食品卫生微生物检验实验室操作技术(doc 10)

食品卫生微生物检验1按照GB 4789.2－2016菌落总数测定进行液体样品测定时，若两个接种原液的样品的培养皿中均无菌落出现，则应报告（）CFU/ml。

A、0B、＜1C、＜10D、＜1×稀释倍数正确答案：B2在环境卫生饮水卫生和食品卫生学中，常用做被粪便污染的检测指标是()A、粪链球菌B、大肠菌群C、沙门氏菌D、金黄色葡萄球菌正确答案：B3（）发酵利用试验在微生物法检验食品中大肠菌群上有重要意义。

A、葡萄糖B、乳糖C、麦芽糖D、甘露醇正确答案：B4在环境卫生饮水卫生和食品卫生学中，常用做被粪便污染的检测指标是()A、粪链球菌B、大肠菌群C、沙门氏菌D、金黄色葡萄球菌正确答案：B5大肠菌群MPN计数法中，在LST肉汤管中的培养时间是（）A、24~48hB、24~36hC、36~48hD、48h±2h正确答案：A二.多选题（共5题,50.0分）1我国卫生部颁布的食品微生物指标有（）三项A、菌落总数B、大肠菌群C、大肠杆菌D、致病菌正确答案：ABD2以下关于菌落总数检验错误的是（）A、活菌计数法检测细菌总数应选择平均菌落数在30~300之间的稀释度B、活菌计数法检测细菌总数应选择平均菌落数在200~500之间的稀释度C、检测食品中菌落总数的培养是48hD、检测食品中菌落总数的培养是24h正确答案：BD3以下关于大肠菌群检测说法错误的是（）A、MPN法是待测样品经系列稀释并培养后，根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度，应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的最大可能数B、MPN法中从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过20minC、初发酵实验中，培养24±2h未产气者进行复发酵试验D、凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性正确答案：BC4空气中微生物检验样品采集方法有()。

A、直接沉降法B、过滤法C、气流撞击法D、通风法正确答案：ABC5菌落总数测定时需要注意哪些误差？（）A、菌落计数误差B、菌落分布误差C、吸管容积误差D、稀释操作误差正确答案：ABCD一.单选题（共7题,70.0分）1关于金黄色葡萄球菌的检验，不包括（）A、鉴定试验包括动力试验B、使用Baird-Parker平板分离C、革兰氏染色阳性D、血浆凝固酶试验阳性正确答案：A2产生血浆凝固酶的病原菌是( )A、沙门氏菌B、单增李斯特氏菌C、大肠杆菌D、金黄色葡萄球菌正确答案：D3下列关于金黄色葡萄球菌的描述正确的是（）A、革兰染色阴性B、能产生血浆凝固酶C、培养需要特殊培养基D、耐盐性差正确答案：B4金黄色葡萄球菌感染（）A、脓液稠厚、黄色、无臭味B、脓液稀薄量大，淡红色C、脓液呈淡绿色，特殊的甜腥臭味D、脓液呈特殊恶臭味正确答案：A5下列关于金黄色葡萄球菌的叙述中，正确的是（）A、革兰染色为红色B、没有荚膜C、能产生芽胞D、不能分解乳糖和甘露糖正确答案：B6检测金黄色葡萄球菌所用的增菌液是（）A、7.5%的氯化钠肉汤B、普通肉汤C、蛋白胨水D、TTB正确答案：A7金黄色葡萄球菌在血平板上的菌落特点是( )A、金黄色，大而凸起的园形菌落B、金黄色，表面光滑的园形菌落，周围有溶血环C、金黄色，透明，大而凸起的园形菌落D、白色透明圆形菌落正确答案：B二.多选题（共2题,20.0分）1以下（）在血平板上有溶血现象。

微生物检验实验室操作技术要求第一节实验室管理制度一、实验室管理制度1．实验室应制定仪器配备管理、使用制度，药品管理、使用制度，玻璃器皿管理，使用制度，并根据安全制度和环境条件的要求，本室工作人员应严格掌握，认真执行。

2．进入实验室必须穿工作服，进入无菌室换无菌衣、帽、鞋，戴好口罩，非实验室人员不得进入实验室，严格执行安全操作规程。

3．实验室内物品摆放整齐，试剂定期检查并有明晰标签，仪器定期检查、保养、检修, 严禁在冰箱内存放和加工私人食品。

4．各种器材应建立请领消耗记录，贵重仪器有使用记录，破损遗失应填写报告；药品、器材、菌种不经批准不得擅自外借和转让，更不得私自拿出，应严格执行《菌种保管制度》。

5．禁止在实验室内吸烟、进餐、会客、喧哗，实验室内不得带入私人物品，离开实验室前认真检查水、电、暖气、门窗，对于有毒、有害、易燃、污染、腐蚀的物品和废弃物品应按有关要求执行。

