球孢白僵菌营养需求及培养条件

球孢白僵菌液体生长营养和培养条件优化作者：张亚平吴圣勇王海鸿雷仲仁来源：《植物保护》2014年第06期摘要以菌株液体发酵过程中菌丝干重和芽生孢子浓度为测试指标，对球孢白僵菌DZDC9菌株液体发酵营养需求进行优化，结果表明，菌株生长的适宜碳源为葡萄糖，适宜氮源为酵母粉，在基础培养液中添加0.000 5 mol/L KCl可以显著提高菌丝和芽生孢子浓度。

通过单因素分析和正交设计对不同培养条件下菌丝生长量进行测定，结果表明，在培养温度26 ℃，培养液装样量1/5，初始接菌量107个/mL，转速200 r/min的培养条件下，菌株液体发酵能在60 h达到最大菌丝生长量（13.184±0.328 6）g/L。

利用筛选出的培养基和培养条件进行液固双相发酵试验，得到的孢子粉产量为（22.30±1.78）g/kg大米，显著高于优化之前的产量（13.04±1.90）g/kg大米。

关键词球孢白僵菌；液体发酵；营养需求；培养条件；产孢量中图分类号：S 476.12文献标识码：A近年来，随着害虫抗药性的增加，生物防治逐渐成为人们的研究热点，其中虫生真菌受到人们的关注，而球孢白僵菌作为一种广谱性的昆虫病原真菌，可以用于控制多种有害生物[1]，并逐渐成为可以替代化学农药的商业化产品[2]。

与传统化学农药相比，白僵菌不仅对环境安全，对非靶标生物无害，还可以借助虫体繁殖，引起再次侵染[3]。

如何大量繁殖球孢白僵菌便成为菌株推广应用的基础和前提。

国内外对于白僵菌的生产进行了多方面的研究，加拿大Goettel[4]使用浅盘、麦麸、玻璃纸和高压尼龙袋的方法生产菌粉，玻璃纸作为一种半透膜，隔绝菌体和培养基，以此获得纯孢粉。

胡加付[5]等利用低值农副产品为载体，利用浅盘发酵法对固体发酵的条件和载体配比进行了优化，以此获得了大量原孢粉。

Rombach[6]利用液体深层培养的方式获得液生分生孢子，Pham[7]等对液体深层培养产孢条件进行了优化，获得了液生分生孢子大量生产的优化条件，周晓妹[8]也对白僵菌液体深层培养方式进行了优化，筛选了适合液体深层发酵的培养基和培养条件。

球孢白僵菌的使用方案
球孢白僵菌对环境的要求比较高，适宜的温度为25℃，最适湿度为90%，在此条件下球孢白僵菌才具有活性。

若要将球孢白僵菌应用于车间治理，只有储丝柜区和掺配间的温度恒定，满足球孢白僵菌的温度需求，但湿度仍不足以使球孢白僵菌具有活性。

球孢白僵菌的使用受制于湿度问题，那么需要人为创造适宜条件。

一、使用方案
经技术部研究讨论，制定了以下使用方案：
首先，用盆或其他直径在25cm-40cm的圆形或边长为15cm-20cm 的方形器具装载材料，作为侵染菌盆；
再将构成菌盆的材料用以下顺序放置：泥土放置于底层，泥土上覆盖细沙，球孢白僵菌菌粉置于细沙层上，诱芯（诱捕器诱芯）放置于菌盆中间位置；
泥土和细沙层适当加水，需有专人负责，保持其湿度条件满足其中球孢白僵菌的活跃性；
为防止菌盆被清洁工或其他烟厂车间工人移走或破坏，还需在菌盆上粘贴警示标示，并与烟厂相关方作好沟通；
设置点根据成都分厂储丝柜区和掺配间大小，计划在储丝柜区设置3个菌点，顶棚一个、地面柜区两端各一个；掺配间设置2个菌点，放于掺配间两端。

二、目的和意义
使用此种方式能保证白僵菌的效果，一方面能验证球孢白僵菌的控虫效果；另一方面能在车间治理的间隙期起到一定的控虫作用，避免在间隙期虫害增长过快，可减少专人监控的时间，节约人力成本。

