放线菌检测

土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化一、实验目的1. 学习、掌握从土壤稀释分离、划线分离各类微生物的技术。

2. 学习从样品中分离、纯化出所需菌株。

3. 学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术，了解培养细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物的培养条件和培养时间。

4. 学习平板菌落计数法。

二、实验原理将待分离的样品进行一定的稀释，使微生物的细胞（或孢子）尽量呈分散状态，选用有针对性的培养基，在不同温度、通风等条件下培养，让其长成一个纯种单个菌落。

要想获得某种微生物的纯培养，还需提供有利于该微生物生长繁殖的最适培养基及培养条件。

微生物四大类菌的分离培养基、培养温度、培养时间见表2-1所示。

表2-1 微生物四大类菌的分离和培养要求样品来源分离对象分离方法稀释度培养基名称培养温度/℃培养时间/d土样细菌稀释分离10-5，10-6，10-7牛肉膏蛋白胨30～37 1～2土样放线菌稀释分离10-3，10-4，10-5高氏1号28 5～7土样霉菌稀释分离10-2，10-3，10-4马丁氏琼脂28～30 3～5面肥或土样酵母菌稀释分离10-4，10-5，10-6马铃薯葡萄糖28～30 2～3细菌分离平板细菌单菌落划线分离10-2 牛肉膏蛋白胨30～37 1～2三、实验材料1. 菌源土样2. 培养基牛肉膏蛋白胨培养基，马丁氏培养基，高氏合成1号培养基，马铃薯葡萄糖培养基(制平板和斜面)，见附录Ⅲ。

3. 无菌水 250 mL锥形瓶，每瓶装99 mL无菌水(或95mL为分离霉菌用)，内装10粒玻璃珠。

4.5 mL无菌水试管(每人5～7支)。

4. 其他物品无菌培养皿，无菌移液管，无菌玻璃涂棒(刮刀)，称量纸，药勺，橡皮头，10%酚溶液。

（一）系列稀释平板法1. 取土样选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。

先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。

盛土的容器应是无菌的。

将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等杂物，装入已灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。

放线菌的分离与筛选方法放线菌介于细菌和丝状真菌的一类丝状原核生物，多为腐生，少数寄生。

腐生型在自然界物质循环中起着重要作用。

放线菌突出特性产生抗菌素，常以孢子或菌丝状态存在，以土壤最多，常存在肥土农田土中性或偏碱性土壤中。

1.拮抗放线菌的筛选方法：1.1平板划线法：待测菌株与检测病原菌通用培养基制成平板，在平板中央划线接种待测菌株，28-30℃ 3-5d，将病原菌垂直方向划线于待测菌生长线的两侧，不能与待测菌相连，在37℃ 24h取出观察。

如果待测菌株对病原菌有抑制活性，病原菌靠近待测菌的一端生长会受到待测菌抑制产生抑菌带。

可根据抑菌带的长短来判断待测菌活性强弱。

选择抑制活性强的复筛。

1.2抑菌圈法或十字交叉法：常用的初筛方法将待测菌接种于平板，长出成熟菌落后，用打孔器将供试病原菌苔打成直径5-6mm小菌块，并将其移入到病原菌平板培养基中，将待测菌与病原菌呈十字交叉排列，即病原菌在中央，待测菌置于病原菌的四周，培养3-4d。

若有抑菌活性在待测菌周围形成一个没有生长病原菌抑菌圈。

若菌块厚度大小一致的，抑菌圈的大小可直观反应待测菌抑菌活性的强弱。

1.3纸片法或生长速率法：主要测定发酵液的抑菌活性，即将相同灭菌后的圆形滤纸片放于待测发酵液中，取出并黏贴在接种有病原菌的平板培养基，培养后观察有无抑菌圈或抑菌圈的大小。

2.放线菌分离与筛选.2.1培养基；2.1.1改良高1号：可溶性淀粉20g/L KH2PO40.5g/L NaC10.5g/L MgSO40.2-0.5g/L KNO3 1g/L FeSO40.01g/L 重铬酸钾（3%）3.3mL/L PH7.2-7.4（分离保存用）每100ml培养基加入1ml0.1℅的FeSO4溶液。

2.1.2淀粉培养基和秸秆腐解物培养基2.1.3拮抗试验培养基：高1号牛蛋 PDA改良培养基加3g牛肉膏2.2抑菌剂的选择：有效降低细菌真菌的数量，细菌扩散真菌蔓延速度迅速。

土壤、水质检测——放线菌、霉菌、大肠杆菌的分离方法微生物因为体积小、质量轻、适应性强、繁殖能力强等特点，广泛分布于自然界中。

它们存在于食品、化妆品、饲料、环境等人们能触及的各个角落中。

某些微生物对产品的污染，不仅影响到产品本身的质量，更严重的是它危及消费者的健康和安全。

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以下介绍几种菌的分离方法：一、从土壤中分离放线菌1.制作高氏一号培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。

