槐米中芦丁的提取 分离与鉴定

槐⽶中芦丁的提取、分离和鉴定槐⽶中芦丁的提取、分离和鉴定张景清（⼴西科技⼤学⽣物与化学⼯程学院⼴西柳州545006）1.摘要:本实验以槐⽶为原料，采⽤碱提酸沉法从槐⽶中提取芦丁，使我们学习和掌握提取和精制芦丁的具体作⽅法，并了解如何对黄酮类化合物鉴定。

该⽅法提取率⾼达26.3%，对提取的芦丁做了薄板识别及紫外分析，并与标准品做对⽐，结果表明提取的芦丁与标准品的纯度⼤致相等。

2.引⾔芦丁,亦称芸⾹苷,⼴泛存在于植物界中,现已发现的含芦丁的植物有50种以上,其中以槐⽶和荞麦叶中含量最⾼,可作为⼤量提取芦丁的原料。

芦丁属于黄酮类化合物,在⼼脑⾎管疾病的治疗上起到了举⾜轻重的作⽤,具有VP样作⽤。

有助于保持⽑细⾎管正常弹性,同时还有抗炎、抗病毒、抗氧化等作⽤。

其临床效果肯定,副作⽤少,同时也是⼀种植物原料药[1]。

黄酮类化合物的提取⽅法较多主要是依据其溶解性及酸性。

黄酮类化合物的提取⽅法⼀般有：①热⽔提取法②醇提法③碱提酸沉法④系统溶剂提取法本实验碱提酸沉法通过从槐⽶中提取芦丁，使我们学习和掌握提取和精制芦丁的具体操作⽅法，并了解如何对黄酮类化合物鉴定。

3.实验原理槐⽶中含芦丁、槲⽪素、皂苷、⽩桦、酯醇等多种成分。

芦丁是其主要成分，含量为16%-25%。

芦丁属于黄酮类化合物，结构中含有多个酚羟基，呈酸性，苷元为槲⽪素，糖基为芸⾹糖。

芦丁为浅黄⾊细⼩针状结晶，95-97℃脱⽔，熔点314℃，可溶于沸⼄醇、⽆⽔⼄醇、⼄酸⼄酯、丙酮，不溶于⽯油醚和⽔。

芦丁可溶于碱液中，呈黄⾊酸化后⼜析出，故可采⽤碱提酸沉法得到芦丁产品。

然后利⽤在冷⽔中不溶，在热⽔中微溶的溶解度差精制，可获得纯度⾼的微细针状结晶，最后利⽤芦丁、槲⽪素、及糖的性质予以鉴定。

4.实验部分4.1实验药品槐⽶（市售），氧化钙AR（西陇化⼯股份有限公司），盐酸AR（西陇科学有限公司），四硼酸钠AR（⼴东省台⼭市化⼯⼚），甲醇AR（天津市⼤茂化学试剂⼚），三氯甲烷AR（成都市科隆化学品有限公司）,氯仿（分析纯，成都市科龙化⼯试剂⼚），⼄醇（分析纯）4.2实验仪器JJ200电⼦天平（常熟市双杰测试仪器⼚），SHZ-D（III）循环⽔式多⽤真空泵（河南爱博特科技发展有限公司），ZNLC-GS 130*60智能磁⼒搅拌器（河南爱博特科技发展有限公司），薄层⾊谱展开缸，紫外分析仪（上海嘉鹏科技有限公司）4.3实验步骤4.3.1芦丁的提取⽅法⼀：称取槐⽶10.0g，在研钵中稍加研碎后，置于500ml烧杯中，加⼊250ml⽔，加热搅拌下添加⽯灰乳，保持PH=8-8.5。

实验一槐米中芦丁的提取、分离与鉴别一、实验目的（1）掌握黄酮类化合物的提取原理和方法。

（2）掌握黄酮类成分的主要理化性质及鉴别方法。

二、实验原理芦丁(Rutin)亦称芸香苷(Rutisude)，广泛存在于植物界中。

现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。

尤以槐花米和荞麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。

槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L)的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达23.5%，槐花开放后降至13.0%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。

芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性，临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。

芦丁(Rutin)为淡黄色细小针状结晶，mp.174℃~178℃(含三分子结晶)，188℃(无水物)。

溶解度情况如下：水：1:10000(冷)，1:200(热)甲醇：1:100(冷)，1:9(热)乙醇：1:300(冷)，1:30(热)吡啶：1:11.7(冷)，易溶(热)不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。

可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。

芦丁可溶于热水，难溶于冷水，其分子结构中具有较多的酚羟基，显弱酸性，在碱液中易溶解，而在酸性条件下，易析出沉淀，故本实验采用碱溶解酸沉淀的方法自槐米中提取芦丁。

再利用其在冷热水中溶解度的差别采用沸水为结晶溶剂进行精制。

利用芦丁可被稀酸水解，生成苷元和糖，通过颜色反应、薄层层析等方法进行检识和确认芦丁。

三、实验内容（一）芦丁(芸香苷)的提取1. 取1.5g石灰粉（CaO），置于干净的小研钵中，加入10mL水研成乳液备用。

称取槐米20g，于1000m1烧杯中，加0.4%硼砂水溶液200mL，在搅拌下小心加入石灰乳调至pH 8～9，加热至微沸，维持pH值20-30分钟，趁热抽滤，弃去滤渣，冷至60-70℃用浓盐酸调至pH4-5，放置过夜，减压过滤，得粗芦丁（滤饼用水洗3-4次），干燥后得粗品。

槐花米中芦丁的提取分离与鉴定实验一预试；苷的碱提取，酸沉淀；薄层层析铺板。

实验二产品的精制:重结晶；苷的水解。

实验三苷、苷元的定性鉴定；甙、甙元的TLC鉴定；糖的纸层析鉴定。

槐花米中芦丁的提取分离与鉴定（一）预试；苷的碱提取，酸沉淀；薄层层析铺板。

（二）产品的精制:重结晶；苷的水解。

（三）苷、苷元的定性鉴定；甙、甙元的TLC鉴定；糖的纸层析鉴定。

教学目的：1．掌握酸碱法提取黄酮苷类的原理及方法。

2．掌握化学鉴别试验、苷水解、薄层层检查等手段在苷类结构鉴定上的作用。

已知重要成分及其性质1．芦丁（芸香苷，rutin）淡黄色针晶，水中结晶者含3分结晶水，C27H30O16·3H2O 100mmHg和110℃加热12小时后，变为无水物，无水物于25℃变棕，115～7℃软化，214～5℃发泡分解，1g芦丁溶于约300ml冷水，200ml沸水，7ml沸甲醇，溶吡啶，甲酰胺和碱液，微溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯，不溶于氯仿，二硫化碳、乙醚、苯和石油醚。

2．槲皮素（Guereetin）为芦丁的苷元，C15H10O7，MW302.23；含二分子结晶水为黄色针晶，（稀乙醇），5～7℃失水，314℃解，1g溶于290ml无水乙醇、23ml沸乙醇，溶于冰醋一般在碱水中溶解显黄色，几不溶于水。

OHOOR OHOHR=glu rha芦丁R=OH槲皮素3．皂苷（Saponin）粗品为白色粉末，mp 210℃～20℃（dec）。

易溶于吡啶。

能溶于200倍的甲醇，酸水解得下列两种苷元及糖。

糖为葡萄糖，葡萄糖醛酸和葡萄醛酸内酯。

（1）白桦酯醇（Betulin）无色针晶，mp215～2℃，能溶于醋酸，丙酮、醋酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、苯等；难溶于石油醚和水。

HO OHHOCH2OH（2）槐花二醇（Sophoradiol）无色针晶，mp219~20℃或224℃，溶于石油醚、苯、丙酮、甲醇、难溶于水。

整套实验的过程：预试——提取分离——鉴定实验一预试；甙的碱提取，酸沉淀实验目的通过系统预试，了解检品中含有哪些类型的成分，可能含有哪些化学类型的成分，为进一步提取分离有效成分提供线索。

