下载文档原格式
碱性磷酸酶（AKP、ALP）的测定及医学意义
1．正常参考值：
①速率法
女性：
1～12岁：＜500 U/L
15岁以上：40～150 U/L
男性：
1～12岁：＜500 U/L
12～15岁：＜750 U/L
25岁以上：40～150 U/L
②比色法：
健康成年人：3-13 金氏单位
儿童：5-28 金氏单位
2．临床意义
碱性磷酸酶活力测定常作为肝胆疾病和骨骼疾病的临床辅助诊断的指标。
血清碱性磷酸活力增高可见于下列疾病：
①肝胆疾病：阻塞性黄疸、急性或慢性黄疸型肝炎、肝癌等。
②骨骼疾病：由于骨的损伤或疾病使成骨细胞内所含高浓度的碱性磷酸酶释放入
血液中，引起血清碱性磷酸酶活力增高。
如纤维性骨炎、成骨不全症、佝偻病、骨软化病、骨转移癌和骨折修复愈合期等。
综述：碱性磷酸酶在临床诊断与治疗中的应用作者：陆双妙 201540007医学检验技术15级17班1组碱性磷酸酶在临床诊断与治疗中的应用陆双妙广西医科大学15级17班1组（广西南宁）前言：碱性磷酸酶（ALP或AKP）是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。
随着对其研究的深入发展，涉及的内容和应用范围越来越广泛。
本文综合概述了碱性磷酸酶主要在临床检验方面的应用。
摘要：碱性磷酸酶按分布部位的不同可分为骨碱性磷酸酶、血清碱性磷酸酶以及中性粒细胞碱性磷酸酶等，本文分别探讨及阐述了它们各自在临床诊断中的应用和价值。
关键词：碱性磷酸酶1.骨碱性磷酸酶在临床诊断中的应用①检测骨碱性磷酸酶含量对小儿佝偻病的早期诊断价值佝偻病是婴幼儿的常见病，也是我国重点防治的儿科疾病之一。
佝偻病是由于维生素D 摄入不足或吸收障碍导致机体内钙、磷代谢紊乱，继而使骨发育障碍。
佝偻病如果不及时发现并治疗，可能造成骨骼的畸形，对患儿生理和心理造成损害，严重的佝偻病还会对患儿的神经、肌肉等系统或组织造成损害，故早期对婴幼儿进行佝偻病的筛查十分重要。
佝偻病早期缺乏特异性症状，患儿常常出现易激惹、夜惊、多汗等，且目前临床上对于、佝偻病的早期筛查尚无较为有效的指标，而对于<2岁，尤其是<1岁的婴幼儿，其血生化、X 线的表现均不明显，故临床上早期诊断婴幼儿佝偻病的困难很大①。
虽然我国佝偻病的发病率近年来逐年下降，但仍然很高②。
佝偻病如果不及时治疗，很容易造成畸形，严重者甚至会损伤神经系统，故对佝偻病进行早期、有效的筛查十分重要。
BALP是由成骨细胞合成的一种生物酶，其含量与成骨细胞的活性成正比，佝偻病患儿在临床症状未出现之前，骨钙化受阻就已经发生，当骨钙化不足时，成骨细胞活性增强，BALP含量也随之升高。
通过研究，898.IC 得出的结果显示，观察组患儿血清中BALP含量显著高于对照组(P<0．05)，而观察组BALP≥200 U／L的阳性检出率高达91．5％，显著高于对照组的21．0％(P<O．05)，这说明在未出现明显临床症状时，成骨细胞已经开始活跃，验证了上述的观点，说明BALP对于骨钙化不足较为敏感。
肠外营养中血清碱性磷酸酶的临床意义与监测策略肠外营养（TPN）在临床实践中被广泛运用于提供肠道无法充分吸收营养的患者。
TPN可以有效补充患者所需的营养物质，但同时也带来了一系列的代谢异常。
血清碱性磷酸酶（ALP）是一种由肝脏、骨骼和肠道分泌的酶，参与骨代谢和胆汁生成等过程。
其临床意义在于评估肝胆疾病、骨代谢异常以及胆汁堵塞等情况。
然而，在TPN中，血清ALP的水平可能会受到干扰，需谨慎监测和解读。
肠外营养中，血清ALP的升高与TPN相关的肝胆道病变有关。
长期使用TPN可能导致高脂肉肝、胆汁淤积、胆汁酸代谢紊乱等，并进一步导致血清ALP水平升高。
因此，在TPN治疗期间，及时监测血清ALP水平对于早期发现和干预肝胆损伤具有重要意义。
监测策略方面，血清ALP的监测频率应根据患者的具体情况和TPN使用时间来决定。
对于TPN治疗时间较短且没有肝胆道疾病史的患者，每周监测一次即可。
而对于长期使用TPN及存在肝胆道疾病风险的患者，则应每两周进行一次监测。
此外，监测血清ALP水平的同时还要结合其他肝功能指标、骨骼代谢指标和胆汁相应指标的变化进行综合分析。
只有综合分析才能全面了解患者的肝胆道情况和TPN治疗的效果。
需要注意的是，血清ALP水平的升高并不一定意味着存在肝胆疾病或骨骼异常。
其他因素，如干扰药物的使用、急性炎症反应、骨折愈合过程以及儿童生长发育等，都可能对血清ALP水平产生影响。