2.称取土壤10克，放入装有100毫升无菌水的锥形瓶中，并加入10%酚10滴，以抑制细菌生长。

振荡10分钟，制成10-1菌悬液。

按照连续稀释分离法，进一步制成10-3菌悬液。

3.用移液管吸取0.1毫升10-3菌悬液，注入平板培养基上，用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀涂抹在整个培养基上。

然后将培养皿倒置于25-30℃温箱中，培养7-10天，培养基上会出现微生物菌落。

如果菌落的硬度较大，干燥致密，且与基质紧密结合，不易被针挑起，这就是放线菌菌落。

4.挑取放线菌菌落，接种于斜面培养基上。

二、从土壤中分离霉菌1.制作豆芽汗葡萄糖培养基，并添加80%乳酸数滴，以抑制细菌生长。

将培养皿中，凝成平板，待用。

2.称取10克土壤，按上述分离放线菌的方法制成10-4或10-5的菌悬液。

3.取0.1毫升菌悬液注入培养皿内培养基上，用玻璃刮刀涂抹均匀。

然后将培养皿倒置于2 5-30℃温箱内培养3-4天。

培养基上会出现微生物菌落。

霉菌菌落常长成绒状、棉絮状或蜘蛛网状，可根据这一特征寻找霉菌菌落。

4.挑取培养皿内的霉菌菌落接种于斜面培养基上三、从饮水中分离大肠杆菌1.制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。

2.用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按1:10稀释。

放线菌的分离和鉴定放线菌的分离和鉴定实验器材：1.⼟壤材料 5 ---10cm 处⼟壤，放于采集袋中带回实验室。

2.培养基淀粉琼脂培养基（⾼⽒Ⅰ号培养基( w /v)）可溶性淀粉2%，KNO3 0. 1%，NaCL 0. 05%，K2HP04 0. 05%，MgSO4 0. 05%，FeSO4 0. 001%，琼脂2% 3.溶液和试剂（1) 20% ⽢油( 2) 0. 1%美蓝 A 液: 美蓝0. 3g ，95% ⼄醇300ml;B 液: 0. 01% KOH 100ml 混合A 和B 液即成⾰兰⽒染液3( 1) 结晶紫染⾊液: 甲液结晶紫2g，95% ⼄醇20ml;⼄液草酸铵0. 8g，蒸馏⽔80ml。