6．科、室负责人督促本制度严格执行，根据情况给于奖惩，出现问题立即报告，造成病原扩散等责任事故者，应视情节直至追究法律责任。

二、仪器配备、管理使用制度1．食品微生物实验室应具备下列仪器：培养箱、高压锅、普通冰箱、低温冰箱、厌氧培养设备、显微镜、离心机、超净台、振荡器、普通天平、千分之一天平、烤箱、冷冻干燥设备、匀质器、恒温水浴箱、菌落计数器、生化培养箱，电位pH计、高速离心机。

2．实验室所使用的仪器、容器应符合标准要求，保证准确可靠，凡计量器具须经计量部门检定合格方能使用。

3．实验室仪器安放合理，贵重仪器有专人保管，建立仪器档案，并备有操作方法，保养、维修、说明书及使用登记本，做到经常维护、保养和检查，精密仪器不得随意移动，若有损坏需要修理时，不得私自拆动、应写出报告、通知管理人员，经科室负责人同意填报修理申请、送仪器维修部门。

4．各种仪器（冰箱、温箱除外），使用完毕后要立即切断电源，旋钮复原归位，待仔细检查后，方可离去。

5．一切仪器设备未经设备管理人员同意，不得外借，使用后按登记本的内容进行登记。

食品微生物实验报告（1）了解培养基的配置原理和方法，掌握别离培养微生物的有关准备工作。

（2）掌握高压灭菌方法及原理（1）培养基的制备原理：培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。

从营养角度分析：营养：碳源、氮源、能源、生长素、水分和无机盐等；?适宜的酸碱度(pH值)和一定缓冲能力；?一定的氧化复原电位；?适宜的渗透压。

琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。

加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固，不容易被微生物污染。

但屡次反复融化，其凝固性降低。

（2）湿热灭菌原理－高压蒸汽灭菌在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。

在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。

在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。

实验材料与方法配制培养基所需器材实验设备：高压蒸汽灭菌器。

实验器材：500ml三角烧瓶、蓝盖瓶、5ml刻度吸管、培养基、天平、砝码、称量纸、药勺、500ml、100ml量筒、牛皮纸、硫酸纸、橡皮筋、铁丝筐、平皿、剪刀等。

培养基等集中放讲台前高压桶内，送到洗刷室统一高压灭菌条件及本卷须知高压灭菌条件：121.3℃，15min。

含糖培养基113℃，15min。

倒平板电炉加热灭菌好的培养基翻开平皿包装倒平板（10块）本卷须知：空气环境无菌（应在酒精灯火焰周围无菌区）。

a.在酒精灯火焰处，倾斜翻开瓶口。

b.瓶口要过火焰。

c.左手掀开平皿小口。

d.倾注满皿底再多一点，约10ml（7cm直径平皿）。

e.推放一边要轻缓，不能晃起琼脂挂壁，易在培养过程中污染杂菌。

f.完全凝固再翻转平板放塑料筐内，4℃备用。

（1）如何证明培养基灭菌是否彻底?把灭菌后的培养基按灭菌锅内的不同位置，每处抽取数管(瓶)，标上记号，置25℃～30℃培养一周左右进展检查。

如果培养基没有什么变化，说明灭菌效果良好；如果某一位置的培养基出现了杂菌菌落，可能是摆放的太紧，导致蒸汽不畅，或锅的构造不合理等原因所致，应根据上述情况进展改进；如果大部分或全部菌种瓶都出现杂菌，说明灭菌温度或灭菌时间不够，应提高压力或延长灭菌时间。

1、微生物检验一、微生物实验室概况食品微生物实验室主要负责各类微生物项目的检测,主要检测项目有菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母、乳酸菌、双歧杆菌、罐头商业无菌、致病菌(如沙门氏菌、志贺氏菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌等)。

微生物实验室由准备室、洗涤室、灭菌室、无菌室、恒温培养室与普通实验室六部分组成。

这些房间的共同特点就是地板与墙壁的质地光滑坚硬,仪器与设备的陈设简洁,便于打扫卫生。

二、微生物实验室功能分区(一)准备室准备室用于配制培养基与样品处理等。

室内设有试剂柜、存放器具或材料的专柜、实验台、电炉、冰箱与上下水道、电源等。

(二)洗涤室洗涤室用于洗刷器皿等。

由于使用过的器皿已被微生物污染,有时还会存在病原微生物。

因此,在条件允许的情况下,最好设置洗涤室。

室内应备有加热器、蒸锅,洗刷器皿用的盆、桶等,还应有各种瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等。