2010年7月5日。

生物农药之白僵菌蔡永欢白僵菌隶属半知菌亚门(Deutero-mycotina )，丝孢纲(Hyphomycetales)丛梗孢科(Moniliaceae) 白僵菌属(Beauveria)，是目前国内外研究最多、应用最广的一种昆虫病原真菌；白僵菌寄生范围广、致病力强、适应性强，对温血动物无害且容易培养，在生产上具有广泛的应用前景，是继B.T之后最有望成功实现产业化的新型生物农药。

生物学特性白僵菌菌丝体具隔膜，直径1.5～2μm，无色透明，菌落平坦，粉状，表面白色至淡乳色，在马铃薯胨粉培养基底部无色。

分生孢子梗的分梗或小枝可多次直角分叉，聚集成团。

分生孢子球形，直径2～2.5μm，生于自瓶状细胞延伸而成的小枝梗顶端。

瓶状细胞多变化，由腹端逐渐变细，与主枝或侧枝着生的部位常对称成直角。

白僵菌可以在不同条件下通过产生分生孢子、芽生孢子、节生孢子、内生孢子、厚壁孢子、菌丝断裂等方式进行不同类型的无性生殖。

另外，白僵菌能通过不同的接合方式产生异核菌丝，异核体内的不同基因型的核融合可进行准性生殖。

分生孢子在适宜的条件下萌发侵入虫体，长出的菌丝体可分枝和再分枝。

白僵菌的分生孢子在25℃，相对湿度90%以上，PH4.4的条件下萌发率最高。

菌丝在13～36℃间均能生长，生育适温为21～30℃，相对湿度为98%以上、PH4～5。

在30℃，相对湿度70%以下，PH为6的情况下，最适于分生孢子的产生。

白僵菌属好氧性菌，在培养基上可保持1～2年，在干燥条件甚至可存活5年，在虫体上可维持6个月，阳光直射很快失活。

分类由于白僵菌属寄生范围广，不同条件下可产生多种孢子形态，先后有许多新种出现。

目前被承认的白僵菌共有8种(李增智)，包括球孢白僵菌、布氏白僵菌、白色白僵菌、蠕孢白僵菌、粘孢白僵菌、多形白僵菌、蜘蛛白僵菌及苏格兰白僵菌等。

侵染及致病机理白僵菌寄主广泛，包括鳞翅目、鞘翅目、半翅目、同翅目、双翅目、直翅目、膜翅目等及多种螨类，约200种以上。

球孢白僵菌发酵方法
球孢白僵菌是一种常见的真菌，其发酵方法通常用于生物制药
和农业等领域。

下面我将从多个方面介绍球孢白僵菌的发酵方法。

首先，球孢白僵菌的发酵方法包括培养基的配制、发酵条件的
控制和发酵过程的监测等环节。

在培养基的配制方面，通常采用含
有碳源（如葡萄糖、玉米粉等）、氮源（如酵母提取物、蛋白胨等）、矿物盐和其他生长因子的培养基。

培养基的配制需根据球孢
白僵菌的生长特性和所需产物的要求进行优化。

其次，发酵条件的控制是球孢白僵菌发酵过程中的关键环节。

包括温度、pH值、通气量、搅拌速率等参数的控制。

球孢白僵菌通
常在28-30摄氏度下进行发酵，pH值一般控制在5.5-7.0之间，通
气量和搅拌速率需根据菌株的特性和发酵产物的需求进行调节。

此外，发酵过程的监测也是发酵方法中的重要环节。

通过监测
发酵液的溶解氧、pH值、生长曲线、产物含量等参数，可以实时掌
握发酵过程的进展，及时调整发酵条件，以提高产物的得率和纯度。

总的来说，球孢白僵菌的发酵方法涉及到培养基的配制、发酵
条件的控制和发酵过程的监测。

通过合理设计培养基配方、精确控
制发酵条件和及时监测发酵过程，可以实现球孢白僵菌的高效发酵，从而获得所需的发酵产物。

希望这些信息能够对你有所帮助。

专利名称：一种球孢白僵菌的培养方法专利类型：发明专利
发明人：潘响亮,潘军
申请号：CN202111421594.X
申请日：20211126
公开号：CN114058518A
公开日：
20220218
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开的属于球孢白僵菌培养技术领域，具体为一种球孢白僵菌的培养方法，将球孢白僵菌接种于一级培养基中，所述一级培养基包括葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、琼脂、磷酸一钾、硫酸镁、硫酸锌、水，在20‑22℃条件下，将球孢白僵菌在液体培养基中振荡培养30‑40h，得到球孢白僵菌丝体，将球孢白僵菌丝体接种于二级培养基中，在24‑25℃条件下，培养120‑130h，得到球孢白僵菌分生孢子，球孢白僵菌依次在一级培养基和二级培养基中生长，一级培养基中具有葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、琼脂、微量元素镁和锌，从而能够提高孢子萌发率，然后通过二级培养基提供营养，使其生长和继续萌发，从而提高最终得到的球孢白僵菌分生孢子含量。

申请人：盐城市神微微生物菌种科技有限公司
地址：224000 江苏省盐城市射阳县合德镇兴隆村三组
国籍：CN
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球孢白僵菌固态发酵及产孢条件的研究李尊华;袁志辉;郭晓贤;赵昌会;余响华【摘要】[Objective] To optimize solid-state fermentation and sporulation conditions for Beauvena bassiana.[Method] The orthogonal experiment was adopted to optimize the fermentation conditions including substrate water content,medium thickness and the inoculation.The optimal sporulation conditions include illumination,temperature and air relative humidity.