第３ ８卷 第９期 ２ ０ １ １年９月 湖南大学学报（自然科学版） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｕｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ） Ｖｏｌ｜３８．Ｎｏ．９ Ｓｅｐ．２ ０ １ １
文章编号：１６７４—２９７４（２０１１）０９—００７５—０４
利用稻草液体发酵产纤维素酶及酶粉提取的研究
谭 宏，刘选明 ，盛培科，廖胜辉，黄小峰，何 迪
（湖南大学生物学院，湖南长沙４１００８２）
摘 要：利用摇瓶确定的优化培养基配方和产酶条件，在３０ Ｌ罐中研究了里氏木霉
ＨＣ一４１５茵利用稻草液体发酵产纤维素酶发酵液ｐＨ值、纤维素酶活性等随时间变化的动态
规律，研究了发酵液纤维素酶的提取及得率等．所得未脱盐冻干纤维素酶粉ＣＭＣ酶活性平
均为３５５．０ ＩＵ／ｇ，ＦＰＡ平均为４４．３ ＩＵ／ｇ．相对发酵液得率平均为１６．Ｏ０ ｇ／Ｉ ．酶粉对发酵
液ＣＭＣ酶活性平均得率为７７．１６ ，ＦＰＡ酶活性平均得率为５８．１Ｏ％．
关键词：纤维素酶；里氏木霉；液体发酵；提取；稻草
中图分类号：Ｑ８１４．１ 文献标识码：Ａ
Ｃｅｌｌｕｌａｓｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｓｔｒａｗ
ＴＡＮ Ｈｏｎｇ，Ｉ ＩＵ Ｘｕａｎ－ｍｉｎｇ ，ＳＨＥＮＧ Ｐｅｉ－ｋｅ，ＩｄＡＯ Ｓｈｅｎｇ－ｈｕｉ，ＨＵＡＮＧ Ｘｉａｏ－ｆｅｎｇ，ＨＥ Ｄｉ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｎａｎ Ｕｎｉｖ，Ｃｈａｎｇｓｈａ，Ｈｕｎａｎ ４１００８２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｂｙ Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ ＨＣ一４ １ ５ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ Ｓｈａｋｅ—ｆｌａｓｋ ｏｒ—
ｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔｓ １ ａｎｄ ２ ａｎｄ Ｓｈａｋｅ—ｆｌａｓｋ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ一２ ｔｅｓｔ，ｗｈｉｃｈ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｔｈｅ ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ
第５１卷第５期 ２０１２年９月 中山大学学报（自然科学版） ＡＣＴＡ ＳＣＩＥＮＴＩＡＲＵＭ ＮＡＴＵＲＡＬＩＵＭ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＡＴＩＳ ＳＵＮＹＡＴＳＥＮＩ Ｖｏ１．５１ Ｎｏ．５ Ｓｅｐ． ２０１２
一株产纤维素酶细菌的分离鉴定及其酶学特性研究
邓先余 ，邹谋勇 ，黄志坚 ，易 俗 ＇
（１．湖南科技大学生命科学学院，湖南湘潭４１１２０１； ２．中山大学生命科学学院，广东广州５１０２７５）
摘 要：采用ＣＭＣ平板筛选和刚果红染色等方法，从湖南科技大学校园腐烂木芙蓉根部土壤中分离１株产纤 维素酶菌株ＣＸＢ００１，经生理生化测试、１６Ｓ ｒＤＮＡ分子进化树分析，鉴定菌株为Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｖｅｌｅｚｅｎｓｉｓ。对该菌株的
生物特性研究表明，其最适生长温度为３７℃，在１０～５０℃，ｐＨ ５．０—１１．０中能生长，在ｐＨ ６．０～９．０，３４～４０ ℃．１．５％～３．５％ＮａＣ１的培养条件下，最适产酶。ＣＸＢ００１所产纤维素酶最适反应温度为５０℃，最适反应ｐＨ 为５．０；在２０℃、ｐＨ ５．０～７．０具有较好的稳定性。ｃｏ 对纤维素酶具有激活作用，Ｍｇ ，Ｆｅ“对纤维素酶具
有抑制作用。
关键词：纤维素酶；Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｖｅｌｅｚｅｎｓｉｓ；１６Ｓ ｒＤＮＡ；酶学特性
中图分类号：Ｑ９３６ 文献标志码：Ａ 文章编号：０５２９—６５７９（２０１２）０５—００９３—０７
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｓｔｒａｉｎ ｏｆ Ｃｅｌｌｕｌａｓｅ－Ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ
Ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｄ Ｉｔｓ Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
ＤＥＮＧ Ｘｉａｎｙｕ ，ＺＯＵ Ｍｏｕｙｏｎｇ ，ＨＵＡＮＧ Ｚｈｉｆｉａｎ ，ＹＩ Ｓｕ ，
（１．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈｕｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｘｉａｎｇｔａｎ ４ １ １ ２０ １，Ｃｈｉｎａ；
第２５卷第４期 ２００６年７月 食品与生物技术学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｅｈｎｏｌｏｇｙ ＶＯ１．２５ ＮＯ．４ Ｊｕ１． ２００６
文章绩号：１６７３－１６８９（２００６）０４－００９７－０４
