将目的基因导入植物细胞的方法

2023届安徽师范大学附属中学高三4月冲刺测试（一）理综生物试题学校:___________姓名：___________班级：___________考号：___________一、单选题1．下列有关细胞结构和细胞中物质的叙述，正确的是（）A．构成血红素的某些氨基酸结构中含有Fe2+B．细胞中能转运氨基酸的物质为tRNAC．能将无机物转化成有机物的生物，其细胞一定含有核糖体D．线粒体中只能进行有机物的分解，叶绿体中只能进行有机物的合成2．下图表示中科院近年来发现的一种诱导细胞凋亡的新机制。

在H2O2和细胞因子TNF-α等因素的诱导下，鼠并细胞内的溶酶体释放微量的胰凝乳蛋白酶，将细胞质内的Bid蛋白分解成更多、更小的cBid，cBid与线粒体、溶酶体的膜结合，诱导内容物（含胰凝乳蛋白酶）释放，最终导致细胞凋亡。

下列叙述错误．．的是（）A．细胞凋亡是基因决定的细胞程序性死亡的过程，不属于细胞坏死B．图中这种诱导细胞凋亡的新机制属于负反馈调节C．线粒体、溶酶体内容物的释放是导致细胞凋亡的直接原因D．细胞凋亡对多细胞生物体维持内部环境的稳定起着关键的作用3．小龙虾是淡水经济虾类，因肉味鲜美广受人们欢迎。

小龙虾的神经系统中有一种特殊的突触，这种突触的突触间隙极小，仅有2~3nm。

带电离子和局部电流可通过相邻细胞膜上的蛋白质通道直接传递信号。

下列相关说法正确的是（）A．兴奋在这种突触中的传递存在电信号和化学信号的转化B．信号在该突触中的传递方向可能是双向的C．有这种突触结构的反射弧，兴奋传递速度慢D．信号在该突触中的传递依赖于细胞膜的流动性4．研究者拟通过有性杂交的方法将簇毛麦（2n=14）的优良性状整合到普通小麦（6n=42）中。

用簇毛麦花粉给数以千计的普通小麦的花授粉，10天后只发现两个杂种幼胚F1，F1幼苗经化学物质X处理后获得可育的作物新品种。

下列叙述正确的是（）A．簇毛麦能与普通小麦杂交成功，证明二者不存在生殖隔离B．化学物质X可能是秋水仙素，其作用于有丝分裂间期C．将杂种幼胚经培养形成的杂种植株相互杂交，得到可育植株的概率较高D．该育种方式依据的原理是染色体数目的变异5．“碳中和”是指国家、企业或个人等通过植树造林、节能减排等形式，以抵消自身产生的CO2或温室气体排放量，实现正负抵消，达到相对“零排放”。

第2课时 将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定[学习目标] 1.熟悉目的基因导入受体细胞的方法。

2.了解农杆菌转化法。

3.画出DNA 分子杂交示意图。

4.目的基因的检测方法的比较。

知识点一 将目的基因导入受体细胞知识梳理1.转化的含义：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内□01维持稳定和表达的过程。

2．将目的基因导入植物细胞(1)□01农杆菌转化法：将目的基因导入□02双子叶植物和裸子植物最常用的方法 ①农杆菌特点：当植物体受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量的□03酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞，这时农杆菌中的□04Ti 质料上的T －DNA(可转移的DNA)可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的□05DNA 上。

②受体细胞：植物□06体细胞或受精卵。

③操作过程：将目的基因插入到□07Ti 质粒的T­DNA 上―→转入□08农杆菌―→导入□09植物细胞―→目的基因整合到□10受体细胞染色体的DNA 上―→目的基因表达。

(2)基因枪法：适用于□11单子叶植物，成本较高。

是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的□12表达载体DNA 打入受体细胞中，使目的基因与其整合并□13表达的方法。

(3)花粉管通道法：我国科学家独创的方法花粉管通道法，就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去□14柱头；然后，滴加□15DNA(含目的基因)，使目的基因借助□16花粉管通道进入受体细胞。

该方法十分简单经济。

我国的转基因抗虫棉就是用此种方法获得的。

3．将目的基因导入动物细胞(1)方法：□01显微注射技术，采用最多、最有效的方法。

(2)受体细胞：动物的□02受精卵。

(3)操作过程：将含有□03目的基因的表达载体提纯―→取卵(□04受精卵)―→□05显微注射―→受精卵经胚胎早期培养后，□06移植到雌性动物的□07输卵管或子宫内―→获得□08新性状的动物。

4．将目的基因导入微生物细胞(1)方法01Ca2＋处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态(这种细①用□胞称为□02感受态细胞)。

五年2018-2022高考生物真题按知识点分类汇编91-生物技术与工程-基因工程-目的基因的检测与鉴定（含解析）一、综合题1．（2022·山东·高考真题）某种类型的白血病由蛋白P引发，蛋白UBC可使P被蛋白酶识别并降解，药物A可通过影响这一过程对该病起到治疗作用。

为探索药物A治疗该病的机理，需构建重组载体以获得融合蛋白FLAG-P和FLAG-P△。

P△是缺失特定氨基酸序列的P，FLAG是一种短肽，连接在P或P△的氨基端，使融合蛋白能与含有FLAG抗体的介质结合，但不影响P或P△的功能。

(1)为构建重组载体，需先设计引物，通过PCR特异性扩增P基因。

用于扩增P基因的引物需满足的条件是_______、为使PCR产物能被限制酶切割，需在引物上添加相应的限制酶识别序列，该限制酶识别序列应添加在引物的______（填“3'端”或“5'端”）。

