生化分析仪-光电比色篇

第二章 光电比色计第一节 比色分析比色分析是基于溶液对光的选择性吸收而建立起来的一种分析方法，又称吸光光度法。

有色物质溶液的颜色与其浓度有关。

溶液的浓度越大，颜色越深。

利用光学比较溶液颜色的深度，可以测定溶液的浓度。

根据吸收光的波长范围不同以及所使用的仪器精密程度，可分为光电比色法和分光光度法等。

比色分析具有简单、快速、灵敏度高等特点，广泛应用于微量组分的测定。

通常测定含量在6-1～6-4mg/l 的痕量组分。

比色分析如同其他仪器分析一样，也具有相对误差较大（一般为1%～5%）的缺点。

但对于微量组分测定来说，由于绝对误差很小，测定结果也是令人满意的。

在现代仪器分析中，有60%左右采用或部分采用了这种分析方法。

在医学学科中，比色分析也被广泛应用于药物分析、卫生分析、生化分析等方面。

一、朗伯-比尔（Lambert-Beer ）定律溶液颜色的深浅与浓度之间的数量关系可以用朗伯-比耳定律来描述。

当一束平行单色光（只有一种波长的光）照射有色溶液时，光的一部分被吸收，一部分透过溶液（图2-1-1）。

设入射光的强度为I 0，溶液的浓度为c ，液层的厚度为b ，透射光强度为I ，则II 0lg =Kcb 式中II 0lg 表示光线透过溶液时被吸收的程度，一般称为吸光度（A ）或消光度（E ）。

因此，上式又可写为：A=Kcb上式为朗伯-比尔定律的数学表示式。

它表示一束单色光通过溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度和液层厚度的乘积成正比。

式中，K 为吸光系数，当溶液浓度c 和液层厚度b 的数值均为1时，A=K ，即吸光系数在数值上等于c 和b 均为1时溶液的吸光度。

对于同一物质和一定波长的入射光而言，它是一个常数。

比色法中常把0I I 称为透光度，用T 表示，透光度和吸光度的关系如下： A ＝II 0lg ＝T 1lg ＝－lg T 当c 以mol·L -1为单位时，吸光系数称为摩尔吸光系数，用ε表示，其单位是L·mol -1·cm -1。

