(word完整版)微生物检测用高压蒸汽灭菌锅灭菌效果验证2010

高压灭菌锅验证方案1 目的通过验证试验提供足够的数据和文件依据，证明质检中所使用的高压灭菌锅以及其灭菌程序对各种不同物品灭菌过程的可靠性和重现性。

2 范围质量管理部高压灭菌锅（设备编号：Sbnzk-JQ-02301）。

3 验证小组成员及职责质量管理部负责验证的实施及准备工作；质量管理部(QC)负责检测工作；设备部负责设备的正常运转；质量管理部(QA)负责组织验证工作和结果评价。

3.1 验证委员会：质量受权人、主管副总经理、质量管理部经理、设备部经理。

3.2 验证工作小组：质量管理部、设备部有关人员为验证工作小组成员。

4 验证依据4.1 《中华人民共和国药典》。

4.2 《药品生产验证指南》。

4.3 仪器标准操作规程及使用说明书。

5 概述本灭菌器是一种可编程序控制器进行程序控制的新型湿热灭菌设备。

高压灭菌锅采用饱和蒸汽灭菌，工作温度105℃～135℃任意设定，灭菌时间在1～250分钟内任意设定。

5.1 设备基本情况：设备编号：Sbnzk-JQ-02301 设备名称：高压灭菌锅型号：HVE-50型生产厂家：HIR AYAMA使用部门：质量管理部购货日期：2000.11 安装位置：质量管理部微生物培养室。

6 验证前准备6.1 温度检测用设备6.1.1 校准的无线热电偶（10个），测量范围在0℃～135℃之间。

该高压灭菌锅的空载热分布、满载热穿透试验用无线热电偶进行温度检测。

6.2 微生物挑战试验用菌片该设备进行满载热穿透试验同时进行微生物挑战试验，微生物挑战试验所需要的菌片为军事医学科学院消毒检测中心出产的嗜热脂肪杆菌芽胞，含菌数量为5×105-5×106 cfu/片。

6.3 确认相关规程和文件7 验证内容7.1 预确认：7.1.1 设备技术指标审核对设备技术指标的适用性进行审查并作出书面评价。

审查时必须依据工艺技术要求和公司实深圳市赛百诺基因技术有限公司SOP-A05-040际情况进行。

编制人编制日期第一审核人审核日期第二审核人审核日期批准人批准日期实施日期有效期至颁发部门持有部门高压灭菌锅考证方案1目的经过考证试验供给足够的数据和文件依照，证明质检中所使用的高压灭菌锅以及其灭菌程序对各样不一样物件灭菌过程的靠谱性和重现性。

2范围质量管理部高压灭菌锅（设施编号：Sbnzk-JQ-02301 ）。

3考证小构成员及职责质量管理部负责考证的实行及准备工作；质量管理部(QC)负责检测工作；设施部负责设施的正常运行；质量管理部 (QA)负责组织考证工作和结果评论。

考证委员会：质量授权人、主管副总经理、质量管理部经理、设施部经理。

考证工作小组：质量管理部、设施部有关人员为考证工作小构成员。

人员职务 / 职称职责组长质量授权人负责考证方案审察及考证结果评论负责对有关人员进行确认，负责有关部门的交流工作，方案履行人质量管理部经理保证依照同意的考证方案履行，对考证过程中出现的误差进行检查，对证量授权人负责。

质量管理部经理负责拟定监测项目及考证周期生产部操作员负责考证的实行及准备工作质量管理部质监员负责考证过程的监察和取样工作成员质量管理部质检员负责考证项目的查验，并依据查验结果出具查验报告单质量管理部质检员负责拟定查验规程及取样规程质量管理部计量员负责考证过程中全部的计量用具处于有效期内。

设施部技术员负责设施、仪器的保护、养护4考证依照《中华人民共和国药典》。

《药品生产考证指南》。

仪器标准操作规程及使用说明书。

5概括本灭菌器是一种可编程序控制器进行程序控制的新式湿热灭菌设施。

高压灭菌锅采纳饱和蒸汽灭菌，工作温度105℃～ 135℃随意设定，灭菌时间在1～ 250 分钟内随意设定。

设施基本状况：设施编号： Sbnzk-JQ-02301 型号： HVE-50 型使用部门：质量管理部设施名称：高压灭菌锅生产厂家： HIR AYAMA 购货日期：安装地点：质量管理部微生物培育室。

