常用消毒与灭菌方法

文章编号:1001-7658(2010)02-0234-03 【专题讲座】常用消毒与灭菌方法袁洽劻(中国疾病预防控制中心传染病控制所,北京　102206)中图分类号:R187 文献标识码:B1热力消毒与灭菌热力消毒与灭菌是指用加热的方法使微生物体内蛋白质凝固、酶失活,致使微生物死亡。

热消毒法具有简便、经济、效果可靠等优点,己广泛用于卫生防疫、医院消毒、环境保护、食品、制药工业及废弃物处理等。

可分为干热和湿热两类。

1.1干热消毒与灭菌1.1.1焚烧法　利用点燃燃料或在焚烧炉内燃烧的方法使被处理对象焚为灰烬,排出的废气应不污染环境。

一般分为两级焚烧,一级温度约为800℃,二级温度应高于1100℃。

焚烧法主要用于有传染性的废弃物处理,如接触传染源的敷料、衣物、食物、疫源地垃圾等。

1.1.2烧灼法　烧灼灭菌适用于微生物实验室小件耐热物品灭菌,利用酒精灯或煤气灯火焰杀灭微生物,如白金耳、接种棒、剪刀、蹑子、试管等。

烧灼时,应注意将器材放在操作者与火焰相隔的彼方,并逐渐靠近火焰,防止污染物突然进入火焰而发生爆沾,以致污染周围环境。

1.1.3干烤法　用电热、电磁辐射线等依靠空气传导加热物体,因而,加热过程较慢。

干热主要用于耐高热物品消毒或灭菌,如玻璃器材、金属器械、油脂、粉剂等。

一般情况下,加热至160℃、2h;170℃、1h;180℃、30m i n,可达到灭菌。

粉剂和油脂灭菌时,厚度一般不超过1.3c m。

纸张、有机物品灭菌时,温度不宜超过170℃,且在干烤箱温度降至80℃后,才可开启干烤箱,以防玻璃迂冷空气炸裂、纸张迂氧燃烧。

新近有真空电烤箱,装载物品后,关闭箱体,抽真空至0.27k P a,然后,加热可至250℃,缩短了灭菌时间,且物品不易被氧化,延长了使用寿命。

1.1.4干热浴法　玻璃珠灭菌器的灭菌箱内装有直径3m m 左右的无铅玻珠,厚度为5c m,通过电热装置将其加热,控制温度在180℃～250℃,然后将待灭菌器械全部插入玻璃珠中,10m i n后可达灭菌。

消毒与灭菌常用方法及设备（一）干热灭菌【原理】高温对细菌有明显的致死作用，主要机理是凝固菌体蛋白质，也可能与细菌DNA单螺旋断裂、细菌膜功能受损及菌体内电解质浓缩有关。

