扩增活化的自体淋巴细胞技术

329BIOTECHWORLD 生物技术世界CIK细胞具有增殖快速、杀癌力强、杀癌谱广、对正常细胞无杀伤作用、对耐药肿瘤敏感、可调整人体的免疫状态、刺激骨髓造血等重要作用。

是目前已知活性最高的非特异性杀伤免疫效应细胞。

树突状细胞(dendritic cell,DC细胞)是体内功能最强大的专职抗原递呈细胞，也是唯一能激活幼稚T细胞的抗原的递呈细胞。

DC细胞在免疫应答过程中具有关键的作用。

将CIK细胞和同源DC细胞以及一系列细胞因子如IL-1、IL-2、IFN-y、CD3mAb共同培养，即可获得DC-CIK细胞。

它既可以促进DC细胞的成熟，更能促进CIK细胞的增殖，并增强其抗肿瘤活性。

1. CIK 细胞治疗技术流程白细胞采集→淋巴细胞→CIK细胞＋DC细胞＋细胞因子→共培养、添加IL-2扩增→DC-CIK细胞→质量检测→质量合格→静脉回输入患者体内→疗效评估2. CIK 细胞的抗肿瘤机制CIK细胞是一种异质细胞，是混合的细胞群体。

主要细胞成分为CD3+CD56+细胞，主要的效应细胞是CD3+CD8+细胞。

外周血单核细胞经多种细胞因子如IL-1、IL-2、IFN-y、CD3mAb等刺激诱导，并通过体外培养两周左右，细胞数量便可扩增上千倍。

其中CD3+CD56+CIK细胞达到70%以上，这是抗肿瘤作用的主要细胞亚群。

并且在回输到患者体内后，经细胞因子IL-2的诱导仍能进行扩增，这种机能保证了患者体内免疫细胞的数量和活性。

CIK细胞作用于肿瘤细胞主要有5种途径:(1)引发毒性颗粒依赖性溶细胞作用，致使靶细胞死亡。

(2)CIK细胞与T细胞抗原受体结合，参与免疫过程。

T细胞合成并释放毒性颗粒，作用于靶细胞，造成靶细胞溶解。

(3)CIK细胞自身可分泌细胞因子。

细胞因子作用于靶细胞或反作用于效应细胞，提高其活性。

(4)C I K 细胞群中的CD3+CD56+可以合成并释放穿孔蛋白，溶解靶细胞。

(5)CIK细胞能够激活靶细胞的凋亡基因，使凋亡基因转录并表达。

T淋巴细胞来源于骨髓的多能干细胞（胚胎期则来源于卵黄囊和肝）。

在人体胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干细胞或前T细胞迁移到胸腺内，在胸腺激素的诱导下分化成熟，成为具有免疫活性的T细胞。

成熟的T细胞经血流分布至外周免疫器官的胸腺依赖区定居，并可经淋巴管、外周血和组织液等进行再循环，发挥细胞免疫及免疫调节等功能。

T细胞的再循环有利于广泛接触进入体内的抗原物质，加强免疫应答，较长期保持免疫记忆。

T细胞的细胞膜上有许多不同的标志，主要是表面抗原和表面受体。

这些表面标志都是结合在细胞膜上的巨蛋白分子。

图1-1 T细胞表面受体T淋巴细胞是在胸腺中分化成熟的淋巴细胞，故称胸腺依赖性淋巴细胞（Thymus-dependent lymphocyte），简称T细胞。

T细胞是由胸腺内的淋巴干细胞分化而成，是淋巴细胞中数量最多，功能最复杂的一类细胞。

T细胞膜表面分子与T细胞的功能相关，也是T细胞的表面标志，可以用以分离、鉴定不同亚群的T细胞。

T细胞产生的免疫应答是细胞免疫，细胞免疫的效应形式主要有两种：与靶细胞特异性结合，破坏靶细胞膜，直接杀伤靶细胞；另一种是释放淋巴因子，最终使免疫效应扩大和增强。

图1-2 促进T细胞分化T细胞活化的标志应该是得到两个活化信号活化信号1是T细胞受体TCR与相应的抗原肽-MHC分子结合这里要注意，CD4+细胞是与抗原肽-MHC II类分子结合CD8+细胞与抗原肽-MHC I类分子结合CD4/CD8是TCR的辅助受体，也存在于T细胞表面结合后TCR-CD3复合体有了信号传导的能力CD3复合体的肽链胞浆区内含有ITAM（免疫受体酪氨酸活化基序），ITAM可以把活化的信号传导至细胞内部，至此得到活化信号1只有活化信号1还不可以使T细胞活化，这时需要活化信号2活化信号2就是由细胞表面的黏附分子来完成的对于T细胞来说，CD28是产生活化信号的共刺激分子，它与与此T细胞接触的APC(抗原呈递细胞）表面的B7分子结合后，即可产正活化信号此为第二活化信号需要说明的是，如果CD152与B7结合，产生的却是抑制信号，因为CD152胞内区含有ITIM（受体酪氨酸抑制基序）。