6考证前准备温度检测用设施校准的无线热电偶（10 个），丈量范围在0℃～ 135℃之间。

压力蒸汽灭菌器验证报告编制：岗位：理化工程师签字：___________ 日期：____________审核：岗位：进料检验主管签字：___________ 日期：____________批准：岗位：质量经理签字：___________ 日期：____________1.验证背景及概述:本公司LS-75HD立式高压蒸汽灭菌器，山江阴滨江医疗器械设备有限公司制造的。

该灭菌器是利用加压饱和蒸汽对玻璃器皿、微生物培养基等物品进行消毒灭菌的设备。

具有效果优良、操作简易、安全可靠等优点。

为了确保该设备提供稳定的灭菌条件，特制定本验证方案进行验证2.验证目的：2.1检查并确认LS-75HD立式压力蒸汽灭菌器安装符合要求，资料和文件齐全。

2.2确认LS-75HD立式压力蒸汽灭菌器温度、压力及灭菌等性能指标达到设定技术指标，满足日常使用需求。

3.验证范围：适用于LS-75HD立式压力蒸汽灭菌器。

4.验证依据：• YY 0731-2009大型蒸汽灭菌器手动控制型•《立式压力蒸汽灭菌器使用说明书》5.验证小组5.1验证小组成员5.2验证小组职责小组组长：负责批准验证方案和报告。

小组成员：•质量部经理负责审核验证方案及验证报告；•体系部体系工程师负责评审确认方案及报告，并配合验证工作的实施。

•质量部计量工程师负责检测设备的校验，并确保检测设备在校验周期内。

•质量部质量工程师负责验证方案的形成及根据相关记录出具验证报告，负责协调验证方案的实施。

•质量部质量工程师负责组织理化实验室执行试验样品的检测，负责按照验证方案执行操作并提供相应的检测记录和报告。

6・验证过程6. 1安装验证（IQ）6. 1. 1设备型式与基本参数符合性确认；依Y Y0731-*******认确认人/日期:确认人/日期:6・确认人/日期:确认人/日期:6.1.5验证人员的确认：执行本验证试验的实验人员，已经过本验证方案的培训，并在在灭菌设备操作及灭 菌效果监测方面具有一定的实践经验，能够独立完成验证操作工作。

微生物实验常用的灭菌、消毒方法及效果监测因为微生物广泛存在于环境中，从预防交错污染的角度动身，微生物试验必需遵循无菌操作的原则，采纳多种物理、化学或是生物的办法，确保全部的物品和工作环境符合用法要求。