槐米中芦丁的提取与鉴定一、摘要：芦丁是一种分布广泛的黄酮类化合物。

目前主要用于治疗毛细血管脆性减弱和渗透性增强所致的出血，芦丁还可降低人体血脂和胆固醇并具有抗菌和抗放射作用。

国外主要用作食品、化妆品的添加剂和着色剂。

文献报道的槐米中提取芦丁的方法较多。

本实验通过煮沸槐米与水的混合物得到粗芦丁的水溶液，然后利用硅胶色谱柱法得到产物芦丁。

关键词：槐米芦丁硅胶色谱柱层板二、引言芦丁（Rutin）又称芸香苷，广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。

尤以槐花米（为植物Sophora japonicaL的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高(含量可达12-16%)，可作为大量提取芦丁的原料。

芦丁是由斛皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水形成的苷。

芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有3分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。

溶解度：冷水中为1:10 000；沸水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。

微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。

芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液，酸化后又可析出，因此，本实验采用碱提取酸沉淀法提取芦丁。

芦丁具有维生素P样作用。

能维持血管的正常通透性，减低血管的脆性，缩短流血时间，可作为高血压病的辅助治疗剂。

亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。

三、实验仪器与试剂【仪器】紫外灯蒸馏装置一套 250ml烧杯（一只） 500ml烧杯（两只）100ml三角瓶（一只）纱布色谱柱（Ф1.5×30cm）玻璃板（5×20cm 3片 2.5×7.5 8片）【试剂】硅胶层析用聚酰胺（60~100目）甲醇 70%工业乙醇槐米芦丁标准样四、实验内容与步骤1.芦丁的提取将粉碎好的槐米12g倒入500ml烧杯中，加沸水150ml，煮沸1h（在煮沸的过程中，可补加水），趁热用纱布过滤，残渣中加入100ml水，再煮沸30min，共进行两次，将两次滤液合并，放置，冷却。

※实验三槐花米中芦丁的提取、分离与鉴定芦丁（Rutin）广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。

尤以槐花米（为植物Sophora japonica的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。

槐花米为豆科植物槐花的未开放花蕾。

味苦性凉，具清热、凉血、止血之功。

槐花的主要化学成分为芦丁，又名芸香甙，含量可达12-16%。

芦丁是由槲皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔为葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水合成的苷。

为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。

溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。

微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。

芦丁具有维生素P样作用。

可降低毛细管前壁的脆性和调节渗透性，有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性，临床上用作毛细管脆性引起的出血症，并常用作防治高血压病的辅助治疗剂。

现在国处也常用芦丁作食品及饮料的染色剂。

一、实验目的1．通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。

2．掌握芦丁的一种提取、精制方法及提制过程中防止甙水解的方法。

3. 掌握黄酮甙水解生成甙元的方法及二者之间的分离。

4．熟悉芦丁、槲皮素的结构性质、检识方法和纸层析鉴定方法。

二、实验原理本实验主要是利用芸香苷中含有较多的酚羟基，可溶于碱中，加酸酸化后又可析出芸香苷结晶的性质，采用碱溶酸沉法提取，并用芸香苷对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。

芦丁可被稀酸水解，生成槲皮素及葡萄糖、李糖，并能通过纸层析鉴定。

芦丁及槲皮素还可通过化学反应及紫外光谱鉴定。

三、实验材料槐米、石灰乳、0.4％硼砂水溶液、2％的硫酸溶液、浓盐酸、正丁醇、醋酸、氨水、1％的氢氧化钠溶液、1％的三氯化铝乙醇溶液、1％的葡萄糖溶液、1％的鼠李糖溶液、1％芸香苷乙醇溶液、1％槲皮素乙醇溶液、95％乙醇、碳酸钡、广泛pH试纸、中速层析滤纸等。

槐花米中芦丁的提取、分离与鉴定※实验三槐花米中芦丁的提取、分离与鉴定芦丁（Rutin）广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。

尤以槐花米（为植物Sophora japonica 的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。

