(优选)南医大药物分析维生素
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维生素类药物的分析
或者：
A——直接测得的A328或校正后的A328 (校正)；
D——供试品的稀释倍数；
1900——换算因数；
W——胶丸的平均内容物重—比色池厚度，cm；
标示量——样品标签上注明的每胶九含有的维生素A醋酸酯的国际单位数。
用第二法测
定
用
A328
（校正
）
二、鉴别试验
[讨论]：
实际起作用的是三氯化锑(Ⅲ)中存在的Lewis酸氯化高锑(V) 反应要用无醇氯仿，因为醇的存在要作为亲核反应物与正碳离子反应而使其正电荷消失。 反应要无水，水可使三氯化锑水解为氧氯化锑。
二、鉴别试验
Vit A
Vit A3
★ （二）紫外吸收 特征：1. 直接测定——维生素A1 在326nm处有最大吸收。 2.酸消去后测定——维生素A3（去水维生素A） 在332nm附近有曲折， 在348、367、389nm附近有吸收峰。 ★ 1、为什么吸收带红移？ 2、为什么吸收峰变多？
A
B
C
D
E
目前各国药典均采用紫外分光光度法测定维生素A的含量。本法快速、准确、经济，测定结果能比较正确地反映维生素A的效价。 [如何测定？] 1.根据紫外光谱数据: 定量 维生素A在不同溶剂中的紫外吸收数据
A值选择： 先计算出： 再计算出 再根据以下三种不同情况选择 若所得的数值在±3%，表明杂质干扰很小，则仍用A328计算含量； 若所得的数值在-15%～-3%之间，表明杂质有一定的干扰，则需用A328（校正）计算含量；
（C单位为g/100ml）
VitA的标示量为效价！
[如何计算标示量的百分含量]？ 第二步：求 第三步：求效价（IU/g）：效价系指每克供试品中所含维生素A的国际单位数。 如何换算成效价（IU/g）？ 换算因子：定义为每1个 数值所相当的效价。
药物分析维生素类药物的分析
在方法验证的基础上，可构建维生素类药物分析的评价指 标体系，包括定量限、检测限、回收率、重复性、稳定性 等指标，以全面评价分析方法的性能。
持续改进方向和目标设定
持续改进方向
针对维生素类药物分析过程中存在的问题和 不足，可进一步改进样品前处理方法、优化 分析条件、提高检测灵敏度等，以不断提高 分析结果的准确性和可靠性。
数据处理和结果表达技巧分享
数据处理
对HPLC和UV-Vis法得到的数据进行整理、归纳和统计 分析，包括峰面积、保留时间、浓度等参数的计算和 处理。
结果表达
将分析结果以图表形式呈现，如色谱图、标准曲线图、 含量分布图等，使结果更加直观、易于理解。同时，对 分析结果进行解释和说明，提出改进意见和建议。
在选择维生素类药物的标准品时，应确保其 纯度高、稳定性好，且具有代表性。同时， 应关注标准品的来源和溯源性。
使用注意事项
在使用标准品时，需按照规定的条件进行保 存和使用，避免污染和降解。此外，应定期 对标准品进行复验和更新。
检测方法验证及评价指标体系构建
要点一
检测方法验证
要点二
评价指标体系构建
为确保维生素类药物分析方法的准确性和可靠性，需进行 方法学验证，包括专属性、线性、范围、准确度、精密度 等指标的考察。
质量控制体系建立及实施情况介绍
质量控制体系
为确保维生素类药物分析结果的准确性和可靠性，需建立全面的质量控制体系，包括样 品采集、前处理、分析测试、数据处理等各个环节。
实施情况
目前，质量控制体系已在多个实验室得到广泛应用，有效提高了维生素类药物分析的准 确性和一致性。
标准品选择与使用注意事项
标准品选择
通过对该维生素类药物的定性、定量分析，评估其质量 稳定性和一致性，为药物研发、生产和监管提供科学依 据。
《药物分析》维生素类药物的分析
第一法
测定VA acetate →环己烷为溶剂
λ(nm)
吸收度 A 比值 A328nm
300
λmax＝328nm 316 328 340
360
测定 吸收度
0.555 0.907 1.000 0.811 0.299
⊕如果 λmax为326～329nm;
(
A A328nm
)测
-规定值≤±0.02
Analytical column 25cm4.6mm porous silica particle 5~10µm
Mobile phase B
n-amyl alcoholDehydrated hexane
3 1000
UVD：254nm