常用以下术语表示杀灭微生物的程度。

消毒：杀灭或(和)清除致病微生物，使其数量削减到不再能引起人发病。

用于消毒的化学药品称为消毒剂。

灭菌：将全部微生物所有杀灭或(和)清除掉，包括细菌芽孢和非致病微生物。

灭菌比消毒更彻底。

无菌：不含活菌，是灭菌的结果。

防止细菌进入人体或其他物品的操作技术称为无菌操作。

(一)常用的灭菌、消毒办法常用的灭菌或消毒办法分为4类：热力灭菌法、化学消毒法、辐射法和过滤除菌法。

普通按照物品的种类和污染后的危害程度来挑选消毒、灭菌办法。

消毒首选物理办法，不能用物理办法消毒的方可选化学办法。

1.热力灭菌法高温对微生物具有显然的杀伤作用，这是因为热能可变性蛋白质、核酸及破坏细胞膜等。

热力灭菌法按照有无水蒸气的参加分为干热灭菌法和湿热灭菌法两种。

热力灭菌法的种类及用法范围详见表4-4。

表4-4 热力灭菌法的种类及用法范围 2.化学消毒法无数化学药物能够影响微生物的物理结构和生理活动，从而达到消毒的作用。

化学消毒剂普通都对人体组织有害，因此，只能外用或用于环境的消毒，常用化学消毒剂的种类、作用机理及用法范围见表4-5。

表4-5 化学消毒剂及用法范围 3.辐射法辐射法中紫外线杀菌最为常用。

紫外线的穿透能力很弱，简单被固形物汲取，不能透过一般玻璃，因此，它只适用于空气、水及物体表面的杀菌。

无菌室、超净工作台、生物平安柜内都装有紫外灯，用来举行空气消毒，消毒时光普通为30min。

应用紫外线杀菌时，必需防止紫外线对人体的挺直照耀，以免损害眼睛和灼伤皮肤。

4.过滤除菌法指将含菌的液体或气体通过一个称作细菌滤器的装置，使细菌受到机械的阻力而留在滤器或滤板上，从而达到除菌的目的。

此法常用于不宜加热灭菌的液体物质，如培养基添加剂、抗生素、血清等。

第1篇一、实验目的1. 理解灭菌锅的工作原理和操作流程。

2. 掌握高压蒸汽灭菌技术，确保实验材料的无菌性。

3. 学习使用灭菌锅进行实验操作，提高实验室无菌操作技能。

二、实验原理灭菌锅是一种用于高温高压条件下杀灭微生物及其芽孢、孢子的设备。

其工作原理是利用高温高压蒸汽产生的高温高压环境，使微生物蛋白质变性、酶失活，从而杀死微生物。

三、实验材料1. 试剂：无菌蒸馏水、琼脂、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠等。

2. 仪器：灭菌锅、高压蒸汽灭菌器、培养皿、试管、移液管、酒精灯、火柴等。

四、实验方法1. 培养基制备：按照实验要求，将牛肉膏、蛋白胨、氯化钠等试剂加入无菌蒸馏水中，搅拌均匀，煮沸消毒后，加入琼脂，继续煮沸至琼脂完全溶解，冷却后分装至无菌培养皿中。

2. 接种：将待分离的微生物接种于制备好的培养基上，用无菌镊子将接种环在酒精灯上灼烧，待冷却后，将接种环蘸取少量待分离的微生物，轻轻涂抹于培养基表面。

3. 灭菌锅操作：a. 将接种好的培养皿放入灭菌锅中，关闭锅盖，确保密封良好。

b. 将灭菌锅加入适量的水，使水面与三角搁架相平。

c. 打开高压蒸汽灭菌器，调节温度至121℃，压力至0.1MPa。

d. 灭菌30分钟后，关闭高压蒸汽灭菌器，自然冷却至室温。

e. 打开灭菌锅，取出培养皿，观察菌落生长情况。

五、实验结果经过高压蒸汽灭菌处理后，接种于培养基上的微生物被有效杀灭，培养基表面无菌落生长。

六、实验讨论1. 灭菌锅是一种高效、安全的灭菌设备，广泛应用于实验室、医院、食品加工等行业。

2. 高压蒸汽灭菌技术是实验室无菌操作的重要手段，可有效防止微生物污染。

3. 在实验操作过程中，应注意以下几点：a. 确保实验材料、仪器和操作场所的无菌性。

b. 严格遵守操作规程，避免交叉污染。

c. 使用无菌工具，避免污染培养基。

七、实验总结本次实验成功掌握了灭菌锅的操作方法，了解了高压蒸汽灭菌技术的原理和应用。

通过实验，提高了实验室无菌操作技能，为今后的实验研究奠定了基础。

一、实验目的1. 了解蒸汽灭菌锅的原理和操作方法。

2. 掌握蒸汽灭菌的步骤和注意事项。

3. 验证蒸汽灭菌锅对微生物的灭活效果。

二、实验原理蒸汽灭菌锅是一种常用的灭菌设备，其原理是利用高温高压的蒸汽杀灭微生物。

在密闭的容器中，随着水的加热，蒸汽压力逐渐升高，温度也随之升高。

当蒸汽温度达到一定值时，可以杀死各种微生物，包括细菌、病毒、真菌等。

三、实验材料1. 蒸汽灭菌锅2. 玻璃器皿（如培养皿、试管、烧杯等）3. 待灭菌物品（如培养基、实验器材等）4. 温度计5. 时间记录表四、实验步骤1. 准备工作（1）检查蒸汽灭菌锅是否完好，如有损坏及时更换。

