医院细胞遗传室N显带法作业指导书

医院细胞遗传室外周血淋巴细胞建株作业指导书1目的规范外周血淋巴细胞建株操作过程，通过建立永生化大量增殖的类淋巴母细胞系，为保存家族性疾病家系成员特有的基因组资源及临床研究奠定物质基础。

2方法EB病毒转化3原理3.1环孢霉素（CYA是一种能在G0-G1期之间选择性地抑制T淋巴细胞RNA聚合酶II的免疫抑制剂，与EBV同时加入时可有效地阻止T淋巴细胞对EBV的应答反应，防止已转化的B 淋巴细胞受T 淋巴细胞攻击而退化。

3.2EB病毒一般感染B淋巴细胞，通过受体CD21进入宿主细胞后可自行环化以游离体的形式长期存在于宿主细胞体内，形成潜伏感染。

EB病毒潜伏感染人外周血B淋巴细胞后可活化B淋巴细胞，促进静息期的B细胞转化为永生化大量增殖的类淋巴母细胞系（LCL）。

4实验性能4.1EBV转化结果转化培养1 周后，倒置显微镜下观察可见聚集的细胞团块，细胞透明发亮，体积明显增大，细胞外壁有不规则毛刺状突起，即为淋巴母细胞样B细胞；3周后，镜下可见转化细胞克隆明显增多；1 个月以后，细胞增殖旺盛，形成生长密集的大克隆，标志转化成功。

4.2冻存细胞复苏后生长情况分别于冻存10 d 、1 个月、3 个月后进行了复苏，所有冻存后的细胞复苏成功率都为100％，复苏后3d 即可传代培养，镜下观察细胞形态正常，所有细胞株依然保持旺盛的增殖特性，表明成功获得永生细胞株。

4.3细胞生物学特性4.3.1染色体核型分析：采用染色体核型分析技术比较转化后永生细胞与来自同•个体新鲜外周血淋巴细胞染色体的G 带，未发现有任何变异，表明转化后的B 淋巴细胞保留了正常的染色体核型，未发生畸变，即保留了原有细胞的遗传特性。

4.3.2细胞表型分析：转化后的细胞经荧光抗体CD3／CD19。

染色，用流式细胞仪分析，结果100％表达成熟B 淋巴细胞CD19。

5样本类型及受检者准备在无菌条件下采集静脉血3ml（肝素抗凝，空腹为宜），立即送至实验室。

6仪器及耗材离心机，CO2培养箱，离心管(15ml, 50ml), 10ml吸管，电动枪，大中小Tip头及移液枪，25cm2培养瓶，0.22「m 针式过滤器，10ml注射器，冻存液，冻存管。

