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——一主苎垫薹胰高糖素样肽２对肠道缺血再灌注小鼠肠粘膜免疫的影响中文摘要研究目的：缺血再灌注损伤常常会损害肠屏障功能，产生免疫抑制和增加肠道细菌移位。
胰高糖素样肽２（ＧＬＰ一２）是新近发现的肠道特异性生长因子。
近年来的研究发现，使用ＧＬＰ一２治疗，可以增加啮齿类动物小肠粘膜的增生，并能防止和治疗休克、放疗、化疗、肠外营养等诱发的消化道损伤和免疫功能损害。
本研究通过建立小鼠肠道缺血再灌注模型，以探讨ＧＬＰ一２对维持正常的肠屏障功能、减轻免疫抑制和减少肠道细菌移位的影响。
材料和方法：实验１：将３０只雄性ＩＣＲ小鼠（３０～４０９）随机分成正常对照组（Ｎ组）、实验对照组（Ｃ组）和ＧＬＰ一２预处理组（Ｐ组）。
所有小鼠均予普食，Ｐ组小鼠给予１０“ｇ／ｍｌ的ＧＬＰ一２ＰＢＳ溶液，０．５ｍｌ，皮下注射，一日两次，连续５天。
Ｎ组、Ｃ组小鼠给予０．Ｏｌｍｍｏｌ／ＬＰＢＳ液，０．５ｍｌ，皮下注射，一目两次，连续５天。
Ｃ组和Ｐ组小鼠均在麻醉后剖腹，分离出肠系膜上动脉，以丝线结扎２０分钟后松开，形成肠道的缺血及再灌注状态。
２４小时后统计各组死亡率。
所有小鼠均在２４小时后处死，在无菌条件下，分别取肝、脾、肠系膜淋巴结和肺组织作细菌培养和菌种鉴定，鲎试验合成基质偶氮显色法检测血浆内毒素，二抗夹心ＥＬＩＳＡ法测量肺和全小肠灌洗液ｓｉｇｈ含量，分别切取近端、远端空肠和末段回肠作形态学和免疫组化检测肠粘膜淋巴细胞的分布和数量，ＥＬＩＳＡＫｉｔ试剂盒测量肠粘膜细胞因子ＩＬ一２、４、６、１０和ＩＦＮ—Ｙ的变化。
实验２：将７０只雄性ＩＣＲ小鼠（３０～４０９）随机分成正常对照组（Ｎ组）、实验对照组（ｃ组）和ＧＬＰ～２治疗组（Ｔ组）。
除Ｎ组外的小鼠均制成肠道缺血再灌注模型。
所有小鼠均予普食。
Ｎ组和Ｃ组给予皮下注射０．Ｏｌｍｍｏｌ／ＬＰＢＳ液，０．５ｍｌ，一日两次，直至处死。
Ｔ组给予皮下注射ｌＯｐｇ／ｍｌ的ＧＬＰ一２ＰｇＳ溶液，０．５ｍｌ，一日两次，直至处死。
肠道黏膜免疫屏障及其菌群与机体健康关系的研究进展李 伟，陈庆森＊（天津商业大学生物技术与食品科学学院，天津市食品生物技术重点实验室，天津 ３００１３４）摘 要：肠黏膜屏障对于防止肠腔内细菌、食物抗原、酶和化学药物等直接与黏膜裸露面接触而引起疾病至关重要，其免疫屏障对机体的健康作用越来越被人们重视。
黏膜免疫系统不仅具有一般性的屏障作用，而且还参与体液免疫和细胞免疫过程，在机体肠道内环境的调节中起重要作用。
随着更深入的研究，人们可能会找到新的维持机体健康的途径。
本文对肠道黏膜免疫调控机理、肠道菌群及营养物质对肠黏膜屏障功能的影响，以及肠黏膜屏障受损对机体健康的危害等方面进行了综述。
关键词：肠黏膜屏障；肠黏膜免疫；ＳＩｇＡ；免疫细胞；肠道菌群；益生元Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｈｅａｌｔｈ ｗｉｔｈ Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｍｕｃｏｓａｌ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ａｎｄ ＭｉｃｒｏｆｌｏｒａＬＩ Ｗｅｉ，ＣＨＥＮ Ｑｉｎｇ－ｓｅｎ＊（Ｔｉａｎｊｉｎ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｔｉａｎｊｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｏｍｍｅｒｃｅ， Ｔｉａｎｊｉｎ ３００１３４， Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ ：Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｕｃｏｓａｌ ｂａｒｒｉｅｒ ｐｌａｙ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ｄｉｒｅｃｔ ｃｏｎｔａｃｔ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａ， ｆｏｏｄａｎｔｉｇｅｎ， ｅｎｚｙｍｅ， ｃｈｅｍｉｃａｌ ｄｒｕｇｓ ｗｉｔｈ ｍｕｃｏｓａｌ ｓｕｒｆａｃｅ． Ｔｈｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｕｃｏｓａｌ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｂａｒｒｉｅｒ ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ ｆｏｒ ｂｏｄｙｈｅａｌｔｈ ｈａｓ ａｒｉｓｅｎ ｍｏｒｅ ａｎｄ ｍｏｒｅ ｐｅｏｐｌｅ＇ｓ ｃｏｎｃｅｒｎｓ． Ｔｈｉｓ ｓｙｓｔｅｍ ｎｏｔ ｏｎｌｙ ｈａｓ ｒｕｎ－ｏｆ－ｍｉｌｌ ｂａｒｒｉｅｒ ｅｆｆｅｃｔ， ｂｕｔ ａｌｓｏ ｔａｋｅｓ ｐａｒｔ ｉｎ ｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｈｕｍｏｒａｌ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ａｎｄ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｉｍｍｕｎｉｔｙ， ｗｈｉｃｈ ｐｌａｙｓ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｏｆ ｇｕｔ．Ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｔｈｏｒｏｕｇｈ ｒｅｓｅａｒｃｈ， ｔｈｅ ｎｅｗ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ ｒｅｓｔｏｒｉｎｇ ａｎｄ ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ ｈｕｍａｎ ｈｅａｌｔｈ ｍｉｇｈｔ ｂｅ ｐｒｏｖｉｄｅｄ． Ｔｈｅ ｐａｐｅｒｄｅｓｃｒｉｂｅｄ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｕｃｏｓａｌ ｉｍｍｕｎｉｔｙ， ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ ａｎｄ ｎｕｔｒｉｅｎｔｓ ｏｎ ｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｕｃｏｓａｌ ｂａｒｒｉｅｒ ａｎｄ ｔｈｅ ｈａｒｍ ｏｆ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｂａｒｒｉｅｒ ｄａｍａｇｅ ｔｏ ｂｏｄｙ ｈｅａｌｔｈ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｕｃｏｓａｌ ｂａｒｒｉｅｒ；ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｕｃｏｓａｌ ｉｍｍｕｎｉｔｙ；ＳＩｇＡ；ｉｍｍｕｎｅ ｃｅｌｌ；ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ；ｐｒｅｂｉｏｔｉｃｓ中图分类号：Ｒ３９２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００２－６６３０（２００８）１０－０６４９－０７收稿日期：２００７－１１－３０基金项目：国家自然科学基金项目（３０７７１５２４）作者简介：李伟（１９８３－），男，硕士研究生，研究方向为发酵生物技术和生物活性物质。