(三)灭菌室灭菌室主要用于培养基的灭菌与各种器具的灭菌,室内应备有高压蒸汽灭菌器、烘箱等灭菌设备及设施。

(四)无菌室无菌室一般为4 - 5 平方米、高 2、5 米的独立小房间(与外间隔离),专辟于微生物实验室内。

无菌室也称接种室,就是系统接种、纯化菌种等无菌操作的专用实验室。

在微生物工作中,菌种的接种移植就是一项主要操作,这项操作的特点就就是要保证菌种纯种,防止杂菌的污染。

在一般环境的空气中,由于存在许多尘埃与杂菌,很易造成污染,对接种工作干扰很大。

1、无菌室的设置无菌室应根据既经济又科学的原则来设置。

其基本要求有以下几点:(1)无菌室应有内、外两间,内间就是无菌室,外间就是缓冲室。

房间容积不宜过大,以便于空气灭菌。

最小内间面积2×2、5＝5m2,外间面积1×2＝2m2,高以2、5m以下为宜,都应有天花板。

(2)内间应当设拉门,以减少空气的波动,门应设在离工作台最远的位置上;外间的门最好也用拉门,要设在距内间最远的位置上。

(3)在分隔内间与外间的墙壁或“隔扇”上,应开一个小窗,作接种过程中必要的内外传递物品的通道,以减少人员进出内间的次数,降低污染程度。

食品卫生微生物检验实验室操作技术要求第一节实验室管理制度一、实验室管理制度1．实验室应制定仪器配备管理、使用制度，药品管理、使用制度，玻璃器皿管理，使用制度，并根据安全制度和环境条件的要求，本室工作人员应严格掌握，认真执行。

2．进入实验室必须穿工作服，进入无菌室换无菌衣、帽、鞋，戴好口罩，非实验室人员不得进入实验室，严格执行安全操作规程。

3．实验室内物品摆放整齐，试剂定期检查并有明晰标签，仪器定期检查、保养、检修, 严禁在冰箱内存放和加工私人食品。

4．各种器材应建立请领消耗记录，贵重仪器有使用记录，破损遗失应填写报告；药品、器材、菌种不经批准不得擅自外借和转让，更不得私自拿出，应严格执行《菌种保管制度》。

5．禁止在实验室内吸烟、进餐、会客、喧哗，实验室内不得带入私人物品，离开实验室前认真检查水、电、暖气、门窗，对于有毒、有害、易燃、污染、腐蚀的物品和废弃物品应按有关要求执行。

6．科、室负责人督促本制度严格执行，根据情况给于奖惩，出现问题立即报告，造成病原扩散等责任事故者，应视情节直至追究法律责任。

二、仪器配备、管理使用制度1．食品微生物实验室应具备下列仪器：培养箱、高压锅、普通冰箱、低温冰箱、厌氧培养设备、显微镜、离心机、超净台、振荡器、普通天平、千分之一天平、烤箱、冷冻干燥设备、匀质器、恒温水浴箱、菌落计数器、生化培养箱，电位pH计、高速离心机。

2．实验室所使用的仪器、容器应符合标准要求，保证准确可靠，凡计量器具须经计量部门检定合格方能使用。

3．实验室仪器安放合理，贵重仪器有专人保管，建立仪器档案，并备有操作方法，保养、维修、说明书及使用登记本，做到经常维护、保养和检查，精密仪器不得随意移动，若有损坏需要修理时，不得私自拆动、应写出报告、通知管理人员，经科室负责人同意填报修理申请、送仪器维修部门。

4．各种仪器（冰箱、温箱除外），使用完毕后要立即切断电源，旋钮复原归位，待仔细检查后，方可离去。

5．一切仪器设备未经设备管理人员同意，不得外借，使用后按登记本的内容进行登记。

微生物检验实验室操作技术要求第一节实验室管理制度一、实验室管理制度1．实验室应制定仪器配备管理、使用制度，药品管理、使用制度，玻璃器皿管理、使用制度，并根据安全制度和环境条件的要求，本室工作人员应严格掌握，认真执行。

2．进入实验室必须穿工作服，进入无菌室换无菌衣、帽、鞋，戴好口罩，非实验室人员不得进入实验室，严格执行安全操作规程。

3．实验室内物品摆放整齐，试剂定期检查并有明晰标签，仪器定期检查、保养、检修, 严禁在冰箱内存放和加工私人食品。

4．各种器材应建立请领消耗记录，贵重仪器有使用记录，破损遗失应填写报告；药品、器材、菌种不经批准不得擅自外借和转让，更不得私自拿出。

5．禁止在实验室内吸烟、进餐、会客、喧哗，实验室内不得带入私人物品，离开实验室前认真检查水电，对于有毒、有害、易燃、污染、腐蚀的物品和废弃物品应按有关要求执行。

6．负责人严格执行本制度，出现问题立即报告，造成病原扩散等责任事故者，应视情节直至追究法律责任。

二、仪器配备、管理使用制度1．食品微生物实验室应具备下列仪器：培养箱、高压锅、普通冰箱、低温冰箱、厌氧培养设备、显微镜、离心机、超净台、振荡器、普通天平、千分之一天平、烤箱、冷冻干燥设备、匀质器、恒温水浴箱、菌落计数器、生化培养箱，电位pH计、高速离心机。