[Result] It is demonstrated that temperature is an important factor influencing accumulation of biomass of B.bassiana during solid state fermentation.The result suggested that optimized temperature combination of lag phase,exponential phase and stationary phase is at 24-26 ℃,27-28 ℃ and 28-29 ℃,respectively,and under this condition,the maximum biomass reached 279.32 mg mycelium per gram of dry weight of substrate 120hr after fermentation.Furthermore,the effects of water content and thickness of solid substrate,and proportion of liquid inoculum and solid substrate on solid-phase fermentation was investigated using the method of orthogonal design (L9 (34)),and result suggested that all three factors remarkably influenced the growth of B.bassiana in solid-phase fermentation,the order of factors according to influenced extent is substrate thickness ＞ water content ＞ proportion of liquid inoculum and solid substrate.However,there was no remarkable difference among three factors each other.Statistical analysis suggested that the optimized parameter of solid-phase fermentation is 8cm of culture thickness,0.4 L/kgof proportion of liquid inoculum and solid substrate and 55％-60％ water content of substrate.In addition,the conditions of sporulation for solid culture substrate was studied,and the result indicated that under the condition of continuous daylight lamp irradiation,25 ℃ of t he temperature and 63％of relative humidity,the highest yield of conidia reached 1.57 × 1010 conidia per gram dry weight substrate,which increased by 35.34％comparing with that of other solid state fermentor used in our country.[Conclusion] The study will provide theoretical basis for industrialization of solid fermentation of Beauveria bassiana.%[目的]优化球孢白僵菌固态发酵及产孢的最佳条件.[方法]采用正交试验优化固态发酵时的发酵基质含水量、培养基厚度和接种量,并研究了产孢时的光照条件、温度及空气相对湿度.[结果]温度是影响固体发酵生物量积累的重要因素,优化的发酵温度组合为延滞期24～26℃、对数生长期27 ～28℃和稳定期温度28 ～29℃,发酵120h可达到最大生物量(279.32 mg菌体/g干重基物).发酵基质含水量、培养基厚度、接种量3个因子对球孢白僵菌菌体生长的影响都达到极显著水平,各因子的主次关系大小为培养基厚度、发酵基质含水量、接种量,但各因子之间差异不显著.优化的发酵条件参数为:培养基厚度8 cm,接种量0.4 L/kg,发酵基质含水量55％～60％.对发酵基物的产孢条件研究表明,在连续光照、温度为25℃、相对湿度为63％时产孢量达最高(1.570×1010个孢子/g干发酵产物),比国内同类研究的产孢量提高了35.34％.[结论]为球孢白僵菌固态发酵的产业化提供了理论依据.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2013(000)012【总页数】4页(P5302-5304,5308)【关键词】球孢白僵菌;固态发酵;产孢【作者】李尊华;袁志辉;郭晓贤;赵昌会;余响华【作者单位】湖南科技学院生命科学与化学工程系,湖南永州425100;湖南科技学院生命科学与化学工程系,湖南永州425100;湖南科技学院生命科学与化学工程系,湖南永州425100;湖南科技学院生命科学与化学工程系,湖南永州425100;湖南科技学院生命科学与化学工程系,湖南永州425100【正文语种】中文【中图分类】S188+.4球孢白僵菌(Beauveria bassiana)作为一种重要的杀虫真菌，被国内外广泛用于害虫的生物防治［1－4］。