甲⼄液先分别溶解，然后混合在⼀起，过滤除去残渣后装⼊滴瓶中备⽤。

( 2) 碘液: 碘1g，碘化钾2 个，蒸馏⽔100ml 先取少量蒸馏⽔加⼊碘和碘化钾，使碘完全溶解后再加⼊全部蒸馏⽔，分装于滴瓶中备⽤。

( 3) 复红酒精溶液: 碱性复红0. 4g，95%⼄醇100ml，溶解装⼊滴瓶备⽤。

4.仪器和其他⽤品⽆菌纸、带玻璃珠的三⾓烧瓶、1ml⽆菌吸管、⽆菌试管、⽆菌培养⽫⼀.⽬的要求：1. 掌握倒平板的⽅法和常⽤分离纯化微⽣物的基本操作。

2. 初步观察⼟壤中放线菌菌落形态。

3. 初步了解掌握微⽣物分类的基本⽅法。

⼆.实验原理：放线菌在⾃然界中主要⽣存于陆地和淡⽔中，⼟壤为这类微⽣物的主要习居场所，⽆论在种类和数量上都⽐其他地⽅繁多。

在中性或偏碱性的⼟壤和有机质等丰富的⼟壤中较多。

放线菌以孢⼦和菌丝⽚段的形式存在于⼟壤，每克⼟壤内含有数万、数⼗万的孢⼦。

放线菌的⽣活史和形态特征放线菌的孢⼦和孢囊孢⼦在适宜的环境下吸收⽔分，膨胀萌发，⽣出芽管1 －3 个，芽管伸长长出分枝，分枝越来越多，形态菌丝体。

因其菌丝体在培养基内，即基内菌丝或称营养菌丝体。

基内菌丝体⼀般没有横隔，由于菌丝体长⼊培养基内和培养基表⾯，并纠缠在⼀起形成密集的菌落，所以⽤接种针将整个菌落培养基挑起⽽不破裂。

放线菌实验报告放线菌实验报告一、引言放线菌是一类广泛存在于土壤和水体中的微生物，其具有重要的生物学意义和应用价值。

本次实验旨在通过对放线菌的培养、鉴定和抗菌活性测试，了解放线菌的特性和应用前景。

二、材料与方法1. 放线菌培养基的制备：将葡萄糖、酵母粉、肉膏粉、胰蛋白胨等按一定比例溶解于蒸馏水中，加热煮沸，倒入培养瓶中，待冷却后加入抗生素。

2. 放线菌的采集：在适宜的环境中采集土壤或水样，并将样品分装于离心管中。

3. 放线菌的分离：取适量样品并加入适量的生理盐水，摇匀后进行稀释，取适量稀释液分别均匀涂布于放线菌培养基上。

4. 放线菌的纯化：从培养基上挑选出单菌落，进行连续传代，直至获得纯种放线菌。

5. 放线菌的鉴定：通过形态特征、生理生化特性和分子生物学方法对放线菌进行鉴定。

6. 抗菌活性测试：采用平板扩散法或孔隙扩散法，将放线菌菌液或提取物涂布于琼脂平板上，观察抑菌圈的形成情况。

三、结果与分析经过培养和分离，我们成功获得了多个放线菌菌株。

在鉴定过程中，我们观察到这些放线菌菌株形态各异，有的呈现棕黄色，有的呈现淡黄色，有的呈现灰白色。

此外，通过生理生化特性的检测，我们发现这些放线菌菌株对某些碳源和氮源具有不同的利用能力。

进一步的分子生物学分析结果显示，这些放线菌菌株属于不同的物种。

在抗菌活性测试中，我们选取了几个放线菌菌株进行了评估。

结果显示，这些放线菌菌株对多种细菌具有一定的抑制作用。

其中，某一放线菌菌株对金黄色葡萄球菌表现出了较强的抗菌活性，形成了较大的抑菌圈。

这表明该放线菌菌株可能具有潜在的抗生素生产能力。

四、讨论与展望通过本次实验，我们成功地获得了多个放线菌菌株，并对其进行了鉴定和抗菌活性测试。

然而，由于时间和设备的限制，我们并未对放线菌的抗生素产物进行深入研究。

因此，未来可以进一步探索这些放线菌菌株的抗生素产物，并对其进行分离、纯化和结构鉴定，以期发现新的抗生素。

此外，放线菌不仅具有抗菌活性，还具有其他生物活性物质的合成能力，如抗肿瘤物质、抗病毒物质等。

微生物总数检测方法(放线菌）一、检测用培养基配方与培养条件1.培养基：高氏1号培养基配方：可溶性淀粉 2g ，KNO30.1g ，K2HPO4 0.05g ，MgSO4• 7H2O 0.05g ，NaCl0.05g ，FeSO4• 7H2O 0.001g （母液），琼脂 2g ，自来水 100mL 。

先把淀粉放在烧杯里，用5毫升水调成糊状后，倒入95毫升水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。

在烧杯外做好记号，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。

调整pH值到7.2～7.4，分装后灭菌，备用。

2. 培养条件：温度：27℃-30℃；时间：36--48小时。

二、检测与计数方法1. 系列稀释称取适量的样品，加入带玻璃珠的三角瓶中，加入100mL的无菌水（无菌水中事先加入了分散剂1—2滴，分散剂可以是吐温，OP—10，用来分散菌团），用玻璃棒搅拌使之溶解吸水均匀后上旋转式摇床200 r/min充分振荡40—60 min，,即成母液菌悬液（基础液）。

2. 用1mL无菌移液管分别吸取1.0mL上述母液菌悬液加入9 mL无菌水中，按1:10进行系列稀释，分别得到1:1×101，1:1×102，1:1×103，1:1×104……1:1×k稀释的菌悬液（每个稀释度应更换无菌移液管）。

3. 加样及培养取1个适宜的稀释度，用移液枪吸取菌悬液0.1 mL，加至预先制备好的固体培养基平板上，用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀地涂于琼脂表面。

此稀释度重复3次，同时以空白作对照，于适宜的条件下培养。

4. 菌落识别根据所检测菌种的技术资料，每个稀释度取不同类型的代表菌落通过涂片、染色、镜检等技术手段确认有效菌。

当空白对照培养皿出现菌落数时，检测结果无效，应重做。

5. 菌落计数以出现20—150个菌落数的稀释度的平板为计数标准，分别统计有效活菌数目和杂菌数目。

有效菌平均菌落数在20—150之间时，则以该菌落数计算。

放线菌的实验报告放线菌的实验报告一、引言放线菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，以其独特的形态和生物学特性而备受研究者的关注。