实验守则一、一般要求1、预习：学生在实验课前应认真预习本实验指导以及教材有关章节，必须对该次实验的目的要求、实验内容、基本原理和操作方法有一定的了解。

2、讲解：教师只对该实验内容的安排及注意事项进行讲解，让学生有充分的时间按实验指导的顺序进行独立的操作和观察。

3、独立操作与观察：实验一般都由学生独立进行，在实验中要按操作程序反复练习，以达到一定的熟练程度。

4、示教：有些实验备有示教。

其目的是帮助学生对某些较难的操作过程和观察材料给予演示，学生建立初步认识后，再独立操作，仔细观察。

5、作业：实验报告必须根据各人的观察，以实事求是和一丝不苟的精神忠实地记录、分析、综合。

不得抄袭教材或其他同学的报告。

实验报告一般应于实验结束时呈交。

它的形式可因实验内容而不同。

6、总结：实验结束后，一般由教师说明该次实验的主要收获及今后应注意的事项。

二、实验室规则和注意事项1、学生上实验课时必须携带教材、实验指导、实验报告纸和文具，进入实验室要求穿好工作服，按规定座位入座。

2、实验开始前要检查所用仪器、材料、实验用品是否完好齐全。

如有缺损及时向带课教师报告，自己不得随意调换仪器和实验用品。

3、实验时要遵守纪律，听从教师指导，保持肃静。

有问题时举手提问，严禁彼此谈笑喧哗或随意走动，也不得进行和实验无关的其他活动。

4、实验时要遵守实验操作规程，严格按照教师的安排和实验指导的要求进行。

操作要正规，观察要认真仔细，边做边看、边想，及时完成实验报告。

5、要爱护仪器、标本和器材设备，注意节约实验材料、试剂和水电。

如损坏了仪器或器材应主动报告，说明情况。

6、实验结束后，应自觉清理实验台面，认真清理好仪器、试剂及其他用品，放回原处。

值日生要负责清扫地面，收拾实验用品，处理垃圾，关好水电、门窗后再离开实验室。

7、实验课不得迟到、早退或无故缺课。

实验一正常人类染色体核型观察及分析一、实验目的1、熟悉人类染色体的数目及形态特征。

2、掌握非显带染色体的核型分析方法。

细胞遗传学实验技术标准操作规程（SOP）细胞遗传学实验技术标准操作规程（SOP）外周⾎培养及染⾊体的识别 (2)⽩⾎病⾻髓及外周⾎染⾊体 (7)外周⾎细胞脆性位点检测技术 (9)⼈⽺⽔细胞培养收获操作程序 (11)绒⽑细胞培养和染⾊体分析 (13)⾼分辨染⾊体操作⽅法和识别 (15)GII式显带法 (21)N式显带法 (21)R(反式)显带法 (23)姐妹染⾊单体互换（SCE）技术 (23)荧光原位杂交操作程序 (25)附:细胞遗传学实验试剂配制标准操作规程（SOP） (27)天平称量操作规程 (27)药匙处理操作规程 (27)PBS配制规程 (28)胰酶配制规程 (28)培养基配制规程 (29)1N HCL配制规程 (29)1N N A OH配制规程 (29)外周⾎培养及染⾊体的识别1. 原理：外周⾎中的淋巴细胞⼏乎都是处在G0期或G1期，⼀般情况下是不分裂的。

当在培养基中加⼊植物⾎凝素（Phytohaemagglutinin PHA）时，这种⼩淋巴细胞受到刺激后转化为淋巴母细胞，并开始进⾏有丝分裂。

经过短期培养后，⽤秋⽔仙素处理就可获得⼤量中期分裂相的细胞，制⽚后可以清楚地对染⾊体进⾏观察与分析。

2. 外周⾎培养与收获操作步骤：2.1 采⾎：⽤20:1肝素（0.4%）温润⽆菌注射器抽取外周⾎5ml（注意：消毒时需脱碘）。

2.2. 种⾎：将注射器搓捏，使⾎样混匀，在⽆菌条件下，⽤7号针头垂直种⾎0.3ml±抗凝⾎（成年男⼦28滴，成年⼥⼦30滴左右，⼉童32滴）⾄外周⾎培养基内。

2.3. 培养：将培养瓶放⼊37℃恒温箱中培养68-72⼩时，注意第⼆观察培养液有⽆凝⾎、溶⾎或长菌的现象，可每天培养液摇⼀摇，以便细胞可获得充分的营养，但⼀般情况下可不摇。

2.4. 制⽚过程：2.4.1. 加秋⽔仙素：在培养完成前2-3⼩时，加⼊浓度为20ug/ml的秋⽔仙素2-3滴（7号针头竖滴）后，继续培养2-3⼩时。

医院细胞遗传室各类仪器设备标准操作规程1目的规范各类仪器的正常使用和保养，延长仪器的使用寿命，确保各结果的准确性。

2仪器使用环境：1）无灰尘、通风环境良好。

2）避免阳光直射。

3）室内温度18～30℃，变化不超过±2℃4）室内湿度2～80%RH。

5）电源电压变化再20V±10V之内，5m内不能有配电器。

3使用仪器程序3.1超净工作台超净工作台是目前实验室内普遍应用的无菌操作装置，在超净工作台内进行无菌操作，可明显地减少细菌污染的机会。

超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气，通过高效空气微粒滤层净化，使操作范围形成无菌环境。