正交旋转回归试验优化纤维素酶发酵培养基
郝学财ｈ ， 缪静。， 余晓斌¨ ， 周洪ｈ ， 汤蕾ｈ
（１．江南大学生物工程学院，江苏无锡２１４０３６；２．工业生物技术教育部重点实验室，江苏无锡
２１４０３６；３．鲁东大学生命科学学院，山东烟台２６４０２５）
摘要：利用旋转回归法研究里氏木霉ＷＸ－ｌｌ２发酵生产纤维素酶的两个重要因素：微晶纤维素 粉（Ａｖｉｃｅ１）和麸皮对滤纸酶活的影响，并拟合出回归方程。经回归分析表明，培养基中Ａｖｉｃｅｌ、麸
皮的含量及其配比对滤纸酶活有显著影响。通过岭脊分析寻优得出：Ａｖｉｃｅｌ最佳浓度为１．３４ ｇ／ｄＬ、麸皮最佳浓度为３．３５ ｇ／ｄＬ，在此优化条件下滤纸酶活可迭６．５１ Ｕ／ｍＬ。用３Ｏ Ｌ发酵罐进 行放大试验，滤纸酶涪可迭１Ｏ．８４ Ｕ／ｍＬ，ＣＭＣａｓｅ达到４４９．５７ Ｕ／ｍＬ。 关键词：纤维素酶；里氏木霉；岭脊分析；培养基优化
中图分类号：Ｑ ８１５ 文献标识码：Ａ
Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｅｌｌｕｌａｓｅ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｍｅｄｉａ ｂｙ
ｔｈｅ Ｑｕａｄｒａｔｉｃ Ｒｏｔａｒｙ Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ Ｄｅｓｉｇｎ
ＨＡＯ Ｘｕｅ—ｃａｉ ， ＭＩＡＯ Ｊｉｎｇｓ， ＹＵ Ｘｉａｏ－ｂｉｎ。 ， ＺＨＯＵ Ｈｏｎｇ ， ＴＡＮＧ Ｌｅｉ ・。 （１．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｙａｎｇｔｚｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ。Ｗｕｘｉ ２１４０３６。Ｃｈｉｎａ；２．Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ。Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｙａｎｇｔｚｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ。Ｗｕｘｉ ２１４０３６・Ｃｈｉｎａ；３．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ— ｅｎｃｅ，Ｙａｎｔａｉ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ。Ｙａｎｔａｉ ２６４０２５。Ｃｈｉｎａ）
．－——３７８－－—— 江苏农业科学２０１１年第１期 史国翠，尹文新，张 敏．康氏木霉产纤维素酶固态发酵条件的研究［Ｊ］ 江苏农业科学，２０１１（１）：３７８—３８０
康氏木霉产纤维素酶固态发酵条件的研究
史国翠，尹文新，张敏 （延边大学农学院动物科学系，吉林龙井１３３４００） 摘要：以稻草和麸皮为主要原料，通过单因素试验优化康氏木霉固态发酵产纤维素酶的条件，对氮源、接种量、麸 皮含量、含水量、发酵时间、发酵温度和初始ｐＨ值进行了研究。结果表明，最佳发酵条件：培养基氮源为（ＮＨ ）：Ｓ０４、 麸皮添加量为４０％、含水量为２００％；接种量为７％；初始ｐＨ值为５．０；发酵时间为９６ ｈ；发酵温度为３０℃。 关键词：康氏木霉；纤维素酶；固态发酵 中图分类号：ＴＱ９２５ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２—１３０２（２０１１）０ｌ一０３７８—０２ 纤维素是自然界中最广泛的一类碳水化合物，同时也足 地球上数量最多的可再生资源。通过植物的光合作用，地球 上每年合成的植物生物总量约为１×１０“ｔ…，而纤维素大约 占全球植物生物总量的５０％ 。目前，纤维素只有－－ｄ，部分 得到了直接利用，绝大多数不仅被浪费，而且还造成一定程度 的环境污染。利用微生物发酵生产纤维素酶可将纤维素转化 为人类所需的能源、食物和化工原料，对合理利用纤维素生物 资源，克服环境污染，解决食物短缺和能源危机具有重大的现 实意义。纤维素酶是降解纤维素生成葡萄糖的一类酶的总 称，它不是单种酶，而是起协同作用的多组分酶系。如果能利 用纤维素酶将农副产品和工业废料如糠醛渣、蔗糖渣、造纸废 液等纤维素材料转化成糖和蛋白质，就有可能开辟饲料、发酵 工业原料和人类食品的新来源，不仅对传统农业是有力的补 充，而且同时还可以变废为宝、消除公害和保护环境。 １材料与方法 １．１材料 １．１．１・供试菌种与辅料康氏木霉由本课题组筛选获得；稻 草秸秆粉（当地农户提供），粉碎过４０目筛；麸皮（市售）。 １．１．２培养基ＰＤＡ培养基：称取２００ ｇ马铃薯，洗净，去 皮，切成小块，加水１ ０００ ｍＬ，煮沸０．５ ｈ，纱布过滤，再加 ｌ０～２Ｏ ｇ葡萄糖和１７～２０ ｇ琼脂。固体发酵培养基：６０％稻 草、４０％麸皮、０．５％（ＮＨ。）２ＳＯ４、０．３％ＫＨ２ＰＯ４、０．０６％ＣａＣＩ２、 ０．０５％ＭｇＳＯ 、ＦｅＳＯ ・７Ｈ：Ｏ、ＣｏＣ１２、ＺｎＳＯ４・７Ｈ２０、 ＭｎＳＯ ・Ｈ ０。培养基均于１２１℃下灭菌３Ｏ ｍｉｎ。 １．１．３试剂３，５一二硝基水杨酸（ＤＮＳ）溶液：准确称取 ＤＮＳ ６．３ ｇ于５００ ｍＬ大烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，加入 ２ ｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ溶液２６２ ，再加到５００ ｍＬ含有１８５ ｇ酒石 酸钾钠的热水溶液中，再加５ ｇ结晶酚和５ ｇ无水亚硫酸钠， 搅拌溶解，冷却后移入１ ０００ ｍＬ容量瓶中用蒸馏水定容至