本实验旨在通过对放线菌的分离培养、形态观察和抗生素产生能力的检测，进一步了解放线菌的特点和应用潜力。

二、材料与方法1. 放线菌分离培养：将土壤样品取自自然环境中，加入到含有适宜培养基的培养皿中，进行稀释均匀。

然后将培养皿密封，置于恒温培养箱中，在适宜的温度下培养一段时间，直至观察到单个菌落的形成。

2. 放线菌形态观察：取一颗单个菌落，用显微镜观察其形态特征，包括菌丝的形状、颜色、分枝情况等。

3. 抗生素产生能力检测：将分离得到的放线菌菌株接种到含有抗生素敏感菌株的琼脂平板上，观察菌落周围是否出现抑制圈。

三、结果与讨论1. 放线菌的分离培养：经过一段时间的培养，观察到培养皿中出现了单个菌落。

将这些菌落通过传代培养，得到纯种的放线菌菌株。

2. 放线菌的形态观察：在显微镜下观察到放线菌菌丝呈分枝状，颜色多样，有的呈白色、黄色或橙色。

菌丝通常呈直线状，但也有少数呈弯曲或环状。

3. 抗生素产生能力检测：将分离得到的放线菌菌株接种到含有抗生素敏感菌株的琼脂平板上，观察到菌落周围出现了抑制圈。

这表明放线菌具有抗生素产生的能力，可以对其他细菌产生抑制作用。

放线菌作为一类重要的微生物资源，具有广泛的应用前景。

其产生的抗生素被广泛应用于医药领域，用于治疗各种感染性疾病。

此外，放线菌还具有其他生物活性物质的合成能力，如抗肿瘤物质、抗氧化物质等。

因此，对放线菌的深入研究具有重要意义。

在本次实验中，我们成功地从自然环境中分离出了放线菌，并观察到了其形态特征和抗生素产生能力。

然而，实验中仍存在一些不足之处。

首先，由于实验时间有限，我们只对放线菌的形态进行了简单的观察，没有进行更深入的分类和鉴定。

其次，我们只检测了放线菌的抗生素产生能力，而未对其产生的抗生素进行具体的鉴定和分析。

为了更好地发掘和利用放线菌的潜力，今后的研究可以从以下几个方面展开：1. 对分离得到的放线菌菌株进行进一步的形态学和生理学研究，以了解其多样性和适应能力；2. 对放线菌产生的抗生素进行鉴定和分析，以寻找新的抗生素种类和开发新的药物；3. 利用基因工程技术改造放线菌，提高其抗生素产量和质量。

细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的菌落测定一、目的要求1．观察细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的代表种类的菌落形态特征。

2．学习细菌菌落制片的方法。

二、墓本原理菌落形态是指某种微生物在一定的培养基上由单个菌体形成的群体形态。

细菌、放线菌、酵母菌和霉菌，每一类微生物在一定培养条件下形成的菌落各具有某些相对的特征，利用观察这些特征，来区分各大类微生物及初步识别、鉴定微生物，方法简便快速，在科研和生产实践中常被采用。

利用血液培养基富有营养及粘性等特性来培养细菌，在此培养基上生长的菌落在固定时粘性很大，能够牢固地附着在载玻片或盖玻片上，便于制片和观察。

另外，血液培养基又是较好的保存菌种用培养基，故由此培养基所制的菌落制片能保存较长时间。

三、器材圆褐固氮菌，枯草芽孢杆菌，灰色链霉菌，酿酒酵母，青霉的单个菌落平板，白色葡萄球菌（Staphylococcus albus）；Bouin氏固定液，0．01％结晶紫溶液，羊血或兔血，肉膏蛋白胨琼脂培养基，酒精等。

四、操作步骤1．观察圆褐固氮菌、枯草芽孢杆菌、灰色链霉菌、酿酒酵母、青霉的单个菌落特征，并按实验一菌落特征描述的方法记录结果。

2．血液琼脂培养基的制备：(1)成分pH7．6肉膏蛋白胨琼脂培养基10ml，无菌脱纤维羊血（或兔血）1ml。

(2)将肉膏蛋白胨琼脂培养基加热溶化。

(3)待冷至45℃时，以无菌操作加1ml无菌脱纤维羊血于培养基内，立即摇荡使血液和琼脂培养基充分混匀。

(4)迅速以无菌操作倒入平板，使成血液琼脂平板，注意不要产生气泡。

中心以化工行业技术需求和科技进步为导向，以资源整合、技术共享为基础，分析测试、技术咨询为载体，致力于搭建产研结合的桥梁。

以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推动化工行业的发展。

(5)置37℃过夜，如无菌生长即可使用。

(6)将无菌的平板取出进行划线接种分离单个菌落，因要保持琼脂表面完整，接种改用圆头光滑玻棒，注意不要把琼脂划破。

抗FOC4香蕉内生放线菌的筛选及菌株NJQG—3A1鉴定1材料与方法1.1材料1.1.1病原菌尖孢镰刀菌4号生理小种，由中国热带农业科学院生物技术研究所曾会才实验室提供。

