病猪采集病变明显的组织进行细菌分离培养、显微镜镜检、生化试验等实验室诊断，结合病猪的临床症状和病理变化特点，判定该细菌分离株为副猪嗜血杆菌。

药敏试验结果显示，该株副猪嗜血杆菌对头孢噻呋、阿米卡星等药物高度敏感。

【总页数】4页(P9-12)【作者】谷禹;张东超;弓建芳;徐继鹏;金天明;李留安;高丰【作者单位】吉林大学畜牧兽医学院，长春 130062; 北辰区养殖业发展服务中心，天津 300400;天津农学院动物科学与医学学院，天津 300384;天津农学院动物科学与医学学院，天津 300384;武清区养殖业发展服务中心，天津 301800;天津农学院动物科学与医学学院，天津 300384;天津农学院动物科学与医学学院，天津300384;吉林大学畜牧兽医学院，长春 130062【正文语种】中文【中图分类】S852.613【相关文献】1.副猪嗜血杆菌的分离鉴定和药敏试验研究 [J], 宋凤香;闫振贵;姜世金2.猪胸膜肺炎放线杆菌与副猪嗜血杆菌分离鉴定和药敏试验 [J], 张欣;崔敏;罗满林3.北疆地区副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药敏试验 [J], 章莲;武磊;高建鹏;汪骁轩;赵鑫;齐亚银;张莉4.一株血清9型副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验 [J], 薛瑞; 刘守川; 赵坤坤; 王迎迎; 刘杰; 闫文朝5.一株血清5型副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验 [J], 邓汝森;颜广智;陈盛楠;张海龙;顾万军;黄良宗因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验

副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验薛国聪;任涛;徐成刚;涂玉蓉;蔡绍鑫;阳艳林;蔡丽丽;郑俏伟;张建民;廖明【摘要】对广东15个送检的疑似猪传染性副猪嗜血杆菌病的病猪样品,用TSA培养基进行细菌的分离,并对分离菌株进行细菌的形态观察、培养特性和生化试验鉴定,以及用副猪嗜血杆菌16s rRNA基因的特异性引物进行PCR鉴定.试验结果表明,有7株分离菌株扩增出了821 bp的特异性目的条带,结合形态观察、培养特性和生化试验鉴定,结果表明成功分离到了7株副猪嗜血杆菌;药敏试验结果显示,分离菌株对氨苄西林、多粘菌素、庆大霉素等药物较敏感.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2010(000)001【总页数】4页(P134-137)【关键词】副猪嗜血杆菌;分离鉴定;药敏试验【作者】薛国聪;任涛;徐成刚;涂玉蓉;蔡绍鑫;阳艳林;蔡丽丽;郑俏伟;张建民;廖明【作者单位】华南农业大学兽医学院农业部动物疫病防控重点开放实验室,广州,510642;华南农业大学兽医学院农业部动物疫病防控重点开放实验室,广州,510642;华南农业大学兽医学院农业部动物疫病防控重点开放实验室,广州,510642;华南农业大学兽医学院农业部动物疫病防控重点开放实验室,广州,510642;华南农业大学兽医学院农业部动物疫病防控重点开放实验室,广州,510642;华南农业大学兽医学院农业部动物疫病防控重点开放实验室,广州,510642;华南农业大学兽医学院农业部动物疫病防控重点开放实验室,广州,510642;华南农业大学兽医学院农业部动物疫病防控重点开放实验室,广州,510642;华南农业大学兽医学院农业部动物疫病防控重点开放实验室,广州,510642;华南农业大学兽医学院农业部动物疫病防控重点开放实验室,广州,510642【正文语种】中文【中图分类】S854.4副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)是猪革拉泽氏病(Glasser's disease)的病原菌,属于巴氏杆菌科嗜血杆菌属。