肿瘤细胞免疫治疗之CAR-T技术：技术优势、风险与几大应用场景动脉网2018-10-04 11:36:35一、CAR-T技术原理（一）过继性细胞治疗过继性细胞治疗是细胞的免疫治疗一个主要研究方向。

过继免疫细胞输注（adoptive cell transfer, ACT）属于肿瘤的被动免疫疗法，指的是分离肿瘤患者自体肿瘤浸润淋巴细胞( tumor-infiltrating lymphocytes，TIL)或者外周血淋巴细胞，在体外加以分选、扩增、活化，并回输至患者体内。

在恶性黑色素瘤和肾细胞癌，TIL是常用的ACT治疗。

TIL是浸润于肿瘤中的淋巴细胞，分离后在IL-2等因子作用下进行体外扩增，最后再回输到患者体内。

然而，多数情况下无法应用TIL：有些患者缺乏肿瘤标本或肿瘤和转移灶中TIL很少；获得新鲜的肿瘤组织并分离和扩增TIL 具有难度；回输的TIL 细胞功能受损，在体内往往不能有效识别肿瘤细胞; 肿瘤中强大的免疫抑制微环境降低回输细胞的杀伤能力。

这些问题限制了TIL的广泛应用，仅对如恶性黑色素瘤和肾细胞癌的少数肿瘤有一定疗效，对大多数肿瘤疗效欠佳。

在这种情况下，ACT需要使用外周血淋巴细胞。

目前使用外周血淋巴细胞的ACT包括淋巴因子激活的杀伤细胞（lymphokine activated killer cells，LAK）、细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killer，CIK）、树突细胞-细胞因子诱导杀伤细胞（dendritic cells-cytokine induced killer，DC-CIK）、抗CD3抗体诱导的活化杀伤细胞（anti-CD3 antibody-induced activated killer cells, CD3-AK cells）等。

然而CIK等是非特异性活化的淋巴细胞，缺乏肿瘤特异性反应能力。

在这种情况下，科学家开始通过基因修饰，将识别肿瘤抗原的T细胞受体（T cell receptor, TCR）或CAR基因导入淋巴细胞使之成为TCR基因修饰T淋巴细胞（TCR-T）或CAR-T细胞，使之具备肿瘤抗原靶向识别能力。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710493447.0(22)申请日 2017.06.26(71)申请人 杭州中赢生物医疗科技有限公司地址 310052 浙江省杭州市滨江区楚天路88号(72)发明人 王冶陶　吴忠福　彭昉　刘慧显　王俊俊　俞英豪　(74)专利代理机构 北京品源专利代理有限公司11332代理人 巩克栋(51)Int.Cl.C12N 5/0783(2010.01)C12N 5/10(2006.01)A61K 35/17(2015.01)A61P 35/00(2006.01)A61P 35/02(2006.01)A61P 31/04(2006.01)A61P 31/12(2006.01)A61P 31/10(2006.01)A61P 33/00(2006.01)A61P 1/16(2006.01)A61P 31/20(2006.01)A61P 31/18(2006.01)A61P 31/14(2006.01)(54)发明名称一种体外扩增淋巴细胞的培养体系及扩增方法和应用(57)摘要本发明涉及细胞免疫治疗领域，具体涉及一种体外扩增淋巴细胞的培养体系及扩增方法和应用。

所述培养体系包括：白细胞介素21、白细胞介素12和CD80的混合物。

采用本发明培养体系扩增的NK细胞，NK细胞纯度高，对肿瘤细胞杀伤力强，在第14天可以将NK细胞扩增约9100倍，达到各种临床适合治疗病症预期疗效应用要求；解决了临床应用培养体系的安全性问题，有效降低NK细胞的应用成本，为NK细胞过继免疫治疗的广谱应用奠定了基础。

权利要求书2页 说明书6页 附图2页CN 107177548 A 2017.09.19C N 107177548A1.一种体外扩增淋巴细胞的培养体系，其特征在于，所述培养体系包括：白细胞介素21、白细胞介素12和CD80的混合物。