肠黏膜生物屏障的研究现状和进展陈贤玉;王昆华【期刊名称】《结直肠肛门外科》【年(卷),期】2012(018)004【总页数】5页(P268-272)【作者】陈贤玉;王昆华【作者单位】昆明医科大学附属昆华医院普外一科,云南昆明,650032;昆明医科大学附属昆华医院普外一科,云南昆明,650032【正文语种】中文肠黏膜屏障是指肠道能够防止肠内的有害物质如细菌和毒素穿过肠黏膜进入人体内其他组织、器官和血液循环的结构和功能的总和，包括机械屏障、生物屏障、免疫屏障和化学屏障。
肠黏膜生物屏障是肠道黏膜屏障的重要组成部分，在保护人体肠道免于致病菌的侵袭、阻止肠道内细菌及内毒素移位中发挥着重要作用，肠道内益生菌与致病菌之间相互依赖相互制约，使肠道内微生态环境处于动态平衡，一旦平衡遭到破坏则出现肠黏膜生物屏障损伤，引起微生态失调［1］。
因此，调节和保持肠道微生态平衡正越来越受到重视。
本文对肠黏膜生物屏障的最新定义及其对人体的重要作用、生物屏障的常见损伤因素、生态免疫营养疗法对生物屏障的调节保护作用作一综述。
1 肠黏膜生物屏障概念正常情况下，肠道菌群保持相对稳定，以厌氧菌为主的肠道生理性细菌与肠黏膜紧密黏附，产生定植抵抗力，形成肠道生物屏障。
这些细菌通过分泌细菌毒素、短链脂肪酸、抑菌肽、促进肠蠕动、占据致病菌黏附位点以及争夺营养素等防止有害细菌的侵入，使肠内致病因子与肠黏膜屏障达到了“攻防”平衡，维护人体健康。
病理状态时，致病菌大量繁殖、肠道缺血、缺氧以及细胞因子等的作用使肠黏膜生物屏障受到损伤，肠道细菌和内毒素移位，引起内源性感染和／或肠道炎症性疾病等［2］。
2 肠道生物屏障的保护作用人的胃肠道栖息着至少500种细菌，数量约1012～1014CFU／g，由厌氧菌、兼性厌氧菌和需氧菌组成，其中专性厌氧菌占99%以上，类杆菌及双歧杆菌就占细菌总数90%［3］。
在肠黏膜深层寄居着厌氧菌，中层为类杆菌、消化链球菌，表层为大肠杆菌、肠球菌等。
肠道免疫屏障功能损伤的研究进展戈娜，袁慧（湖南农业大学动物医学院，湖南长沙４１０１２８）收稿日期：２００７－１１－０１肠道除了消化、吸收、分泌功能外，还具有重要的屏障功能［１］。
肠道的屏障功能是指肠道上皮能够分隔肠腔内的物质，防止致病性物质的侵入和阻止肠道内细菌及内毒素的移位。
肠屏障包含肠黏膜的机械屏障、生物屏障、化学屏障及免疫屏障等多层含义。
随着对肠黏膜屏障研究的深入，近年来，学者们发现肠道黏膜能够选择性地允许肠腔内容物中的食物、药物等进入，而阻止细菌及毒素的进入，这除了与肠黏膜机械屏障有关外还与肠相关淋巴样组织（Ｇｕｔ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｌｙｍｐｈｏｉｄｔｉｓｓｕｅ，ＧＡＬＴ），即所谓的肠道免疫屏障密切相关。
同时，肠道黏膜免疫也是机体防止感染的第一道防线。
因此，研究肠道免疫屏障的损伤有助于我们能够更好地预防由于肠道屏障功能障碍所造成的脏器感染，多器官功能障碍等疾病的发生。
目前，关于肠道免疫屏障的损伤作用已逐渐引起人们关注。