光电比色计校准方法说明书一、引言光电比色计是一种常用的科学实验仪器，广泛应用于化学、生物、制药等领域。

为了确保准确测量样品的光谱吸光度值，我们需要进行光电比色计的校准。

本文将详细介绍光电比色计的校准方法，以确保实验结果的准确性和可靠性。

二、校准前准备1. 检查设备：确保光电比色计及其配件完好无损，并清洁仪器表面。

2. 准备标准溶液：选择合适的标准溶液，如铜离子溶液，浓度应在光电比色计检测范围内。

三、校准步骤1. 装载溶液：使用干净的容器，将标准溶液倒入光电比色计样品池中。

确保溶液充满样品池，但不得溢出。

2. 调整波长：根据实验需要，使用仪器上的波长选择器调整到所需波长，确保准确的测量目标。

3. 零点校准：按下零点校准按钮，等待一段时间使仪器自动将当前波长下的吸光度值归零。

记下校准后的吸光度值。

4. 透射校准：将标准溶液从样品池中移除，确保样品池干净。

按下透射校准按钮，等待一段时间使仪器自动将当前波长下的吸光度值设为100%透射率。

记下校准后的吸光度值。

5. 校准曲线绘制：选择几个不同浓度的标准溶液，按照上述步骤进行校准。

得到一系列吸光度值与溶液浓度的对应关系。

利用这些数据绘制校准曲线，以便后续样品吸光度值的定量测量。

四、校准结果分析1. 校准曲线的斜率：通过校准曲线的斜率可以推断出溶液浓度与吸光度值的关系。

斜率越大，吸光度值对溶液浓度的变化越敏感。

2. 校准曲线的回归系数：回归系数反映了校准曲线与实验数据的拟合程度。

回归系数越接近1，表示数据与校准曲线的拟合度越好，结果越可靠。

3. 校准误差：计算样品测量值与校准曲线的偏离程度，可评估校准结果的准确性。

校准误差越小，表示校准的准确性越高。

五、校准注意事项1. 定期校准：根据实验需要和仪器要求，定期进行光电比色计的校准，并记录校准结果。

2. 标准溶液存储：标准溶液要储存在密封的容器中，避免受到光、热和空气中的污染。

3. 清洁样品池：校准前后要清洁样品池，避免残留物对校准结果的影响。

光电比色计的使用及溶液浓度的测量许多物质的溶液是有颜色的，有些物质的溶液本身没有颜色，但可以通过某些试剂的作用而生成有色化合物。

这些溶液具有一个共同的特点，即当其浓度改变时，溶液颜色的深浅也随之改变，溶液愈浓，颜色就愈深。

因此，可以用比较溶液颜色深浅来测定溶液中有色物质的含量，这种基于比较颜色深浅的分析方法称为比色分析，又称吸光光度法。

比色分析具有简单、快速、灵敏度高等特点，广泛应用于微量组分的测定，通常测定 含量在10-1—10-4mg ／L 的痕量组分。

特别是近年来采用了新的特效有机显色剂和络合掩蔽剂，可以经分离而直接进行比色测定。

比色分析如同其他仪器分析一样，也具有相对误差较大(一般为1％—5％)的缺点。

但对于微量组分测定来说，由于绝对误差很小，测定结果也是令人满意的。

在现代仪器分析中，有60％左右采用或部分采用了这种分析方法。

在医学学科中，比色分析也被广泛应用于药物分析、卫生分析、生化分析、冶炼地质勘测中的物质分析、环境污染中的水质分析等方面。

【实验目的】1． 了解光电比色计的构造，掌握其原理和使用方法。

2． 熟练掌握用光电比色计测量未知溶液浓度的方法。

【实验仪器】582-S 光电比色计(含比色皿四个)、滤色片(三个)、已知浓度的标准溶液、待测溶液、蒸馏水 【实验原理】比色法是化学分析方法的一种，基原理是基于被测定物质溶液的颜色或加入显色剂后生成的有色溶液，其颜色强度和物质含量成比例。

溶液中的物质在光的照射激发下，产生对光的吸收效应。

因此，根据光被有色溶液吸收的强度，可测出溶液内物质的含量的多少。

1．朗伯－比尔定律当单色光通过厚度相同，而浓度很小的溶液时，光能量减弱的程度和物质的浓度满足朗伯－比尔定律。

当一束平行单色光(只有一种波长的光)照射有色溶液时，光的一部分被吸收，一部分透过溶液(如图1所示)。

设入射光的强度为0I ，溶液的浓度为C ，液层的厚度为b ，透射光强度为I ，则KCb II =010log (1) 式中II 010log 表示光线透过溶液时被吸收的程度，一般称为吸光度(A )或消光度(E )，因此上式可以写成KCb A = (2)K 称为吸光系数，它表示有色溶液在单位浓度和单位厚度时的吸光度。