机体内具有杀伤作用的淋巴细胞有自然杀伤细胞、杀伤细胞杀伤性T细胞等，它们本身就能够对抗肿瘤细胞的产生。

根据实验观察，一个肿瘤细胞需要上百个淋巴细胞对付它。

而一立方厘米大小的瘤块中约有10亿个瘤细胞。

因此，如果有大量的淋巴细胞，就能够有效的消灭肿瘤细胞，对抗肿瘤细胞的生成，这就是细胞免疫疗法的基本理念。

[1]简介机体内具有杀伤作用的淋巴细胞有自然杀伤细胞、杀伤细胞杀伤性T细胞等，它们本身就能够对抗肿瘤细胞的产生。

根据实验观察，一个肿瘤细胞需要上百个淋巴细胞对付它。

而一立方厘米大小的瘤块中约有10亿个瘤细胞。

因此，如果有大量的淋巴细胞，就能够有效的消灭肿瘤细胞，对抗肿瘤细胞的生成，这就是细胞免疫疗法的基本理念。

当前，以细胞免疫疗法为首的细胞生物治疗己经初露锋芒，成为肿瘤生物治疗中重要的发展方向。

细胞免疫疗法，其全称为过继性免疫细胞疗法，(adoptive cellular immunotherapy, ACI或AIT)，是指向肿瘤患者转输具有抗肿瘤活性的免疫细胞(特异性和非特异性的)，直接杀伤肿瘤或激发机体的免疫应答杀伤肿瘤细胞。

临床上是指将体外激活的自体或异体免疫效应细胞输注给患者，以杀伤患者体内的肿瘤细胞的一种治疗方式。

近年来，细胞免疫疗法一直是肿瘤生物治疗中最活跃的领域。

细胞免疫疗法对细胞免疫功能低下的患者，如大剂量化疗、放疗后、骨髓移植后、病毒感染损伤免疫细胞数量及功能的患者，尤其是血液/免疫系统肿瘤的患者更为适合。

发展细胞免疫治疗可选择性地抑制/杀伤肿瘤细胞,而且不依赖于荷瘤者的免疫功能,并可与放、化疗合用,自上世纪80年代以来已进行了大量研究。

该疗法历经LAK、TIL、CD3AK、CIK、DC-CIK、EAAL等发展阶段，其疗效、特异性、整体有效率、副作用反应等方面的情况逐步改善。

分类LAK细胞免疫治疗LAK细胞即淋巴因子激活的杀伤细胞。

将外周血淋巴细胞在体外经淋巴因子白介素-2(IL-2)激活3～5天而扩增为具有广谱抗瘤作用的杀伤细胞。

自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术管理规范国家卫生部医政处第三类技术准入制管理免疫细胞治疗技术是使用体外培养获得免疫活性细胞作为治疗手段的医疗技术。

本管理规范适用于在临床上已完成安全性和有效性认证，并符合伦理要求，只涉及T细胞和NK细胞作为治疗手段的医疗技术。

这类新技术已在世界多个国家开展，目前基本处于临床试验阶段。

为规范细胞免疫治疗技术临床应用，保证医疗质量，保障人体健康，保障公民的合法权益，并促进我国相关生物治疗技术的发展，特制定本规范。

第一部分自体免疫细胞治疗技术的范畴自体免疫细胞治疗技术：从自体外周血中分离的单个核细胞经过体外激活和扩增后输入患者体内，直接杀伤肿瘤细胞或病毒感染细胞，或调节和增强机体的免疫功能。

这类细胞免疫治疗技术主要包括：一. 自体CIK细胞（自体细胞因子诱导的杀伤细胞）二. 自体TIL细胞（自体肿瘤浸润淋巴细胞）三. 自体DC-CIK细胞（自体树突状细胞刺激的CIK细胞）四. 自体CTL细胞（细胞毒T淋巴细胞）五. 自体γδT细胞（自体伽马德尔塔T细胞）六. 自体NK细胞（自然杀伤细胞）第二部分自体免疫细胞治疗技术临床应用机构要求一、临床应用机构基本要求（一）开展自体免疫细胞治疗技术应当与该医疗机构功能、任务相适应。