⊙第三节 维生素C( Vit C)
6CH2OH
H 5C HO
OH
COONa(H)
CH2OH
CH2OH
CO
H C OH
H C OH
CO
O O -2H
O OOH-(H+)
H C OH
+2H
H2O
HO OH
OO
HO C H
CH2OH
L-抗坏血酸 L-去氢抗坏血酸 L-二酮古罗糖酸
有生物活性 有生物活性
精密称取Vit A滴剂0.06126g(标示量50000 I.U./g)，置于25ml量瓶中，加环已烷至刻 度，精密吸取2ml置于另一25ml量瓶中，加 环已烷至刻度，并混匀，置石英比色皿中， 以环已烷为空白，分别于以下波长处测得 吸收度值，试求此滴剂中Vit A为标示量的 百分含量：
λ(nm) 300 316 328 340 360 A 0.330 0.508 0.570 0.477 0.190
典型药物分析—维生素及制剂的质量分析(药物分析课件)
H 5 C﹡ OH
O
4﹡
1
O
内酯结构
共轭 酸性强
3 2
HO
OH
烯二醇结构
酸性弱
维生素C
主要性质
溶解性 酸性 旋光性 还原性
L-抗坏血酸
L-去氢抗坏血酸
(有生物活性)
L-二酮古罗 糖酸
无生物活性
VitC
鉴别
1.与AgNO3反应
AgNO VitC Ag 黑（银镜）
2.与2,6-二氯靛酚反应
2，6 二氯靛酚 VitC无色
Vit E
2.三氯化铁反应
H3C HO
CH3 O
CH3 C16H33
[Fe3+] H3C
O
CH3
CH3 O
OH
CH3 C16H33
CH3
Vit E
三、杂质检查
1.酸度 CH3
2.生育酚
CH3COO
CH3 O
CH3
CH3 无水乙醇 CH3
C16H33
H2SO4 回流
HO
CH3 O
CH3
CH3 C16H33
流动相→A: buffer(0.05M KH2PO4,0.2% 三乙胺,pH6.0):ACN =(97:3) B: MeOH
梯度洗脱程序→(0min)A:B(90:10)→ (20min)A:B(60:40) →
(30min)A:B(90:10)
流速→1.0ml/min
检测波长→210nm 100
80
加盐酸溶液（ 9→1000）约 70ml，振摇15分 钟，使维生素B1 溶解，加盐酸（ 9→1000）稀释 至刻度，摇匀
用干燥滤纸滤过 ，精密量取续滤 液5ml，置另一 100ml量瓶中， 再加盐酸溶液（ 9→1000）稀释
南医大2012药物分析鉴别总结
药物分析鉴别反应总结1.与FeCl3反应（阿司匹林，双水杨酯，二氟尼柳，水杨酸，对乙酰氨基酚，吡罗昔康，美洛昔康）（水解-紫堇色）（碱水解-紫色）（溶于乙醇-深紫色）（紫堇色）（蓝紫色）（玫瑰红色）（淡紫红色）（盐酸异丙肾上腺素，重酒石酸去氧肾上腺素，盐酸去氧肾上腺素，盐酸多巴胺）（深绿）（翠绿）（紫色）（墨绿）（盐酸氯丙嗪）（维生素D）（红色）（橙黄）2.缩合反应（酮洛芬：酸性条件与二硝基苯肼生成橙色偶氮化合物）（巴比妥类：与香草醛在浓硫酸存在条件下发生缩合反应生成棕红色产物）3.重氮化-耦合反应：（二氢吡啶类苯环硝基在酸性条件下被Zn还原为芳伯胺基也可发生此反应）（氯氮卓，奥沙西泮与盐酸共沸水解，生成橙红色沉淀，后者放置后颜色变暗）（对乙酰氨基酚）（苯佐卡因，盐酸普鲁卡因，盐酸氯普卡因，盐酸普鲁卡因胺）（红色）（橙黄到猩红色）（橙黄到猩红色）（与上述芳伯胺基类的区别：盐酸丁卡因在酸性条件下与亚硝酸钠反应，生成N-亚硝基化合物乳白色沉淀）4.氧化反应：（甲芬那酸：溶于硫酸，与重铬酸钾显深蓝色到棕绿色）（吲哚美辛：硫酸中与重铬酸钾共热显紫色）（莨菪烷类：水解生成莨菪酸与硫酸-重铬酸钾在加热条件下，逸出苦杏仁臭味）（二氢吡啶类：可将氢氧化亚铁氧化为红棕色氢氧化铁沉淀。
）（氧化显色：盐酸氯丙嗪加水溶解后加硝酸显红色后渐变黄色；）（氧化显色：盐酸氯丙嗪加水溶解后加三氯化铁显红色）5.水解：（阿司匹林：水解加稀硫酸生成白色沉淀）（巴比妥类药物：酰亚胺结构碱液水解，释放出氨气可使红色石蕊试纸变蓝）6.S元素：（美洛昔康：高温分解产生H2S，遇醋酸汞生成硫化铅黑色沉淀）（硫喷妥钠：氢氧化钠溶液中与铅离子反应生成白色沉淀）（维生素B1：与氢氧化钠共热，分解产生Na2S，可与硝酸铅反应生成黑色沉淀。