2.实验室所使用的仪器、容器应符合标准要求，保证准确可靠，凡计量器具须经计量部门检定合格方能使用。

3．实验室仪器安放合理，贵重仪器有专人保管，建立仪器档案，并备有操作方法，保养、维修、说明书及使用登记本，做到经常维护、保养和检查，精密仪器不得随意移动，若有损坏需要修理时，不得私自拆动、应写出报告、通知管理人员，由经理同意填报修理申请、送仪器维修部门。

4．各种仪器（冰箱、温箱除外），使用完毕后要立即切断电源，旋钮复原归位，待仔细检查后，方可离去。

5．一切仪器设备未经设备管理人员同意，不得外借，使用后按登记本的内容进行登记。

6．仪器设备应保持清洁，一般应有仪器套罩。

食品微生物检验复习资料绪论食品卫生：指“为了确保食品安全性和适用性在食物链的所有阶段必须采取的一切条件和措施”。

食品卫生学：研究食品中存在或从环境可能进入食品、能威胁人体健康的有害物质和因素及其评价方法、预防与控制措施，以提高食品卫生质量，保证食用者安全的学科。

食品微生物检验学：是运用微生物学的理论与技术，研究食品中微生物的种类、数量、性质、活动规律等特性，建立食品微生物学检验方法和确定食品卫生的微生物学标准的一门应用性科学。

食品微生物检验学特点：1.研究对象以及研究范围广：食品种类多，各地区有各地区的特色，分布不同，在食品来源、加工、运输等都可能受到各种微生物的污染；微生物的种类非常多，数量巨大。

2.涉及学科多样：食品微生物检验是以微生物学为基础的，还涉及生物学、生物化学、工艺学、发酵学等方面的知识，以及兽医学方面的知识等。

根据不同的食品以及不同的微生物，采取的检验方法也不同。

3.实用性及应用性强：本学科在促进人类健康方面起着重要的作用。

通过检验，掌握微生物的特点及活动规律，识别有益的、腐败的、致病的微生物，在食品生产和保藏过程中，可以充分利用有益微生物为人类服务，同时控制腐败和病原微生物的活动，防止食品变质和杜绝因食品而引起的病害，保证食品卫生的安全。

4.采用标准化：在食品的卫生质量标准中，有明确的微生物学标准。

必须达到法规规定的标准。

《中华人民共和国国家标准——食品卫生检验方法》中的具体规定，这是法定的检验依据。

食品微生物检验的任务：1、研究各类食品中微生物种类、分布及其特性2、研究食品的微生物污染及其控制，提高食品的卫生质量3、研究微生物与食品保藏的关系4、研究食品中的致病性、中毒性、致腐性微生物5、研究各类食品中微生物的检验方法及标准；为生产出安全、卫生、符合标准的食品提供科学依据。

第一章微生物常规鉴定技术接种：将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。

划线接种：这是最常用的接种方法。

《食品微生物检验技术》课程标准课程名称：食品微生物检验技术 课程类型：专业核心课程 适用专业：食品营养与检测 课程学分：8 总学时：1441 课程定位食品微生物检验技术是食品营养与检测专业的一门工学结合的专业核心课程，是食品检验两大工作岗位群之一，实践性、技术性很强。

在掌握与食品卫生检验中的有关微生物特性的基础上，通过系统的检验方法，及时、准确地对食品样品作出食品卫生检验的报告，为食品安全生产及卫生监督提供科学依据。

2 课程目标1.能力目标1.1 掌握微生物检验过程中无菌操作规程；1.2 正确使用光学显微镜、高压蒸汽灭菌锅、干燥箱、均质器、超净工作台等微生物检验有关仪器和设备；基础化学食品生物化学食品检验校内生产训练食品微生物检验技术顶岗实习1、 食品微生物类群鉴别、测定技术；2、 食品微生物检验室建设；3、 食品卫生细菌学检验技术；4、 真菌学检验技术；5、 食品中常见病原微生物检验技术；6、 其他的微生物检验技术1.3 熟练掌握无菌操作技术、培养基制备技术、消毒灭菌技术、分离纯培养和接种技术、染色技术等微生物基本操作技能；1.4 掌握各类食品检样的菌落总数、大肠菌群、乳酸菌、霉菌和酵母菌、致病菌等常规项目的检测技术，能掌握罐头食品商业无菌的检验技术；1.5 熟练分析总结实验结果，并做出实验结果，并作出正确、规范的实验报告。