干烤箱为常用的干热灭菌器，其杀菌作用是通过脱水干燥和大分子变性完成的。

【构造】干烤箱是中间夹着石棉的双层金属制成的方形或长方形箱，箱底装有热源，箱内有数层金属架，并附有温度计和自动温度调节器等装置。

把待灭菌的物件均匀地放入恒温干燥箱，加热至160℃～170℃维持2小时即可达灭菌目的。

【使用方法及注意事项】1.将包扎好的待灭物品（培养皿、吸管器等）放于箱内，注意不要摆得太挤，以免妨碍气流流通。

2.关门，插上电源插头（常为220伏），拨动开关，旋动恒温调节器，至红灯亮。

3.待温度上升160℃～170℃时，借恒温调节器的自动控制，保持此温度2小时。

4.灭菌后停止加热，待温度下降至40℃以下方可开门取物，在这之前切勿自行打开箱门，否则其内物品(如玻璃器皿等)会因温度骤然下降而爆裂。

【应用】干热灭菌主要用于要求干燥的、耐高温的物品灭菌，如玻璃器材、瓷器、凡士林、液体石蜡、药粉等的灭菌。

一般不耐高温的、含有水份的物质，不能用这种方法灭菌。

（二）湿热灭菌【原理】高温对细菌有明显的致死作用，主要机理是凝固菌体蛋白质，也可能与细菌DNA单螺旋断裂、细菌膜功能受损及菌体内电解质浓缩有关。

湿热灭菌所需温度较低，时间较短(表3-2)。

特别是高压蒸气灭菌，因增加压力而提高温度，灭菌效果最佳。

其主要优点是：①温度较高，灭菌所需时间较短；②蒸气穿透力强；③蒸气冷凝时释放汽化热，能迅速提高物品的温度；④物品不过分潮湿。

表3-2 热力消毒灭菌法比较方法温度(℃) 时间(min)灭菌器适用物品焚烧＞500 瞬时废弃物品、动物尸体灭菌干烤160～170 120 干热灭菌器（干烤箱）玻璃器材、瓷器等灭菌巴氏消毒法61.1～62.871.73015-30s牛奶、酒类等消毒煮沸消毒法100 5 食具、刀剪、注射器等消毒流通蒸气消100 15～30 Arnold流通蒸气灭食具等消毒毒法菌器间歇灭菌法100 30 流通蒸气灭菌器(重复3次)不耐高温的含糖、牛奶等培养基高压蒸气灭菌法121 15～30高压蒸气灭菌器耐高温、高压及不怕潮湿的物品高压蒸气灭菌器是目前应用最广泛、灭菌效果最好的灭菌器具，其种类有手提式、直立式、横卧式等。

消毒和灭菌两个词在实际使用中常被混用，其实它们的含义是有所不同的。

消毒是指应用消毒剂等方法杀灭物体表面和内部的病原菌营养体的方法，而灭菌是指用物理和化学方法杀死物体表面和内部的所有微生物，使之呈无菌状态。

物理方法1温度利用温度进行灭菌、消毒或防腐，是最常用而又方便有效的方法。

高温可使微生物细胞内的蛋白质和酶类发生变性而失活，从而起灭菌作用，低温通常起抑菌作用。

1)干热灭菌法：a.灼烧灭菌法：利用火焰直接把微生物烧死。

此法彻底可靠，灭菌迅速，但易焚毁物品，所以使用范围有限，只适合于接种针、环、试管口及不能用的污染物品或实验动物的尸体等的灭菌。

b.干热空气灭菌法：这是实验室中常用的一种方法，即把待灭菌的物品均匀地放入烘箱中，升温至160℃，恒温1小时即可。

此法适用于玻璃皿、金属用具等的灭菌。

2)湿热灭菌法：在同样的温度下，湿热灭菌的效果比干热灭菌好，这是因为一方面细胞内蛋白质含水量高，容易变性。

另一方面高温水蒸汽对蛋白质有高度的穿透力，从而加速蛋白质变性而迅速死亡。

a.巴氏消毒法：有些食物会因高温破坏营养成分或影响质量，如牛奶、酱油、啤酒等，所以只能用较低的温度来杀死其中的病原微生物，这样既保持食物的营养和风味，又进行了消毒，保证了食品卫生。