１肠道免疫屏障的组成肠道免疫屏障由肠上皮细胞（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ，ｉＥＣ）、肠上皮内淋巴细胞（ｉｎ－ｔｅｓｔｉｎａｌｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ，ｉＩＥＬ）、固有层淋巴细胞（ｌａｍｉｎａｐｒｏｐｒｉａｌｌｙｍｐｈｏ－ｃｙｔｅ，ＬＰＬ）、派伊氏结（ｐｅｙｅｒ＇ｐａｔｃｈ，ＰＰ）和肠系膜淋巴结等肠道组织及肠道浆细胞分泌型免疫球蛋白Ａ（ｓＩｇＡ）构成［２］。
其主要功能是由相关淋巴样组织通过分泌ｓＩｇＡ发挥抗感染的体液免疫以及细胞毒性的细胞免疫。
在肠道免疫屏障中有一个特殊的ＧＡＬＴ，ＧＡＬＴ是由ＰＰ、肠系膜淋巴结（ＭＬＮ）以及分散在黏膜固有层（ＬＰ）和肠上皮中的大量淋巴细胞组成。
ＧＡＬＴ既能抵御致病因子入侵，又可耐受肠道非致病菌群。
其作用机制就是在抗原刺激下产生局部的免疫反应，中和抗原物质（主要是产生大量的ｓＩｇＡ）［３］。
ｓＩｇＡ是免疫球蛋白Ａ（ＩｇＡ）单体通过Ｊ链连结而成的二聚体，主要由肠黏膜固有层浆细胞产生。
肠黏膜屏障的构成与功能研究进展基金项目:河北省科学技术研究与发展计划项目(05276101D -21)杨书良a ,李兰梅a ,陈育民b(河北工程大学医学院a .病理教研室;b .微生物与免疫学教研室,河北邯郸056029)关键词:肠黏膜;上皮细胞;紧密连接部;黏液;免疫中图分类号:R333.3文献标识码:A 文章编号:1004-583X (2008)24-1809-03 长期以来,人们普遍对肠道在营养物质消化吸收方面的功能研究较多,而对肠黏膜屏障在抵御内外病原微生物侵入机体,引起疾病方面研究较少。
近几年来,随着对肠黏膜屏障保护作用研究的深入,人们对肠黏膜屏障的功能越来越重视。
目前,肠黏膜屏障的概念已不仅仅局限在简单的传统的机械屏障上,而是由肠黏膜上皮、黏液层、黏膜免疫系统、肠道正常微生物群、肠道内分泌及肠蠕动等环节组成的一种复杂的防御体系。
从而可有效地阻挡肠道内上百种寄生菌及其毒素向肠腔外组织、器官移位和外源性病原微生物侵入机体[1]。
现就近几年对肠黏膜屏障的组成和功能方面的研究进展综述如下。
1 黏膜上皮屏障肠黏膜上皮屏障是构成机体内外环境之间的一种起机械保护作用的组织学屏障。
正常成人胃肠黏膜的总面积约400m 2,大约是自身体表面积的200倍,在防止病原微生物从黏膜侵入方面有着非常重要的作用。
肠黏膜上皮屏障主要由两部分组成,即肠黏膜上皮细胞及其周围的紧密连接。
1.1 肠黏膜上皮细胞 小肠黏膜表面有许多细小的绒毛状突起称为肠绒毛,它是由上皮细胞和固有层(lamina propria ,LP )共同向肠腔突起而形成。
绒毛根部的上皮向固有层下陷形成管状小肠腺,又称为Liebe rkuhu 隐窝[2]。
小肠腺上皮与绒毛上皮构成完整的小肠黏膜上皮屏障。
小肠绒毛上皮主要由吸收细胞和少量的杯状细胞、内分泌细胞组成。
另外,还有少量的潘氏细胞和干细胞。
吸收细胞最多,呈高柱状,高约20μm ,肠腔面有许多微绒毛,主要功能是对营养物质进行吸收和起机械屏障作用。
肠道黏膜屏障机能及其调控研究进展翟双双【摘要】肠道不仅仅是机体消化、吸收营养物质的主要场所，也是机体的一道防御屏障。
肠道黏膜屏障包括黏膜生物屏障、机械屏障、化学屏障和免疫屏障，不论是哪一种肠道黏膜屏障受到损伤，都会导致机体不同程度的伤害，与一些疾病的发生密切相关。
本文就肠道黏膜屏障机能及其调控研究进展进行综述，为进一步认识肠道黏膜屏障及治疗由其损伤引起的疾病提供参考和帮助。