2.知识目标2.1 理解和掌握无菌操作技术特点，五大类微生物类群的形态特征，细菌的革兰氏染色的原理和方法，光学显微镜的工作原理和技术特点，培养基的配制原则和种类，微生物生长的规律以及影响微生物生长的因素；2.2 熟悉微生物检验的基本程序和要求；2.3 常规项目的检验的卫生学意义及检验程序；2.4 理解《中华人民共和国国家标准食品卫生检验方法微生物部分》（简称国标）；2.5 熟悉常见致病菌的生物学特性，能在食品检验中进行致病菌的鉴别；2.6 检验新技术基本原理。

3.素质目标3.1 培养学生自觉学习新技术、新知识的能力；3.2 重视培养学生的诚信品质、敬业精神和责任意识、遵纪守法意识、团结合作意识；3.3 提高学生的实践能力、创造能力、就业能力。

食品微生物检验学二、食品微生物检验学1、概念食品微生物检验学是运用微生物学的实际与技术，研讨食品中微生物的种类、特性等，树立食品微生物学检验方法和确定食品卫生的微生物学规范的一门运用性迷信。

2、特点1)研讨对象以及研讨范围广:食品种类多，各有特征，散布不同；微生物的种类十分多，数量庞大；在食品来源、加工、运输等都能够遭到各种微生物的污染。

2)触及学科多样 :触及生物学、生物化学、工艺学、发酵学等方面的知识，以及兽医学方面的知识等。

3)适用性及运用性强:在促进人类安康方面起着重要的作用。

检验——应用、控制微生物——防止食品蜕变和根绝因食源性病害——保证食品卫生的平安。

4)采用规范化(受法规约束):«中华人民共和国国度规范——食品卫生检验方法»是法定的检验依据。

3、目的为消费出平安、卫生、契合规范的食品提供迷信依据，保证人类取得契合卫生要求、适于人类消费的食品。

4、食品微生物检验学的义务1)研讨各类食品中微生物种类、散布及其特性2)研讨食品的微生物污染及其控制，提高食品的卫生质量3)研讨微生物与食品保藏的关系4)研讨食品中的致病性、中毒性、致腐性微生物5)研讨各类食品中微生物的检验方法及规范5、食品微生物检验的开展食品微生物检验学的开展是与整个微生物学的开展是分不开的。

人类很早就末尾应用微生物的许多特性为人类的消费、生活效劳，现代人类早已将微生物学知识用于工农业消费和疾病防治中，公元前二千多年的夏禹时代，就有仪狄酿酒的记载。

北魏(公元386～534年)«齐民要术»一书中详细记载了制醋的方法。

临时以来官方常用的盐腌、糖渍、烟熏、风干等保管食物的方法，实践上正是经过抑制微生物的生长而防止食物的腐朽蜕变。

在预防医学方面，我国自古就有将水煮沸后饮用的习气。

明朝李时珍在«本草纲目»中指出，将病人的衣服蒸事先再穿就不会传染上疾病，说明已有消毒的记载。

1)致病菌检测阶段微生物的发现：首先观察到微生物的是荷兰人吕文虎克(Antory Van Leeuwenhoek，1632～1723)。

《食品微生物检验技术》课程标准课程名称：食品微生物检验技术课程代码：0803003课程类别：专业课课程性质：必修课课程学分：4 课程学时：64适用专业：食品营养与检验开课学期：第二学期一、课程定位《食品微生物检验技术》为食品营养与检验的专业课，属于职业发展平台中的必修课。

通过学习，学生能够掌握食品微生物检验的基本理论知识、实验操作技术能力，具备食品微生物检测职业素质。

《食品微生物检验技术》是在《分析化学》、《食品生化》等基础上开设的。

为后续的专业课程《食品理化检测技术》、《食品质量管理》、《食品安全控制》、获得食品检验员职业资格证书以及毕业后从事食品检测、食品品质控制等奠定坚实的基础。

二、课程目标食品营养与检验专业开设《食品微生物检验技术》，该课程是我院食品营养与检测专业的必修课程之一，也是核心课程。

安排在第二学期开设，是学生今后从事食品检验工作的必备知识。

本课程总学时数为4×16=64学时，其中理论课时24学时，实验40学时。

通过以基础知识和基本技能、食品微生物形态观察、食品微生物数量及大小测定、食品微生物培养及分离等典型实验项目为载体，进行任务型的学习教学设计。

在微生物实验中结合企业目前的检测规范，培养学生的管理能力。

（一）知识目标1.掌握食品微生物检验技术的基础理论、。

2.掌握食品微生物检验的基本方法3、掌握食品卫生细菌学的检测方法4、掌握食品中病原微生物的检测方法5、掌握发酵食品微生物的检测方法（二）能力目标1．能熟练使用显微镜及维护、2.能进行微生物的制片及形态观察3.能进行微生物的计数4．能测定微生物的大小5.能进行培养基的制备及灭菌6.能培养微生物7.能对微生物纯种分离（三）素质目标1.团队工作、与人沟通能力。