（二）具有卫生部门核准登记的三级甲等医院或省级及省级以上专科医院。

（三）具有与免疫细胞治疗相关的科室。

科室人员组成包括有从事人体免疫细胞治疗相适应的执业医师、执业护士、具有免疫学专业背景的专家和免疫细胞制备技术人员。

该科室职责包括接受体细胞免疫治疗患者的选择，治疗方案的制定，患者的管理和随访，疗效评估体系的建立，规范治疗的程序建立，以及在治疗过程中处理可能出现的问题等。

具备从事体细胞治疗质量控制的专业检验科室和人员。

（四）具有人体免疫细胞治疗所需要的场地、设备和设施。

（五）医院设有管理规范、运作正常的临床伦理委员会，该委员会中从事人体细胞免疫治疗的相关人员不超过委员人数的1/4。

EAAL一、EAAL的定义EAAL，是扩增活化的自体淋巴细胞的英文Expanding Activated Autologous Lymphocytes的缩写，EAAL细胞技术是治疗肿瘤和慢性传染性病毒感染的细胞免疫治疗方法之一。

其技术是从患者自体外周血（20-100毫升）中分离单个核细胞，经过体外刺激扩增培养，使在生理条件下具有杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞的杀伤性效应的细胞亚群，主要是CD8+杀伤性T淋巴细胞（CTL，约70%）和自然杀伤细胞（NK，约20%）得到大量扩增和活化，之后经一次或多次回输给患者。

作为细胞过继性免疫治疗方法，可有效辅助恶性肿瘤和慢性传染性病毒感染的治疗。

二、EAAL治疗肿瘤的作用机制根据体外实验和临床试验证明，EAAL细胞可通过多种途径直接杀伤肿瘤细胞：1) 患者回输EAAL细胞后可以导致CD8+杀伤性T淋巴细胞比例上升，NK细胞比上升，CD4/CD8 T淋巴细胞比值下降。

这些杀伤性淋巴细胞以不同的机制识别肿瘤细胞，通过穿孔素等作用，穿透封闭的肿瘤细胞胞膜，实现对肿瘤细胞的裂解；2) 回输EAAL细胞后，可促使机体分泌IL-2、IL-6、IFN-γ等多种抗肿瘤的细胞因子，诱导肿瘤细胞凋亡；3) 回输EAAL细胞后可以改善机体的免疫环境，提高机体的免疫机能。

一、EAAL的定义EAAL，是扩增活化的自体淋巴细胞的英文Expanding Activated Autologous Lymphocytes的缩写，EAAL细胞技术是治疗肿瘤和慢性传染性病毒感染的细胞免疫治疗方法之一。

其技术是从患者自体外周血（20-100毫升）中分离单个核细胞，经过体外刺激扩增培养，使在生理条件下具有杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞的杀伤性效应的细胞亚群，主要是CD8+杀伤性T淋巴细胞（CTL，约70%）和自然杀伤细胞（NK，约20%）得到大量扩增和活化，之后经一次或多次回输给患者。

作为细胞过继性免疫治疗方法，可有效辅助恶性肿瘤和慢性传染性病毒感染的治疗。

生物性靶向治疗美国“国际肿瘤生物/免疫治疗及基因治疗”2000年年会总结报告中指出：“生物治疗是目前知道的唯一一种有望完全消灭癌细胞的治疗手段，21世纪是肿瘤生物治疗的时代”，生物免疫治疗技术在近年来越来越受到医学界和广大患者的关注。

生物性靶向治疗中，比较成熟的是过继性细胞免疫疗法。

这种疗法的理念，是“用人体自身的免疫细胞杀死肿瘤细胞”的原理来治疗肿瘤，利用具有杀伤肿瘤细胞活性的细胞来治疗肿瘤的同时，能够增强人体的免疫功能，抑制肿瘤细胞生长。

过继性免疫效应细胞治疗因具有以下的优点而受到人们的重视，为近十多年肿瘤免疫治疗中十分活跃的研究领域：1. 免疫细胞在体外处理，可绕过体内肿瘤免疫障碍的种种机制，从而选择性地发挥抗肿瘤免疫反应。

如新鲜分离的肿瘤浸润性淋巴细胞（tumor infiltrating lymphocyte，TIL）往往缺乏抗肿瘤效应，而在体外一定条件下培养一段时间后可恢复特异性抗肿瘤作用；在体外培养条件下，肿瘤抗原特异性耐受的免疫细胞可被逆转。

2. 免疫细胞的活化及效应过程往往由一些细胞因子介导，而目前基因工程可大量克隆不同的细胞因子，也可大量克隆肿瘤抗原或多肽，这使体外活化扩增大量的抗肿瘤免疫细胞更为可行方便。