1.1.2主要培养基内生放线菌分离培养基采用改良高氏（Gauses）1号培养基（GS）、1/10 ATCC 合成培养基、葡萄糖天门冬酸培养基（GA）、腐殖酸培养基（HV）、改良高氏2号培养基（GPT）和改良淀粉酪素培养基（SIM）[14-18]，为抑制杂菌生长，在各分离培养基中均加入终浓度为75 mg/L的重铬酸钾、100 mg/L的制霉菌素和20 mg/L的萘啶酮酸；放线菌纯化培养保存采用YE培养基；抑菌试验采用马铃薯琼脂培养基（PDA）；液体发酵采用淀粉-大豆粉液体培养基；形态特征观察采用国际链霉菌计划（ISP）推荐的培养基，参考Shirling等的方法[19-20 ]进行配制。

1.1.3样品采集与处理2012年11月3日从海南省临高南宝蕉园（19°47′1″N，109°51′17″E）和皇桐蕉园（19°49′58″N，109°50″E）采集香蕉植株样品（表1）。

每个品种随机采集香蕉植株10株，混匀。

表1样品采集信息采集地点根部土壤pH值香蕉植株采集植株部位皇桐美台蕉园4.35农科健康植株（NK）根、球茎、假茎、叶临高南宝蕉园4.17南天健康植株（NJ）根、球茎、假茎、叶临高南宝蕉园5.54南天感病植株（NB）根、球茎、假茎、叶临高南宝蕉园4.17巴西健康植株（BJ）根、球茎、假茎、叶临高南宝蕉园5.54巴西感病植株（BB）根、球茎、假茎、叶1.2方法1.2.1内生放线菌的分离参考阮继生分离弗兰克氏菌的方法对样品进行表面消毒，采用组织块匀浆法进行内生放线菌分离。

1.2.2香蕉枯萎病内生拮抗放线菌筛选以尖孢镰刀菌4号生理小种（FOC4）为靶标菌，采用平板对峙法进行初筛；对初筛有活性的菌株用平板对峙法进行复筛，计算抑菌率，公式为：抑菌率=[（对照组菌落半径-处理组菌落半径）/对照组菌落半径]×100%。

放线菌素d实验原理
放线菌素D是一种天然产生的抗生素，具有广谱抗菌活性。

放线菌素D实验可以用于检测细菌对该抗生素的敏感性，从而评估其抗菌能力。

实验中，首先需要准备放线菌素D溶液，通常是将放线菌素D溶解在适当的溶剂中。

然后，需要制备一系列浓度递减的溶液，以便进行浓度梯度的检测。

接下来，需要选取待测细菌，通常可以选择已知的抗生素敏感细菌株作为对照。

将待测细菌接种在琼脂平板上，然后通过斑点法或者扩散法在平板表面均匀涂抹不同浓度的放线菌素D 溶液。

将涂抹了放线菌素D溶液的平板在恰当的温度下培养一段时间，待形成菌落后，观察平板上不同浓度溶液涂抹处的菌落情况。

如果细菌对放线菌素D敏感，那么其生长会受到抑制，相对于对照区域，涂抹了高浓度的放线菌素D溶液的区域将会出现菌落生长受限或完全无菌的情况。

根据不同浓度放线菌素D涂抹区域细菌生长的情况，可以得出不同浓度放线菌素D对细菌产生的抗菌效果。

通常，可以绘制生长抑制曲线，确定细菌对放线菌素D的最小抑菌浓度（MIC）。

这种方法可以用于评估不同细菌株对放线菌素D的耐药性及敏感性，并为合理应用该抗生素提供参考依据。

同时，该实验原理也可以应用于评估其他抗生素的抗菌能力和耐药性。

可编辑修改精选全文完整版土壤中放线菌的分离和纯化实验（精选5篇）第一篇：土壤中放线菌的分离和纯化实验土壤中放线菌的分离和纯化实验一、实验目的1、制作MS培养基的方法，掌握母液的保存方法。

2、掌握培养基的灭菌方法。

掌握外植体的消毒和超净工作台的使用。

4、掌握放线菌的分离纯化及染色的基本流程；5、掌握高氏一号培养基的配制方法；6、复习分离纯化放线菌的基本操作技术、培养方学会使用高压蒸汽灭菌锅。

7、培养微生物实验的设计思路和动手能力。

二、实验材料高压蒸汽锅、培养瓶、石斛的愈伤组织、超净工作台，酒精灯、酒精棉球、镊子、电子天平、称量纸、烧杯、量筒、显微镜、三角锥形瓶、无菌培养皿、接种环、酒精灯、分析天平；接种环、载玻片、盖玻片、玻璃珠、移液枪、剪刀三、实验原理植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）、组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）第 1 页或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体,在无菌和适宜的人工培养基及温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科。