2.注意工作保护能力。

3.提高学生观察、分析和判断问题的能力。

4.严谨的工作作风、实事求是的工作态度。

5.遵守有关法律法规。

6.具有安全知识与职业道德。

三、教学内容四、教学设计项目一：食品微生物检验基本条件学时：14学时教学目标：知识目标：了解食品中的微生物的主要来源、不同微生物对营养的要求，了解食品质量的主要指标、食品检验中细菌总数、大肠菌群数的定义及其检验意义、微生物检验室和无菌室的基本要求，认识和熟悉微生物检验中常用的仪器设备机器结构与性能认识和熟悉微生物检验中常用的常用玻璃器皿了解染色的基本原理，掌握常用染料的性质，了解培养基的种类及一些常用的培养基的用途。

1.微生物检验一、微生物实验室概况食品微生物实验室主要负责各类微生物项目的检测，主要检测项目有菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母、乳酸菌、双歧杆菌、罐头商业无菌、致病菌（如沙门氏菌、志贺氏菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌等）。

微生物实验室由准备室、洗涤室、灭菌室、无菌室、恒温培养室和普通实验室六部分组成。

这些房间的共同特点是地板和墙壁的质地光滑坚硬，仪器和设备的陈设简洁，便于打扫卫生。

二、微生物实验室功能分区（一）准备室准备室用于配制培养基和样品处理等。

室内设有试剂柜、存放器具或材料的专柜、实验台、电炉、冰箱和上下水道、电源等。

（二）洗涤室洗涤室用于洗刷器皿等。

由于使用过的器皿已被微生物污染，有时还会存在病原微生物。

因此，在条件允许的情况下，最好设置洗涤室。

室内应备有加热器、蒸锅，洗刷器皿用的盆、桶等，还应有各种瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等。

（三）灭菌室灭菌室主要用于培养基的灭菌和各种器具的灭菌，室内应备有高压蒸汽灭菌器、烘箱等灭菌设备及设施。

（四）无菌室无菌室一般为4 - 5 平方米、高 2.5 米的独立小房间(与外间隔离)，专辟于微生物实验室内。

无菌室也称接种室，是系统接种、纯化菌种等无菌操作的专用实验室。

在微生物工作中，菌种的接种移植是一项主要操作，这项操作的特点就是要保证菌种纯种，防止杂菌的污染。

在一般环境的空气中，由于存在许多尘埃和杂菌，很易造成污染，对接种工作干扰很大。

1. 无菌室的设置无菌室应根据既经济又科学的原则来设置。

其基本要求有以下几点：（1）无菌室应有内、外两间，内间是无菌室，外间是缓冲室。

房间容积不宜过大，以便于空气灭菌。

最小内间面积2×2.5＝5m2，外间面积1×2＝2m2，高以2.5m以下为宜，都应有天花板。

（2）内间应当设拉门，以减少空气的波动，门应设在离工作台最远的位置上；外间的门最好也用拉门，要设在距内间最远的位置上。

（3）在分隔内间与外间的墙壁或“隔扇”上，应开一个小窗，作接种过程中必要的内外传递物品的通道，以减少人员进出内间的次数，降低污染程度。

根据检验目的、食品特点、批量、检验方法、微生物的危害程度等确定采样方案。

应采用随机原则进行采样，确保所采集的样品具有代表性。

采样过程遵循无菌操作程序，防止一切可能的外来污染。

样品在保存和运输的过程中，应采取必要的措施防止样品中原有微生物的数量变化，保持样品的原有状态。

采样方案分为二级和三级采样方案。

二级采样方案设有n、c和m值，三级采样方案设有n 、c、m和M值。

n：同一批次产品应采集的样品件数；c：最大可允许超出m值的样品数；m：微生物指标可接受水平的限量值；M：微生物指标的最高安全限量值。

注1：按照二级采样方案设定的指标，在n 个样品中，允许有≤c 个样品其相应微生物指标检验值大于m 值。

注2：按照三级采样方案设定的指标，在n个样品中，允许全部样品中相应微生物指标检验值小于或者等于m值；允许有≤c个样品其相应微生物指标检验值在m值和M值之间；不允许有样品相应微生物指标检验值大于M值。

例如：n=5，c=2，m=100 CFU/g，M=1 000 CFU/g。

含义是从一批产品中采集5个样品，若5个样品的检验结果均小于或者等于m值(≤100 CFU/g) ，则这种情况是允许的；若≤2个样品的结果(X)位于m值和M值之间(100 CFU/g<X≤1 000CFU/g)，则这种情况也是允许的；若有3个及以上样品的检验结果位于m 值和M值之间，则这种情况是不允许的；若有任一样品的检验结果大于M值(>1 000CFU/g)，则这种情况也是不允许的。