光电比色原理光电比色是一种利用光电二极管或光电倍增管等光电探测器测量样品溶液吸收光强度的方法。

它是通过比较样品和参比液对同一光源的吸收情况，来确定样品中某种物质的含量。

光电比色法是一种非常重要的分析方法，广泛应用于化学、生物、环境等领域。

在光电比色法中，我们首先需要了解光的基本性质。

光是一种电磁波，它在空间中传播时具有一定的波长和频率。

当光线照射到物质表面时，会发生吸收、反射、透射等现象。

而在溶液中，溶质会吸收特定波长的光，这就是光谱吸收现象。

光电比色法利用了这一原理来进行定量分析。

光电比色法的基本原理是，将待测样品和参比液置于两个光学池中，分别通过光源照射。

样品和参比液吸收特定波长的光后，光电探测器会将光信号转换为电信号，经过放大和处理后，最终转化为测量值。

通过测量样品和参比液的吸光度差异，可以计算出样品中特定物质的浓度。

在实际操作中，我们需要注意一些关键因素。

首先是选择合适的光源和光学池，以保证光路的稳定性和精确度。

其次是选择合适的光电探测器，不同的物质对光的吸收特性不同，需要选择对应的探测器。

另外，还需要进行光路校准和零点校正，以消除仪器本身的误差。

最后，还需要注意样品制备和操作的一致性，以保证实验结果的准确性和可重复性。

光电比色法具有操作简便、灵敏度高、准确性好等优点，因此在实际应用中得到了广泛的推广和应用。

它被广泛应用于水质分析、环境监测、生物医药、食品安全等领域。

例如，在水质分析中，可以利用光电比色法对水中的重金属离子、有机物质等进行快速、准确的检测。

在食品安全领域，也可以利用光电比色法对食品中的添加剂、农药残留等进行定量分析。

总的来说，光电比色法是一种重要的分析方法，它利用光的基本性质和光电探测器的灵敏度，能够对样品中特定物质的含量进行快速、准确的测量。

在未来的发展中，随着光电技术的不断进步和创新，光电比色法将会得到更广泛的应用，为化学、生物、环境等领域的分析提供更多的可能性。

光电比色计操作规程光电比色计是一种常见的光学仪器，常用于测定样品中某种化学物质的浓度。

在进行光电比色计测量之前，需要先准备好各种材料和仪器，并按照一定的操作规程进行操作，以确保测量的准确性和可靠性。

下面，我们将详细介绍光电比色计的操作规程。

一、光电比色计的准备工作1.准备样品：将需要测定浓度的样品取出适量，称取到称量皿中，注明样品编号和浓度。

2.准备试剂：按照所需试剂比例精确称取试剂。

注意，用水或其他溶剂将试剂溶解，并保持溶液的纯净。

3.准备比色杯：取足够数量的比色杯，用纯净水洗净，并保证干燥无水迹。

4.光电比色计参数设置：根据测量需要，对光电比色计进行参数设置，包括样本池深度、波长选择、校正、显示模式等。

二、样品加药量的选择根据不同的样品需要选择不同的加药量。

通常，需要进行初步研究和实验确定最适宜的加样量，以确保测量结果的准确性。

三、光电比色计操作流程1.打开仪器电源，按照仪器操作手册上的说明进行预热操作，以稳定仪器的性能。

2.将样品移动到光电比色计的样本池中。

如果需要对样品进行配对比对，则在操作前先进行确定。

3.准备试剂，将其加入样品池中，并用移液管或者自动分液器进行混合。

4.按照所需方法选择波长和计量单位，并开始测量。

5.在测量过程中，需要对样品和试剂进行密切的观察和监测，以确保测量结果的准确性。

6.将测试结果记录下来，并进行计算处理，得出浓度或容量等参数。

7.在测量结束后，关闭仪器电源并按照仪器的使用手册进行清洁和维护工作。

四、光电比色计操作注意事项1.在进行操作前一定要根据用户手册的要求，对光电比色计进行仔细检查和维护。

2.根据样品的需求选择适当的波长和计量单位，以确保测量的准确性和可靠性。

3.要严格遵守试剂的配制比例，确保药剂的严格准确性和质量。

4.将样品和试剂均匀混合后，静置一段时间以让材料充分反应。

5.光电比色计使用过程中注意安全，防止误操作和材料波动。

通过上述的光电比色计操作规程，我们可以有效地进行光电比色计的测量，从而得到准确的样品浓度和参数值，并为我们的工作和生活提供必要的科学参考。

实验五光电比色计测定液体的浓度一、概述：许多物质的溶液是有颜色的，而有些物质的溶液本身没有颜色，但可以通过与某些试剂的作用而生成有色化合物。

这些溶液具有一个共同的特点，即当其浓度改变时，溶液颜色的深浅也随之改变，溶液愈浓，颜色就愈深。

因此，可以用比较溶液颜色深浅来测定溶液中有色物质的含量，这种基于比较颜色深浅的分析方法称比色分析。

比色分析与重量分析和容量分析相比具有如下特点；比色法具有较高的灵敏度。

因此，比色分析特别适用于对微量组分的测定；比色分析测定手续简便，快速，所用仪器相当简单。

特别是近年来采用了新的特效有机显色剂和络合掩蔽剂，可以经分离而直接进行比色测定。

581－S 光电比色计可以测量各种物质在可见光区域内的吸收光谱，从而对物质的成份进行定性和定量的分析，该仪器广泛应用于下述领域：1、冶炼、地质勘测中的物质分析；2、医疗卫生临床化验；3、环境污染中的水质分析；4、农业科学研究中的土壤成份分析：5、钢铁工业中的炉前快速分析。