四、实验步骤1、配制MS培养基8L，称取马铃薯1600g、香蕉400g、蔗糖240g、活性炭8半勺、琼脂80g、配制母液。

2、配制培养液时应注意：①在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制；为防止母液被微生物污染，有机母液放在冰箱里4℃保存；②用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次；③量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。

溶化琼脂用粗天平分别称取琼脂9 g、蔗糖30 g，放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入蒸馏水750 mL，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。

放线菌菌落特征放线菌资料的总结放线菌菌落特征放线菌资料的总结放线菌的形态比细菌复杂些，但仍属于单细胞。

在显微镜下，放线菌呈分枝丝状，我们把这些细丝一样的结构叫做菌丝，菌丝直径与细菌相似，小于1微米。

菌丝细胞的结构与细菌基本相同。

根据菌丝形态和功能的不同，放线菌菌丝可分为基内菌丝、气生菌丝和孢子丝三种。

链霉菌属是放线菌中种类最多、分布最广、形态特征最典型的类群，其形态如下图所示。

下图:链霉菌的一般形态和构造(模式图)正文:放线菌是怎么生长的，需要什么条件，我指的不是培养基，而是在植物体内。

哪位做过植物内生菌，恳请指教!不胜感激!植物内生放线菌在植物的韧皮部、木质部和韧皮部之间的缝隙有生长，分离植物的内生菌通常在这两个部位可以分离到。

主要是靠植物组织提供营养，有很多内生菌能够分解纤维素作为炭源，无机盐和氮源可以由植物组织中的无机盐和含氮物质获得，他们在植物中生长很缓慢。

通常来说，植物或者植物的组织器官的生长时间越长内生菌的种类和数量越多，你如果要分离可以选择树龄在百年以上的树。

植物器官粉末中会有放线菌存在吗?干燥的，经辐射灭菌后的粉末会把放线菌杀死吗?适宜的条件还会长出菌吗?辐射灭菌和50-60度的干燥都不能杀死所有的放线菌。

另外植物当中不只有放线菌，植物的内生菌大多数是真菌，有的内生真菌产生孢子能够抵御不良环境，生存能力很强。

如果你是做植物组织化学可以采用高温处理，杀死植物当中的微生物，再分析植物组织的成分。

如果你要的成分不能高温处理，可以用容易挥发的消毒剂处理植物样品，杀死微生物然后，在无菌环境下使消毒剂挥发。

建议你采用75%乙醇。

如何分离内生菌?目前内生菌的分离主要还是表面消毒，建议你最好不要把植物组织研磨成粉末。

可以将组织用75%乙醇表面消毒，在无菌室中的超净台中将植物组织吹干，用消毒的手术刀，把植物组织切割成0.5*1cm的小块。

直接把组织块接入培养基，同时将组织小块在空培养基中滚动，然后取出，作为对照平板。

放线菌的鉴定方法嘿，咱今天就来聊聊放线菌的鉴定方法哟！你可别小瞧这放线菌，它们虽然个头小小的，却有着大作用呢！要鉴定放线菌呀，咱可以先从形态上入手。

你想想看，就像我们看一个人，先看他的外貌特征一样。

放线菌也有自己独特的形态呀，比如那丝丝缕缕的菌丝，有的像细细的线，有的还会交织在一起呢。

咱就仔细观察观察，看看它们长成啥样，是不是和其他的菌不一样。

还有呢，咱可以看看它们的菌落特征呀。

不同的放线菌，长出来的菌落也是各有特点哦。

有的菌落平平的，有的可能会凸起一些，颜色也不尽相同。

这就好像不同的花朵有不同的颜色和形状一样，是不是很有意思呀！再来说说生理生化特征。

这就像是了解一个人的性格和习惯一样。

放线菌在不同的环境下会有不同的反应呢。

比如对某些物质的利用情况，对温度、酸碱度的适应能力等等。

通过这些测试，咱就能更深入地了解它们啦。

还有个重要的方法，那就是分子生物学方法。

哎呀呀，这可高级啦！就好像给放线菌做了个基因检测似的。

通过分析它们的基因序列，就能更准确地知道它们到底是哪种放线菌。

这可真是个厉害的手段呢！你说，要是咱能熟练掌握这些鉴定方法，那不是能把放线菌都摸得透透的啦？咱就能更好地利用它们，或者避免它们可能带来的一些问题呀。

想象一下，就像我们在一个大森林里寻找宝藏一样，通过各种线索和方法，一点点地找到我们想要的放线菌宝藏。

这过程多有趣呀，多有挑战性呀！总之呢，鉴定放线菌的方法有很多，我们可以根据不同的情况选择合适的方法。

只要我们用心去研究，去探索，就一定能把放线菌的秘密都揭开。

让我们一起加油吧，去和这些小小的放线菌来一场奇妙的邂逅！。

综合病例研究基金项目：广州市妇女儿童医疗中心儿科研究所内部基金（YIP -2018-001）作者单位：510623 广州，广州市妇女儿童医疗中心急诊综合病区通信作者，沈君，E -mail ：*********************肺泡灌洗液宏基因测序诊断儿童肺放线菌感染一例苏玲 李素云 洪燕 王强 沈君【摘要】 儿童肺放线菌感染很罕见，且临床症状不典型，仅凭影像学表现易误诊为真菌、结核、肿瘤等。