球孢白僵菌简析白僵菌(Beauveria spp .)是目前世界上研究和应用最多的病原真菌之一 ,近年来也是热门生物农药的研究课题。

白僵菌 Beauveria 因其较广的寄主范围、较强的致病性和适应性等特点，逐渐成为农林害虫生物防治中应用最为广泛的生物杀虫剂之一。

白僵菌的寄生范围极广, 可寄生 15 个目 149个科的 700 多种昆虫及蜱螨类, 根据野外调查昆虫的越冬情况发现,因白僵菌致病而死的昆虫占真菌致病总数的21 %。

球孢白僵菌(Beauveria bassiana)是一种广谱性昆虫病原真菌, 其致病性强, 杀虫范围广。

首个以球孢白僵菌Beauveria bassiana 为主要有效成分的生物制剂二十世纪在美国注册登记，而后各类白僵菌生物制剂不断涌现，目前全球以球孢白僵菌为有效成分的制剂占全部真菌杀虫剂的 33. 9% ，我国已登记的 11 种真菌杀虫剂中有 6 种为球孢白僵菌产品。

虽然球孢白僵菌得到了广泛的应用,但仍存在击倒害虫时间长和防治效果易受环境影响等缺点。

生物学特征白僵菌是在自然界广泛存在的子囊菌类虫生真菌，同时还能随着植物的生长进行传播。

以有丝分裂孢子进行增殖，其孢子在接触害虫后产生芽管侵入虫体，在虫体内大量繁殖，代谢产物对昆虫体内角质层、细胞膜以及细胞核等细胞器产生不利影响，最终导致害虫因代谢紊乱而死。

白僵菌可寄生鳞翅目、鞘翅目、同翅目、膜翅目等700 多种昆虫和部分蜱螨类，是广谱性虫生真菌。

同时白僵菌还具有较强的选择性，对瓢虫、食蚜虻和草蛉等侵染攻击能力较弱，从而有利于保护天敌昆虫，降低对昆虫生态群落的破坏。

白僵菌对害虫致病能力受到菌株、宿主及环境因子等影响。

白僵菌虽然侵染多种昆虫，但不同菌株对害虫寄生具有一定的专一性。

环境条件对白僵菌致病力有一定的影响。

曹艺潇和刘爱萍测试了不同温度、湿度下白僵菌对草地螟Loxostege sticticalis 幼虫的致病力，结果表明: 在温度为26 ℃ 时的致死中时( LT50 ) 最短，死亡率最高; 相对湿度越高，草地螟幼虫死亡率越高，相对湿度为 95% 时，死亡率达100%。

球孢白僵菌：这个新药专治根蛆、韭蛆、蒜蛆等，5小时死蛆，1天死蛆率达到95%根蛆、韭蛆、蒜蛆是大葱、大蒜、韭菜等葱蒜类蔬菜的发生最普遍，危害最严重的地下害虫，由于这些害虫主要危害地下根茎，传统的有机磷杀虫剂陆续推出市场，导致这些地下害虫防治十分困难。

令农民朋友十分头疼。

今天给大家推荐一个新型的优秀杀虫剂，专治地下害虫，防治效果十分突出。

这个药剂就是球孢白僵菌。

球孢白僵菌是一种广谱性杀虫真菌，这种真菌在适宜的环境条件下繁殖速度特别快。

能产生大量菌丝和分生孢子，分生孢子接触昆虫体后，在合适温湿条件下，即可发芽直接侵入昆虫体内，以昆虫体内的血细胞及其他组织细胞作为营养，大量增殖，达到杀死害虫的目的。