3.2CO2培养箱实验室一般应置备二台 CO2培养箱，将来自同一标本的培养瓶分两线放入不同的培养箱内培养，以保证细胞培养的成功率。

CO2培养箱常见的是隔水式培养箱。

培养的细胞需要一个恒定的温度，过低或过高的环境温度均可导致细胞死亡，因此对培养箱的灵敏度要求在±0.5℃。

此外，一定浓度的CO2也是细胞培养所必需的。

CO2培养箱可恒定地提供细胞所需的CO2（通常是5%）,使培养液的pH值保持稳定，适用于开放性培养。

使用时应注意每三个月定期校正，如有异常应及时调整。

培养箱内空气必须保持清洁，应定期用酒精擦拭消毒，消毒时每层隔板均需洗刷干净，并用75％酒精纱布擦拭。

每周定期更换箱底水盘中的水，以保持相对湿度。

为防污染可在水盘内加入1‰新洁尔灭。

箱内高效空气过滤器堵塞时，指示灯提示后需及时更换3.3烤箱烤箱用于玻璃器皿的烘干和干热灭菌，一般以650mm×500mm×500mm的比较适用。

烤箱都装有鼓风装置，鼓风与升温同时开始。

干热灭菌物品时一般为180℃维持1.5h，灭菌后应待箱内温度下降至80℃时方可开门，以免骤冷而致玻璃器皿损坏。

应注意的是橡皮制品、塑料培养板、有机玻璃制品禁用烤箱灭菌。

3.4恒温水浴锅恒温水浴锅是实验室不可缺少的设备。

医学实验技术操作作业指导书一、实验室安全须知1. 实验室入口处需佩戴实验服、口罩和手套，并确保服装整洁。

2. 切勿在实验室内进食、饮水或吸烟。

3. 遵循实验室内规定的紧急疏散路线和安全出口，确保熟悉火灾和紧急救援的相关事项。

4. 操作前，确保室内的化学药品储存顺序和标签是否清晰可见。

5. 操作时，注意保持实验台整洁，避免杂物堆积。

二、实验器材准备1. 确认所需实验器材是否完整并处于良好状态。

2. 准备所需的试剂和溶液，并按照指定浓度配制。

3. 实验前检查实验仪器和设备的工作状态，确保正常运行。

三、实验步骤1. 实验前进行充分的个人卫生，洗净双手并佩戴手套。

2. 取出所需试剂，并按照实验要求称取或滴取所需量。

3. 开始实验前，先阅读相关实验操作指南，确保操作顺序和步骤的正确性。

4. 按照操作步骤，依次进行实验操作，注意实验时间和温度。

5. 操作期间，保持注意力集中，避免走神或转移注意力。

6. 注意观察实验结果，及时记录数据或变化，并按照实验要求进行分析和解释。

7. 实验完成后，及时清理实验台和器材，将废弃物物品按照规定进行分类和处理。

四、实验安全注意事项1. 禁止单独操作需要两人以上合作或需要特殊设备时的实验项目。

2. 实验过程中如遇特殊情况或意外事故，应立即向导师或实验室负责人报告。

3. 实验结束后，注意关闭仪器设备电源，归位实验工具和器材，保持实验室整洁。

4. 实验结束后，注意检查并关闭所有实验用的液体和气体阀门，确保安全。

五、实验结果记录和分析1. 实验结束后，仔细整理和整合实验记录，保证数据清晰准确。

2. 对于实验结果进行合理分析和解释，提出可能的原因和优化方案。

3. 绘制实验数据曲线、图表或统计表格，以便进一步研究和参考。

六、实验评估和总结1. 对实验过程进行自我评估，包括操作规范性、实验结果准确性等方面。

2. 总结实验的意义和价值，回答实验中的疑问或问题。

3. 就实验中存在的问题提出改进意见或优化建议。

医院细胞遗传室常用实验溶液试剂的配置作业指导书1目的规范试剂的配制，为临床实验的可靠性提供质量保障。

2原则专人负责，一剂一皿，一配一录，双人核签。

定期校对，可溯源。

3性能特征规范试剂的配制，为临床提供准确稳定有效的试剂，减少人为因素对临床试验结果的影响。

4 方法化学实验试剂的配制方法5 试剂与耗材量筒、烧杯、玻棒、电子称、量杯、容量瓶、定容瓶、油纸、药勺、100ul 加样枪、100ul 枪头6 操作步骤6.1 生理盐水准确称取氯化钠（NaCl ）（生产商xxxx, 批号xxxx 有效期xxx）8.5 g,加二蒸水溶解定容至1L,待充分溶解混匀装瓶，贴标签（配置日期、药品名称、浓度、用途、有效期、配制双人），记录双人签名6.2 0.075M 氯化钾溶液氯化钾（KCI）5.587g ,加二蒸水至1000ml,室温保存，用于细胞低渗处理。

6.312X SSC 溶液氯化钠（NaCl）105.3g柠檬酸钠（Na3C6H3O7• 5H2O）52.94g加二蒸水至1000ml，室温保存，临用时用二蒸水稀释至所需浓度。

6.40.25%胰蛋白酶溶液（Trypsin ）胰蛋白酶粉末（1:250）250mg无Ca2+, Mg2+的PBS 加至100ml先用少许消毒的PBS 将胰蛋白酶粉末溶解，再补足PBS 至100ml，搅拌混匀，置4C冰箱4小时，用0.22um微孔滤膜除菌，分装成小瓶于-20 C保存，用于消化细胞。

