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AOAC 991.14 食品中的大肠杆菌测定--AOAC Official method 991.14 coloform and escherichia coli counts i

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17.3.04AOAC Official Method991.14Coliform and Escherichia coliCounts in FoodsDry Rehydratable Film(PetrifilmäE.coli/Coliform Count PlateäandPetrifilmäColiform Count Plateä)MethodsFirst Action1991Final Action1994See Table991.14for the results of the interlaboratory study sup-porting the acceptance of the method.A.PrincipleSee989.10A(see17.3.03).B.Apparatus and ReagentSee989.10B(b)–(f)(see17.3.03).E.coli count plates.—Plates are similar to coliform count plates, 989.10B(b)(see17.3.03),withadditionof5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-glucuronide,an indicator of glucuronidase activity.This allows coliforms and E.coli tobereadonthesameplate.Petrifilm E.coli CountPlates(Micro-biologyProducts,3MCenter,Bldg.275-5W-05,St.Paul,MN55144,USA) meet these specifications.C.Preparation of Test SuspensionSee966.23B(see17.2.01)and986.33C(see17.3.02).D.Analysis(a)Coliform count.—Place dry-film E.coli count plate,B,or coliform count plate,989.10B(b)(see17.3.03),on flat surface.Lift top film and inoculate1mL test suspension onto center of film base. Carefully place top film down onto inoculum.Distribute test suspen-sion over prescribed growth area with downward pressure on center of plastic spreader device(flat side down).Leave plate undisturbed 1min to permit gel to solidify.Incubate plates24±2h at35°±1°C. In incubator,place plates in horizontal position,clear side up,in stacks not exceeding20units.Count plates promptly after incuba-tion period.After incubation is complete,plates may be stored frozen(≤–15°C)up to7days.This should be avoided as routine e standard colony counter for counting purposes.Magni-fier-illuminator may also be used to facilitate counting.Coliforms ap-pear as red colonies that have one or more gas bubbles associated (within one colony diameter)with them.Count all colonies in countable range(15–150colonies).Red colonies without gas bubbles are not counted as coliform organisms.(b)E.coli count.—Use E.coli count plate and proceed as in(a).In-cubate an additional24±2h(48±4h total).E.coli colonies appear as blue colonies associated with gas bubbles;other coliforms appear as red colonies with gas.Reference:JAOAC74,635(1991).Revised:March2002Table991.14Interlaboratory study results for total coliforms and E.coli on dry-film count platesProduct Level Mean log,cfu/g s r s R RSD r,%RSD R,%Total coliforms on coliform count platesGround turkey Low 1.8450.1930.29610.516.1Medium 2.2350.3610.36116.216.2High 2.7440.1050.270 3.89.9 Fresh mushrooms Low 4.2410.2780.808 6.619.0Medium 4.9990.662 1.14113.222.8High 5.1970.1200.872 2.316.8 Beef with gravy Low 1.0690.2430.28822.727.0Medium 2.0620.2570.39112.518.9High 2.7320.2330.3208.511.7 Cheese Low0.7830.1720.17221.921.9Medium 2.4110.0920.206 3.88.5High 3.4340.2120.364 6.210.6 Wheat flour Low 2.6350.2910.87411.133.2Medium 3.4600.746 1.29121.637.3High 4.0490.873 1.55021.638.3 Nut meal Low0.8960.3360.44337.549.5Medium 1.3450.4860.69936.252.0High 2.3700.2670.83111.335.1Total coliforms on E.coli count platesGround turkey Low 1.9340.1770.2619.213.5Medium 2.2160.2850.31512.914.2High 2.8350.1130.242 4.08.5 Fresh mushrooms Low 4.5500.0790.722 1.715.9Medium 5.2780.600 1.00111.419.0High 5.2270.3460.817 6.615.6 Beef with gravy Low 1.0160.2150.28421.227.9Medium 2.0600.2560.29512.414.3High 2.6790.1910.3317.112.4 Cheese Low0.8130.1720.19221.123.6Medium 2.5070.1090.238 4.39.5High 3.6200.0740.106 2.1 2.9 Wheat flour Low 2.6390.2430.8839.233.4Medium 3.4320.826 1.31824.138.4High 4.0640.929 1.55722.938.8 Nut meal Low0.7590.0280.295 3.738.8Medium 1.4030.3780.72826.951.8High 2.3550.4250.91518.038.9Total E.coli on E.coli count platesGround turkey Low 1.4190.3160.31622.322.3Medium 1.9230.3640.36418.918.9High 2.6070.0980.233 3.88.9 Fresh mushrooms Low 2.5000.2610.34310.413.7Medium 3.0580.2960.4229.713.8High 3.4360.7150.76020.822.1 Beef with gravy Low0.7530.0280.172 3.722.8Medium0.9910.1540.60115.660.7High 1.3120.1610.82812.363.1 Cheese Low0.8190.1900.19023.223.2Medium 2.4540.0980.166 4.0 6.8High 3.4400.1120.123 3.2 3.6 Wheat flour Low 1.1750.5240.73744.662.7Medium 3.0950.967 1.36231.344.0High 3.5490.821 1.44223.140.6 Nut meal Low0.7160.0670.2369.433.0Medium 1.2680.2680.60521.147.7High 2.3140.2650.85711.437.0。