该法一般在62℃，30分钟即可达到消毒目的。

此法为法国微生物学家巴斯德首创，故名为巴氏消毒法。

b.煮沸消毒法：直接将要消毒的物品放入清水中，煮沸15分钟，即可杀死细菌的全部营养和部分芽孢。

若在清水中加入1%碳酸钠或2%的石炭酸，则效果更好。

此法适用于注射器、毛巾及解剖用具的消毒。

c.间歇灭菌法：上述两种方法在常压下，只能起到消毒作用，而很难做到完全无菌。

若采用间歇灭菌的方法，就能杀灭物品中所有的微生物。

具体做法是：将待灭菌的物品加热至100℃，15~30分钟，杀死其中的营养体。

然后冷却，放入37℃恒温箱中过夜，让残留的芽孢萌发成营养体。

第2天再重复上述步骤，三次左右，就可达到灭菌的目的。

常用的消毒和灭菌方法
常用的消毒和灭菌方法有以下几种：
1. 物理方法：
- 高温灭菌：使用高温蒸汽或热气将细菌和病毒杀死，常见的方法有煮沸、高压蒸汽灭菌等。

- 紫外线消毒：利用紫外线辐射杀死细菌和病毒，常见的方法有紫外线消毒灯、紫外线箱等。

- 过滤法：通过物理隔离的方式去除或杀灭细菌和病毒，常见的方法有过滤器、过滤膜等。

2. 化学方法：
- 酒精消毒：使用含有70%以上酒精的液体对物体表面进行擦拭或浸泡，酒精能够破坏细菌和病毒的细胞膜，达到杀菌的效果。

- 氯化物消毒剂：如漂白粉或含氯消毒液，氯离子能够与细菌和病毒中的蛋白质反应，造成细胞死亡。

- 醛类消毒剂：如福尔马林，具有很强的杀菌能力，但使用需注意毒性。

3. 生物方法：
- 生物灭菌剂：利用一些可以生产抗菌物质的生物体，如放线菌等，来进行消毒和灭菌，常见的方法有利用乳酸菌发酵产生的乳酸来进行消毒。

需要根据具体的场合和需求选择合适的消毒和灭菌方法。

实验室13种常用消毒灭菌的方法汇总1、热力消毒灭菌高温能使微生物的蛋白质和酶变性或凝固（结构改变导致功能丧失），新陈代谢受到障碍而死亡，从而达到消毒与灭菌的目的。

在消毒中，热可分为湿热与干热两大类。

2、干热消毒灭菌干热是指相对湿度在20％以下的高热。

干热消毒灭菌是由空气导热，传热效果较慢。

一般繁殖体在干热80－100℃中经1小时可以杀死，芽胞需160－170℃经2小时方可杀死。

燃烧法：是一种简单、迅速、彻底的灭菌方法，因对物品的破坏性大，故应用范围有限。

烧灼法：一些耐高温的器械（金属、搪瓷类），在急用或无条件用其他方法消毒时可采用此法。

将器械放在火焰上烧灼1－2分钟。

若为搪瓷容器，可倒少量95％乙醇，慢慢转动容器，使乙醇分布均匀，点火燃烧至熄灭约1－2分钟。

采集作细菌培养的标本时，在留取标本前后（即启盖后，闭盖前）都应将试管（瓶）口和盖子置于火焰上烧灼，来回旋转2－3次。

燃烧时要注意安全，须远离易燃易爆物品，如氧气、汽油、乙醚等。

燃烧过程不得添加乙醇，以免引起火焰上窜而致灼伤或火灾。

锐利刀剪为保护刀锋，不宜用燃烧灭菌法。

焚烧某些特殊感染，如破伤风、气性坏疽、绿脓杆菌感染的敷料，以及其它已污染且无保留价值的物品，如污纸、垃圾等，应放入焚烧炉内焚烧，使之炭化。

3、电热培养箱利用培养箱的热空气消毒灭菌。

培养箱通电加热后的空气在一定空间不断对流，产生均一效应的热空气直接穿透物体。

一般繁殖体在干热80－100℃中经1小时可以杀死，芽胞、病毒需160－170℃经2小时方可杀死。

热空气消毒灭菌法适用于玻璃器皿、瓷器以及明胶海棉、液体石腊、各种粉剂等。

灭菌后待箱内温度降至50－40℃以下才能开启柜门，以防炸裂。

4、微波消毒微波是一种高频电磁波，其杀菌的作用原理，一为热效应，所及之处产生分子内部剧烈运动，使物体里外湿度迅速升高；一为综合效应，诸如化学效应、电磁共振效应和场致力效应。

目前已广泛应用于食品、药品的消毒，用微波灭菌手术器械包、微生物实验室用品等亦有报告。

常用的基本操作技术（一）消毒和灭菌技术消毒（disinfection）与灭菌（sterilization）两者的意义有所不同。

消毒一般是指利用物理或化学方法消灭病原菌或有害微生物的营养体，而灭菌则是指利用强烈的物理或化学方法杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子。