6.5Giemsa 染色液Giemsa 储备液：配制：Giemsa粉末1g加少许甘油混合研碎宀共计加入甘油66ml，充分混匀-倒入烧杯中在55-60 C水浴中加热2 小时T冷却T加入甲醇66ml，充分混合—在室温中静置2-3 周，过滤贮存于棕色瓶中，可长期使用。

6%Giemsa 工作液：47ml 蒸馏水中加入Giemsa 储备液3ml，用于染色体标本的染色，一般染色时间为10-20分钟。

6.6 无钙镁离子溶液氯化钠（NaCl）8 g氯化钾（KCl ）0.2g柠檬酸三钠（Na3C6H5O7?2H2O）1g 磷酸二氢钠（NaH2PO4?H2O）0.05g 碳酸氢钠（NaHCO 3）1g 葡萄糖1g依次溶于二蒸水，最后加二蒸水至保存于4C冰箱备用。

医院细胞遗传室高分辨染色体的制备与识别作业指导书1目的为获得具有550条带及850条带以上的染色体分裂相，从而以此为依据进行人类染色体高分辨分析。

2实验方法手工显带法3实验原理正常情况下，人外周血中是没有分裂相的，只有在异常情况下才能发现。

植物血球凝集素（PHA）是人类淋巴细胞有丝分裂的刺激剂，在PHA作用下，原处于G0期的淋巴细胞转化为淋巴母细胞，进而进行有丝分裂。

利用PHA这一特性，淋巴细胞经过含有PHA培养液培养，在体外便可获得丰富的生长活跃、含有丝分裂细胞的细胞群，当细胞增殖到一定数量时，加入5-氟尿嘧啶和尿嘧啶核苷从而阻断DNA的合成，将其同步在S期。

17个小时后加入胸腺嘧啶核苷（TDR）释放细胞，使细胞有丝分裂继续，进入分裂期后加入染色体缩短抑制剂溴乙锭（EB），并加入秋水仙胺破坏纺缍丝的形成，最终获得高分辨率染色体。

4性能特征经G显带处理后可见550-850条显带。

5仪器及耗材酒精灯，烧杯，天平，离心机，CO2培养箱，冰盒，载玻片，玻片盒，光学显微镜，灭菌注射器（5ml），离心管，无菌吸管，量筒，培养瓶，试剂瓶等。

6试剂5%的RPMI1640小牛血清培养基5ml；秋水仙素浓度：20μg/ml；低渗液：0.075mol/L的KCl溶液；卡诺固定液（甲醇:乙酸=3:1）；0.25% EDTA-trypsin；生理盐水；10-5M 5FU （五氟尿嘧啶) ；10-4M Uridine（尿嘧啶核苷）；1/15M KH2PO4；10-3M TDR（胸腺嘧啶）；1/15M Na2HPO4；1mg/ml EB （溴化乙锭）；2.5%胰酶；0.4%酚红。

7操作流程7.1细胞培养将0.25-0.3ml外周血入高分辨培养基；培养72小时后，加Frdu和尿嘧啶核苷各100µl；17小时后加TDR100µl；继续培养4小时加EB 50µl；45分钟后加秋水仙胺35µl10分钟后收获。

医院细胞遗传室G-11式显带法作业指导书1目的用于9号染色体次缢痕多态分析、家系调查，亲子鉴定等研究以及9号染色体倒位的细胞遗传学分析。

2实验方法手工显带法3实验原理G11式显带是一种特异性显示9号染色体次缢痕的显带方法，一般用于9号染色体次缢痕多态分析、家系调查，亲子鉴定等研究以及9号染色体倒位的细胞遗传学分析。

4 性能特征显带处理后可见特异性的9号次缢痕。

5 仪器与耗材光学显微镜、恒温水浴箱、染色缸、吸管、计时器、PH 试纸或PH计。

6 试剂蒸馏水、0.1M氢氧化钠、Giemsa染液。

7 操作程序7.1 制片常规外周血法制备的标本。

7.2 G11显带7.2.1 3ml Giemsa原液中加入蒸馏水47ml，混匀，用氢氧化钠调PH至11。

7.2.2 将染色体玻片放入其中染色5分钟左右。

7.2.3 自来水冲洗，干燥。

7.3镜检观察可见9号染色体次缢痕成紫红色。

9参考范围9号长臂次缢痕显紫色。

10注意事项10.1染色体玻片片龄一般不要超过一周，且在显带之前最好再次75℃烤片5分钟。

10.2 pH值为11是显带成功的关键10.3染色时间可先摸索，如整个背景为蓝色、次缢痕未出现，可相应地延长染色时间；如整个背景为紫红色、次缢痕不明显则可相应地缩短染色时间。