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AOAC 官方方法 986.33 牛奶中细菌和大肠菌群的检测 再水化干膜法

AOAC 官方方法 986.33 牛奶中细菌和大肠菌群的检测 再水化干膜法

17.3.02AOAC官方方法 986.33牛奶中细菌和大肠菌群的检测再水化干膜法（Petrifilm细菌总数测试片和Petrifilm大肠菌群测试片）首次发布 1986最终发布 1988A. 原理本方法使用含有干粉培养基和冷水可溶性凝胶的细菌培养平板。

每个平板加入1.0毫升未稀释或稀释后的样品。

使用塑料压板轻压盖好的上层膜，让样液充满整个20平方厘米的生长区域。

让凝胶凝固后进行培养，然后计数。

可使用移液管或循环连续的移液枪进行加样。

B. 材料(a) Petrifilm细菌总数测试片－含有标准方法培养基营养，940.36A(g)(见17.1.02)，上层膜，膜上的冷水可溶性凝胶和TTC指示剂。

圆形生长区含20个1平方厘米的方格。

Petrifilm细菌总数测试片符合这些规格（生产商为Medical Surgical Division/3M, 275-W 3M Center，St. Paul, MN 55144）。

(b) Petrifilm大肠菌群测试片—含有符合“食品中微生物检测方法纲要”（第三版，1990，美国公共卫生协会，华盛顿）中列出的APHA标准的结晶紫中性红胆盐营养培养基，冷水可溶性凝胶和TTC。

Petrifilm大肠菌群测试片符合这些规格（生产商为Medical Surgical Division/3M, 275-W 3M Center，St. Paul, MN 55144）。

(c) 塑料压板－和Petrifilm测试片一起提供，有一个凹面和一个平面，用于将测试样品均匀地扩散在测试片中的生长区域。

(d) 移液管－细菌校准设备或持续移液注射器，以移取1.0mL（0.1 mL的误差）。

也可使用自动移液器。

(e) 菌落计数器－标准设备，优先使用Quebec 型，或者是能够提供同等放大倍数和可见度的设备。

D. 分析（a）细菌菌落计数－将Petrifilm细菌总数测试片置于平坦表面。

提起上层膜，将1mL样品均液接种于测试片中央。

食品中大肠菌群能力验证结果分析

食品中大肠菌群能力验证结果分析

食品中大肠菌群能力验证结果分析作者：种婷来源：《食品安全导刊》2022年第04期摘要：为保证抽检结果准确可靠，提高实验室检测水平，本实验室参加了2021年辽宁省市场监督管理局组织的能力验证。

采用人员比对，2名检验员同时依据《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》（GB 4789.3—2016）对同一质控样品进行检验。

结果表明，2名检验员检验结果基本一致，最终大肠菌群结果报告为3 600 CFU/mL，|Z|关键词：大肠菌群;能力验证;人员比对;质量控制Analysis of Coliform Ability Verification Results in FoodCHONG Ting（Liaoning Inspection， Examination and Certification Centre， Shenyang 110032， China）Abstract： In order to ensure the accuracy and reliability of the sampling results and improve the laboratory testing level， our laboratory participated in the proficiency testing organized by the Liaoning Provincial Administration for Market Regulation in 2021. Using personnel comparison，two inspectors simultaneously inspected the same quality control sample according to GB 4789.3—2016. The results show that the inspection results of the two inspectors are basically the same， the final coliform group result was reported as 3 600 CFU/mL， |Z|Keywords： coliform; capability verification; personnel comparison; quality control大肠菌群是一群革兰氏阴性无芽孢杆菌，能发酵乳糖，产酸产气，一般用来作为食品是否受到粪便污染的卫生指示菌[1]。