副猪嗜血杆菌病的检验与药敏试验

１００一
分离细菌对头孢拉定、先锋Ｖ、氟哌酸均高度
敏感；对环丙沙星、四环素、强力霉素均中度敏感；对阿莫西林、金霉素呈低度敏感：对链霉素、青霉素均为耐药。
药敏试验结果表明，该菌株对对头孢拉
题，建议政府财政加以扶持。另外，针对机械存在的振动
（１）探索秸秆气化集中供气技术。即将农作物秸秆等生物质原料粉碎后在气化反应炉中通过热解反应或高温裂解，
变成ＣＯ和Ｈ为主的可燃气体。
｜ｌ一ｊ鞠ｉ态藏骥
褥
为了调查副猪嗜ｍ杆菌病的流行情况，从
将各种药敏纸片分别平贴于培养基表面．３７ ℃
培养２４ｈ后测量抑菌圈直径。判断标准为：抑
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
阜蒙县部分发病的猪场采集病料８份。经实验
过分离培养得到革兰氏阴性短小杆菌，无芽
孢，具有多种不同的形态，从单个的球杆菌到
一一长的、细长的以致细丝状菌体．符合副猪嗜血
杆菌的形态特征。
徘
一曩
＿。
定、先锋Ｖ、氟哌酸高敏；而对链霉素、青霉
环丙沙星头孢拉定阿莫西林

陕西省规模猪场副猪嗜血杆菌的分离鉴定及敏感药物筛选

陕西省规模猪场副猪嗜血杆菌的分离鉴定及敏感药物筛选张勇;赵兴绪【期刊名称】《河南农业科学》【年(卷),期】2016(045)004【摘要】为了解陕西省部分规模猪场副猪嗜血杆菌株的血清型及耐药特性,以指导临床用药,防控副猪嗜血杆菌病,对陕西省3个规模化猪场共60头表现副猪嗜血杆菌症状的病猪进行病理剖检,采集肝脏、肺脏、淋巴结、关节液等进行细菌分离培养及生化试验,并对分离菌株进行耐药性试验.结果表明,分离到42株副猪嗜血杆菌,其中血清1型1株(2.38%),4型8株(19.05%),5型15株(35.71%),12型3株(7.14%),13型11株(26.19%),其他型1株(2.38%),未定型的有3株(7.14%).药敏试验结果表明,分离菌株对阿奇霉素、复方新诺明、氟苯尼考、洛美沙星高度敏感,对左旋氧氟沙星、替米考星、庆大霉素、诺氟沙星、磺胺甲氧嘧啶中度敏感,对头孢噻呋钠、链霉素、红霉素、林可霉素、环丙沙星、强力霉素不敏感.【总页数】4页(P126-129)【作者】张勇;赵兴绪【作者单位】甘肃农业大学动物医学院, 甘肃兰州730070;甘肃农业大学动物医学院, 甘肃兰州730070【正文语种】中文【中图分类】S855.1【相关文献】1.规模猪场副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药物试验 [J], 张爱朝2.规模猪场副猪嗜血杆菌的临床分离鉴定与药物敏感试验 [J], 祝天龙;陆叙元3.重庆地区副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药物敏感性分析 [J], 周雪;付利芝;王孝友;翟少钦;谭荣;丁玉春4.天津地区副猪嗜血杆菌的分离鉴定及敏感药物筛选 [J], 池晶晶;杨春蕾;张莉;路超;任卫科5.屠宰生猪副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药物敏感性分析 [J], 田昊伦;张彦明;郭抗抗;冯秀;王凯;冯全文;李鑫鑫;范志新;罗丽华;孙颖;周宏超因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

副猪嗜血杆菌病原的分离鉴定和药敏试验

副猪嗜血杆菌病原的分离鉴定和药敏试验在规模化集约化猪场内，副猪嗜血杆菌病时有发生，表现为多发性浆膜炎和关节炎，主要感染断奶前后和保育阶段猪，发病率一般在10%-15%，严重时死亡率可达50%。