3. 免疫细胞的体外活化扩增可避免一些制剂体内大量应用带来的严重毒副作用，如：IL－2、TNF－α、IL－4、IL－7、IL－12等具有抗肿瘤作用，抗CD3单克隆抗体(MabCD3)的体内应用可激活T淋巴细胞，但这些制剂由于其复杂的多种作用，在体内大量应用可导致严重的甚至致死性副作用，这也是这些因子难以被批准临床使用的重要原因，而在体外操作可避免这些副作用。

4. 目前已能在体外大量扩增自体或异基因的抗肿瘤免疫细胞，其数量大于肿瘤疫苗在体内激活的效应细胞数，一些体外培养的免疫细胞已进入临床治疗试验。

实验显示肿瘤疫苗在体内应用可增加体内的肿瘤特异性CTL数量，但到一定时候，体内的CTL到达平台期而不再增加，这主要由体内存在的特异性及非特异性免疫调节网络限制了CTL克隆的扩增。

免疫疗法相关肿瘤模型介绍导读前两期我们介绍了常见的肿瘤动物模型，考虑到肿瘤免疫疗法不同于普通抗癌药物的作用方式和评价体系，有必要在此单独介绍一下肿瘤免疫疗法研究领域常用的肿瘤动物模型。

为此，笔者专门搜集和整理了一些相关资料，以当前较为成熟的CAR-T/TCR-T以及免疫检查点阻断技术为例，对免疫疗法肿瘤模型的特点、常用实验动物及细胞株、建立方法以及药物评价方式等关键点做个简要介绍，以期为有志于从事肿瘤免疫疗法研究的同行们提供些许参考。

背景在当今众多的癌症治疗手段中，免疫疗法无疑是近年来最为吸引人们眼球的“明星”治疗手段，普遍引起学术界及医学界的强烈关注和研究兴趣。

随着以T细胞受体T细胞技术（TCR-T）、嵌合抗原受体T细胞技术（CAR-T）以及免疫检查点阻断技术（Immune Checkpoint Blockade）为代表的新兴肿瘤免疫疗法不断取得临床上的突破和成功，奇迹频现，捷报频传，持续更新着人们对机体免疫系统潜在的强大肿瘤杀伤能力的认知，进一步提高人们战胜恶性肿瘤的信心，当然也持续激发着科研人员对“肿瘤免疫疗法”这一强大抗癌利器的研究和开发热情。

而对于肿瘤免疫疗法的研究，离不开相关动物模型的选择和建立。

事实上，目前已经取得临床成功的肿瘤免疫疗法中，无一例外都已经过大量严格的临床前动物实验进行验证、评估和预测。

可见，相关动物模型的建立对于肿瘤免疫疗法的开发和应用是至关重要且必不可少的。

免疫疗法相关肿瘤模型一、以CAR-T/TCR-T为代表的细胞过继性疗法（Adoptive Transfer）常用肿瘤动物模型细胞过继性疗法是指将供体（donor）细胞（此处主要是T淋巴细胞）经体外刺激活化或者基因修饰后再次回输入受者（Recipient）体内，从而达到相关治疗目的的治疗方式。

供体细胞可以是来源于受者自身，也可以来自于其他个体，前者称为自体移植（Autograft），后者则有两种情况，如果受者与供者属于相同种属，称为同种异体移植（Allograft），反之则为异种移植（Heterograft）。

(10)申请公布号(43)申请公布日 (21)申请号 201510690590.X(22)申请日 2015.10.22C12N 5/0783(2010.01)(71)申请人苏州科贝生物技术有限公司地址215123 江苏省苏州市工业园区星湖街218号C5独栋苏州科贝生物技术有限公司(72)发明人姬云 周艳 王珏 孙石磊吴守亮 姬星河(54)发明名称一种高效体外扩增自体NK 细胞的培养体系及培养方法(57)摘要本高效体外扩增自体NK 细胞的培养体系及培养方法，培养体系包括含GT-T551基础培养基、白细胞介素IL-2、白细胞介素IL-12、白细胞介素IL-15、白细胞介素IL-18、白细胞介素IL-17、白细胞介素IL-22和天然中药物质。

培养方法为：采集并分离自体40ml 外周血单个核细胞，用含10％自身血浆培养基重悬细胞，加入到用CD3抗体或CD56抗体包被的细胞培养瓶中，细胞因子组合A 刺激，置于37℃、5％CO2培养箱中孵育并振摇，6-7天后转入细胞培养袋中培养并补加含细胞因子组合B 培养基，培养期间，每隔3-4天在含有IL-2基础培养基培养，共培养17-19天可得到高纯度性的NK 细胞。