按相应产品标准中的规定执行。

由工业化批量生产加工的食品污染导致的食源性疾病或者食品安全事件，食品样品的采集由餐饮单位或者家庭烹调加工的食品导致的食源性疾病或者食品安全事件，食品样品的采集按GB14938中卫生学检验的要求，以满足食源性疾病或者食品安全事件病因判定和病原确证的要求。

采样应遵循无菌操作程序，采样工具和容器应无菌、干燥、防漏，形状及大小适宜。

习题库项目一食品中的微生物及其检验一、名词解释1、微生物：2、食品微生物检验：3、食品变质：4、腐败：5、酸败：6、菌落总数：7、大肠菌群：8、MPN：二、填空题1、食品中的微生物的主要来源是、和。

2、引起食品腐败变质的原因主要有、、和等方面，其中，最普遍、最主要的因素是。

3、分解蛋白质的微生物以为主，其次是和。

4、分解糖类的微生物以为主，其次是和。

5、分解脂肪的微生物以为主，其次是和。

6、国家食品卫生标准一般包括三个方面的内容：、和。

7、微生物指标一般分为、和三项。

8、食品微生物检验包括和两个方面。

三、选择题1、下列描述的微生物特征中，不是所有微生物共同特征的是（）A.个体微小B.分布广泛C.种类繁多D.可无致病性E.只能在活细胞内生长繁殖2、土壤中，数量和种类最多的微生物是（）A、细菌B、霉菌C、酵母菌D、放线菌3、我国城市饮用水卫生标准规定（）A、每1000ml水中大肠杆菌＜3个B、每1000ml水中大肠杆菌＜30个C、每100ml水中大肠杆菌＜3个D、每100ml水中大肠杆菌＜30个E、每500ml水中大肠杆菌＜3个4、我国城市饮用水卫生标准规定（ E ）A、每ml水中细菌总数＜1000个B、每ml水中细菌总数＜10个C、每100ml水中细菌总数＜10个D、每500ml水中细菌总数＜10个E、每ml水中细菌总数＜100个四、判断题1、菌落计数以菌落形成单位（CFU）表示。

（）2、MPN是指可能产气的数量。

（）3、食品中病原微生物的检验，可以检验出少量的病原微生物（）五、问答题1、食品微生物检验的特点有哪些？2、食品微生物检验的任务是什么？3、食品微生物检验的内容主要包括哪些方面？每一个方面的检验项目是什么？4、食品质量的评价指标有哪些？并具体解释之。

5、食品微生物检验的意义是什么？6、食品中细菌总数检验的意义是什么？7、食品中大肠菌群检验的意义是什么？项目二食品微生物检验的基本条件与设备一、名词解释1、分辨力：2、相位：3、振幅：二、填空题1、无菌室通常包括和两部分，这两部分的比例一般为，高度一般 m左右。

微生物实验室安全管理制度一、实验室生物安全规程（一）进入规定1、在处理危险度2级或更高危险度级别的微生物的实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志。

2、只有经批准的人员方可进入实验室工作区域。

3、实验室的门应保持关闭。

4、儿童不应被批准或允许进入实验室工作区域。

（二）操作规范1、严禁用口吸移液管。

2、严禁将实验材料置于口内。

严禁舔标签。

3、所有的技术操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进行。

4、出现溢出、事故以及明显或可能暴露于感染性物质时，必须向实验室安全主管报告。

5、必须制订关于如何处理溢出物的书面操作程序，并予以遵守执行。

（三）人员防护1、在实验室工作时，任何时候都必须穿着工作服。

2、在进行可能直接或意外接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料或感染性动物的操作时，应戴上合适的手套。