食品微生物大肠菌群检测方法

食品微生物大肠菌群检测方法

食品微生物大肠菌群检测方法食品微生物大肠菌群检测是食品安全监管的重要环节，大肠菌群作为一类潜在致病菌，其检测对于评估食品的卫生质量至关重要。

本文将介绍几种常见的食品微生物大肠菌群检测方法，希望能够为食品安全监管工作提供参考。

首先，传统的培养法是一种常见的大肠菌群检测方法。

该方法通过将食品样品接种在含有特定营养成分的培养基上，利用大肠菌群的特定生长条件，观察并计数培养基上产生的典型菌落。

然而，传统培养法存在着操作复杂、耗时长、无法检测非可培养菌等问题，因此逐渐被更为快速、准确的方法所替代。

其次，分子生物学方法在大肠菌群检测中得到了广泛应用。

其中，聚合酶链式反应（PCR）技术是一种常用的分子生物学方法，通过特异性引物扩增目标DNA片段，再通过凝胶电泳或实时荧光定量PCR技术进行定量分析。

PCR技术具有高灵敏度、高特异性和快速的优点，能够在较短时间内完成大肠菌群的检测，但其需要较为复杂的实验操作和昂贵的设备。

此外，近年来，基于生物传感技术的大肠菌群检测方法也得到了迅速发展。

生物传感技术利用生物元件对靶分子的高度选择性识别，将生物识别转换为可测量的信号输出。

例如，免疫传感技术利用抗体对大肠菌群的特异性识别，通过免疫反应产生信号，实现对大肠菌群的快速检测。

生物传感技术具有高灵敏度、快速、便携等优点，逐渐成为食品微生物检测领域的研究热点。

除了上述方法外，近年来，基于纳米材料的大肠菌群检测方法也备受关注。

纳米材料具有较大的比表面积和特殊的光电性能，能够提高生物传感器的灵敏度和稳定性。

例如，利用金纳米颗粒标记抗体，通过光谱法或电化学法实现对大肠菌群的高灵敏检测。

纳米材料的应用为大肠菌群检测提供了新的思路和方法。

综上所述，食品微生物大肠菌群检测方法多种多样，各具特点。

在实际应用中，可以根据检测的目的、样品的性质和实验条件等因素选择合适的检测方法。

随着科学技术的不断进步，相信食品微生物大肠菌群检测方法将会更加快速、准确、简便，为食品安全监管工作提供更为有力的支持。

总膳食纤维国标测定方法-符合AOAC等

总膳食纤维国标测定方法-符合AOAC等

总膳食纤维测定的介绍1、在α-淀粉酶的作用下，PH为6的磷酸盐缓冲溶液，95—100度下加热15分钟。

2、用蛋白酶在PH为7.5时60度培养30分钟。

3、用淀粉葡(萄)糖苷酶在PH为4.0---4.6下60度培养30分钟。

4、4体积的95%的乙醇沉淀。

5、过滤。

6、用78%和95%的乙醇和丙酮清洗沉淀物。

7、烘干称重。

8、干样可以拿去做凯氏定氮，也可以在525度的马弗炉里灰份5个小时，然后去称重。

不溶的膳食纤维的定义为进行烘干前用乙醇进行清洗并用温水洗涤后残留物。

总膳食纤维（TDF）—不溶膳食纤维= 可溶膳食纤维（SDF）标准酶法测定食品和饲料中的总膳食纤维量1、研磨分级样品2、在105度的烘箱烘干并恒重，在干燥箱中冷却到室温。

3、如果样品脂肪含量高于10%，需要用石油醚进行脱脂，在最终结果中再进行校正。

4、称出0.5—1克的样品，并转移到400毫升的烧杯中。

5、用α-淀粉酶在50毫升的PH为6的磷酸盐缓冲溶液中培养15分钟，培养温度为95—100度，温度可以用温度计控制。

6、冷却到室温，并用0.275 N 浓度的氢氧化钠溶液调节PH到7.5。

7、将烧杯和样品一起转移到磁力搅拌培养器中（GDE）。

8、在搅拌的情况下，加入蛋白酶在60度的情况下培养30分钟。

9、冷却到室温，用0.325的盐酸调节PH值为4.0—4.6。

10、在搅拌的情况下，加淀粉葡(萄)糖苷酶，在60度时培养30分钟。

11、通过加4体积的95%的乙醇沉淀可溶性膳食纤维，并且在室温下沉淀大约1个小时。

12、称量已经添加了0.5克的硅藻土(作为助滤剂)玻璃坩埚.13、将坩埚放在CSF6 (或者FIWE6)上,倒入上述操作的沉淀物,并用V ACUUM进行吸液排空,用78%的乙醇溶液进行洗涤转移沉淀物。

14、用20毫升的78%的乙醇溶液洗涤玻璃坩埚中的沉淀物两次，再用10毫升95%的乙醇溶液洗涤两次，10毫升的丙酮溶液洗涤两次并排除废液。