害虫死后菌丝穿出体表，产生大量白粉状分生孢子，从而使害虫呈白色僵死状，称为白僵虫。

白僵菌制剂对人、畜无毒，对作物安全，无残留、无污染，是一个非常优秀的微生物真菌杀虫剂。

主要特点（1）杀虫范围广：球孢白僵菌可杀死地上地下15目149科521属707种害虫，是目前防治害虫最广的生物杀虫剂。

（2）持效期长：球孢白僵菌只要温度适宜，可在土壤中、空气中大量繁殖，不断再侵染，持续杀死害虫，正常情况下持效期可达60天以上。

（3）无抗药性：球孢白僵菌是通过感染害虫达到杀灭害虫的目的，因此，害虫永远都不会产生抗药性。

（4）无毒无污染：球孢白僵菌是一种微生物真菌，是以菌治虫，对土壤、地下水、农产品、人和其它环境生物，均不会产生任何污染。

（5）杀蛆速度快：冲施后5小时见死蛆，24小时死蛆率达到95%以上，杀蛆速度之惊人，让农民快速挽回损失。

适用作物球孢白僵菌灌根可广泛用于大葱、生姜、大蒜、韭菜、土豆、甘薯、中药材等多种作物。

防治对象可防治韭蛆、根蛆、蒜蛆、蝼蛄、蛴螬、金针虫等地下害虫。

使用技术在河南、山西、陕西、甘肃、河北等部分地区，大葱、大蒜、韭菜等根蛆、韭蛆发生不太严重时，每亩每次可用150亿个/克球孢白僵菌悬浮剂500～1000毫升，随水冲施。

球孢白僵菌球孢白僵菌（B. bassiana）在分类上属于半知菌亚门（Deuteromycotina），丝孢纲（Hyphomycetes），丛梗孢目（Moniliales），丛梗孢科（Moniliaceae），白僵菌属（Beauveria）。

球孢白僵菌（B. bassiana）是国内外广泛用于害虫生物防治的杀虫真菌之一，被认为是最具开发潜力的一种昆虫病原真菌。

【产品功效】球孢白僵菌,属于链孢霉科。

可寄生于60多种昆虫体上 .国内外研究人员利用球孢白僵菌防治玉米螟（Lewis, et al., 1996）、松毛虫（Alves, et al., 2002）、小蔗螟（Alves, et al., 2002）、盲椿（Leland, et al., 2006）、谷象（Vassilakos, et al., 2006）、柑桔红蜘蛛（Shi et al., 2006）和蚜虫（Ye, et al., 2005）等农林害虫。

特别是对玉米螟和松毛虫的生物防治，在国内已作为常规手段连年使用。

由于球孢白僵菌能有效地控制虫口数量，同时不伤害其他天敌昆虫和有益生物，完全符合有害生物综合治理的宗旨，同时由于其容易大量生产，防治成本较有竞争力，因而其具有广泛的应用前景。

【活性成分】白僵菌为真菌类杀虫制剂。

白僵菌分球孢白僵菌(B．bassiana)。

白僵菌分生孢子在寄主表皮或气孔、消化道上，遇适宜条件开始萌发，出生芽管。

同时产生脂肪酶、蛋白酶、几丁质酶溶解昆虫的表皮，由芽管入侵虫体，在虫体内生长繁殖，消耗寄主体内养分，形成大量菌丝和孢子，布满虫体全身。

同时产生各种毒素，如白僵素(Beauvericin)，卵孢白僵菌素(Tenellin)和卵孢子素(Oosporein)等。

白僵素为含N-甲基氨基酸的环状肘。

【性状】白僵素为针状无色晶体，加醋酸铅于水溶液中可产生絮状白色沉淀，对茚三酮显正反应。

【毒性】用50亿／g活孢子制剂大白鼠腹腔注射和灌胃LD50分别为0.6±0.1g ／kg及10.0g／kg，而用纯孢子腹腔注射大白鼠LD50为128士12mg／kg，为低毒类微生物农药，对人、畜无致病作用，属弱的变态反应源，无“三致”问题。