）7.甲醛-硫酸反应：（肾上腺素，盐酸异丙肾上腺素，重酒石酸去氧肾上腺素，盐酸去氧肾上腺素）（苯巴比妥）（红色）（棕色至暗紫色）（淡红）（玫瑰红-橙红-深棕色）（玫瑰红）8.还原性反应：（肾上腺素：酸性条件，过氧化氢氧化生成肾上腺素红显血红色，放置后变为棕色多聚体）（盐酸异丙肾上腺素：偏酸条件，碘氧化生成异丙肾上腺素红，加硫代硫酸钠溶液变淡红色）9.氨基醇的双缩脲反应：（盐酸麻黄碱，盐酸伪麻黄碱，盐酸去氧肾上腺素）（盐酸麻黄碱：硫酸铜2滴，氢氧化钠1ml，显蓝紫色；加乙醚，乙醚层紫红色，水层蓝色）（盐酸去氧肾上腺素：硫酸铜1滴，氢氧化钠1ml，显蓝紫色；加乙醚，乙醚层无色）10.与脂肪伯胺Rimini反应：（重酒石酸间羟胺：加亚硝基铁氰化钾，丙酮，碳酸氢钠显红紫色）（与之区别：C17-甲酮基反应，黄体酮可与亚硝基铁氰化钠反应生成蓝紫色产物）11.与金属的反应：（盐酸利多卡因：碳酸钠中与CuSO4生成蓝色配合物，加三氯甲烷，三氯甲烷层显黄色）（盐酸利多卡因：酸性溶液中与CoCl2反应生成亮绿色细小钴盐沉淀。
药物分析》第12章：维生素类药物的分析
A
22
三、杂质检查
维生素D2原料药中应检查麦角甾醇。
检查方法：取本品10mg，加90％乙醇2ml 溶解后，加洋
地黄皂苷溶液（取洋地黄皂苷20mg，加90％乙醇2ml ， 加热溶解制成）2ml ，混合，放置18小时，不得发生浑浊 或沉淀。
A
23
四、含量测定
《中国药典》2005版附录中收载了维生素D的含量 测定方法 采用高效液相色谱法
2.总氯量： 本品为盐酸盐，需检查总氯量。药典采用银 量法检查，按干燥品计算，含总氯量应为20.6%～ 21.2%。
A
11
四、含量测定
《中国药典》2005版规定
维生素B1原料药：非水滴定法 （加入醋酸汞消除盐
酸盐的干扰，喹哪啶红－亚甲蓝混合指示液 ）
片剂、 注射液：紫外分光光度法 （具共轭双键
，在紫外区246nm处有最大吸收 ）
分三法
第一法：无维生素A醇及其他杂质干扰的供 试品
第二法：有干扰的
第三法：按第二法处理后前维生素D峰仍受 杂质干扰，仅维生素D峰可以分离时
维生素D对光敏感，测定应在暗室中进行。
A
24
第5节 维生素E的分析
一、结构与性质
CH3 CH3COO
CH3
O
CH3
CH3
维C3生1H5素2OE3 472.75
苯并二氢吡喃类
硫酸溶液，摇振后，显色。
4.紫外吸收特性 ： D2和D3均含共轭体系，有紫外吸收，
A
21
二、鉴别试验（2005版药典）
1.醋酐-浓硫酸显色反应 ：
维生素D2或D3 +氯仿+醋酐-浓硫酸 红色，迅即变为紫色 D2最后成绿色
初显黄色，渐变
药物分析课件维生素类药物的分析
生理作用
探讨维生素在维持人体正常功能中的重要作用， 以及补充维生素的好处。
过量症
讨论过量维生素摄入的潜在风险和对人体的不良 影响。
维生素类药物及其检测方法
1
水溶性维生素
维生素B1
使用法拉第反应法和HPLC法来分析维生素B1的含量。
维生素B2
应用荧光法和UV分光光度法测定维生素B2的浓度。
维生素B6
药物分析课件维生素类药 物的分析
通过本课件，我们将详细介绍维生素的概述、分类和药物分析方法，以及常 见问题和案例分析。欢迎来到维生素类药物的精彩世界！
维生素概述
定义及分类
解释维生素的定义和根据化学结构分类的方式， 以及它们在人体内的作用。
缺乏症
介绍维生素Байду номын сангаас乏症的症状并阐述如何通过补充维 生素预防和治疗。
使用滴定法和高效液相色谱法进行维生素B6的定量分析。
2
脂溶性维生素
维生素A
通过饱和点法和高效液相色谱法来检测和分析维生素A的含量。
维生素D
运用放射免疫分析法和高效液相色谱法测定维生素D的含量。
维生素E
利用紫外光谱法和高效液相色谱法对维生素E进行定量分析。
维生素K
使用光度法和类肝素血凝法来检测维生素K的浓度。
常见问题及案例分析
1 使用注意事项
2 滥用及危害
3 案例分析与解决方案
提醒使用维生素类药物时 需要注意的事项，如剂量、 途径和副作用。
阐述维生素类药物滥用的 危害和对人体的潜在风险， 以及怎样正确合理地使用。
分享一些关于维生素类药 物的典型案例，并提供解 决方案和建议。
药物分析维生素类药物的分析
9.1 维生素A的分析
1g维生素Ａ醇相当于：
国际单位IU=0.344微克维生素Ａ醋酸酯； IU＝0.300微克维生素Ａ醇 换算：1g维生素Ａ醋酸酯相当于：
VA1: VA2:(去氢VA) VA3:(去水VA)
注意:在水中三氯化锑水解,必须在绝对无水中进行!