我们实验室对湖南地区某猪场疑似病例进行了病原的分离鉴定和药敏试验，得到良好的治疗效果。

现将结果报告如下：一、材料1、病料：在无菌操作条件下取疑似病猪的肺脏、胸膜、胸腹腔积水、心包积液、心血、关节液等。

2、培养基：巧克力琼脂平板或胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）。

3、生化试验试剂：氧化酶、甘露醇、吲哚、葡萄糖、半乳糖、果糖、蔗糖、糖、脲酶和伯胶糖等，均购自长沙金标生物有限公司。

4、药敏试纸：氟苯尼考、泰妙菌素、头孢菌素、丁胺卡那霉素、氟甲砜霉素、头孢噻肟、红霉素、克林霉素、庆大霉素、环丙沙星、恩诺沙星、链霉素、土霉素, 均购自长沙金标生物有限公司。

二、方法及结果1、病理变化观察剖检病死猪，发现胸腔内有大量淡红色液体、纤维性渗出物。

肺脏呈纤维素性胸膜肺炎，肺肿大暗紫红色，表面覆有纤维素性渗出物。

支气管内有淡红色泡沫样渗出物。

心包积液。

腹腔内有大量透明黄褐色渗出液，有的呈胶胨状凝块。

全身淋巴结肿大，暗红色。

2、触片镜检取发病猪的肺组织、心血、胸水和腹膜面涂片，革兰氏染色，镜检可见革兰氏阴性的细小杆菌，个别两极球杆状革兰氏阴性菌。

3、细菌分离培养无菌取发病猪的肺脏、腹膜、胸水和心血划线接种TSA平板，置37℃，5%CO2培养箱培养48h，出现无色、透明、湿润、光滑、边缘整齐的针头大小菌落，镜检可见大小不一、形态有细长、丝状的革兰氏阴性杆菌。

接种无NAD的TSA不生长。

而后挑取单个菌落，再进行纯培养。

4、生化试验挑取纯化菌落接种于氧化酶、甘露醇、吲哚、葡萄糖、半乳糖、果糖、蔗糖、核糖、脲酶和伯胶糖等生化鉴定管中，同时加入0.01%的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）5微升，置于37℃5%的CO2 培养箱培养48h，观察结果如下：。

天津地区副猪嗜血杆菌的分离鉴定及敏感药物筛选

天津地区副猪嗜血杆菌的分离鉴定及敏感药物筛选池晶晶;杨春蕾;张莉;路超;任卫科【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2015(042)005【摘要】为了给天津地区各区县养猪场提供副猪嗜血杆菌病的科学防控及合理的治疗用药方案,本试验对天津地区各区县养猪场疑似感染副猪嗜血杆菌的病猪进行了解剖及病理变化观察,无菌采集36份各猪场病猪组织脏器并进行细菌分离,对分离菌进行染色镜检、卫星试验、接触酶反应试验、微量生化反应和PCR鉴定.结果显示,剖检结果以纤维素性胸膜炎及腹膜炎常见,关节腔切面内有大量黄亮黏稠液体;分离出了9株疑似副猪嗜血杆菌菌株,染色镜检均可见革兰氏阴性多形态菌;分离菌有明显的卫星现象;接触酶反应试验均为阳性;微量生化反应D-核糖、山梨醇、果糖、阿拉伯糖和硫化氢均为阴性,麦芽糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇和脲酶均为阳性,山梨糖和木糖各有1株为阳性,5株菌β-半乳糖为阳性;PCR鉴定结果显示9株疑似副猪嗜血杆菌菌株在822 bp处均与阳性对照处于同一条带上,均判定为副猪嗜血杆菌,分离率达25％.用16种抗菌药物对9株副猪嗜血杆菌进行敏感药物筛选,药敏结果显示头孢曲松钠和氧氟沙星对分离株有良好的抑菌效果.本试验结果可为天津地区副猪嗜血杆菌病的科学防制提供依据.【总页数】5页(P1306-1310)【作者】池晶晶;杨春蕾;张莉;路超;任卫科【作者单位】天津市畜牧兽医研究所,天津300384;天津市畜牧兽医研究所,天津300384;天津市畜牧兽医研究所,天津300384;天津市畜牧兽医研究所,天津300384;天津市畜牧兽医研究所,天津300384【正文语种】中文【中图分类】S858.28【相关文献】1.陕西省规模猪场副猪嗜血杆菌的分离鉴定及敏感药物筛选 [J], 张勇;赵兴绪2.规模猪场副猪嗜血杆菌的临床分离鉴定与药物敏感试验 [J], 祝天龙;陆叙元3.一株副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药物敏感性分析 [J], 宋德平;黎家祥;金冲4.重庆地区副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药物敏感性分析 [J], 周雪;付利芝;王孝友;翟少钦;谭荣;丁玉春5.屠宰生猪副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药物敏感性分析 [J], 田昊伦;张彦明;郭抗抗;冯秀;王凯;冯全文;李鑫鑫;范志新;罗丽华;孙颖;周宏超因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