本培养基及培养方法能使NK 细胞体外扩增1000倍以上，获得超过5X109次方的高纯度NK 细胞。

(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书5页 附图1页CN 105238752 A 2016.01.13C N 105238752A1.一种高效体外扩增自体NK细胞的培养体系，其特征在于，所述的培养体系包括含GT-T551基础培养基、特异因子组合A和特异因子组合B；所述的特异因子组合A包含IL-2、IL-12、IL-15、lL-17，IL-18、IL-22，其中IL-2浓度为1000u/ml、IL-12的浓度为100-200ng/ml、IL-15的浓度为100-200ng/ml、IL-17的浓度为200-400ng/ml、IL-18的浓度为100-200ng/ml、IL-22的浓度为100-200ng/ml；所述的特异因子组合B包含来自天然中药物质提取物的单个成分或多个成分组合：为人参皂苷、三七皂苷、紫杉醇、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、黄芩素、沙苑子总黄酮、姜黄素、云芝多糖中的一种或两种物质组合，其浓度分别为人参皂苷2-5ug/ml、三七皂苷2-5ug/ml、紫杉醇2-6ug/ml、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)5-8ug/ml、黄芩素5-8ug/ml、沙苑子总黄酮3-5ug/ml、姜黄素3-5ug/ ml、云芝多糖5-10ug/ml。

贴膏药可以治癌症一、治疗癌症的最新成果“秦氏御医消瘤法”最大的特色就是口服、含化、外敷用药三管齐下，配合作用，达到治疗癌症的最佳效果，而外敷用药指的就是“秦氏抗癌点穴膏”。

“秦氏抗癌点穴膏”的发明人济南中医肿瘤医院院长秦旭东先生，是清代御医秦本煜第八代传人，得祖先《千金不与世人传》、《咽喉指掌》、《秦氏秘笈六法纲要》三部医学奇书的真传。

秦旭东先生虽出身于中医世家，但并不拘泥于传统医学，他注重学习和吸取世界最先进的医学抗癌成果，在他的治癌理念中，没有中医、西医的界限之分，一切治疗都是围绕着对患者负责的态度和从最佳治疗方案上考虑问题。

他治学严谨，勤于实践，博采众长，锐意创新，在秉承祖国医学精华及祖传秘笈的同时，大胆吸取现代医学科技的最新成果，尤其是将最新治疗癌症的分子靶向技术和扩增活化的自体淋巴细胞（EAAL）技术的理念融入到了中医治疗癌症的方法中，采用中医传统的膏药形式与先进的抗癌理念相结合，并把疗效发挥到极致，同时将副作用降到最低。

“秦氏抗癌点穴膏”的发明是秦旭东先生在抗癌领域的突出贡献之一。

二、目前世界治癌最新理念：1.分子靶向治疗在细胞分子水平上，针对已经明确的致癌位点（该位点可以是肿瘤细胞内部的一个蛋白分子，也可以是一个基因片段），来设计相应的治疗药物，药物进入体内会特异地选择致癌位点来相结合发生作用，使肿瘤细胞特异性死亡。

缺陷：该疗法跟化疗一样也是通过西药作用于人体，对身体会产生相应的毒副作用。

还必须指出的是，目前分子靶向治疗还停留在理念阶段，技术上并不成熟，靶向药物的单独使用效果并不明显，费用却很昂贵，而且很多癌症患者并不在靶向治疗范围之列。

2.扩增活化的自体淋巴细胞（Expanded Activated Autologous Lymphocytes，英文缩写EAAL）属过继性细胞免疫治疗EAAL疗法在治疗中使用的淋巴细胞采自患者自身的外周血，在2周左右时间内，通过体外培养可以活化扩增100-1000倍，再将这些活化扩增的自体淋巴细胞回输患者体内，从中获得活化细胞80%以上是细胞毒性T淋巴细胞（CTL 细胞）。