2、紫外吸收光谱 VA的无水乙醇溶液在326nm有最大吸收。
含量测定
测定波长
吸光度
吸光度比值
吸光度比值差
计算值
规定值
300
0.555
316
0.907
(326)
328
1.000
(329)
340
0.811
360
0.299
紫外UV（中国药典） VB1片：方法与片剂含量测定相同(246nm)
01
VB1注射液：与液剂相同。（246nm)
02
9.3 维生素C的分析 化学结构
D(-)-异抗坏血酸 L(+)-异抗坏血酸 L(+)-抗坏血酸 D(-)-抗坏血酸 具有4种光学异构体。其中生理活性最强的是 L（+）-抗坏血酸
四、含量测定
1、铈量法（中国药典）
原理：VE用硫酸加热回流，水解成生育酚，用硫酸铈定量地氧化为对一生育醌，过量的硫酸铈氧化二苯胺指示剂而指示滴定终点。 终点：亮黄→灰紫 ，需作空白试验。
3、高效液相色谱法
日本药局方（JP13）
气相色谱法：Chp2005
Hale Waihona Puke 测定数据如下表，求：维生素A的标示百分含量。
由此可知，应该用测得的328nm处的吸收度计算。
添加标题
01
02
03
04
1g维生素Ａ醇相当于：
国际单位IU=0.344微克维生素Ａ醋酸酯； IU＝0.300微克维生素Ａ醇 换算：1g维生素Ａ醋酸酯相当于：
VA1: VA2:(去氢VA) VA3:(去水VA)
注意:在水中三氯化锑水解,必须在绝对无水中进行!
2、紫外吸收光谱 VA的无水乙醇溶液在326nm有最大吸收。
含量测定
测定波长
吸光度
吸光度比值
吸光度比值差
计算值
规定值
300
0.555
316
0.907
(326)
328
1.000
(329)
340
0.811
360
0.299
紫外UV（中国药典） VB1片：方法与片剂含量测定相同(246nm)
01
VB1注射液：与液剂相同。（246nm)
02
9.3 维生素C的分析 化学结构
D(-)-异抗坏血酸 L(+)-异抗坏血酸 L(+)-抗坏血酸 D(-)-抗坏血酸 具有4种光学异构体。其中生理活性最强的是 L（+）-抗坏血酸
四、含量测定
1、铈量法（中国药典）
原理：VE用硫酸加热回流，水解成生育酚，用硫酸铈定量地氧化为对一生育醌，过量的硫酸铈氧化二苯胺指示剂而指示滴定终点。 终点：亮黄→灰紫 ，需作空白试验。
3、高效液相色谱法
日本药局方（JP13）
气相色谱法：Chp2005
Hale Waihona Puke 测定数据如下表，求：维生素A的标示百分含量。
由此可知，应该用测得的328nm处的吸收度计算。
添加标题
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2019年最新-《药物分析》第12章：维生素类药物的分析-精品文档-精选文档
计算：
标示 % E 量 1 1c % m A 1V 0 W 0 D 标 W 示 10 量 % 0
19:46
第3节 维生素C的分析
一、结构与性质
L-抗坏血酸
19:46
1.多羟基化合物：具糖类似的性质
2. 具连二烯醇结构：强还原性，贮存过程中易变色 ——氧化 还原滴定法
C C (O)
OH OH
CC OO
3 .酸性：连二烯醇，可与Na2CO3成盐 4.旋光性：具手性C原子（C4、C5），
L(+)－抗坏血酸活性最强
19:46
二、鉴别试验（2019版《中国药典》）
1.氧化反应
与硝酸银反应 ：+AgNO3
Ag↓ （黑色）
与2，6-二氯靛酚的反应 ：+ 2，6-二氯靛酚钠 蓝色消失
与碱性酒石酸铜的反应：维生素C钠+碱性酒石酸铜 HCI 红色沉淀
维生素B1
19:46
性质：
1.共轭双键：UV （λmax = 246nm）
2.噻唑环含S原子：硫色素荧光法 分解产物与Pb(AC)2反应
3.碱性N原子：嘧啶环 —— 伯氨 噻唑环 —— 季铵
可与酸成盐；可与生物碱沉淀剂反应（鉴别和硅钨
酸重量法）
19:46
二、鉴别试验
1.硫色素反应 ：维生素B1溶于氢氧化钠溶液中，噻唑环被
因此可能会引入硝酸盐杂质。采用靛胭脂法检查， 限量为0.25%。
2.总氯量： 本品为盐酸盐，需检查总氯量。药典
采用银量法检查，按干燥品计算，含总氯量应为 20.6%～21.2%。
四、含量测定
19:46
《中国药典》2019版规定
维生素B1原料药：非水滴定法 （加入醋酸汞消除
标示 % E 量 1 1c % m A 1V 0 W 0 D 标 W 示 10 量 % 0
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第3节 维生素C的分析
一、结构与性质
L-抗坏血酸
19:46
1.多羟基化合物：具糖类似的性质
2. 具连二烯醇结构：强还原性，贮存过程中易变色 ——氧化 还原滴定法
C C (O)
OH OH
CC OO
3 .酸性：连二烯醇，可与Na2CO3成盐 4.旋光性：具手性C原子（C4、C5），
L(+)－抗坏血酸活性最强
19:46
二、鉴别试验（2019版《中国药典》）
1.氧化反应
与硝酸银反应 ：+AgNO3
Ag↓ （黑色）