规模猪场副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药物试验

养．５菌体形态及染色
对该病的治疗临床上目前还是以使用抗生素为主。但是由于抗生素的耐药性，不同菌株对同一种抗生素的敏感性有很大差异，因
使用同一种药，要交替轮换使用。
挑去上述纯化培养物，涂片，革兰氏染色，镜检，观察观察此，要在进行药敏试验的基础上，选择药物，不能长期、大剂量细菌形态。
副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌（ＨＰＳ）引起猪的以纤维
愿活动等副猪嗜血杆菌只感染猪，一般多发生于断奶前后及保育左右的小菌落。分离到的３株细菌被别命名为ＬＳ１、ＬＳ２、ＬＳ３。猪，感染高峰期通常见于４周～６周，病死率可达５０％，给养猪业２．２卫星现象观察
１．６卫星现象观察
参考文献
［１Ｊ马增军．副猪嗜血杆菌重要生物学特性测定［Ｊ１．黑龙江畜牧兽医，
２００５，（１）：２８ — ２９．［２］陆承平．兽医微生物学ｆＭ１．北京：中国农业大学出版社，２００１：
按常规方法进行，将分离到的单个细菌菌落均匀涂于氧氟沙
原菌是副猪嗜血杆菌。同时，对分离菌进行药敏试验，为今后防星、丁胺卡那霉素、阿莫西林、环丙沙星、替米考星等ｌＯ种抗生控该病提供试验依据。素药敏试纸，３７。ｃ培养２４ｈ后，观察测定抑菌圈的大小。

副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药物筛选防治试验

副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药物筛选防治试验邱永红;宋娟;杨莉;史开志;吴位珩;徐景峨;杨茂生【摘要】在贵州天柱、花溪、南明、毕节、龙里、福泉等县市一些养殖场和养猪户进行副猪嗜血杆菌病流行病学调查,对疑似副猪嗜血杆菌感染的病猪进行病理剖检,无菌条件下抽取心血、心包积液和胸腹水,并采集病变明显的肺、肝等病料进行分离培养鉴定.分离出的菌株按常规纸片法采用常用抗生素和中草药方剂进行药敏试验,结果表明该分离菌株对左旋氧氟沙星、磺胺二甲嘧啶、中草药方剂等高敏,抑菌圈直径＞15 mm；采用中草药方剂与磺胺二甲嘧啶对某猪场18头45日龄、体重相近、PCR检测阳性病例进行疗效对比试验,中草药方剂组和中草药方剂+磺胺二甲嘧啶组有增强机体抗病力功效；在12个猪场对疑似病例2 334头随机抽样开展PCR检测,对受到副猪嗜血杆菌病阳性感染的猪群使用筛选的药物进行综合防治试验,治愈率达到89.7％.【期刊名称】《养猪》【年(卷),期】2013(000)001【总页数】3页(P121-123)【关键词】副猪嗜血杆菌;病原检测;药敏试验;综合防治【作者】邱永红;宋娟;杨莉;史开志;吴位珩;徐景峨;杨茂生【作者单位】贵州省畜牧兽医研究所,贵州贵阳550005【正文语种】中文【中图分类】S858.285.12008年10月和2012年4月，先后对贵州天柱、瓮安、丹寨、花溪、开阳、南明、小河、毕节、清镇、龙里、福泉等县市一些养殖场和养猪户进行副猪嗜血杆菌病流行病学调查。