全球顶尖肿瘤治疗技术—第5代强效CIK，正悄然兴起1、强效CIK疗法适应症：●已明确诊断的恶性实体瘤：肝癌，肺癌，肾癌，黑色素瘤，乳腺癌，恶性脑肿瘤，卵巢癌，前列腺癌，膀胱癌，食道癌，胰腺癌，宫颈癌等；●慢性传染病或感染患者：乙型肝炎，丙型肝炎患者，慢性寄生虫感染等●体质虚弱或有肿瘤病史的人群2、强效CIK细胞治疗禁忌症◆T细胞淋巴瘤，骨髓瘤，部分外周侵犯的淋巴瘤◆器官移植后，长期使用免疫抑制药物或正在使用免疫抑制药物的患者◆自身免疫病患者3、副作用强效CIK细胞回输时，部分患者（10—15%）会出现低热（37—38℃），这是短时间的自限性症状，回输后0.5—4小时即可恢复正常，可不处理或者使用解热剂对症处理即可。

第5代强效CIK细胞治疗流程扩增活化的自体淋巴细胞（强效CIK）治疗肿瘤-------最好的医生就是自身“免疫系统”恶性肿瘤是威胁人类健康和生命的最大因素之一，自1982年国外学者提出生物反应调节剂以来，肿瘤的生物治疗越来越受到国内外学者的重视。

随着细胞生物学，分子生物学及生物工程技术的迅速发展，肿瘤的生物治疗研究取得了重大突破，越来越多的被用于恶性肿瘤患者的治疗，对于杀灭肿瘤细胞，促进患者免疫系统重建，消除残余病变以及骨髓净化，预防肿瘤的复发和转移都具有良好的效果。

人体的免疫系统存在的T淋巴细胞能够直接杀伤靶细胞，监控肿瘤细胞的增殖，是抵御病毒感染、肿瘤形成的英勇斗士。

但是，在肿瘤患者体内，免疫系统功能明显减弱，T淋巴细胞的数量和功能都有不同程度的下降，难以抵御肿瘤细胞的大规模增生。

因此，国内众多著名医院都采用了国际先进水平的强效CIK技术，通过从自身静脉血中提取淋巴细胞，在体外进行扩增，然后将活化的淋巴细胞回输患者体内，用自身免疫细胞杀伤肿瘤细胞，以此达到治疗肿瘤的目的。

使用该项技术进行肿瘤的治疗，因为全部细胞都是自体细胞，不会引起排异反应，也不会有大量使用化疗药物的各种副反应，效果安全且疗效确切，在临床实践中已经得到了证实。

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活细胞疗法有哪些特点
导语：随着科学技术的发达，很多有效的科学技术，也被用到了医疗设备当中，用到了对患者治疗当中，和细胞疗法是一种新型的治疗方式，主要用于治疗
随着科学技术的发达，很多有效的科学技术，也被用到了医疗设备当中，用到了对患者治疗当中，和细胞疗法是一种新型的治疗方式，主要用于治疗各种疑难杂症性的遗传疾病，该种治疗方法都具有哪些特点呢，下面我们就了解下活细胞疗法有哪些特点。

随着基因工程和细胞培养技术的提高和完善，近年来，国际上兴起了一种用活细胞作为治疗剂，医疗各种疑难遗传病症的“活细胞疗法”。

这种目前仍处于试验阶段，尚未推广。

然而这种活细胞疗法最大的优点就是可以向扩散的癌症进攻而不伤害正常细胞，所以比化疗更为有效。

这一新兴的医疗方法主要是采用遗传工程在体外繁殖患者的自体细胞，包括淋巴细胞、骨髓细胞、肿瘤浸润的细胞、异体的胚胎细胞、婴儿脐带细胞、胸腺细胞等活细胞，使之扩增或产生具有疗效的物质（抗体、蛋白、激素等），再将这些活细胞注入或植入患者体中，来医治一些恶性肿瘤和血癌等疾病。

从国内外临床实验和应用来看，这种活细胞疗法对癌症、白血病、糖尿病、血友病、烧伤以及艾滋病等严重的遗传病、传染病都有明显的疗效。

1，萃取自胚胎细胞的精华液的分化程度尚未完整，抗体原的程度低，比较容易被人体吸收。

2，胚胎的萃取精华都是天然活化，对人组织的整体都有刺激活化的效用。

3，活细胞萃取精华好像是一个产生新蛋白质的模块，这些模块的基因组会与人体的基因组合成一体。

这两组基因组合成一起会产生新
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淋巴瘤自体干细胞移植原理最近在研究淋巴瘤自体干细胞移植原理，发现了一些有趣的事儿，今天就来和大家好好聊聊。