与2，6-二氯靛酚的反应 ：+ 2，6-二氯靛酚钠 蓝色消失
与碱性酒石酸铜的反应：维生素C钠+碱性酒石酸铜 HCI 红色沉淀
维生素B1
19:46
性质：
1.共轭双键：UV （λmax = 246nm）
2.噻唑环含S原子：硫色素荧光法 分解产物与Pb(AC)2反应
3.碱性N原子：嘧啶环 —— 伯氨 噻唑环 —— 季铵
可与酸成盐；可与生物碱沉淀剂反应（鉴别和硅钨
酸重量法）
19:46
二、鉴别试验
1.硫色素反应 ：维生素B1溶于氢氧化钠溶液中，噻唑环被
因此可能会引入硝酸盐杂质。采用靛胭脂法检查， 限量为0.25%。
2.总氯量： 本品为盐酸盐，需检查总氯量。药典
采用银量法检查，按干燥品计算，含总氯量应为 20.6%～21.2%。
四、含量测定
19:46
《中国药典》2019版规定
维生素B1原料药：非水滴定法 （加入醋酸汞消除
《药物分析》维生素类药物的分析课件
充N 密封，于-40℃保存备用
Vit D2 骨化醇 22 Ergocalciferol
Vit D3 胆骨化醇 Cholecalciferol 胆钙化醇
1
2 10
7
34 5 6
9,10-开链麦角甾5,7,10(19),22- 四烯-3β-醇
三9,1烯0--开3β链-醇胆甾-5,7,10(19)-
胆甾醇，胆固醇 Cholesteral
ChP VE 中检查生育酚 取Vit E 0. 1g，加无水乙醇5ml溶解后，加二 苯胺T.S. 1滴，用硫酸鈰滴定液(0.01mol/L) 滴定，消耗硫酸鈰滴定液(0.01mol/L)不得 过1.0ml
中国药典 维生素E 色谱条件与系统适应性试验
System Suitability Tests SST
6 - Cis Isovitamin A a
VA polmitate
2,6-dicis Isovitamin Ab
Vit A含量表示 I.U.(international Unit) 国际单位 效价(I.U./g) 按WHO规定 VA acetate VA alcohol 效价(I.U./g) 2.907×106 3.33×106
Analytical column Mobile phase B
2 5 cm 4 . 6 mm porous silica particle 5 ~ 1 0 µm n- amyl alcohol : Dehydrated
hexane
3 : 1000
UVD ：254nm
UVD ：292nm
R≥2.6
人 血 清 中 VA和 VE的 含 量 测 定
Waters µ-Bondapak C18 30cm 3.9mm
药物分析维生素.
幻灯片1维生素类药物的分析概述基本要求维生素A维生素D维生素E维生素B1维生素C练习与思考幻灯片2一、掌握维生素类药物的结构特点与分析方法之间的关系。
二、掌握维生素类药物的鉴别原理与方法。
三、掌握三点校正法测定维生素A的原理、测定方法与计算方法。
四、掌握维生素D的HPLC含量测定法和维生素E的GC含量测定法。
五、掌握维生素B1非水溶液滴定法与维生素C碘量法的测定原理、方法与注意事项。
六、熟悉本类药物其他的含量测定方法。
七、熟悉本类药物杂质检查方法。
八、了解维生素A三点校正法的推导过程。
幻灯片3维生素：是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物资。
人体不能合成维生素。
幻灯片4按溶解度分 分类脂溶性VitA 、D2、D3、 E 、K1 等VitB 族(B1、B2、B6、B12) VitC 、叶酸、烟酸、泛酸等。
水溶性幻灯片533333-H 维生素A醇-COCH3 维生素A醋酸酯-COC15H31 维生素A棕榈酸酯R :幻灯片6为一个具有共轭多烯侧链的环己烯（一）具有UV吸收结构与性质一、●存在多种立体异构化合物幻灯片7●易发生脱氢、脱水、聚合反应VitA2VitA3幻灯片8鲸醇幻灯片9223△或有金属离子存在时氧化↑幻灯片10酸醛环氧化物、氧化剂紫外线、VitA VitA VitA ]O [O 2−−→−→−−−−−−−−→−环氧化物VitA 醛共轭多烯侧链 易被氧化（二）VitA酸幻灯片11O二、鉴别试验条件 无水无醇 幻灯片12蓝色紫红幻灯片13三氯化锑反应（一）紫红蓝色→−−−→−3SbCl VitA CHCl3R C OS b C 5C H +CH 2-RCOOSbCl 5（BP（2000））λmax为326nm一个吸收峰λmax为350～390nm三个吸收峰幻灯片14 UV法（二）VitA HCl△无水乙醇−→−−−→−−−−→−VitA ↓去水VitA （VitA3） 幻灯片15幻灯片16（三）TLC法33333BP 杂质对照品法 显色剂 三氯化锑 USP 显色剂 磷钼酸规定斑点颜色和Rf 值 幻灯片17（一） UV 法维生素A2 维生素A3 环氧化物维生素A醛维生素A酸立体异构体氧化降解产物合成中间体幻灯片18三点校正法（法定方法）1. 原理：（1）杂质的吸收在310~340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；（2）物质对光的吸收具有加和性。