槐花米为豆科植物槐花的未开放花蕾。

味苦性凉，具清热、凉血、止血之功。

槐花的主要化学成分为芦丁，又名芸香甙，含量可达12-16%。

芦丁是由槲皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔为葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水合成的苷。

为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。

溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。

微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。

芦丁具有维生素P样作用。

可降低毛细管前壁的脆性和调节渗透性，有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性，临床上用作毛细管脆性引起的出血症，并常用作防治高血压病的辅助治疗剂。

现在国处也常用芦丁作食品及饮料的染色剂。

一、实验目的1．通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。

2．掌握芦丁的一种提取、精制方法及提制过程中防止甙水解的方法。

3. 掌握黄酮甙水解生成甙元的方法及二者之间的分离。

4．熟悉芦丁、槲皮素的结构性质、检识方法和纸层析鉴定方法。

二、实验原理本实验主要是利用芸香苷中含有较多的酚羟基，可溶于碱中，加酸酸化后又可析出芸香苷结晶的性质，采用碱溶酸沉法提取，并用芸香苷对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。

芦丁可被稀酸水解，生成槲皮素及葡萄糖、李糖，并能通过纸层析鉴定。

芦丁及槲皮素还可通过化学反应及紫外光谱鉴定。

三、实验材料槐米、石灰乳、0.4％硼砂水溶液、2％的硫酸溶液、浓盐酸、正丁醇、醋酸、氨水、1％的氢氧化钠溶液、1％的三氯化铝乙醇溶液、1％的葡萄糖溶液、1％的鼠李糖溶液、1％芸香苷乙醇溶液、1％槲皮素乙醇溶液、95％乙醇、碳酸钡、广泛pH试纸、中速层析滤纸等。

槐米中芦丁的提取、分离与鉴定（一）一、实验目的1、通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。

2、通过芦丁结构的鉴定，了解苷类结构研究的一般程序和方法。

二、实验原理芦丁：浅黄色针状结晶，mp174℃-178℃。

溶解度：1：8000；热水1:200；冷乙醇1:300；热乙醇1:30；冷甲醇1:100；热甲醇1:10.槲皮素：黄色结晶，mp313℃-314℃（2分子结晶水），能溶解于冷乙醇（1:650），易溶于沸乙醇（1:60），可溶于甲醇、乙酸乙酯等；难溶于水，实验室以稀硫酸水解，乙醇重结晶制得。

本实验主要是利用芦丁分子中含有较多的酚羟基，显弱酸性，可溶于碱中，加酸酸化后又可析出结晶的性质，采用碱溶酸沉法提取，并用芦丁对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。

三、药品材料槐米、石灰乳、盐酸、广泛PH试纸四、实验操作芦丁的的提取和精制芦丁的提取：取槐米20g置500ml烧杯中，加入沸水400ml及1g硼砂，搅拌下加入石灰乳调至PH8-9,保持微沸30分钟（注意保持PH8-9），并随时补充蒸发掉的水分，趁热用双层纱布滤过，收集滤液，药渣再用200ml水按同样的操作再提取20分钟，合并两次滤液。

浓缩至1/2体积，滤液在60℃-70℃再用盐酸调至PH4-5，静置一周，析出芦丁。

五、实验说明及注意事项1、本实验采用碱溶液酸沉法从槐米中提取芦丁，收率稳定，且操作简便。

在提取前应注意将槐米捣碎，使芦丁易于被热水溶出。

槐花中含有大量粘液质，加入石灰乳使生成钙盐沉淀除去。

PH应严格控制8-9，不得超过10,。

因为在强碱条件下煮沸，时间稍长可促使芦丁水解破坏，使提取率明显下降。

酸沉淀时PH4-5，不宜过低，否则会使芸香苷成烊盐溶于水，降低了收率。

2、提取过程中加入硼砂作用：保护芦丁分子中的邻二酚羟基不被氧化，亦保护邻二酚羟基不与钙离子络合，使芦丁不受损失。

槐米中芦丁的提取、分离与鉴定（二）一、实验目的1、掌握芦丁水解生成苷元的方法及二者之间的分离。

※实验三槐花米中芦丁的提取、分离与鉴定芦丁（Rutin）广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。