手套用完摘除后必须洗手。

3、在处理完感染性实验材料和动物后，以及在离开实验室工作区域前，都必须洗手。

4、有喷溅的可能时，为了防止眼睛或面部受到泼溅物的伤害，应戴安全眼镜、面罩（面具）或其他防护设备。

5、不得在实验室内穿露脚趾的鞋子。

6、禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理隐形眼镜。

7、禁止在实验室工作区域储存食品和饮料。

8、在实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。

（四）实验室工作区1、实验室应保持清洁整齐，严禁摆放和实验无关的物品。

2、发生具有潜在危害性的材料溢出以及在每天工作结束之后，都必须清除工作台面的污染。

3、所有受到污染的材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用之前，必须清除污染。

4、在进行包装和运输时必须遵循国家和∕或国际的相关规定。

5、如果窗户可以打开，则应安装防止节肢动物进入的纱窗。

（五）实验室生物安全预防技术实验室中标本的安全操作实验室标本的收集、运输和处理不当，会带来使相关人员感染的危险。

1、标本容器标本容器可以是玻璃的，但最好使用塑料制品。

标本容器应当坚固，正确地用盖子或塞子盖好后应无泄漏。

食品微生物检验复习资料绪论食品卫生：指“为了确保食品安全性和适用性在食物链的所有阶段必须采取的一切条件和措施”。

食品卫生学：研究食品中存在或从环境可能进入食品、能威胁人体健康的有害物质和因素及其评价方法、预防与控制措施，以提高食品卫生质量，保证食用者安全的学科。

食品微生物检验学：是运用微生物学的理论与技术，研究食品中微生物的种类、数量、性质、活动规律等特性，建立食品微生物学检验方法和确定食品卫生的微生物学标准的一门应用性科学。

食品微生物检验学特点：1.研究对象以及研究范围广：食品种类多，各地区有各地区的特色，分布不同，在食品来源、加工、运输等都可能受到各种微生物的污染；微生物的种类非常多，数量巨大。

2.涉及学科多样：食品微生物检验是以微生物学为基础的，还涉及生物学、生物化学、工艺学、发酵学等方面的知识，以及兽医学方面的知识等。

根据不同的食品以及不同的微生物，采取的检验方法也不同。

3.实用性及应用性强：本学科在促进人类健康方面起着重要的作用。

通过检验，掌握微生物的特点及活动规律，识别有益的、腐败的、致病的微生物，在食品生产和保藏过程中，可以充分利用有益微生物为人类服务，同时控制腐败和病原微生物的活动，防止食品变质和杜绝因食品而引起的病害，保证食品卫生的安全。

4.采用标准化：在食品的卫生质量标准中，有明确的微生物学标准。

必须达到法规规定的标准。

《中华人民共和国国家标准——食品卫生检验方法》中的具体规定，这是法定的检验依据。

食品微生物检验的任务：1、研究各类食品中微生物种类、分布及其特性2、研究食品的微生物污染及其控制，提高食品的卫生质量3、研究微生物与食品保藏的关系4、研究食品中的致病性、中毒性、致腐性微生物5、研究各类食品中微生物的检验方法及标准；为生产出安全、卫生、符合标准的食品提供科学依据。

第一章微生物常规鉴定技术接种：将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。

划线接种：这是最常用的接种方法。

食品微生物检验检测练习题与参考答案一、单选题（共40题，每题1分，共40分）1、在实验室不慎将酒精灯打翻，酒精在桌上燃烧过起来，正确有效的灭火方法是（）A、用抹布抽打B、用嘴吹C、浇水D、用砂土掩盖正确答案：D2、测定菌落总数操作中，加入的营养琼脂的温度通常是（）左右A、46℃B、90℃C、55℃D、60℃正确答案：A3、食品菌落总数测定中，培养温度通常为A、46±1℃B、36±1℃C、20±1℃D、27±1℃正确答案：B4、罐头食品防止微生物污染，下面措施中（）应严加控制A、杀菌的温度与时间B、原材料应新鲜未变质C、车间、仓库的卫生条件D、抽样的感官、理化、微生物检验合格才出厂正确答案：A5、引起蛋白质分解而使食品腐败变质的微生物主要是A、曲霉B、酵母菌C、细菌D、青霉正确答案：B6、厌氧微生物的培养经常采用的方法是（）A、厌氧罐法B、厌氧袋法C、厌氧箱法D、这些都是正确答案：D7、细菌的芽孢是（）A、一种细菌接合的通道B、一种繁殖方式C、细菌生长发育的一个阶段D、一种运动器官正确答案：C8、在沙门氏菌检验中，为了验证培养物是否是沙门氏菌，必须要做的五项生化试验是A、硫化氢试验，靛基质试验、尿素酶试验、KCN试验、氨基酸脱氨酶试验B、硫化氢试验，靛基质试验、尿素酶试验、KCN试验、氨基酸脱羧酶试验C、硫化氢试验，靛基质试验、甲基红试验、KCN试验、氨基酸脱羧酶试验D、硫化氢试验，靛基质试验、甲基红试验、KCN试验、氨基酸脱氨酶试验正确答案：B9、下列何种微生物培养时会产生溶血环现象A、乙型溶血性链球菌B、军团菌C、肺炎支原体D、肺炎链球菌正确答案：A10、某样品经增菌后，取增菌液一环，接种BS平皿，其培养温度是36±1℃，培养时间是A、16~18hB、18~24hC、24~36hD、40~48h正确答案：D11、微生物的纯培养可用A、平板倾注法B、平板划线法C、单个细胞技术D、所有这些方法正确答案：D12、在测定菌落总数时，首先将食品样品作成（）倍递增稀释液。