因此，在解读监测结果时需结合临床实际情况，综合考虑。
综上所述，肠外营养中血清ALP水平的监测具有重要的临床意义。
对于使用TPN的患者，及时监测血清ALP水平可以帮助早期发现和干预TPN相关的肝胆道病变，从而提高治疗效果和患者的生存质量。
在进行监测时，应根据患者的具体情况和TPN使用时间制定监测策略，并综合分析其他相关指标的变化，才能更好地评估患者的肝胆道状况和TPN治疗效果。
碱性磷酸酶染色（NAP）碱性磷酸酶染色（NAP）在临床的应用基本属于常规筛查的染色法。
（1）原理（偶氮偶联法）：血细胞内的碱性磷酸酶在pH 9.4～9.6的条件下将基质液中的α-磷酸萘酚钠水解，产生α-萘酚与重氮盐偶联形成不溶性灰黑色沉淀，定位于酶活性所在之处。
（2）结果判断：阳性结果为胞质内出现灰褐色至深黑色颗粒状或片状沉淀①（一）灰褐色沉淀，为0分。
②（+）胞质出现灰褐色沉淀，为1分。
③（++）胞质深褐色沉淀，为2分。
④（+++）胞质中已基本充满棕黑色颗粒状沉淀，但密度较低，为3分。
⑤（++++）胞质全被深黑色团块沉淀所充满，密度高，甚至遮盖胞核，为4分。
（3）参考值：成熟中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）的积分值为7～51。
由于各实验室的实验条件不同，正常值也有差异，应建立本实验室的正常值。
这里的正常值仅供参考。
（4）临床意义1）生理变化：①年龄变化：新生儿NAP活性增高，以后下降。
儿童期各年龄大致相似，成年期较儿童期活性减低，老年期更低。
②应激状态下的变化：紧张、恐惧、激烈运动等NAP活性可增高。
③月经周期中的变化：经前期增高，行经后降低，经后期恢复。
④妊娠期的变化：妊娠2～3个月的NAP积分值轻度增高，以后逐月增高，分娩时达高峰，产后则恢复正常。
2）病理性变化：①感染：细菌性感染时NAP积分值增高。
在细菌性感染中球菌性感染较杆菌性感染为高；在球菌性感染中，急性较慢性为高。
病毒性感染时，NAP积分值一般无明显变化。
因此本染色法有时可帮助鉴别细菌性感染和病毒性感染；②血液病：慢性粒细胞白血病的NAP积分值明显减低，常为“0”，缓解时NAP积分值上升到正常。
类白血病反应时的NAP积分值明显增高，中性杆状核粒细胞的碱性磷酸酶活性增强，甚至中性晚幼粒细胞也呈阳性反应。
因此本法常用来鉴别慢粒和类白血病反应及观察慢粒疗效的指标之一；急性粒细胞白血病时NAP积分值减低，急性淋巴细胞白血病时NAP积分值一般增高，因此本法可作为鉴别急粒和急淋的方法之一；急性单核细胞白血病时NAP积分值一般减低，有时可正常；粒细胞白血病合并细菌性感染时NAP积分值可增高，但不如单纯细菌性感染增高的明显；再生障碍性贫血的NAP积分值增高，当病情好转时，NAP积分值可下降，完全缓解时NAP活性可恢复到正常，因此本法对再障的诊断、疗效观察和估计病情均有一定意义；阵发性睡眠性血红蛋白尿的NAP积分值减低，因此本法可作为鉴别阵发性睡眠性血红蛋白尿和再生障碍性贫血的方法之一；真性红细胞增多症的NAP积分值升高，而继发性红细胞增多症的NAP积分值无明显变化。
血清碱性磷酸酶测定标准操作规程1.检验原理：(对硝基酚磷酸盐连续监测法)以磷酸对硝基酚二钠(PNPP)为底物，2—氨基-2-甲基丙醇(AMP)为磷酸酰基的受体。
在碱性环境，碱性磷酸酶催化PNPP水解产生的游离对硝基酚，对硝基酚在碱性溶液中转变成黄色。
根据在405nm 处吸光度增高速率来计算碱性磷酸酶的活性单位。
PNPP+H2O9阻'->对硝基酚+无机磷-20°C保存7天，样本不可反复冻融！4.检验方法；仪器法(详见DF-603/DI-600标准操作规程)5.参考范围6.检验结果的解释：6.1样本含量超出线性范围时，建议用0.9%(W∕V)的氯化钠溶液稀释样本。
7.2.单位换算：ukat∕L=U∕L*16.67*IO-38.检验方法的局限性8.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7.2若试剂浑浊或以水空白在405nm处吸光度大于1.000时不能使用。
8.试剂性能指标8.1试剂外观：R1：无色透明液体，无悬浮物及沉淀；R2无色或淡黄色透明液体，无悬浮物及沉淀。
8.2装量：不低于标识值。