尤以槐花米（为植物Sophora japonica的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。

槐花米为豆科植物槐花的未开放花蕾。

味苦性凉，具清热、凉血、止血之功。

槐花的主要化学成分为芦丁，又名芸香甙，含量可达12-16%。

芦丁是由槲皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔为葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水合成的苷。

为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。

溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。

微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。

芦丁具有维生素P样作用。

可降低毛细管前壁的脆性和调节渗透性，有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性，临床上用作毛细管脆性引起的出血症，并常用作防治高血压病的辅助治疗剂。

现在国处也常用芦丁作食品及饮料的染色剂。

一、实验目的1．通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。

2．掌握芦丁的一种提取、精制方法及提制过程中防止甙水解的方法。

3. 掌握黄酮甙水解生成甙元的方法及二者之间的分离。

4．熟悉芦丁、槲皮素的结构性质、检识方法和纸层析鉴定方法。

二、实验原理本实验主要是利用芸香苷中含有较多的酚羟基，可溶于碱中，加酸酸化后又可析出芸香苷结晶的性质，采用碱溶酸沉法提取，并用芸香苷对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。

芦丁可被稀酸水解，生成槲皮素及葡萄糖、李糖，并能通过纸层析鉴定。

芦丁及槲皮素还可通过化学反应及紫外光谱鉴定。

三、实验材料槐米、石灰乳、0.4％硼砂水溶液、2％的硫酸溶液、浓盐酸、正丁醇、醋酸、氨水、1％的氢氧化钠溶液、1％的三氯化铝乙醇溶液、1％的葡萄糖溶液、1％的鼠李糖溶液、1％芸香苷乙醇溶液、1％槲皮素乙醇溶液、95％乙醇、碳酸钡、广泛pH试纸、中速层析滤纸等。

实验一、槐米中芦丁的提取、精制和鉴定（一）实验目的要求1.制备芦丁，供药用。

2.通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。

3.熟悉重结晶技巧。

4.了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。

（二）实验的基本原理1.芦丁的提取原理利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的性质，可用碱性溶剂进行提取，提取液加酸后可沉淀析出（碱溶酸沉法）。

也可利用芦丁在冷水中溶解度小，在热水中溶解度大的性质进行提取。

2.芦丁的分离原理利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大，以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质分离。

芦丁用溶剂加热溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后能析出而达到分离的目的（如不纯可再重复操作进行分离）。

也可采用醇溶水沉法进行精制。

3.芦丁的鉴定原理（1）利用吸附薄层色谱的分离原理，芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开，显色，以达到鉴定芦丁的目的。

（2）通过专属的化学显色反应（如三氯化铝显色反应），确定芦丁的成分类型（黄酮类）。

（三）实验内容1.用碱提法、水提法、醇提法提取槐米中芦丁。

2.用酸沉法和冷却过饱和法分离芦丁。

3.溶剂重结晶精制芦丁。

4.薄层色谱法和显色反应鉴定芦丁（四）实验药材仪器与试剂1.实验药材槐米20g。

2.仪器：磁力加热搅拌器、旋转蒸发仪、粉碎机、500ml烧杯，1000ml烧杯，50ml烧杯，250ml 园底烧瓶、500ml园底烧瓶、100ml量筒、50ml量筒、100ml锥形瓶、50ml锥形瓶、研钵、移液管、减压过滤装置，布氏漏斗，抽滤瓶、层析缸等。

3.试剂：硼砂、氧化钙、HCI、三氯化铝、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、甲酸、滤纸、PH试纸等。

（五）实验步骤1.提取（水提取法）称取槐米粗粉20g，在研钵中研碎后放入500ml烧瓶中，加水200ml，用磁力加热搅拌器加热煮沸30min，趁热过滤。

残渣同法操作一次，合并两次滤液，放置冰箱中析晶，待全部析出后，减压抽滤，用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶，抽干，得粗制芦丁，干燥，称重，计算得率。