该文报道了1例儿童肺放线菌感染病例的诊治经过：7岁男性患儿，临床表现为发热、咳嗽，血常规提示白细胞及CRP 明显升高，肺部CT 提示肺部感染、待排除真菌等特殊菌群感染，常规抗感染治疗1周后肺部影像学无明显变化，行纤维支气管镜冲洗并取肺泡灌洗液进行宏基因测序后提示为放线菌感染，确诊后予静脉大剂量青霉素治疗，出院后予阿莫西林克拉维酸钾口服近2个月后复查CT 明显好转。

该例诊治过程提示，肺泡灌洗液宏基因测序有助于儿童肺放线菌感染的早期诊断，大剂量足疗程的青霉素可获得较好的疗效。

【关键词】 肺泡灌洗液；放线菌病；宏基因组测序；儿童Application of metagenomic sequencing from alveolar lavage fluid in diagnosis of pediatric pulmonary actinomycete infection: a case report Su Ling △， Li Suyun， Hong Yan， Wang Qiang， Shen Jun. △General Ward of Emergency Department， Guangzhou Women and Children’s Medical Center， Guangzhou Medical University， Guangzhou 510623， China Corresponding author， Shen Jun， E -mail:*********************【Abstract 】 Pediatric actinomycete infection is extremely rare without typical clinical symptoms. It is easily misdiagnosedas fungi ， tuberculosis and tumors based on imaging findings. In this article ， the diagnosis and treatment of a child with pulmonary actinomycete infection were reported. A 7-year -old boy presented with fever and cough. Routine blood test showed significant elevation in the white blood cells and C -reactive protein. CT scan of the lung suggested lung infection. The possibility of other special floral infection ， such as fungus ， should be excluded. After 1-week routine anti -infection treatment ， no significant changes were detected in the imaging findings of the lung. Bronchoscopy was performed to obtain the alveolar lavage fluid for subsequent metagenomic sequencing ， which prompted actinomycete infection. After the diagnosis was confirmed ， he was administered with intravenous high -dose penicillin. After discharge ， amoxicillin/clavulanate potassium was orally given for nearly two months. CT scan revealed significant improvement. The diagnosis and treatment of this case indicate that metagenomic sequencing from alveolar lavage fluids contributes to early diagnosis of pediatric pulmonary actinomycete infection. Full -course of high -dose penicillin can achieve high clinical e ff icacy.【Key words 】 Alveolar lavage fluid ； Actinomycosis ； Metagenomic sequencing ； Children放线菌病是由放线菌属致病菌感染引起的慢性疾病，根据侵犯的部位一般分为头颈型、腹盆腔型和胸型，发病率分别为55%、20%、15% ［1］。

菌种筛选的一般步骤________、_________、________。

答案：菌种的分离和筛选一般步骤分为采样、富集、分离、目的菌的筛选四个步骤。

知识拓展：
放线菌是重要的抗生素产生菌，主要分布在土壤中。

分离和纯化土壤中放线菌的实验流程如下：土壤取样→系列稀释→涂布平板→恒温培养→观察菌落→菌种纯化。

回答下列问题：（1）取样时应选择有机物含量丰富且疏松的土壤，可判断大多数放线菌属于____（填“需氧菌”或“厌氧菌”）。

将1g土样放入盛有99mL无菌水的锥形瓶中混合均匀，再取1 mL 土壤悬液注入盛有9 mL无菌水的试管中，则该试管中稀释液的稀释倍数为____倍。

（2）高氏1号培养基是培养放线菌的常用培养基，该培养基含有的营养物质主要包括____。

（3）在分离土壤中的放线菌时，为减少细菌和真菌的干扰，提高放线菌的分离效率，在培养基中要加入一定量的重铬酸钾，重铬酸钾在培养基中所起的作用是____。

（4）放线菌的培养温度一般应____（填“低于”或“高下”）细菌的培养温度。

（5）筛选放线菌可根据菌落特征进行判断，菌落特征主要包括____（答两点）等方面。

（6）分离得到土壤中的放线菌后，可利用____法对菌种进行纯化。

答案：(1). 需氧菌(2). 103（或1000）(3). 碳源、氮源、水和无机盐(4). 抑制细菌和真菌的生长（或选择作用）(5). 低于(6). 形状、大小、颜色和隆起程度(7). 平板划线或稀释涂布平板。