11环境和安全控制11.1试剂中含有防腐剂和稳定剂,请勿直接接触皮肤、眼睛、黏膜，一旦接触，立即用大量清水冲洗。

11.2受检标本均应假定含有传染性病原菌，其废弃过程应遵循实验室《生物安全管理程序》进行处理。

11.3实验过程中应严格控制环境及实验仪器/设备的温度、湿度等相关条件，以确保实验条件稳定。

医院细胞遗传室绒毛细胞培养及染色体制备作业指导书1目的规范绒毛细胞培养与染色体制备（胶原酶法）过程，为临床绒毛细胞染色体核型分析可靠性提供质量保证。

2测定方法CO2培养/手工收获3测定原理绒毛细胞由受精卵发育分化的滋养层细胞及绒毛间质中的胚外中胚层细胞组成，绒毛细胞与胎儿组织同源，通过绒毛检测，可客观反映胎儿情况。

绒毛既可以直接制片进行染色体的观察，也可以经培养制备染色体，进行产前诊断。

4性能特征经G显带处理后可见300-550条显带。

5样本类型及受检者准备在超声引导下，无菌操作吸取孕7-9周孕妇绒毛组织，注入15ml一次性离心管中，立即送检。

6仪器与耗材酒精灯，烧杯，天平，离心机，恒温培养箱，载玻片，玻片盒，光学显微镜，灭菌注射器（5ml），无菌离心管，无菌吸管，量筒，培养瓶，试剂瓶，眼科镊，眼科剪，35mm2一次性平皿等。

7试剂7.1 100ml完全培养基：在超净工作台内，用移液管将培养基和其他各试剂分装入100毫升无菌瓶中（商业培养基或F10培养基70ml，进口胎牛血清30ml，用3.5%碳酸氢钠调节pH 为7.2-7.4）7.2胶原酶Ⅱ：在超净工作台内，用注射器吸取100mlD-hanks 液于无菌容器中，加入一支胶原酶Ⅱ粉末100mg，充分混匀溶解，终浓度为200U/ml(约为1mg/ml),过滤分装成1ml/管，置-20℃冰箱保存。

7.3秋水仙素浓度：20μg/ml7.4低渗液：0.075mol/L的KCl溶液7.5卡诺固定液7.6 0.25% EDTA-trypsin7.7双抗：青霉素和链霉素，终浓度为100U/ml，7.8 1×PBS或生理盐水7.9 D-hanks液8仪器与耗材酒精灯，烧杯，天平，离心机，恒温培养箱，载玻片，玻片盒，光学显微镜，灭菌注射器（5ml），无菌离心管，无菌吸管，量筒，培养瓶，试剂瓶，眼科镊，眼科剪，35mm2一次性平皿等。

9操作步骤9.1标本处理和细胞培养9.1.1取3个平皿编号1、2、3号，分别加入10ml 1×PBS，再依次加入500U/ml、300U/ml、100U/ml的双抗（含1万u 氨苄青霉素+硫酸链霉素），轻摇混匀。

医学遗传学实验室技能项操作医学遗传学实验室技能操作医学遗传学是指运用实验室技术和遗传学原理，对人类遗传疾病进行的研究和临床应用。

医学遗传学实验室技能操作是指在实验室进行的关于人类基因的分析和检测的技术操作。

在医学遗传学实验室中，技能操作是至关重要的一部分，因为它对人类基因的分析和检测结果质量有着直接的影响。

本文将重点介绍医学遗传学实验室技能操作。

一、实验室技能操作的重要性医学遗传学实验室技能操作是保证分析和检测结果精准和可靠性的关键环节。

良好的实验室技能操作是医学遗传学实验室分析和检测质量、实验结果准确度和可重复性的基础。

优秀的实验室技能操作不仅可以节省实验时间和成本，而且大大提高实验室质量标准。

此外，良好的实验室技能操作还可以防止实验室流程的错误、减少分析误差和样品污染，从而提高结果的准确性和可靠性。

二、技能操作内容1. 样品的处理和收集在医学遗传学实验室中，样品的处理和收集是一项重要的技能操作。

样品的质量直接影响分析的结果。

因此，在进行样品处理和收集之前，必须仔细阅读样品的处理和收集方法，并遵循严格的实验室标准对样品进行处理和存储。

2. 分子生物学技术PCR扩增技术、楼梯PCR、荧光PCR、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)等技术是在医学遗传学实验室中常用的分子生物学技术。