二、原理：比色法是化学分析方法的一种，其原理是基于被测定物质溶液的颜色或加入显色剂后所生成的有色溶液，其颜色强度和物质含量成比例。

溶液中的物质在光的照射激发下，产生对光吸收的效应。

因此，根据光被有色溶液吸收的强度，即可测出溶液内物质含量的多少。

光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，符合比色原理——比尔定律：T ＝P／P(1/T)=abcLog10A=abcT——透光率、P0——入射光、P———透过光、A———吸光度、a——吸光系数、b——光径c——溶液浓度从上式中可以看出，当入射光，吸光系数和溶液厚度不变时，透光率是依据溶液的浓度而变化，同时根据比尔定律，溶液的浓度 c 对吸光率 A(即消光度 E)的变化是成线性关系的。

三、仪器结构581－S 光电比色计的外形如下图所示：图 5 581－3 光电比色计图中：1——显示器， 2——T 选择开关，3——A 选择开关，4——C 选择开关，5——T 粗调节钮，6——T 细调节钮 7——A 调零钮， 8——C 校正钮， 9——比色皿座 10——比色皿盖， 11——滤色片该仪器由光源、单色器、样品室、光电二极管、微电流放大器、对数放大器、数字电压表等部件组成。

生化分析仪的操作与注意事项分析仪操作规程生化分析仪又常被称为生化仪，是接受光电比色原理来测量体液中某种特定化学成分的仪器。

由于其测量速度快、精准性高、消耗试剂量小，现已在各级医院、防疫站、计划生育服务站得到广泛使用。

搭配使用可大大提高常规生化检验的效率及收益。

操作流程一、采血1、采血前需空腹8—12小时。

2、采血量为2—5ml。

二、离心1、机器通电，打开“开关按钮”开机。

2、打开离心机盖，将血液配平对称放入离心机内。

3、将转速设置为“3000r/min”，离心时间设置为“5—10min”。

4、按“开始”键，开始离心。

5、离心完毕后，取上层血清。

三、配置试剂1、配置工作液：将R1：R2=10:1配好后，混匀。

2、加样3、充分混匀后，放到恒温水浴箱内（37℃）。

4、水浴15分钟后，上机检测。

四、检测注意事项（1）主机电源打开时，非授权维护和修理人员切勿打开仪器上部、后盖和侧盖。

（2）如有液体进入系统内部或系统漏液，请立刻关闭电源，并适时科华公司用户服务部门。

液体使用不当会造成电击不安全，并导致机器的损害。

（3）请勿在仪器四周使用可燃性不安全物，否则可能引发燃烧和爆炸。

（4）比色灯的更换应当由科华公司授权的专业人员进行，在更换比色灯以前，务必先关闭电源开关并等待充分长（至少5分钟）的时间直到比色灯冷却下来。

在灯未冷却前，切勿接触以免被灼伤。

（5）在仪器工作时，切勿接触仪器上的运动部件。

包括样品针、试剂针、搅拌棒、清洗臂。

（6）在仪器运行测试过程中，除急诊插入和样本追加之外，禁止打开仪器上盖。

摆放样品必需在样品盘安全指示灯亮时进行。

（7）试剂、样本、质控品、标准液等物质是受污染条例和排放标准管制的。

请遵守当地排放条例并咨询有关试剂生产商或批发商。

（8）不要直接用手接触样品、废液。

操作时务必戴上手套以防止受到传染。

假如样品接触到皮肤，请立刻依照使用者工作标准或咨询有关医生来实行补救措施。

（9）一些试剂具有强酸性或强碱性。