8.3空白吸光度：在37℃、405rπn处，光径IenI时，空白吸光度A≤1.0008.4空白吸光度变化率：在37C、405nm处，光径ICm时，用生理盐水作为样品加入试剂测试时，Z∖A∕minW0.005.1.15分析灵敏度：在405nm处,光径Icm时，测量120U/L的碱性磷酸酶时，吸光度变化4A∕min20.015.8.6线性范围：试剂的线性区间为[25-750]U∕L,在此线性区间内：a)线性相关系数r应不小于0.9900；b)[25-100]U/L区间内，线性绝对偏差不超过土10U/L；(100-750)U/L区间内,线性相对偏差不超过±10%。
8.7重复性:CV≤5%8.8批间精密度:R≤10%8.9准确度：相对偏差应不大于±10%。
8.10稳定性：(2-8)C下，原包装存放的试剂有效期为12个月,取到期后一个月的试剂进行测试，应满足1-7、9的要求。
alp成分ALP成分一、概述碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）是一种广泛存在于生物体内的酶，主要作用是水解磷酸盐酯键。
在人体中，ALP主要存在于肝、胆道、骨和肠道等组织中，因此成为了临床上常用的生物标志物。
本文将详细介绍ALP成分的来源、结构、功能及其在临床诊断中的应用。
二、来源1. 组织来源（1）肝脏：肝脏是人体内最重要的ALP产生器官之一，大约有70%～80%的总ALP来自肝脏。
（2）胆道：胆汁中含有较高浓度的ALP，因此胆道疾病也会导致血清ALP升高。
（3）骨：成年人体内大约有20%～30%的总ALP来自骨组织。
（4）肠道：小肠和结肠上皮细胞表面均含有少量ALP。
2. 分子形态人体内存在多种形态的ALP，包括：（1）碱性成纤维细胞型(ALPI)：主要由肝脏和骨骼组织分泌。
（2）碱性肝型(ALPII)：主要由肝脏分泌，但也有可能由胆道分泌。
（3）碱性肠型(ALPIII)：主要由小肠和结肠上皮细胞分泌。
（4）碱性胎儿型(ALPVI)：主要由胎盘和成纤维细胞分泌，新生儿体内含有较高浓度的ALPVI。
三、结构ALP是一种糖基化磷脂酰肌醇(GPI)-锚定的磷酸酯水解酶，其分子量为50～100 kDa。
人体内ALP的活性受多种因素影响，包括PH值、离子强度、离子种类、温度等。
此外，ALP活性还受到抑制剂和激动剂的调节。
四、功能1. 水解磷酸盐ALP能够水解多种磷酸盐物质，如ATP、ADP、AMP等。
在人体内，ALP主要参与以下反应：（1）碱性成纤维细胞型(ALPI)：参与无机磷的吸收和转运过程。
（2）碱性肝型(ALPII)：参与胆汁酸合成和胆汁中磷脂的代谢。
（3）碱性肠型(ALPIII)：参与核苷酸的代谢。
（4）碱性胎儿型(ALPVI)：在胎儿生长发育过程中起重要作用。
2. 参与骨代谢ALP是骨细胞分泌的一种重要蛋白质，在骨代谢过程中起到重要作用。
ALP能够水解磷酸盐，释放出磷离子，促进骨钙化过程。
血清碱性磷酸酶ALP测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理本试剂以国际临床化学会（IFCC）推荐方法为基础，所采用的反应原理与反应式如下。
ALP对-硝基苯磷酸盐 + H2O ----------- 对硝基酚 + 磷酸在上述反应中，对-硝基苯酚的生成速率与样本中碱性磷酸酶的活力成正比。
通过在405 nm处监测吸光度的上升速率，即可测得样本中碱性磷酸酶的活性。
3 标本采集与处理：3.1 病人准备：无特殊要求。
3.2 标本类型：标本最好是无溶血的血清。
3.3 血清分离：应在收集后两小时内分离出来。
避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。
3.4 标本存放：2～3天内的活性损失：15～25℃保存：<10%；标本稳定性：4～8℃保存稳定7天；-20℃保存至少可稳定2个月标本。
如果分析延迟8小时以上，最好把血清冷藏。
冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。
3.5 标本运输：常温条件下运输3.6 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。
4 实验材料：4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司ALP试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1（R1）：乙酸镁3.0mmol/L硫酸锌 1.5mmol/LHEDTA 3.0mmol/LAMP缓冲液420mmol/L试剂2（R2）：对-硝基苯磷酸盐81.5mmol/LAMP缓冲液420mmol/LHEDTA5.0mmol/L4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。