这些技术操作比较复杂，需要专业技术和严密操作，以确保最小的误差，并保证最终结果的准确性。

3. 基因测序和分析基因测序和分析是医学遗传学实验室中最常用的技术之一。

目前，常用的基因测序技术包括Sanger测序、高通量测序和单分子测序等。

对于一些遗传疾病的诊断和治疗研究，基因分析是必不可缺的环节。

对于基因测序数据的准确读取和分析，需要专业人员进行组装、调整、注释和分析等过程，确保准确性。

4. 细胞培养和分析在一些研究中，如细胞凋亡的研究、DNA损伤和修复的研究、基因的功能研究等，需要细胞培养和细胞分析技术。

细胞培养技术包括细胞冻存、细胞的传代、细胞的培养、细胞的染色体诱导等操作步骤。

医院细胞遗传室人胚肾、肺细胞培养及染色体制备作业指导书1目的规范人胚肾、肺细胞培养与染色体制备过程，为临床人胚肾、肺细胞染色体核型分析可靠性提供质量保证。

2测定方法CO2培养/手工收获3测定原理通过对流产胚胎的肾、肺细胞培养可获得大量的细胞，再用秋水仙素处理就可获得大量中期分裂相的细胞，制片后可以清楚地对染色体进行观察。

4性能特征经G显带处理后可见300-550条显带。

5仪器与耗材酒精灯，烧杯，天平，离心机，恒温培养箱，冰盒，载玻片，玻片盒，光学显微镜，灭菌注射器（5ml），离心管，无菌吸管，量筒，培养瓶，试剂瓶，眼科镊，眼科剪，35mm 一次性平皿，50ml一次性离心管等。

6实验试剂6.1100ml完全培养基：在超净工作台内，用移液管将培养基和其他各试剂分装入100毫升无菌瓶中（高糖DMEM培养基90ml，小牛血清10ml，双抗：青霉素和链霉素，终浓度为100U/ml，用3.5%碳酸氢钠调节pH为7.2-7.4）6.2秋水仙素浓度：20μg/ml6.3低渗液：0.075mol/L的KCl溶液6.4卡诺固定液6.20.25% EDTA-trypsin6.6生理盐水7操作程序7.1标本处理和细胞培养7.1.1在无菌操作下，取新鲜组织保存在装有DMEM的培养基的试剂瓶中。

7.1.2入接种培养室，将组织移入一次性平皿中，加入PBS （含双抗400U/ml）15ml冲洗一次。

7.1.3将组织移入另外第二个一次性平皿中，加入PBS（含双抗200U/ml）15ml冲洗一次。

7.1.4将组织入另一个一次性平皿中，加入PBS（含双抗100U/ml）15ml冲洗一次。

7.1.5取出肾、肝、肺组织，将其剪成5mm3碎块放入装有30-50倍组织量的0.25% EDTA-trypsin的50ml一次性离心管中，37℃下,20-30min即可。