药物分析实验维生素B1平均片重及含量测定（紫外分光光度法）
药物分析实验维生素B1平均片重及含量测定（紫外分光光度法）维生素BI平均片重及含量测定一、实验目的1、掌握紫外可见风光光度法操作方法；2、了解紫外可见风光光度法操作原理；3、掌握用紫外可见风光光度法测定药物含量；4、掌握片剂片重质量标准。
二、实验原理1、紫外可见分光光度法是利用物质的分子或离子对某一波长范围的光的吸收作用，对物质进行定性分析、定量分析及结构分析, 所依据的光谱是分子或离子吸收入射光中特定波长的光而产生的吸收光谱。
2、分类：按所吸收光的波长区域不同：分为紫外分光光度法和可见分光光度法，合称为紫外-可见分光光度法。
3、紫外-可见分光光度法的特点：（1) 其仪器设备和操作都比较简单，费用少，分析速度快;（与其它光谱分析方法相比）（2）灵敏度高;（3）选择性好;（4）精密度和准确度较高;（5）用途广泛。
4、物质对光的选择性吸收物质对光的吸收是选择性的，利用被测物质对某波长的光的吸收来了解物质的特性，这就是光谱法的基础。
通过测定被测物质对不同波长的光的吸收强度（吸光度），以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得出该物质在测定波长范围的吸收曲线。
在吸收曲线中，通常选用最大吸收波长λmax进行物质含量的测定。
三、实验仪器与试剂：仪器规格数量药品称量勺20个维生素B1片20片容量瓶100ml 40个盐酸100ml容量瓶1000ml 10个维生素B1注射液10支移液管10ml 30个紫外分光光度计10台比色皿10套容量瓶200ml 20个烧杯250ml 20个洗瓶10个胶头滴管20个玻璃棒20个分析天平20个硬度仪1台超声波清洗仪2台铁架台10个铁架圈10个滤纸1盒洗耳球10个四、实验步骤（一）重量差异照下述方法检查，应符合规定。
检查法取维生素B1片20片，精密称定总重量，求得平均片重后，再分别精密称定每片的重量，每片重量与平均片重比较（凡无含量测定的片剂或有标示片重的中药片剂，每片重量应与标示片重比较），按表中的规定，超出重量差异限度的不得多于2片，并不得有1片超出限度1倍。
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在32
(一)紫外法（三点校正法）
2 .原理 1）维生素A最大吸收波长附近（310～340nm）
杂质吸收近似一条直线 2）物质吸收光谱的加和性
A总=AVA+A杂质
(一)紫外法（三点校正法）
3.三点选择
(一)紫外法（三点校正法）
维生素A醇 1) 三点：325、310、334nm
(一)紫外法（三点校正法）
4. 校正公式的应用及含量计算 第一法:样品9～15IU/ml环己烷溶液 ①λmax326～329nm ②300、316、328、340、360nm （A1、A2、A3、A4、A5) ③计算吸收度比值 (A1/A3、A2/A3、A3/A3、A4/A3、A5/A3) ④计算比值差
样品：
醇制KOH/ Et2O/提取 挥散 残渣 溶于异丙醇中
9～15IU/ml
(一)紫外法（三点校正法）
①λmax323－327nm之间 300、310、 325及334nm A300/A325≤0.73，计算A325（校正） a、校正在未校正吸收度≤土3% 以未校正吸收度计算 b、>土3%，以校正吸收度计算
(一)紫外法（三点校正法）
②λmax不在323～327nm 或A300/A325>0.73 需进一步纯化
(一)紫外法（三点校正法）
5. 生物效价和换算因子 （Biological potency and conversion factor,CF）
1IU=0.344μg VA醋酸酯 1IU=0.300μg VA醇 1g VA醋酸酯:2.907×106IU/g 1g VA醇:3.33×106IU/g
CH2
CH2OR
维生素A2（去氢维生素A） 维生素A3（去水维生素A）
(一)紫外法（三点校正法）
2）异构体 目前分离得到5个异构体
97
5
2
8 6 4 3 1CH2OH
新维生素Aa(2-顺型)
9
7 65
4
8
32
CH2OH
新维生素Ab(4-顺1型)
(一)紫外法（三点校正法）
9
7
8
65 4
1
3
CH2OH
(一)紫外法（三点校正法）
E1% 1c m328( 环己烷）样
E1% 1cm 328(环己烷）标
效价[IU/g]样 效价[IU/g]标
[IU
/
g]样
E1% 1cm328(环己烷）样
[IU / g]标 E1%
1c m 328(环己烷）标
换算因数（CF)
[IU/g]标 E1%
1c m 328(环己烷）标
（优选）南医大药物分析维生 素
第一节
维生素A的分析
一、结构与性质 1.结构
97
53
1 CH2OR
864 2
环己烯 多烯醇（共轭双键系统）
R=H VA醇(维生素A1)：性质活泼 R=CH3CO- VA醋酸酯：性质稳定
第一节
维生素A的分析
2.物理性质 淡黄色或红色油状或固定物，几乎无气味，