放线菌的分离与筛选方法放线菌（Actinomycetes）是一类革兰氏阳性细菌，常见于土壤和水体中。

由于其多样的形态和代谢特性，放线菌具有广泛的生物学和工业应用价值。

分离和筛选放线菌的方法是研究和利用其功能的基础，本文将介绍几种常用的方法。

一、分离方法：1.稀释和均匀涂布法：首先，将环境样品（如土壤、水样）进行适当稀释，并在培养基平板上平均涂布样品。

随着放线菌的生长，单个菌落会形成，然后可以通过挑选单个菌落进行分离纯化。

2.稀释和涂布法：方法类似于前者，但将初步培养得到的单菌落拖线在新的培养基平板上进行再次分离，以获得更纯的放线菌。

3.祛除污染菌法：样品前处理的关键是去除非放线菌细菌的干扰。

常见的处理方法有在分离培养基中加入抗生素、改变pH值等。

4.冷冻-融化法：利用放线菌对低温和高温的耐受性不同，将样品进行多次冻结-融化处理，可以选择性地分离出放线菌。

二、筛选方法：1.对抗菌活性筛选：放线菌具有对其他菌株的抗菌活性，可以使用对抗菌活性筛选方法，通过将待测分离物与感兴趣的致病菌共同培养，观察是否产生抑菌圈来筛选放线菌。

2.抗真菌筛选：放线菌不仅对细菌有抑制作用，也能抑制真菌的生长。

可以通过共培养放线菌和待测真菌，并观察是否产生抑菌圈来筛选放线菌。

3.溶磷筛选：放线菌具有溶解磷酸盐的能力，可以利用Na-P亚硝酸盐琼脂平板培养基来筛选放线菌。

4.产生生物活性化合物筛选：放线菌可以生成一系列生物活性化合物，如抗生素、酶、生物胺等。

可以根据需要设计相应的试剂盒，进行营养检测、酶活性测定或染色方法进行筛选。

5.双层平板筛选法：放线菌在液体培养基上生长一段时间后，将其转移到固体上层培养基上继续培养。

这种方法可以筛选出产生生物活性化合物的放线菌。

以上介绍的方法只是一小部分常用的放线菌分离和筛选方法，随着技术的不断发展，还有更多新的方法被提出。

分离和筛选放线菌是一个复杂且耗时的过程，需要根据具体的研究目的和条件来选择适合的方法。

葡萄霜霉病菌拮抗放线菌QH94的筛选及鉴定蒋欣陶;赵奎华;刘长远;梁春浩;臧超群【摘要】为筛选出葡萄霜霉病菌的拮抗放线菌,对采自辽宁省沈阳、葫芦岛、锦州、鞍山、朝阳等地区葡萄园的23份土样中的放线菌进行分离,并对获得的119株放线菌进行防效评价,得到1株拮抗放线菌菌株QH94,其田间防效可达68.83％～89.80％.采用平板对峙培养法进行抑菌谱的测定,QH94菌株对9种病原菌有抑制作用,其中对稻瘟病菌的抑制作用最强,抑菌带宽度为10.57am.根据菌株QH94的形态特征、培养特征、生理生化特性以及16S rDNA序列分析结果,将其初步鉴定为细黄链霉菌[Streptomyces microflavus (Krainsky) Waksman&Herici].【期刊名称】《沈阳农业大学学报》【年(卷),期】2015(046)003【总页数】6页(P303-308)【关键词】葡萄霜霉病菌;生物防治;放线菌;细黄链霉菌【作者】蒋欣陶;赵奎华;刘长远;梁春浩;臧超群【作者单位】沈阳农业大学植物保护学院,沈阳110161;辽宁省农业科学院植物保护研究所,沈阳110161;辽宁省农业科学院植物保护研究所,沈阳110161;辽宁省农业科学院植物保护研究所,沈阳110161;辽宁省农业科学院植物保护研究所,沈阳110161;辽宁省农业科学院植物保护研究所,沈阳110161【正文语种】中文【中图分类】S436.631.1.9葡萄霜霉病[Plasmopara viticola（Berk.et Curt.）Berl.et de Toni]是葡萄生产上的重要病害，世界各葡萄主要产区均有发生。

该病主要为害叶片，也为害新梢、叶柄、卷须、幼果、果梗和花序等幼嫩部分，可造成叶片早期干枯脱落，葡萄果穗不能正常发育，浆果不易成熟；同时影响枝条成熟、植株的抗寒性减弱，可造成第二年产量严重损失。

一般年份葡萄霜霉病可造成减产10%～20%，严重年份可达60%以上[1-2]。