抗生素的分离

中国抗生素杂志２０１０年４月第３５卷第４期　２８１　

素　果　文章编号：１００１—８６８９（２０１０）０４—０２８１—０５　

糖肽类抗生素Ⅳ＿甲基无糖万古霉素的分离、纯化和结构鉴定　

郭兆霞　阮林高：李航，朱丽　陈代杰　３　（１华东理工大学生物工程学院，生物反应器工程国家重点实验室，上海２００２３７；２上海来益生物药物研发中心，　上海２０１２０３；３上海医药工业研究院，创新药物与制药工艺国家重点实验室，上海２０００４０）　

摘要：目的　利用含Ｍ甲基转移酶的粗酶液对无糖万古霉素进行催化，从得到的反应液中分离、纯化Ⅳ＿甲基无糖万古霉　并进行结构鉴定。７５－，￣　利用大孔树脂吸附、中压反相制备色谱等方法进行分离纯化。利用光谱分析，进行结构解析。结　分离到一个糖肽类化合物Ⅳ＿甲基无糖万古霉素。结论经鉴定＾Ｌ甲摹无糖万古霉素为新结构化合物。　关键词：Ｎ－甲基转移酶；糖肽类抗生素；Ｎ－甲基无糖万古霉素　中图分类号：Ｒ９７８．１　文献标识码：Ａ　

Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇｌｙｃｏｐｅｐｔｉｄｅ　ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　

Ｎ－ｍｅｔｈｙｌａｇｌｕｃｏｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ　

Ｇｕｏ　Ｚｈａｏ—ｘｉａ’，Ｒｕａｎ　Ｌｉｎ—ｇａｏ　，Ｌｉ　Ｈａｎｇ　，Ｚｈｕ　Ｌｉ　ａｎｄ　Ｃｈｅｎ　Ｄａｉ－ｊｉｅ　，　（１　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｂｉｏ‘ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｅａｓｔ　Ｃｈｉｎａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔｈｅ　Ｓｔａｔｅ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，　Ｓｈａｎｇｈａｉ　２００２３７；２　Ｓｈａｎｇｈａｉ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｃｒｅａｔｉｏｎ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ　Ｒ＆Ｄ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　２０１２０３；３　Ｓｈａｎｇｈａｉ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，Ｔｈｅ　Ｓｔａｔｅ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆＮｅｗ　Ｄｒｕｇ＆Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｐｒｏｃｅｓｓ．Ｓｈａｎｇｈａｉ　２０００４０）　

专注物料浓缩分离提纯技术

纳滤膜分离技术用于浓缩抗生素

在制药工业中，目前抗生素的生产大多采用发酵的方法。发酵产生的溶液经过滤除去生物残渣、树脂脱色提纯后得到的解析液的抗生素浓度往往很低。通常都采用溶剂萃取的方法，薄膜蒸发等工艺进行纯化、浓缩。

纳滤膜可直接浓缩抗生素树脂解析液，如头C的生产过程，利用纳滤膜的特性，将头C解析液浓缩到效价达到12万左右，即可用溶媒结晶法得到产品。采用纳滤膜浓缩的优点是浓缩过程无相变，而且整个过程可在常温下进行，解析液不会由于有热敏性而收到破坏，同时，采用纳滤浓缩可大大节省能耗，降低生产成本。另外，纳滤膜可用于浓缩抗生素发酵滤液的浓缩，如青霉素、红霉素的生产，用纳滤膜分离浓缩抗生素发酵滤液，至较小体积后再用有机溶剂的萃取，利用这种方法，现有的萃取设备的生产能力将大幅度地提高，并可大量减少抽提过程中溶剂的用量。

纳滤膜分离技术浓缩纯化的优点：

1、能耗极低(各种浓缩方法除水成本比较。

2、膜耐受的条件范围宽，浓缩倍数高。

3、设备结构简洁紧凑，操作十分方便，可实现自动化作业。

4、常温浓缩不破坏有效成分，损失率极低(0.1%以下)，透析液不造成二次污染。

实验十二 土壤中产抗生素放线菌的分离纯化

实验目的：

1、从土壤中分离产抗生素的放线菌。

2、抗生素产生菌的抗菌谱测定。

3、掌握微生物的基本操作。

实验原理：

放线菌是一类呈菌丝状生长，主要以孢子繁殖，革兰染色为阳性的单细胞原核微生物，是细菌中的一种特殊类型。放线菌与人类的生产和生活关系极为密切，目前广泛应用的抗生素约70%是各种放线菌所产生。