试剂启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定14天。
4.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
4.1.5 注意事项：试剂中含有稳定剂，可能存在一定的刺激作用或毒性，请勿直接接触皮肤、眼睛。
碱性磷酸酶km测定实验报告碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，简称ALP）是一种存在于人体组织和体液中的酶类，其活性的测定对于临床诊断和疾病监测具有重要意义。
本文将对碱性磷酸酶的KM测定实验进行详细介绍和分析。
一、实验目的本实验旨在测定碱性磷酸酶的KM值，以了解其底物浓度对酶活性的影响，并探讨酶底物的亲和力。
二、实验原理碱性磷酸酶是一种催化磷酸酯水解的酶，其底物为磷酸酯类物质。
当底物浓度较低时，酶活性会受到限制，因此，通过测定不同底物浓度下的酶活性，可以得到碱性磷酸酶的KM值。
KM值是酶与底物结合的亲和力指标，数值越小表示酶对底物的结合越紧密。
三、实验步骤1. 准备实验所需材料和试剂，包括碱性磷酸酶酶液、磷酸酯底物、缓冲液等。
2. 制备一系列不同浓度的磷酸酯底物溶液，如0.1 mM、0.2 mM、0.3 mM等。
3. 将不同浓度的磷酸酯底物溶液分别与碱性磷酸酶酶液混合，使其反应一定时间。
4. 停止反应，并加入一定量的酶抑制剂，以停止碱性磷酸酶的活性。
5. 使用特定的检测方法，如比色法或荧光法，测定反应液中产生的产物浓度。
6. 根据不同底物浓度下产物浓度的变化，绘制酶活性与底物浓度的曲线。
7. 通过曲线拟合，计算出碱性磷酸酶的KM值。
四、实验结果与分析根据实验数据绘制的酶活性与底物浓度曲线，可以观察到酶活性随着底物浓度的增加而逐渐增加，但增加速率逐渐减缓。
这是因为底物浓度增加，酶与底物的结合也增加，但当底物浓度达到一定程度时，酶的活性已经接近饱和状态，进一步增加底物浓度对酶活性的影响较小。
通过对曲线的拟合，可以计算出碱性磷酸酶的KM值。
KM值表示酶与底物结合的亲和力，数值越小表示酶对底物的结合越紧密。
在实验中，我们可以通过计算得到不同底物浓度下的KM值，从而了解碱性磷酸酶与底物之间的亲和力变化情况。
五、实验误差与改进在实验过程中，可能存在一些误差，如底物溶液的制备误差、酶活性的测定误差等。
碱性磷酸酶测定的标准规程【目的】体外检测血清中碱性磷酸酶（ALP ）的含量。
【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP ，室负责人监督落实。
2.本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h ，不饮酒24h 后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯，应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机一、检测原理本试剂方法学原理以IFCC 推荐的方法为基础。
该方法采用对-硝基苯磷酸盐为底物，在最适反应条件下，样本中的碱性磷酸酶（ALP ）催化下述转磷酸反应：磷酸硝基酚-对O H 硝基苯磷酸盐-对2++−−→−ALP在上述反应中，对-硝基酚的生成速率与样本中碱性磷酸酶的活力成正比，通过在405nm 波长处测定吸光度的上升速率，即可测得样本中碱性磷酸酶的活力1.试剂本科使用上海复星长征医学科学有限公司ALP试剂盒，为液体双试剂，其各组分如下：试剂1（R1）乙酸镁 3.0 mmol/L硫酸锌 1.5 mmol/LHEDTA 3.0 mmol/LAMP缓冲液420 mmol/L试剂2（R2）对 - 硝基苯磷酸盐 81.5 mmol/LAMP缓冲液420 mmol/LEDTA 5.0 mmol/L2.校准要求2.1校准品：使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清（货号：4490050/4590050）对测定进行校准。