%The gut is not only the main place of digestion, absorption of nutrients, but a body defensive barrier. Intestinal mucosal barrier including mucosal biological barrier, mechanical bar-rier, chemical barrier and immune barrier. Regardless of what kind of intestinal mucosal barrier is damaged, it will cause the different degree of damage which closely associated with the occur-rence of some diseases. This paper reviews the progress research on intestinal mucosal barrier function and regulation, in order to further understanding of intestinal mucosal barrier and pro-vide reference and help to treatment the disease caused by the injury.【期刊名称】《现代畜牧兽医》【年(卷),期】2014(000)007【总页数】5页(P54-58)【关键词】肠道黏膜屏障;机械屏障;化学屏障;生物屏障;免疫屏障【作者】翟双双【作者单位】华南农业大学动物科学学院，广东广州 510642【正文语种】中文【中图分类】S852.21肠道是机体消化系统的主要组成部分，是消化、吸收营养物质的主要场所，是机体主要的免疫器官，同时还具有激素分泌、免疫调节和黏膜屏障等功能，肠黏膜屏障在维护肠道功能中发挥重要作用[1]。
肠道黏膜屏障功能及其检测方法研究进展
王小英;程爱国
【期刊名称】《河北联合大学学报（医学版）》
【年(卷),期】2009(011)005
【摘要】@@ 肠道不仅是消化吸收器官,而且是集内分泌、免疫、屏障等功能为一体的重要器官.在消化、吸收各种营养物质的同时又能将细菌及其代谢产物抑制于肠道内,在此过程中肠道屏障起重要作用.现将肠道屏障黏膜防御体系和屏障功能的检测方法综述如下.
【总页数】2页(P653-654)
【作者】王小英;程爱国
【作者单位】华北煤炭医学院附属医院骨科,河北唐山,063000;华北煤炭医学院附属医院骨科,河北唐山,063000
【正文语种】中文
【中图分类】R572.3
【相关文献】
1.产肠毒素大肠杆菌对仔猪肠道黏膜屏障功能的影响及其损伤修复研究进展 [J], 黄登桂;周加义;高春起;王修启
2.肠道黏膜屏障功能评估的研究进展 [J], 高鹏;张旭光;刘雪来
3.霉菌毒素对肠道黏膜屏障功能影响的研究进展 [J], 张曼;霍军;王军;张利卫;彭永帅;李月勤;宋予震;金鑫
4.呕吐毒素对畜禽肠道黏膜屏障功能影响及其防治的研究进展 [J], 张赛武;周加义;
黄登桂;王修启
5.热应激对畜禽肠道黏膜屏障功能影响及其损伤修复研究进展 [J], 周加义;高春起;严会超;王修启
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・综述与讲座・3通讯作者,E 2mail:meiqiaomq@yahoo 肠黏膜屏障功能检测研究进展刘晓昌,梅 俏3,许建明(安徽医科大学第一附属医院,安徽合肥230022) [关键词] 肠黏膜;屏障;实验室技术和方法 [中图分类号] R446.9 [文献标识码] A [文章编号] 10022266X (2009)1620106202 肠黏膜屏障包括机械屏障、免疫屏障、生物屏障、化学屏障等多层含义。