不溶于水，易溶于氯仿，乙醚，环己烷和油中 VA醇：λmax(异丙醇)325nm VA酯：λmax(环己烷)328nm
2
新维生素Ac(2.4-顺型)
9
76
8 54
3
2
异维生素Aa(6-顺型C1)H2OH
9
76
8 54
3
2 C1 H2OH
异维生素Ab(2.6-二顺型)
(一)紫外法（三点校正法）
3）氧化产物：环氧化物，醛，酸 4）中间体、副产品： 5）裂解产物： 6）鲸醇（Kitol）:二聚体，非生物活性 7）不相关物质：抗氧剂，稀释用油
6 2) 等吸收点：A310=A334= 7 A325
3）校子公式： A325（校正）=6.815A325-2.555A310-4.260A334
(一)紫外法（三点校正法）
维生素A酯 1）三点：328、316、340nm 2）波长等距：12nm 3）校正公式： A328（校正）=3.52(2A328-A316-A340)
(二) HPLC
色谱柱：硅胶为填充剂 流动相： 正己烷-异丙醇（997：3） 检测波长：325nm 系统适应性试验：维生素A醋酸酯主峰与
其顺式异构体峰的R应大于3.0。 进样5次RSD≤3.0%。
第二节 维生素B1( Vit B1)
CH3
N
N
NH2
S
N CH2
CH2CH2OH CH3
Cl- HCl
(一)紫外法（三点校正法）
换算因子： 单位百分吸收系数所相当于的效价 VA酯百分吸收系数=1530 VA醇百分吸收系数＝1820 CF(酯)=2.907×106/1530=1900 CF(醇)=3.33×106/1820=1830
(一)紫外法（三点校正法）
6.注意问题 ① 仪器波长校准 ② 半暗室快速进行
第一节
维生素A的分析
3.化学性质 ①日光照射裂解 ②空气、氧化剂、加热或金属离子等 产生环氧化物、醛、酸 ③三氯化锑反应 蓝色产物（不稳定）、渐变成紫红色
第一节
维生素A的分析
（二） 鉴别 1. Carr-price反应（三氯化锑） 三氯化锑的氯仿液与VA作用产生蓝色 渐变成紫红色
①无水：三氯化锑水解、VA不溶 ②无醇：乙醇能和反应中正碳离子作用
(一)紫外法（三点校正法）
吸收度比值规定值
波长（nm）
吸收度比值 （规定）
300 0.555
316 0.907
328 1.000
340 0.811
360 0.299
λmax 326~329
326~329
不在 326~329
吸收度比 值范围
Amax
含量（效价）
≤ ± 0.02 > ± 0.02
Amax(不须校正)
第一节
维生素A的分析
2.紫外法 本品加无水乙醇－盐酸溶解，立即紫外扫描 326nm单一吸收峰(VA) 水浴加热30s，迅速冷却，再扫描 348、367和389nm三个尖锐吸收峰(去水VA)
第一节
维生素A的分析
三、含量测定 紫外法（三点校正法） HPLC
(一)紫外法（三点校正法）
1.维生素A中存在的相关物质和不相关物质 1）衍生物
≤ ±3%
A328校正 A328 100 % A328
-3%~ -15%
<-15%, >+3%
E1% 1cm
Am a x CL
E1% 1cm
Am a x CL
E1c1m%
A328校正 CL
E1% 1cm
1900
E1% 1cm
1900
E1c1m% 1900
第二法
第二法
(一)紫外法（三点校正法）
第二法： a、λmax不在326～329nm b、校正与未校正吸收度比较<-15%、>+3%
(一)紫外法（三点校正法）
2 .原理 1）维生素A最大吸收波长附近（310～340nm）
杂质吸收近似一条直线 2）物质吸收光谱的加和性
A总=AVA+A杂质
(一)紫外法（三点校正法）
3.三点选择
(一)紫外法（三点校正法）
维生素A醇 1) 三点：325、310、334nm
(一)紫外法（三点校正法）
4. 校正公式的应用及含量计算 第一法:样品9～15IU/ml环己烷溶液 ①λmax326～329nm ②300、316、328、340、360nm （A1、A2、A3、A4、A5) ③计算吸收度比值 (A1/A3、A2/A3、A3/A3、A4/A3、A5/A3) ④计算比值差
样品：
醇制KOH/ Et2O/提取 挥散 残渣 溶于异丙醇中
9～15IU/ml
(一)紫外法（三点校正法）
①λmax323－327nm之间 300、310、 325及334nm A300/A325≤0.73，计算A325（校正） a、校正在未校正吸收度≤土3% 以未校正吸收度计算 b、>土3%，以校正吸收度计算
(一)紫外法（三点校正法）
②λmax不在323～327nm 或A300/A325>0.73 需进一步纯化
(一)紫外法（三点校正法）
5. 生物效价和换算因子 （Biological potency and conversion factor,CF）
1IU=0.344μg VA醋酸酯 1IU=0.300μg VA醇 1g VA醋酸酯:2.907×106IU/g 1g VA醇:3.33×106IU/g
CH2
CH2OR
维生素A2（去氢维生素A） 维生素A3（去水维生素A）