试验主要调查12个地点，20日龄仔猪至6月龄肥育猪、种猪和后备猪共2 334头。

重点了解其疫苗接种史、临床症状、发病率、患病年龄、药物使用情况等。

对疑似副猪嗜血杆菌感染的病猪进行病理剖检、病原分离及血清学检测试验[1]。

在此基础上，建立了针对贵州地方株的PCR方法，配置了由金银花、蒲公英、枇杷叶、木通，黄芪、甘草组成的中草药方剂，并开展了对副猪嗜血杆菌的基本药敏试验及毒理试验[2-3]。

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高鹏程等 :副猪嗜血杆菌病原的分离鉴定与药敏试验
29
M. DNA 标准 DL 2 000 ;1～2. 分离菌株 ;3. 标准株 5 型 M. DNA Marker DL 2 000 ;122. Isolated st rains ; 3. Reference st rains serot ype 5
纯化好的液体培养物 ,接种加入 NAD 的生化管中 ,结果见表 1 。
表 1 分离菌生化试验结果 Table 1 Biochemical characteristics of isolated st rains
项目 It e m
结果 Result s
氧化酶
O xi da se
-
接触酶
Cat ala se
[ 4 ] J ansen R , Briaire J , Kamp E M , et al . Cloning and character2 ization of t he Acti nobacill us pleurop neumoni ae2 R TX2toxin Ⅲ ( Apx Ⅲ) gene[J ] . Infect Immun ,1993 ,61 (3) :9472954.
[ 5 ] Bouke K. Pat hogenesis of Acti nobacil l us pleuropneumoni ae : Role of toxins and characterization of t he in vit ro adhesion of
Acti nobacill us pleuropneumoni ae to swine alveolar epit helial cells[J ] . Vet Microbiol ,2003 ,88 (3) :59274. [ 6 ] Alt boum Z , Levine M M , Galen J E , et al . Genetic character2 ization and immunogenicit y of coli surface antigen 4 f rom ente2 rotoxigenic Escherichi a coli when it is expressed in a Shi gel l a live2vector st rain [J ] . Infect Immun ,2003 ,71 (3) :135221360. [ 7 ] 高永贵 , 关怡新 , 姚善泾 ,等. 包涵体蛋白的变复性研究 [J ] . 科技通报 ,2003 ,19 (1) :1215.
+
吲哚
Indole
-
葡萄糖
se
+
果糖
Fr ucto se
+
蔗糖
Sacc ha ro se
+
核糖
Ri bo se
-
脲酶
U r ea se
-
注 “: - ”阴性 “; + ”阳性。 Note “: - ”negative “; + ”positive.
2. 5 PCR 检测将分离菌的 TSB 培养物取 2 mL ,1 000 r/ mim
( Key L aboratory of A ni m al V i rolog y of M i nist ry of A g ricult ure , S t ate Key L aboratory of V eteri nary Etiological B iolog y , L anz hou V eteri nary Research I nstit ute , Chi nese A ca dem y of A g ricult ural S ciences , L anz hou , Gansu , 730046 , Chi na)
场的发展 ,副猪嗜血杆菌已出现流行趋势 ,许多地区都有该病发生的报道[325] 。笔者对西北地区几个猪场临床诊断为猪格拉泽氏病的病例进行了病原的分离鉴定 ,并对分离到的 2 株副猪嗜血杆菌进行了药敏试验 ,现报告如下。
收稿日期 :2007209228 基金项目 :973 计划子课题 (2006CB504403) ;国家科技支撑计划子课题 (2006BAD06A01)
动物医学进展 ,2007 ,28 (12) :27229 Progress in Veterinary Medicine
副猪嗜血杆菌病原的分离鉴定与药敏试验
高鹏程 ,储岳峰 ,赵萍 ,贺英 ,逯忠新 3
(中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室 ,甘肃兰州 730046)