球孢白僵菌球孢白僵菌（B. bassiana）在分类上属于半知菌亚门（Deuteromycotina），丝孢纲（Hyphomycetes），丛梗孢目（Moniliales），丛梗孢科（Moniliaceae），白僵菌属（Beauveria）。

球孢白僵菌（B. bassiana）是国内外广泛用于害虫生物防治的杀虫真菌之一，被认为是最具开发潜力的一种昆虫病原真菌。

【产品功效】球孢白僵菌,属于链孢霉科。

可寄生于60多种昆虫体上 .国内外研究人员利用球孢白僵菌防治玉米螟（Lewis, et al., 1996）、松毛虫（Alves, et al., 2002）、小蔗螟（Alves, et al., 2002）、盲椿（Leland, et al., 2006）、谷象（Vassilakos, et al., 2006）、柑桔红蜘蛛（Shi et al., 2006）和蚜虫（Ye, et al., 2005）等农林害虫。

特别是对玉米螟和松毛虫的生物防治，在国内已作为常规手段连年使用。

由于球孢白僵菌能有效地控制虫口数量，同时不伤害其他天敌昆虫和有益生物，完全符合有害生物综合治理的宗旨，同时由于其容易大量生产，防治成本较有竞争力，因而其具有广泛的应用前景。

【活性成分】白僵菌为真菌类杀虫制剂。

白僵菌分球孢白僵菌(B．bassiana)。

白僵菌分生孢子在寄主表皮或气孔、消化道上，遇适宜条件开始萌发，出生芽管。

同时产生脂肪酶、蛋白酶、几丁质酶溶解昆虫的表皮，由芽管入侵虫体，在虫体内生长繁殖，消耗寄主体内养分，形成大量菌丝和孢子，布满虫体全身。

同时产生各种毒素，如白僵素(Beauvericin)，卵孢白僵菌素(Tenellin)和卵孢子素(Oosporein)等。

白僵素为含N-甲基氨基酸的环状肘。

【性状】白僵素为针状无色晶体，加醋酸铅于水溶液中可产生絮状白色沉淀，对茚三酮显正反应。

【毒性】用50亿／g活孢子制剂大白鼠腹腔注射和灌胃LD50分别为0.6±0.1g ／kg及10.0g／kg，而用纯孢子腹腔注射大白鼠LD50为128士12mg／kg，为低毒类微生物农药，对人、畜无致病作用，属弱的变态反应源，无“三致”问题。

球孢白僵菌营养需求及培养条件研究
程国华;舒静;丁克坚
【期刊名称】《中国农学通报》
【年(卷),期】2006(22)5
【摘要】用含不同营养的培养基对球孢白僵菌Bb13菌株进行培养产孢。

以不同的培养温度、pH值及培养基中所添加的不同的碳、氮源,微量元素进行正交实验,以所产孢子的含孢量和萌发率为主要指标,筛选确定了适合球孢白僵菌Bb13孢子生长的最佳碳源是葡萄糖,最佳氮源是蛋白胨,微量元素铜和锌,对产孢和孢子萌发有明显的促进作用,最适pH值为6￣7,最适培养温度是20￣25℃。

【总页数】4页(P365-368)
【关键词】球孢白僵菌;营养需求;培养条件
【作者】程国华;舒静;丁克坚
【作者单位】安徽农业大学植物保护学院
【正文语种】中文
【中图分类】S360
【相关文献】
1.球孢白僵菌原生质体获得和再生恢复培养条件的研究 [J], 徐文静;马德良;李启云;刘娜;谭云峰;董英山
2.不同营养条件对草地螟球孢白僵菌生长的影响 [J], 徐忠宝;刘爱萍;吴晋华;黄海广;徐林波;高书晶;乔艳荣
3.球孢白僵菌液体生长营养和培养条件优化 [J], 张亚平;吴圣勇;王海鸿;雷仲仁
4.球孢白僵菌培养条件及施菌方法的研究 [J], 马良进;毛胜凤;单成明
5.卵孢白僵菌营养需求及培养条件研究 [J], 邓春生;高松
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