（2）将玻璃器皿清洗干净，并用消毒液进行消毒。

（3）将待灭菌物品包装好，避免在灭菌过程中污染。

2. 灭菌过程（1）将清洗干净的玻璃器皿放入蒸汽灭菌锅内。

（2）将待灭菌物品放入玻璃器皿中，注意不要放得太满，以免影响蒸汽流通。

（3）将蒸汽灭菌锅加水至水位与三角搁架相平。

（4）打开蒸汽灭菌锅的盖子，将温度计插入锅内，记录初始温度。

（5）关闭盖子，旋紧螺栓，确保密封良好。

（6）打开排气阀，使锅内空气排出，待压力稳定后关闭排气阀。

（7）根据实验要求调整温度和压力，维持一段时间。

（8）灭菌时间结束后，关闭热源，让蒸汽自然冷却。

（9）待压力降至0时，打开盖子，取出灭菌物品。

3. 验证灭活效果（1）将灭菌后的物品进行无菌检查，如培养皿、试管等。

（2）将无菌物品接种于培养基上，放入恒温培养箱中培养。

（3）观察培养皿或试管中的微生物生长情况，若无微生物生长，则证明灭菌效果良好。

五、实验结果与分析1. 灭菌效果良好，无菌检查结果为阴性。

2. 蒸汽灭菌锅在121℃、15磅压力下，维持15～30分钟，可以杀死各种微生物和它们的孢子或芽孢。

六、实验结论通过本次实验，我们掌握了蒸汽灭菌锅的操作方法和注意事项，验证了蒸汽灭菌锅对微生物的灭活效果。

在实验过程中，应注意以下几点：1. 选择合适的灭菌时间和压力，以确保灭菌效果。

高压蒸汽消毒锅灭菌监测方法1 、生物学监测使用活的细菌芽孢制成生物指示剂，其抗力均大于或等于各种致病微生物。

在第 1个灭菌周期(灭菌时间3 min)对嗜热脂肪杆菌(ATCC7953)芽孢未全部杀灭。

经过第 1个周期后(灭菌时间5、7、9 min)对嗜热脂肪杆菌(ATCC7953)芽孢全部杀灭。

用生物指标剂来证明灭菌物品内微生物是否全部死亡，是判断灭菌是否合格的直接指标，也是最可靠的监测方法。

高压蒸汽灭菌所用生物指示剂是用嗜热脂肪杆菌芽孢制备，干热灭菌和环氧乙烷灭菌所用生物指示剂则是以枯草杆菌黑色变种芽孢制备的。

但由于使用生物指示剂操作复杂，几天后才能出结果，不适于日常监测。

卫生部《消毒技术规范》要求，使用生物法监测高压蒸汽消毒锅每月1次。

监测使用的生物指示管必须放于标准包内，标准包放在消毒锅的最低层，主要考虑蒸汽穿透物品的时间和高压蒸汽消毒锅温度最低处，具有代表性。

2 、化学监测用某些热敏化学物质配成印墨印制而成。

在一定温度的饱和蒸汽条件下作用一定时间，使其颜色改变，再根据标准色来判断是否达到灭菌条件，因此是间接指标，种类有B—D试验指标图、化学指示胶带和化学指示卡。

（1） B-D测试(Bowie—Dick test) 专门用于预真空(包括脉动式喷射式等)高压蒸汽消毒锅空气排除效果的监测。

预真空不可能达到绝对真空(约有 2%空气)。

因此，空气的存在影响蒸汽对物品的穿透和杀菌效果，可导致灭菌失败。

所以，高压蒸汽灭菌时以物品包中是否有空气团的存在作为灭菌能否成功的一个重要指标。

卫生部《消毒技术规范》要求：每日进行一次B-D测试。

如B—D测试失败，须仔细查找原因，直至B-D测试通过后，该消毒锅方能使用。

B-D测试设计原理是使试验包成为消毒锅内残留空气的聚焦点，因为热蒸汽进入柜内时，它相对较大的体积和可透气性布料极易吸附、“捕捉”残留空气。

真空测试图上的化学指示剂对残留空气具有敏感性，能检测出残留空气在试验包中是否存在。

高压灭菌锅验证资料编制：日期：___________ 审核：日期：___________ 批准：日期：___________有限公司年月日目录1.概述2.验证目的3.验证依据及采用文件4.验证内容4.1.设计确认4.2.安装确认4.3.运行确认4.4.性能确认5.再验证周期1.概述本消毒器是利用高压高温湿热蒸汽杀菌，用于微生物检验用培养基、器皿及污染物过期菌种等灭活，灭菌条件设定为121℃，30min。