(2)PCR扩增得到的P基因经酶切连接插入载体后，与编码FLAG的序列形成一个融合基因，如图甲所示，其中“ATGTGCA”为P基因编码链起始序列。

将该重组载体导入细胞后，融合基因转录出的mRNA序列正确，翻译出的融合蛋白中FLAG的氨基酸序列正确，但P基因对应的氨基酸序列与P不同。

据图甲分析，出现该问题的原因是______。

修改扩增P基因时使用的带有EcoRⅠ识别序列的引物来解决该问题，具体修改方案是______。

(3)融合蛋白表达成功后，将FLAG-P、FLAG-P△、药物A和UBC按照图乙中的组合方式分成5组。

各组样品混匀后分别流经含FLAG抗体的介质，分离出与介质结合的物质并用UBC抗体检测，检测结果如图丙所示。

已知FLAG-P和FLAG-P△不能降解UBC，由①②③组结果的差异推测，药物A的作用是______；由②④组或③⑤组的差异推测，P△中缺失的特定序列的作用是______。

(4)根据以上结果推测，药物A治疗该病的机理是______。

第3章达标检测卷班级：__________姓名：__________学号：__________(时间：45分钟)一、选择题：本题共16小题，每小题3分，共48分。

每小题给出的四个选项中只有一个选项最符合题意。

1．下列关于基因工程的叙述，错误的是()A．利用体外DNA重组技术定向改造生物的遗传性状B．在细胞水平上设计和施工，需要限制酶、DNA连接酶和载体C．打破物种界限，获得人们需要的生物类型或生物产品D．抗虫烟草的培育种植降低了生产成本，减少了环境污染【答案】B【解析】基因工程是指按照人类的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品，可定向改造生物的遗传性状，A正确；基因工程是在分子水平上设计和施工的，B错误；基因工程可在不同生物间进行，故可打破物种界限，获得人们需要的生物类型或生物产品，C正确；抗虫烟草的培育种植减少了农药的使用，降低了生产成本，减少了环境污染，D正确。

2．(2023·新疆名校期末)下列有关基因工程中限制性内切核酸酶的描述，正确的是() A．限制性内切核酸酶能识别双链DNA和RNA分子的特定核苷酸序列B．限制性内切核酸酶可使氢键断裂C．限制性内切核酸酶只能从原核生物中提取D．限制性内切核酸酶可将DNA切割成黏性末端或者平末端【答案】D【解析】限制性内切核酸酶只能识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，不能识别RNA 分子的特定核苷酸序列，A错误；限制性内切核酸酶可使磷酸二酯键断裂而不是使氢键断裂，B错误；限制性内切核酸酶主要来自原核生物，少数来自真核生物，C错误；限制性内切核酸酶可将DNA切割成黏性末端或者平末端两种末端类型，D正确。

3．某线性DNA分子含有3 000个碱基对(bp)，先用限制酶a切割，再把得到的产物用限制酶b切割，得到的DNA片段大小如下表。

限制酶a和b的识别序列和切割位点如图所示。

下列有关说法正确的是()A ．在该DNA 分子中，a 酶与b 酶的识别序列分别有3个和2个B ．a 酶与b 酶切出的黏性末端不能相互连接C ．a 酶与b 酶切断的化学键分别为磷酸二酯键和氢键D ．用这两种酶和DNA 连接酶对该DNA 分子进行反复切割、连接操作，若干循环后，序列会明显增多【答案】D【解析】分析表格，a 酶可以把原有的线性DNA 切成三段，说明DNA 分子上有两个切口，即a 酶的识别序列有2个，b 酶把大小是1600的DNA 分子切成大小分别为800和800两个片段，把大小是1100的DNA 分子切成大小分别为800和300两个片段，且a 酶和b 酶的识别位点不同，说明b 酶的识别序列有2个。

二将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定一、将目的基因导入受体细胞1．转化：是指目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。

2．将目的基因导入植物细胞的方法3．将目的基因导入动物受精卵的方法：利用显微注射将目的基因注入动物的受精卵中。

4．将目的基因导入微生物细胞的方法：常用原核生物作为受体细胞，其中以大肠杆菌应用最为广泛。

先用Ca2＋处理大肠杆菌细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，再将重组的基因表达载体导入大肠杆菌细胞中。

[提醒]微生物(大肠杆菌、酵母菌等)具有繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等优点。

二、目的基因的检测与鉴定[提醒]PCR不仅可用于获取和扩增目的基因，还能用于检测受体细胞中是否含有目的基因或受体细胞中的目的基因是否转录出mRNA。

(1)将目的基因导入植物细胞一般采用农杆菌转化法。

()(2)为培育抗除草剂的作物新品种，导入抗除草剂基因时只能以受精卵为受体。

()(3)常用卵细胞作为培育转基因动物的受体细胞。

()(4)转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定必须通过分子检测。

()(5)抗虫基因即使成功地插入植物细胞染色体上也未必能正常表达。

()(6)检测目的基因是否插入受体细胞的DNA中，可用抗原—抗体杂交技术。

()答案：(1)√(2)×(3)×(4)×(5)√(6)×知识点一将目的基因导入受体细胞1．农杆菌转化法中的两次拼接和两次导入第一次拼接是将目的基因拼接到Ti质粒的T-DNA上；第二次拼接(非人工操作)是指插入目的基因的T-DNA被拼接到受体细胞的染色体DNA上。

第一次导入是将含目的基因的Ti质粒转入农杆菌；第二次导入(非人工操作)是指将含目的基因的T-DNA导入受体细胞。

2．受体细胞的选择(1)对于植物来说，受体细胞可以是受精卵或体细胞，因为植物细胞具有全能性。

(2)对于动物来说，受体细胞一般是受精卵，因为受精卵的全能性高，而高度分化的动物体细胞的全能性受到抑制。