许多临床应用的抗生素均由土壤中分离的放线菌产生。微生物大量存在与土壤中，其中包括细菌、放线菌和真菌等，采用选择性培养基可分离土壤中的放线菌。产抗生素的放线菌经液体培养后，其分泌的抗生素存在于离心所得的上清液中，可采用微生物的抑菌试验进行检测，从而筛选到所需的抗生素产生菌。

实验材料：

1、土壤 菜园土。

2、实验菌 金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的8h培养物。

3、培养基 淀粉琼脂和淀粉液体培养基。

4、其它 10％的酚、牛津杯、灭菌生理盐水、接种环、无菌涂棒、酒精灯、无菌吸管等。

实验方法：

一、土壤中放线菌的分离

1、配制淀粉培养基

配方一 淀粉琼脂培养基（高氏培养基）

可溶性淀粉 2克；硝酸钾 0.1克；磷酸氢二钾 0.05克；氯化钠 0.05克；硫酸镁 0.05克；硫酸亚铁 0.001克；琼脂 2克 水 100毫升

先把淀粉放在烧杯里，用5毫升水调成糊状后，倒入95毫升水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。调整pH值到7.2～7.4，分装后灭菌，备用。

配方二 面粉琼脂培养基

面粉 60克 ；琼脂 20克；水 1000毫升

把面粉用水调成糊状，加水到500毫升，放在文火上煮30分钟。另取500毫升水，放入琼脂，加热煮沸到溶解后，把两液调匀，补充水分，调整pH值到7.4，分装，灭菌，备用。

2、土壤悬液梯度稀释

（1）将5.0g土壤加入到50ml灭菌的生理盐水中，震荡10min制备土壤悬液。

抗生素检测方法范文

抗生素检测方法指的是对食品、环境、体液等样品中存在的抗生素进行检测的技术手段和方法。抗生素检测的目的是为了保障公众健康和食品安全，防止抗生素滥用导致的抗生素耐药问题的发生。下面将详细介绍几种常见的抗生素检测方法。

一、免疫类检测方法

免疫类检测方法是基于抗原与抗体相互作用的原理，利用免疫学技术对抗生素进行检测。这种方法具有操作简单、快速、灵敏度高等优点。免疫类检测方法常见的有ELISA法、免疫层析法等。

1.ELISA法（酶联免疫吸附测定法）：是一种高灵敏度的抗生素检测方法，通过将特定抗原或抗体固定在试验板上，经过适当的处理后，利用化学反应来测定受测物质的浓度。该方法可以对样品中的抗生素进行定性和定量的检测。

2.免疫层析法：是一种基于免疫学原理的快速检测方法。它将特异性的抗体固定在试纸上，通过样品在试纸上上下渗透，当样品中含有目标抗生素时，与抗体结合形成复合物，可通过肉眼观察颜色变化来判断样品中是否存在目标抗生素。

二、色谱类检测方法

色谱类检测方法是通过色谱技术对抗生素进行分离、鉴定和定量的方法。依据其原理和仪器设备的不同，又可分为液相色谱法和气相色谱法。

1.液相色谱法：是一种常用的抗生素检测方法。根据样品中抗生素的不同特性，可以选择不同的液相色谱方法，如高效液相色谱法（HPLC）、超高效液相色谱法（UPLC）等。该方法具有高分离度、高灵敏度、高选择性等优点，对多种抗生素同时检测也可以实现。

2.气相色谱法：是一种通过蒸发样品中的揮发性物质并通过气相色谱检测的方法。在抗生素检测中，通常需要将样品预处理成蒸馏液或萃取液，然后将其注入气相色谱仪进行分析。这种方法对于一些易挥发的抗生素有较好的检测效果。

三、质谱类检测方法

质谱类检测方法是通过分析被检测物质的质量谱图，来鉴定和定量目标物质。该方法准确度高、灵敏度高，可以对不同种类的抗生素进行鉴定和定量。常见的质谱类检测方法有质谱仪联用液相色谱法（LC-MS/MS）和气相色谱-质谱法（GC-MS）等。