7.1.6将50ml一次性离心管中的组织溶液装入离心管，离心，1000rpm，10min。

细胞遗传室⼯作⼿册SOP第⼀章设备与器械1⽬的规范实验室⽤房，确保实验室⼯作和业务⽤房的正常需要，以促进科室的发展，确保各项⼯作顺利进⾏。

2实验室⽤房规范与要求细胞遗传学实验室⼀般分为洗涤室、培养室、细胞学处理室、阅⽚室、暗室、档案室。

其要求⼀般与其他普通实验室的要求基本相同:1.便于所有器具的清洗。

2.便于准备消毒及各种试剂的保藏。

3.便于使⽤各种⽅法检测待检标本，进⾏细胞遗传学⽅⾯的临床诊断。

但同时需要具有暗室并具有符合医疗档案存放的档案室。

2.1洗涤室玻璃器⽫的清洗、包装，培养物质的准备与消毒，供应物品的保藏等⼯作都需在洗涤室⾥进⾏，洗涤室的⼤⼩⼀般为4m×6m，洗涤室应设有下列设备：1.⼀个清洗玻璃器⽫的⽔槽，便于清洗、晾⼲；2.电热⼲燥消毒箱，⽤于玻璃器⽫的⼲热灭菌；3.⾼压蒸汽灭菌锅，⽤于不能耐受⼲热灭菌物品的处理；4.烤箱两个便于烤⼲玻璃器⽫或⾼压蒸汽灭菌物品；5.⽯英玻璃双重蒸馏器或超纯⽔装置，⽤于蒸馏⽔或超纯⽔的制备；6.真空泵⼀个，以备配制培养基过滤时⽤；7.物品准备台，以备包裹玻璃器⽫等；8.储柜或储架，便于清洗⼲燥的器⽫或其它物品存放；9.酸缸，⼀般最好是耐酸材料，⽤于盛装清洗液，清洗液多为含重铬酸钾的硫酸溶液。

2.2培养室培养室包括操作间和缓冲室，操作室功能是进⾏⽆菌操作和细胞培养，如各种组织取材与接种材料的准备、培养物的⽣长状态观察等，因此应配有超净⼯作台、CO2培养箱、倒置显微镜、⼩型低速离⼼机、冰箱、玻璃柜等。

缓冲室则是供⼯作⼈员进⼊培养室前换消毒⾐服、鞋、帽等之⽤。

培养室⼀般3m×3m已够⽤，要求清洁、⼲燥、不通风、光线适宜。

操作间必须墙壁光滑并装有空调器，操作间与外间实验室之间最好有传递窗，以便传递临时需⽤的实验⽤品。

培养室空⽓消毒可采取紫外线消毒或空⽓净化。

2.3细胞学处理室细胞学处理室需要配备普通离⼼机、恒温⽔浴箱及恒温电烤箱（烤⽚⽤）等，主要⽤于染⾊体的收获与显带。

医学遗传学实验指导医学遗传学实验指导内蒙古医学院遗传学教研室目录验一人体外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备实验二小鼠骨髓细胞染色体标本的制备实验三人类染色体G显带技术实验四人类染色体C显带技术实验五核仁形成区银染技术实验六人类染色体G显带核型分析实验七X染色质标本的制备实验八姐妹染色单体交换实验九微核检测技术实验十ABO血型的测定及其基因频率的计算实验十一苯硫脲尝味试验及其基因频率的计算实验十二人类皮纹分析实验十三遗传咨询实验十四人类基因组DNA的提取实验十五聚合酶链式反应（PCR）实验十六DNA的琼脂糖凝胶电泳实验十七PCR-RFLP技术《医学遗传学》实验须知一、医学遗传学实验目的和要求医学遗传学实验课是医学遗传学课程的重要内容。