Abstract :The reco mbinant s p E T2Ap x ⅠA ,p E T2 Ap x ⅢA and p PRoAppOML21 were co nst ructed by testing laborato ry ,p roteins were p roved by SDS2PA GE. Bacterial lyses p repared f ro m 1. 0 mmol/ L IP T G at 37 ℃ for 8h induced cult ures were loaded directly o n to SDS2PA GE . Upo n inductio n ,t he reco mbinant p E T2 Ap x ⅠA ,p E T2 Ap x ⅢA and p PRoAppOML21 p roteins wit h apparent M W of 41 , 41 , 45 ku were co nfirmed. Their M W were t he same as expecting p roteins. Then The p roteins were p urified by kit , t hey were immu2 no reactive when detected by Western blot analysis. These resulet s suggested t hat p urified p rotein has bio2 activit y. Key words :App ;exp ressio n ;p urificatio n ; Western blot ting
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动物医学进展 2007 年第 28 卷第 12 期 (总第 172 期)
1 材料与方法 1. 1 材料 1. 1. 1 病料处死患病猪 ,无菌取肺脏、心血、腹膜和胸水作为病料。 1. 1. 2 培养基 TSA 、TSB ,均购自美国 BD 公司。 1. 1. 3 生化试验试剂脲酶、氧化酶、接触酶、吲哚、葡萄糖、半乳糖、果糖、蔗糖和核糖等 ,均购自杭州微生物试剂有限公司。 1. 1. 5 细菌 DNA 提取试剂盒购自上海生工生物工程技术服务有限公司。 1. 1. 6 药敏试纸氨苄青霉素、环丙沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、壮观霉素、头孢菌素、四环素、庆大霉素、红霉素、磺胺甲基异口恶唑药敏试验 , 均购自杭州微生物试剂有限公司。 1. 2 方法 1. 2. 1 病理变化观察主要为 2 周龄～8 周龄仔猪。剖检后观察肺等组织的病理变化。 1. 2. 2 触片镜检肺组织、心血、胸水和腹水触 (抹) 片 ,镜检。 1. 2. 3 细菌分离培养无菌取肺病变组织、心血、腹膜和胸水划线接种 TSA 平板。置 37 ℃的 CO2 培养箱培养 36 h～48 h 。观察结果。 1. 2. 4 生化鉴定挑去纯化菌落接种脲酶、氧化酶、接触酶、吲哚、葡萄糖、半乳糖、果糖、蔗糖、核糖等生化管中 ,观察结果。 1. 2. 5 PCR 引物的设计与合成参照文献 [ 7 ] 合成引物。
作者简介 :高鹏程 (1978 - ) ,男 ,甘肃会宁人 ,硕士研究生 ,主要从事细菌分子生物学研究。 3 通讯作者
[ 3 ] Bo sch H V D , Frey J . Interference of outer membrane protein PalA wit h protective Immunit y against Acti nobacil l u pleurop neumoni ae infections in vaccinated pigs [ J ] . Vaccine , 2003 ,21 :360123607.
片 ,用革兰氏染色 ,镜检可见革兰氏阴性的细小杆菌。
2. 3 细菌的分离培养无菌取发病猪的肺脏、腹膜、胸水和心血划线接
种 TSA 平板 ,置 37 ℃,体积分数为 5 %的 CO2 培养箱培养 , TSA 平板在 36 h～48 h ,肺脏和心血划线接种的平板上出现无色、透明、边缘整齐的小菌落 , 接种无 NAD 的 TSA 不生长。 2. 4 生化鉴定
中图分类号 : S852. 612
文献标识码 :A
文章编号 :100725038 (2007) 1220027203
副猪嗜血杆菌 ( Haem op hi l us p aras uis , Hp s) 是猪格拉泽氏病 ( Glasser’s disease) 的病原体 ,感染猪表现为多发性浆膜炎、关节炎、脑膜炎等[1] 。近年来 ,副猪嗜血杆菌引起的疾病已逐渐成为危害世界养猪业的重要疾病[2] 。随着我国规模化、集约化猪
Expression and Bioactivity of Toxins and Outer
Membrane Protein of Act i nobaci l l us Pleu ropeumoni ae
H E Ying ,L U Zho ng2xin ,S H I Qin ,ZHAO Ping ,C HU Yue2feng , GAO Peng2cheng