鉴别大肠杆菌的方法

大肠菌群及检验

一、大肠菌群介绍

大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。

大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。

大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。

大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。 二、大肠菌群检验方法：

由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，即：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。

目前国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准和原国家商检局制订的行业标准。两个标准方法在检测程序上略有不同。

（一）国家标准：国家标准采用三步法，即：乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。

乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。

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水中大肠杆菌群检测方法－多管发酵法

NIEA E201.54B

一、 方法概要

本方法系用以检测水中革兰氏染色阴性，不产生内生孢子之杆状好氧或兼性厌氧菌，且能在35 ±

1 ℃、48 ± 3小时发酵乳糖并产生酸及气体之大肠杆菌群（Coliform group）；在不同体积或不同稀释度之水样所产生之结果，以「100 mL水中最大可能数（MPN/100 mL）」表示 100 mL水中存在之大肠杆菌群数目。

二、 适用范围

本方法适用地面水体、地下水体、废水、污水及水源水质水样中大肠杆菌群之检验。

三、 干扰

(一) 水样中含有抑制或促进大肠杆菌群细菌生长之物质。

(二) 检测使用的玻璃器皿及设备含有抑制或促进大肠杆菌群细菌生长的物质。

四、 设备

(一) 量筒：100至1000 mL之量筒。

(二) 吸管：有0.1刻度之10 mL灭菌玻璃吸管或市售无菌塑料吸管，或无菌微量吸管（micropipet）。

(三) 试管：大小约150 × 15 mm之试管或有盖螺旋试管。

(四) 发酵管（fermentation tube）：大小约22 × 9 mm之玻璃管。

(五) 稀释瓶：容量约100 mL可灭菌之硼硅玻璃制品。

(六) 锥形瓶：200至2000 mL之可灭菌硼硅玻璃制品。

(七) 采样容器：容量120 mL以上无菌之硼硅玻璃瓶或无菌塑料有盖容器，或市售无菌袋。

(八) 冰箱：温度能保持在4 ± 2℃者。

(九) 天平：待测物重量大于2 g时，须能精秤至0.01 g；待测物重量不大于2 g时，须能精秤至0.001 g。

(十) 培养箱：温度能保持在35 ± 1℃者。 word完美格式

精心整理 学习帮手 (十一) 高压灭菌釜：温度能维持在 121℃（压力约15 lb/in2 或 1.1 Kg/cm2）灭菌15分钟以上者。

一、实验目的

1. 了解肠道细菌的生理生化特性。

2. 掌握肠道细菌生化实验的基本原理和方法。

3. 通过实验，鉴别肠道细菌的种类。

二、实验原理

肠道细菌生化实验是通过观察细菌对特定底物的代谢反应，如糖类、蛋白质、脂肪等的分解能力，以及产生某些特定代谢产物的能力，来鉴别细菌种类的一种方法。实验中常用的生化反应包括糖发酵实验、吲哚试验、甲基红试验、V-P试验等。

三、实验材料

1. 菌种：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌等。

2. 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、吲哚试剂、甲基红试剂、V-P试剂等。

3. 仪器：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液枪、滴管等。

四、实验方法

1. 糖发酵实验：将待测菌接种于糖发酵培养基中，37℃恒温培养24小时，观察菌落周围是否出现红色圈，红色圈表示该菌能够发酵该糖类。

2. 吲哚试验：将待测菌接种于蛋白胨水培养基中，37℃恒温培养24小时，加入吲哚试剂，观察是否产生红色沉淀。

3. 甲基红试验：将待测菌接种于蛋白胨水培养基中，37℃恒温培养24小时，加入甲基红试剂，观察培养基颜色变化。

4. V-P试验：将待测菌接种于V-P试剂中，37℃恒温培养24小时，观察是否产生红色沉淀。

五、实验结果与分析

1. 糖发酵实验：大肠杆菌发酵葡萄糖，产酸产气；产气肠杆菌发酵乳糖，产酸产气；普通变形杆菌发酵葡萄糖，产酸产气；枯草芽孢杆菌不发酵葡萄糖。 2. 吲哚试验：大肠杆菌产生吲哚，呈阳性；产气肠杆菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌不产生吲哚，呈阴性。

3. 甲基红试验：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌均呈阴性。

4. V-P试验：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌均呈阴性。

根据实验结果，可以初步判断待测菌为大肠杆菌。

六、实验结论

通过肠道细菌生化实验，我们掌握了肠道细菌生化实验的基本原理和方法，成功鉴别了待测菌为大肠杆菌。实验结果表明，肠道细菌的生理生化特性与其种类密切相关，为临床诊断和科研工作提供了有力支持。

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大肠杆菌的基本知识概述

作者：肖安庆

来源：《中学生物学》2010年第11期

大肠杆菌是重要的模式生物,在高中生物学中有.多处知识涉及到,如原核生物的基本结构与分裂、T2’噬菌体侵染细菌实验、基因工程常见运载体、大肠杆菌的鉴定、微生物的酶合成调节等。这些知识涉及点多,分布零散,缺乏系统性,下面就大肠杆菌的基本知识作简要概述。

1 认识大肠杆菌的基本历程

大肠杆菌是大肠埃希氏菌的俗称,属肠杆菌科埃希氏菌属,1885年埃舍利希氏首次发现。在相当长的时间内,人们一直把它当作正常肠道菌群的组成部分,认为是非致病菌。直到20世纪中叶,才认识到一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有病原性,尤其对婴儿和幼禽,常引起严重腹泻和败血症。根据不同的生物学特性,将致病性大肠杆菌分为5类:致病性大肠杆菌(EPEC)、肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、肠出血性大肠杆菌(EHEC)、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、肠黏附性大肠杆菌(EAEC)。

2 大肠杆菌的基本结构

2.1 细胞壁

大肠杆菌的细胞壁厚约11μm,分外膜和肽聚糖层。外膜是大肠杆菌细胞壁的主要成分,占细胞壁干重80%,位于肽聚糖层的外侧,主要由磷脂、蛋白质和脂多糖组成。脂多糖是革兰氏阴性细菌的内毒素,也是革兰氏阴性细菌细胞壁的特有成分,主要与抗原性、致病性及对噬菌体的敏感性有关。肽聚糖层由1—2层网状的肽聚糖组成,占细胞壁干重的10%,是细菌特有的成分,由聚糖链、短肽和肽桥三部分组成。由,脂蛋白将外膜和肽聚糖层连接起来,从而使大肠杆菌的细胞壁形成一个整体结构。

2.2 细胞膜 龙源期刊网

大肠杆菌的细胞膜与其他生物细胞膜的结构相似,但上面的蛋白质含量高、种类多,具有选择透性,可控制营养物质进出细胞。大肠杆菌的细胞膜含有丰富的酶系,是大肠杆菌的能量转化的场所,参与细胞壁的合成。