2.验证目的通过验证确认手提式压力蒸汽灭菌器能达到设备性能指标，满足检验需求。

验证结果必须证明生产中采用的灭菌过程对经过灭菌的物品能够保证残存微生物污染的概率或可能性低于10-63.验证依据及采用文件《药品生产验证指南》《药品生产质量管理规范》《中华人民共和国药典》2015年版4.验证内容4.1设计确认a.灭菌器额定工作压力为0.14MPa-0.165MPa，并安装有放气阀、安全阀、压力表，压力表能显示工作压力和相对温度，当工作压力大于0.165MPa时，安全阀能自动释放压力。

b.电源电压：220V，50Hzc.浸入式电热管功率：2KWd.灭菌桶容积：18L4.2安装确认4.2.1资料档案检验人：日期：复核人：日期：检验人：日期：复核人：日期：4.3.1仪表校正1.校正的温度指示、传感器、温度记录仪的读数值与标准电偶指示值之间的误差应≦+0.5℃。

2.校正的时间记录仪与标准时间指示装置之间的误差应≦+1％.3.校正的压力表/真空表与标准表之间的误差应≦+10%。

4.3.2真空度试验用特定的化学指示剂（试纸）检查，化学指示剂（试纸）在运行抽真空程序后，经134℃暴露3min，其化学指示剂（试纸）的颜色应呈现均匀一直的改变。

4.3.3真空状态下灭菌腔室内泄漏实验泄漏率：在10min内，腔室内压力变化应<130Pa/min（1mm Hg/min)4.3.4将灭菌器重加入纯化水等，准备工作做好后，设置为121℃,30分钟，启动设备，该设备应在121℃保温30分钟，连续运行3次，且用秒表计时。

一、实验目的1. 了解物理灭菌的原理和方法。

2. 掌握高压蒸汽灭菌、紫外线灭菌、灼烧灭菌等物理灭菌技术的操作步骤。

3. 评估不同物理灭菌方法的灭菌效果。

二、实验原理物理灭菌是利用物理因素（如高温、紫外线、辐射等）杀灭或消除微生物的一种方法。

本实验主要研究高压蒸汽灭菌、紫外线灭菌和灼烧灭菌三种物理灭菌方法。

1. 高压蒸汽灭菌：利用高压蒸汽产生的高温，使微生物的蛋白质变性、酶失活，从而达到灭菌的目的。

2. 紫外线灭菌：紫外线具有杀菌作用，其机理是破坏微生物的DNA结构，使其失去繁殖能力。

3. 灼烧灭菌：将微生物的载体（如接种环、培养皿等）直接在火焰中灼烧，使其死亡。

三、实验器材与试剂1. 实验器材：高压蒸汽灭菌锅、紫外线灯、酒精灯、接种环、培养皿、计时器等。

2. 试剂：牛肉膏蛋白胨培养基、大肠杆菌标准菌株、金黄色葡萄球菌标准菌株等。

四、实验步骤1. 高压蒸汽灭菌（1）将待灭菌的培养基或器皿放入高压蒸汽灭菌锅中。

（2）关闭灭菌锅盖，打开蒸汽阀，使锅内压力升至1.05MPa。

（3）保持压力1.05MPa，持续灭菌30分钟。

（4）关闭蒸汽阀，待压力降至0.05MPa以下，打开灭菌锅盖，取出灭菌物品。

2. 紫外线灭菌（1）将待灭菌的培养基或器皿放在紫外线灯下。

（2）打开紫外线灯，保持距离30cm，照射时间60分钟。

（3）关闭紫外线灯，待其自然冷却至室温。

3. 灼烧灭菌（1）将待灭菌的接种环或培养皿放在酒精灯外火焰上。

（2）灼烧至无火星，冷却至室温。

五、实验结果与分析1. 高压蒸汽灭菌（1）灭菌后，培养基表面无菌落生长。

（2）将灭菌后的培养基接种到大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的培养基上，培养24小时，观察结果。

（3）结果显示，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均未生长，证明高压蒸汽灭菌效果良好。

2. 紫外线灭菌（1）灭菌后，培养基表面无菌落生长。

（2）将灭菌后的培养基接种到大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的培养基上，培养24小时，观察结果。