在饥饿和营养不良、创伤、危重疾病、严重感染或炎症等情况下,肠黏膜的结构和功能可能受到损伤,导致肠黏膜屏障功能障碍、肠道细菌移位、内毒素入血,诱发或加重肠道局部或全身性炎症、免疫反应,严重者可导致多器官功能不全的发生。
在某些疾病尤其是多器官功能不全治疗的早期,采取措施保护肠黏膜屏障功能,有助于控制病情,提高疗效。
早期有效治疗的前提是对肠黏膜屏障有充分的认识,能早期对肠黏膜屏障功能进行检测并正确诊断。
因此本文主要从肠黏膜屏障的四个组成部分分别讨论肠黏膜屏障功能的检测。
1 机械屏障 机械屏障由肠道黏液层、肠黏膜上皮细胞、细胞间紧密连接等构成。
肠黏膜上皮细胞是肠屏障中最重要的部分,因此,目前主要针对肠黏膜上皮细胞进行一系列检测。
1.1 肠通透性检测 口服或静脉给予示踪物,然后根据示踪物通过肠黏膜上皮细胞的剂量大小反映肠黏膜的通透性。
用于检测肠黏膜通透性的示踪物主要有放射性同位素类、辣根过氧化物酶(HRP )和蛋白质类、聚乙二醇(PEGs )及糖类等四类。
放射性同位素类如51铬—乙二胺四乙酸(51Cr 2E D 2T A )、99m锝—二乙三胺五乙酸(99mTc 2DTP A )和125碘—白蛋白(125I 2albu m in ),可口服后用计数仪测量尿液中示踪剂的放射性活度。
但由于示踪剂具有放射性,不宜在同一患者身上重复使用,尤其是儿童;另外,其T 1/2短,标本不易保存,临床应用受到限制。
HRP 目前仅适用于体外肠道通透性的测定,不适合用于临床。
蛋白质示踪剂因作为异种蛋白质有可能因刺激机体免疫系统而影响肠道通透性,同时其实验操作和分析比较复杂,临床应用也受到限制[1]。
PEGs 是次乙基乙二醇多聚体的混合物,由于对测定结果的分析和计算相当复杂,结果也存在着较大的差异,并且对其渗透途径尚不明确,因此很少用于临床。
用于检测的糖类主要是单糖和双糖。
口服一种糖,其从尿中的排泄受到除黏膜通透性以外的多种因素如胃排空时间、肠蠕动强弱、肠黏膜表面积大小、心输出量、肾排出量和尿液收集的误差等影响。
因此,目前多采用同时测定一种单糖和一种双糖,使肠内外影响因素相同,结果以尿中二者比值表示可以消除以上因素的影响。
乳果糖和甘露醇在体内不代谢,受肠腔内渗透压影响较小,从肠腔吸收人血后由尿中排除,可留取一定时间内的尿液进行检测,并且尿乳果糖和甘露醇比值(L /M )与绒毛萎缩之间有较好的相关性[2]。
该试验具有操作简单、对机体无损伤以及对肠道损伤敏感等优点,因此目前临床检测肠黏膜通透性最常用L /M 。
糖类含量可通过比色法、酶学法、气相色谱法、高压液相色谱法检测。
前两种方法易受尿中其他复合物干扰,结果不够准确,但临床应用方便;气相色谱法准确性好,但样品处理过程复杂,不适于临床应用;而高压液相色谱法能快速、准确、灵敏地检测出尿中的乳果糖和甘露醇的含量,操作方便,且能同时检测几种糖类,适于临床应用[3]。
近年来国内外出现用带脉冲电流的高压液相色谱仪检测,其灵敏度和特异性更高,但对仪器和操作的要求高[4]。
1.2 肠黏膜形态学检查 肠黏膜形态学检查有一定的创伤性,但通过一般光镜等可以直接观察黏膜上皮细胞形态改变、绒毛厚度、隐窝深度等,可直接从结构上反映肠黏膜通透性的改变。
透射电镜或扫描电镜可观察肠黏膜上皮细胞的超微结构改变并可以进行半定量分析如观测微绒毛、细胞间连接、细胞内线粒体等改变情况。
免疫组织化学方法或分子生物学方法可对相关蛋白成份如结构蛋白(JAM )和调节蛋白(E 钙黏素、肌动蛋白、肌球蛋白)等进行定性或定量分析,是反映肠黏膜屏障功能可靠的指标,因此,已被广泛用于动物和细胞实验。
1.3 血液指标检测 主要包括血浆内毒素水平、D 2乳酸含量、二胺氧化酶(DAO )活性等检测。
血浆内毒素水平可在一定程度上反映肠通透性的改变。
目前多检测外周血内毒素,但因为经过门静脉循环的影响,外周血中内毒素浓度不高。