咱们先从生活中一个常见的现象说起吧。

想象一下，你有一片花园，里面种满了各种花草。

突然，有一种特别厉害的害虫入侵了花园，这种害虫就像淋巴瘤细胞，它在花园（身体）里大肆破坏，让原本美丽的花园变得衰败。

而正常的花草就类似于健康细胞，被害虫弄得奄奄一息。

淋巴瘤是一种在淋巴细胞中产生的肿瘤。

自体干细胞移植呢，就像是给这个花园来一次彻底的改造。

打个比方，自体干细胞就好比是花园里最有生命力、最顽强的种子。

在身体里呢，这些干细胞可以发育成各种健康的血细胞，就像种子能长成各种花草一样。

在进行自体干细胞移植之前，要先把自己体内的干细胞收集起来存好，就好像我们把那些好种子先从危险的花园里找到安全的地方存放起来。

然后呢，医生会给患者用一些高强度的药物或者放疗，这些就像是强力杀虫剂，尽可能地把那些像害虫一样的淋巴瘤细胞都消灭干净。

但是，这样做的时候，也会把身体里正常的细胞也“误杀”不少，就像杀虫剂太厉害，连有益的昆虫也给杀死了，花园的土壤（身体内环境）变得非常贫瘠。

老实说，我一开始也不明白，为什么要这么大费周章。

这就要说到存好的那些干细胞了，这时候把之前存起来的自体干细胞再输回体内，这些坚强的“种子”就会重新在这片“土壤”里生根发芽，慢慢恢复身体正常的造血功能以及免疫系统。

比如说，我有个朋友的亲戚得了淋巴瘤做了这个自体干细胞移植。

在移植前，整个人特别虚弱，因为那些癌细胞折腾得太厉害，而且化疗放疗的过程也很痛苦。

但是移植后的一段时间，随着干细胞在体内慢慢发挥作用，就像新种子慢慢长成茁壮的花草一样，他的身体也开始一步步恢复了，血细胞的各项指标也慢慢正常了。

说到这里，你可能会问，那这个过程有没有什么风险呢？这当然是有的。

就像移苗种树的时候，新的树苗不一定能完全适应新环境，干细胞移植回去后也可能存在排异或者是感染等风险，所以在整个移植过程中和移植后，都需要小心地呵护，也就是要接受严密的医学监测。

EAAL扩增活化的自体淋巴细胞治疗肿瘤技术简介Introduction of EAAL Therapy 肿瘤免疫治疗的机制Mechanisms of Cancer Immunotherapy通过调动机体自身的免疫系统，达到控制肿瘤生长，杀伤肿瘤细胞的目的。

? 前提：–肿瘤细胞有别于正常细胞? 肿瘤抗原? 肿瘤特异性T细胞免疫应答? 肿瘤特异性抗体免疫应答? 天然免疫对肿瘤细胞的杀伤作用如何达到有效的免疫治疗效果? 有足够可以识别肿瘤抗原的杀伤性T细胞? 机体的免疫环境有利于上述细胞发挥抗肿瘤功能–Th1/Th2 – Treg ? 这些T细胞可以到达肿瘤组织局部– T 细胞归巢? 在肿瘤局部，这些T细胞可以发挥有效的杀伤功能–肿瘤基质及肿瘤组织微环境肿瘤的免疫治疗方法Approches of Cancer Immunotherapy 肿瘤疫苗过继细胞免疫治疗细胞免疫治疗Cellular Immunotherapy ? ? 包括肿瘤在内的多种慢性病的最重要的生物治疗方法之一肿瘤的细胞免疫治疗：–非特异性※LAK细胞※CIK细胞※EAAL细胞–特异性※Provenge,树突状细胞※肿瘤特异性T细胞其它慢性病的细胞免疫治疗：※慢性病毒感染性疾病乙肝、丙肝艾滋病※慢性寄生虫感染※糖尿病※多发性硬化症※系统性红斑狼疮扩增活化的自体淋巴细胞（EAAL）的定义自体免疫细胞治疗技术CD3+ T淋巴细胞为主（95.91%±0.24% ），含少量NK细胞体外扩增活化肿瘤杀伤功能改进的LAK和CIK治疗：细胞培养效率和肿瘤杀伤能力显著增强EAAL是Expanded Activated Autologous Lymphocytes（扩增活化的自体淋巴细胞）的简称。

其定义是通过采取机体自身20-100ml静脉血，分离获得0.8-3 x 107外周血单个核细胞，经过体外无血清培养基培养，获得以CD3细胞为主的，包含CD8+ T淋巴细胞、CD4+ T淋巴细胞、CD3+CD56+ NKT细胞、NK细胞，细胞数量在3 x 109以上的活化的混合淋巴细胞，这些细胞在体外具有明确肿瘤杀伤功能。