实验课有助于加深和巩固基础理论知识，并进一步了解和掌握本学科的基本实验内容和操作技能。

在培养学生分析问题、综合问题和解决问题能力方面具有重要作用。

为此，要求学生做到以下几点：1、实验课前做好预习，明确实验目的、实验原理。

2、复习有关理论内容。

3、熟悉实验的主要步骤。

4、初步估计和判定实验的可能结果。

二、实验操作过程中的注意事项1、认真操作，仔细观察和综合分析实验所出现的现象与结果并及时记录。

2、如果实验结果与理论结果不一致，须及时进行科学分析，判断结果的可靠性，寻找出现误差的原因。

3、各种实验试剂用后放回原处，瓶盖封严，轻拿轻放。

4、使用微量加样器时，一定调整好取用量，按使用要求操作。

5、实验室应保持肃静，注意清洁卫生，实验中用过的废弃物品要及时清理，避免堵塞下水管道。

三、实验后的注意事项1、实验后，整理清洁所用仪器、设备，注意放回原位，以备下次使用。

2、如有仪器损坏，要及时填写破损报告，并报告老师。

3、离开实验室前，检查并关闭门、窗、水、电。

四、实验室的意外处理实验室如遇着火、烫伤等意外事件发生，必须镇静做紧急处理，并立即报告老师。

1、着火：如遇酒精灯推倒或其它原因着火，首先将一切易燃品移至远处，然后用水扑灭或者切断电源。

医院细胞遗传室性染色质检测技术作业指导书1目的辨定性别，检测X小体和Y小体。

2实验方法分离细胞，固定染色，显微镜下油镜观察。

3实验原理人体的体细胞，通过特异的处理和染色，在显微镜下可发现部分细胞核膜的内缘有一块染色较深、大小为1μm左右的呈半月形的小块，即X小体。

一个分裂间期细胞核中仅有一条X染色体呈松散状态，参加细胞生理活动，另一条X 染色体则仍保持异固缩的状态，所以染色较深而成为X小体。

据此，正常男性个体不可能出现X小体；正常女性可能出现一个X小体。

Y染色体长臂经荧光染料染色后具有特异的辉煌的荧光。

用同类的荧光染料对男性的各种间期细胞核，以及精子的头部进行染色，均可观察到一个类似于Y染色体长臂的直径约0.3μm的圆形或椭圆形的荧光辉煌的亮点。

而在女性中则没有。

从而确认Y小体是Y染色体长臂上的一部分。

4性能特征1）部分细胞核膜的内缘有一块染色较深、大小为1μm左右的呈半月形的小块，即X小体。

2）Y染色体长臂经荧光染料染色后，观察到一个类似于Y 染色体长臂的直径约0.3μm的圆形或椭圆形的荧光辉煌的亮点。

5样本类型及受检者准备5.1X小体.口腔粘膜细胞：漱口3次，然后以木质压舌板刮取口腔颊部粘膜细胞，立即送检;羊水细胞：中期妊娠（16周左右）的孕妇中，经羊膜穿刺抽取羊水5-10ml左右,立即送检;绒毛细胞：同绒毛培养法。

5.2Y小体.羊水细胞：中期妊娠（16周左右）的孕妇中，经羊膜穿刺抽取羊水5-10ml左右,立即送检;血细胞：抽病人外周血于注射器或EDTA管中，约抽5-15ml，立即送检。

绒毛细胞：同绒毛培养法。

6仪器及耗材酒精灯，烧杯，天平，离心机，载玻片，玻片盒，光学显微镜，灭菌注射器（5ml），离心管，无菌吸管，量筒，培养瓶，试剂瓶，滴管等。

7试剂卡诺固定液（甲醇:乙酸=3:1）、生理盐水、5M HCl、0.2%甲苯胺蓝染色液或硫堇染色液、1:1乙醚酒精、95%酒精、pH5.6的Mcllvaine磷酸缓冲液、0.5%阿的平溶液。

细胞生物室操作规范细胞培养室是对各种动物组织细胞进行体外培养的实验室，具有良好的空气净化系统及多种大型精密仪器。

为保证实验室的正常工作秩序，请做到以下几点：1.每天工作前打开换气扇及紫外灯半小时，确保无菌环境。

2.进入操作间要换洁净的白大衣、拖鞋，清洗双手。

3.操作间地面每周以新洁尔灭清洁两次。

4.CO2培养箱每月以70%酒精清洁一次；注意CO2浓度，及时更换气瓶。

5.倒置、荧光显微镜及附设照相、图象采集分析系统的使用必须在专管人员指导下，严格按操作规程进行。

6.培养的细胞要定期观察及时换液，做好记录，遇有污染，彻底消毒。

7.操作完毕，认真清洁超净工作台。

8.离开实验室前关闭各水、电闸门。

各种培养用液的配制一、平衡盐溶液（BBS）的配制Hanks液1、按成分表所示，准确称量试剂；许多试剂是含有水分的化合物，与不含水分者的称量不同，应加以换算；2、将CaCl2先溶解于100ml水中；3、其它成分依次溶解于750ml水中（注意应待前一种试剂完全溶解后，再溶解下一种成）；4、用数滴5.6%的NaCO3溶液溶解酚红；5、将2缓慢倒入3中，并不时搅动，防止出现沉淀；6、将4加入5中；7、将6入容量瓶中，补足水充分混均；8、分装瓶中，8磅10分钟高压蒸气灭菌，4℃冰箱保存。

二、培养液的制备用干粉制备培养液的制备1、制备出去离子水（玻璃三蒸水）；2、加温水至15-30℃；3、把干粉加入水中，搅拌令之溶解；4、加NaHCO3；5、加水至最终量；6、必要时用1HCl或1N NaOH调节pH；因滤过时pH可能受影响；7、用0.22μm滤膜滤过消毒。

三、胰蛋白酶溶液的配制(1)将D-Han液高压消灭菌，用NaHCO3液调节PH至7．2左右；(2)称取胰蛋白酶粉末置烧杯中，先用少许消毒的盐溶液调成糊状，然后再补足盐溶液，搅拌混匀，量室温4小时或冰箱内过夜，并不时搅拌振荡；(3)次日先用滤纸粗滤，再进行过滤除菌，分装入瓶中，低温冰箱保存备用，常用浓度为0.25％或0.125%，胰蛋白酶溶液偏酸，使用前可调PH至7．2左右。