但日常生活中两者常常通用。

灭菌的方法很多，一般可分为物理灭菌和化学灭菌两大类。

1. 物理灭菌物理灭菌是最常用的灭菌方法。

主要包括热力学灭菌、过滤除菌和紫外线灭菌等。

（1）热力学灭菌又可分为干热灭菌和湿热灭菌两大类。

①干热灭菌干热灭菌是利用高温使微生物的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。

细胞内的蛋白质的凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快；含水量越小，凝固减慢。

因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度更高（160~170℃），时间更长（1~2h）。

进行干热灭菌时最高温度不能超过180℃，否则，包扎器皿的纸或棉塞就会被烤焦，甚至引起燃烧。

通常所说的干热灭菌是指利用干燥箱（或称烘箱）进行灭菌，主要用于玻璃器皿如培养皿、移液管和接种工具等的灭菌。

灭菌时将被灭菌的物体用双层报纸包好或装入特制的灭菌筒内，装入箱中，不要摆的太挤，以免妨碍热空气流通。

逐渐加温，使温度上升至160～170℃后保持2h。

灭菌结束后，切断电源，自然降温，待箱内温度降至70℃以下后，才能打开箱门，取出灭菌物品。

注意在温度降至70℃以前切勿打开箱门，以免玻璃器皿炸裂。

另外，灼烧灭菌也属于干热灭菌。

在进行无菌操作时，接种工具如接种环、接种钩、接种铲、镊子等要在酒精灯火焰上充分灼烧，试管口、菌种瓶口在火焰上作短暂灼烧灭菌等。

②湿热灭菌a.高压蒸汽灭菌此法是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾产生蒸气。

待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度，导致菌体蛋白质凝固变性达到灭菌的目的。

拖把：应有明显标识，严格分区使用。

1)普通办公室、病室、治疗室、换药室走廊每次使用后用清水冲洗，悬挂晾干备用。

2)病室、治疗室、换药室等地面有分泌物、血液、排泄物时，先用1000mg/L 有效氯适量到在污染地面30min 后，用拖把拖干净，再用500mg/L 有效氯消毒剂浸泡30min 后，清洗干净，晾干备用。

3)传染病区，使用后先消毒，用1000mg/L 有效氯消毒液浸泡30 分钟，再用水清洗干净，然后用500mg/L 有效氯消毒液浸泡30 分钟，悬挂晾干备用。

针灸针：高压蒸汽消毒；一定要消毒彻底，以免交叉感染！体温表消毒方法：1 ．每周浸泡用肥皂水清洗两次 (周一、周四)，用75%酒精浸泡,不填加，每周更换两次。

2 ．遇有传染病人用过的体温表，需用0.05％有效氯消毒半小时，然后用清水洗净晾干，放入酒精浸泡。

3 ．病人处不可放置体温表，随用随取，及时消毒。

4 ．每月监测体温表检测，并登记。

方法如下：将体温表中的汞柱甩至35℃以下，放入36℃以上、42℃以下水温中浸泡3 分钟，取出后体温表中汞柱误差在0.2 之间为合格。

血压计终末消毒方法：1．污染的血压计袖带使用0.05％有效氯即刻消毒，消毒半小时后用清水洗净晾干备用。

污染的血压计用0.05％有效氯擦拭消毒。

2 ．无法撤掉的要关闭阀门后，再进行消毒。

3 ．传染病人固定专用血压计，定时每周消毒一次。

4．血压计袖带每周清洁消毒一次，方法如下：用清水或者肥皂水清洗后晾干，再用紫外线双面消毒半小时。

简易呼吸器消毒：1. 接口与面罩用酒精擦拭，球囊污染用肥皂水清洗。

2. 人工呼吸器使用后消毒，避污保存。

3. 气管插管导丝使用后灭菌保存。

呼吸机冷凝水终末消毒：1．配制0.1%有效氯装在密闭容器中，积水器中冷凝水达1/2 满时倾倒，将冷凝水倒入容器中，半小时后倒入洗手间污水系统。

2．呼吸机管路积水瓶处于直立状态，避免冷凝水倒灌公用水杯、痰杯、拖鞋：用后使用0.05％有效氯消毒。