门静脉血内毒素测定方法较准确可靠,但多用于动物实验,临床应用仅限于一些接受特殊手术患者[5]。
所以建立稳定可靠、灵敏的内毒素测定方法才有意义。
D 2乳酸是细菌代601 山东医药2009年第49卷第16期 谢、裂解的产物,肠缺血等原因致肠黏膜上皮细胞损伤,细胞间紧密连接破坏,肠通透性增加,肠腔中的D2乳酸经受损黏膜入血,故测定血中D2乳酸含量可反映肠黏膜损伤程度和肠通透性变化[6]。
有报道血浆D2乳酸含量与肠黏膜损伤评分呈显著正相关[7]。
血浆DAO是肠黏膜绒毛细胞中具有高度活性的细胞内酶,以空肠、回肠活性最高。
血浆DAO活性增高提示有肠屏障破坏,可通过比色法或放射活性法测定,前者操作简单,结果稳定性好,但灵敏度低。
后者灵敏度较高,但试剂有放射性,临床应用受限[8]。
2 免疫屏障 免疫屏障主要由肠道免疫系统的细胞群构成,包括肠相关淋巴组织和弥散免疫细胞。
前者主要指分布于肠道的集合淋巴小结,是免疫应答的诱导和活化部位;后者是肠黏膜免疫的效应部位。
分泌型I g A(sI g A)则是胃肠道和黏膜表面的主要体液免疫成分和效应分子,是防御病菌在肠道黏膜黏附和定植的第一道防线。
目前免疫功能检测主要包括以下几方面:①肠上皮内淋巴细胞(I E L)计数:可反映黏膜细胞免疫功能的变化。
②固有层巨噬细胞表达水平:CD68系巨噬细胞标记性分子,用抗CD68抗体作为一抗进行免疫组化观察,可检测巨噬细胞的分布规律和数量,计算CD68+细胞的面积百分比,可作为肠黏膜巨噬细胞水平的量化指标[9]。
③sI g A表达水平:可量化反映肠道黏膜浆细胞分泌sI g A的能力[10]。
有报道可通过检测粪便中sI g A含量来反映肠道黏膜免疫功能[11],但其敏感性有待于进一步提高。
3 生物屏障 生物屏障由共同寄居在肠腔内或定植于肠黏膜表面的肠道常驻菌群形成。
正常情况下,肠黏膜表面生长着大量的厌氧菌,如双歧杆菌等可通过黏附作用与肠上皮紧密结合,形成菌膜屏障,它们能够抵御和排斥外源性致病菌的入侵,并产生短链脂肪酸、醋酸、乳酸等为肠黏膜细胞提供营养成分,降低肠道pH值,激活肠道免疫系统,对维持肠屏障功能起着重要作用。
应用粪便细菌培养、粪便球杆菌比例检查或肠杆菌基因重复一致序列PCR(ER I C2PCR)指纹图动态监测肠道菌群尤其是双歧杆菌等厌氧菌的变化,能够反映肠道黏膜生物屏障功能。
4 化学屏障 化学屏障由胃肠道分泌的胃酸、胆汁、各种消化酶、溶菌酶、黏多糖等化学物质及肠道寄生菌产生的抑菌物质组成。
胃酸能杀灭肠道的细菌,抑制细菌在胃肠道上皮的黏附和定植。
胆酸可降解内毒素分子,防止其经肠吸收,胆盐缺乏可引内毒素血症。
溶菌酶能破坏细菌的细胞壁,使细菌裂解,黏液中含有的补体成分可增加溶菌酶及免疫球蛋白的抗菌作用,因此化学屏障功能检测和机械屏障同样具有重要的临床意义,但目前相关检测研究较少。
5 反映肠道屏障功能的其他指标 肠黏膜屏障功能损伤也可用细菌移位来表示,有研究表明,肠黏膜通透性增高与细菌移位率呈正相关[12]。
而细菌移位与全身感染有关,因此早期诊断血液中的细菌感染具有重大的临床意义。
细菌移位常用的诊断方法有细菌培养、荧光或特殊质粒标记细菌示踪法、聚合酶链反应(PCR)法等。
PCR法检测到血液中肠源性细菌,可间接反映黏膜屏障功能的异常。
综上所述,肠黏膜屏障功能的实验室检测是肠黏膜功能障碍诊断的重要依据,其中又以机械屏障功能检测最为重要,方法敏感性和特异性高,操作简单,但用于诊断时必须结合临床实际情况综合考虑,如判断有无导致肠黏膜屏障功能障碍疾病的存在以及肠黏膜屏障功能改变后的临床症状变化,否则易误诊。
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