(一)紫外法（三点校正法）
2）异构体 目前分离得到5个异构体
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8 6 4 3 1CH2OH
新维生素Aa(2-顺型)
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7 65
4
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CH2OH
新维生素Ab(4-顺1型)
(一)紫外法（三点校正法）
9
7
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65 4
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3
CH2OH
(一)紫外法（三点校正法）
E1% 1c m328( 环己烷）样
E1% 1cm 328(环己烷）标
效价[IU/g]样 效价[IU/g]标
[IU
/
g]样
E1% 1cm328(环己烷）样
[IU / g]标 E1%
1c m 328(环己烷）标
换算因数（CF)
[IU/g]标 E1%
1c m 328(环己烷）标
（优选）南医大药物分析维生 素
第一节
维生素A的分析
一、结构与性质 1.结构
97
53
1 CH2OR
864 2
环己烯 多烯醇（共轭双键系统）
R=H VA醇(维生素A1)：性质活泼 R=CH3CO- VA醋酸酯：性质稳定
第一节
维生素A的分析
2.物理性质 淡黄色或红色油状或固定物，几乎无气味，
不溶于水，易溶于氯仿，乙醚，环己烷和油中 VA醇：λmax(异丙醇)325nm VA酯：λmax(环己烷)328nm
2
新维生素Ac(2.4-顺型)
9
76
8 54
3
2
异维生素Aa(6-顺型C1)H2OH
9
76
8 54
3
2 C1 H2OH
异维生素Ab(2.6-二顺型)
(一)紫外法（三点校正法）
3）氧化产物：环氧化物，醛，酸 4）中间体、副产品： 5）裂解产物： 6）鲸醇（Kitol）:二聚体，非生物活性 7）不相关物质：抗氧剂，稀释用油
6 2) 等吸收点：A310=A334= 7 A325
3）校子公式： A325（校正）=6.815A325-2.555A310-4.260A334
(一)紫外法（三点校正法）
维生素A酯 1）三点：328、316、340nm 2）波长等距：12nm 3）校正公式： A328（校正）=3.52(2A328-A316-A340)
(二) HPLC
色谱柱：硅胶为填充剂 流动相： 正己烷-异丙醇（997：3） 检测波长：325nm 系统适应性试验：维生素A醋酸酯主峰与
其顺式异构体峰的R应大于3.0。 进样5次RSD≤3.0%。
第二节 维生素B1( Vit B1)
CH3
N
N
NH2
S
N CH2
CH2CH2OH CH3
Cl- HCl
(一)紫外法（三点校正法）
换算因子： 单位百分吸收系数所相当于的效价 VA酯百分吸收系数=1530 VA醇百分吸收系数＝1820 CF(酯)=2.907×106/1530=1900 CF(醇)=3.33×106/1820=1830
(一)紫外法（三点校正法）
6.注意问题 ① 仪器波长校准 ② 半暗室快速进行
第一节
维生素A的分析
3.化学性质 ①日光照射裂解 ②空气、氧化剂、加热或金属离子等 产生环氧化物、醛、酸 ③三氯化锑反应 蓝色产物（不稳定）、渐变成紫红色
第一节
维生素A的分析
（二） 鉴别 1. Carr-price反应（三氯化锑） 三氯化锑的氯仿液与VA作用产生蓝色 渐变成紫红色
①无水：三氯化锑水解、VA不溶 ②无醇：乙醇能和反应中正碳离子作用
(一)紫外法（三点校正法）
吸收度比值规定值
波长（nm）
吸收度比值 （规定）
300 0.555
316 0.907
328 1.000
340 0.811
360 0.299
λmax 326~329
326~329
不在 326~329
吸收度比 值范围
Amax
含量（效价）
≤ ± 0.02 > ± 0.02
Amax(不须校正)
第一节
维生素A的分析
2.紫外法 本品加无水乙醇－盐酸溶解，立即紫外扫描 326nm单一吸收峰(VA) 水浴加热30s，迅速冷却，再扫描 348、367和389nm三个尖锐吸收峰(去水VA)
第一节
维生素A的分析
三、含量测定 紫外法（三点校正法） HPLC
(一)紫外法（三点校正法）
1.维生素A中存在的相关物质和不相关物质 1）衍生物
≤ ±3%
A328校正 A328 100 % A328
-3%~ -15%
<-15%, >+3%
E1% 1cm
Am a x CL
E1% 1cm
Am a x CL
E1c1m%
A328校正 CL
E1% 1cm
1900
E1% 1cm
1900
E1c1m% 1900
第二法
第二法
(一)紫外法（三点校正法）
第二法： a、λmax不在326～329nm b、校正与未校正吸收度比较<-15%、>+3%