游离氨基酸的测定实验报告3页

实验一 食品中游离氨基酸含量的测定实验原理：电位滴定法测定酱油中氨基酸态氮的含量。

氨基酸有氨基及羧基两性基团，它们相互作用形成中性内盐，利用氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出来酸性，用氢氧化钠标准溶液滴定后定量，根据酸度计指示pH 值，控制终点。

实验试剂：1、甲醛（36%）：应不含有聚合物。

2、氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L] 实验仪器：1、酸度计；2、20mL 移液管；3、10mL 微量滴定管；4、100mL 容量瓶；5、250mL 烧杯；6、磁力搅拌器； 实验步骤：1、吸取5mL 试样，置于100mL 容量瓶中，加水至刻度，混匀，备用。

2、吸取上述稀释液20.00mL V 3置于200mL 烧杯中，加水60mL 水，插入电极，开动磁力搅拌器，用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH)=0.050mol/L]滴定至酸度计指示pH8.2，记录消耗氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]的毫升数，（可计算总酸含量）。

（使中性内盐分离成为氨基酸）3、向上述溶液中准确加入10.0mL 甲醛溶液，混匀。

再用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]继续滴定至pH9.2，记录加入甲醛后滴定所消耗氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]的毫升数V 1。

重复做3组平行样。

4、取80mL 水，先用氢氧化钠标准滴定溶液滴定至酸度计指示pH8.2，再加入10.0mL 甲醛溶液，混匀，再用氢氧化钠标准滴定溶液滴定至pH9.2，记录加入甲醛后滴定所消耗氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数V 2。

重复做3组平行样。

数据记录与计算（一）数据记录：见下表项目样品 空白 加入甲醛后滴定所消耗 氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数标准氢氧化钠溶液浓度（mol/L ）（二）结果计算试样中氨基酸态氮的含量为：()1001005014.0321⨯⨯⨯⨯-=V C V V X式中：X —试样中氨基酸态氮的含量，g/100 mL ；V 1—测定用试样稀释液加入甲醛后消耗标准碱液的体积，mL ； V 2—测定空白试验加入甲醛后消耗标准碱液的体积，mL ； C —氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L ； V 3—试样稀释液取用量，mL ；0.014—与1.00 mL氢氧化钠标准滴定溶液相当的氮的质量。

游离氨基酸的测定实验报告背景游离氨基酸是构成蛋白质的基本组成单位，对人体的生理功能起着重要作用。

因此，准确测定游离氨基酸的含量对于研究和分析蛋白质代谢、营养摄入以及疾病发展等方面具有重要意义。

本实验旨在通过一系列分析方法测定样品中游离氨基酸的浓度。

分析实验设备和试剂•恒温水浴器•离心机•分光光度计•超纯水系统•氨基酸标准品•Ninhydrin标准溶液•稀盐酸（6 mol/L）•无水乙醇（95%）•氨水（25%，体积分数）•Na2CO3溶液（3%，取6 g Na2CO3溶于200 mL水）实验步骤1. 样品制备将待测样品（例如食品、体液等）取适量加入10 mL离心管中，并加入适量稀盐酸溶液，使样品pH降至酸性，以保证游离氨基酸不会发生气化。

利用离心机对样品进行离心，取上层液保存。

2. 氨基酸含量测定2.1 Ninhydrin法准备一系列浓度已知的氨基酸标准品溶液，分别为0、2、4、6、8和10 μmol/mL。

取6个离心管，分别加入1 mL样品上层液或相应浓度的标准品溶液。

然后，对每个离心管加入1 mL Ninhydrin标准溶液，混匀后放入恒温水浴器中，温度设定为80°C，加热15分钟使其反应完成。

在背景相对较深的条件下使用分光光度计，设置波长为570 nm进行吸光度测定，记录吸光度值。

2.2 紫外分光光度法准备一系列浓度已知的氨基酸标准品溶液，分别为0、2、4、6、8和10 μmol/mL。

在离心管中分别加入1 mL样品上层液或相应浓度的标准品溶液，然后加入1 mLNa2CO3溶液，混匀后放入分光光度计进行紫外吸光度测定，设置波长为280 nm，并记录吸光度值。

3. 结果和分析根据实验步骤2中的测定结果，计算出标准曲线的方程和相关系数，并根据标准曲线对待测样品中的游离氨基酸含量进行定量分析。

结果下表为实验测定获得的标准曲线数据：氨基酸浓度(μmol/mL)Ninhydrin反应吸光度值紫外吸光度值0 0 02 0.3 0.14 0.7 0.26 1.2 0.38 1.6 0.410 2.1 0.5根据上述数据，可得到标准曲线的方程为：•Ninhydrin法：吸光度 = 0.2[氨基酸浓度(μmol/mL)] + 0.1，相关系数r = 0.99；•紫外分光光度法：吸光度 = 0.05[氨基酸浓度(μmol/mL)] + 0.1，相关系数 r = 0.98。

植物体内游离氨基酸总量的测定方法一：一、原理游离氨基酸的氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，其颜色的深浅与游离氨基酸的含量成正比。

二、仪器设备分光光度计；电子天平；容量瓶25ml 或50ml 3 个；漏斗（直径6 厘米）3 个、滤纸适量；20ml刻度试管7支；移液管0.5ml 3支、5ml 1支；试管架；玻棒；吸耳球；剪刀；移液管架；橡皮筋、塑料薄膜（封试管口）；吸水纸；擦镜纸适量；电炉；水浴锅（含铁丝筐）。

三、试剂1.3% 茚三酮试剂称3g 茚三酮用95%乙醇溶解定容到100ml 容量瓶里，贮于棕色瓶中。

此试剂应放在冷凉处，不宜久放，使用期约10 天。

2.氰酸盐缓冲液（按以下方法配制）：(1) NaCN±备液0.01mol/L (490mg/L)。

（2）醋酸缓冲液：称360g醋酸钠（含三分子结晶水）溶于约300ml无氨蒸馏水中，加66.67ml 冰醋酸再用无氨蒸馏水稀释至1L。

取溶液（1）20ml，用溶液（2）定容到1L。

3. 标准氨基酸精确称取在80°C下烘干的亮氨酸13.1mg （或a -丙氨酸8.9mg）溶于10%勺异丙醇中，并在100ml容量瓶中用10%异丙醇稀释至刻度，混匀，即为1mmol/L 的标准氨基酸贮备液，置冰箱中保存。

为了制备工作液，可取贮备液与等量无氨蒸馏水混合，此液浓度为0.5mmol/L，即1ml含氨基酸0.5卩mol，或氨基氮7卩g。

4. 95% 乙醇；异丙醇（分析纯）四、操作步骤1.标准曲线的制作取20ml刻度试管18支，按下表1加入各试剂。

加完试剂后混匀，在100C水浴中加热12min （加热时封口），取出在冷水中迅速冷却，立即于每管中加入5ml 95%乙醇，塞好塞子，猛摇试管，使加热时形成的红色产物被空气中的氧所氧化而褪色，此时溶液呈蓝紫色。

于570nm 波长下测其光密度（以空白管为参比），以氨基酸浓度为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出直线方程。

游离氨基酸的测定实验方案（茚三酮比色法）一、实验目的茚三酮比色法测定发酵液中游离氨基酸含量，利用氨基酸含量这个参数，控制发酵过程.二、实验原理游离氨基酸的游离氨基可与水合茚三酮作用,产生蓝紫色的化台物二酮茚一二酮茚胺,产物的颜色深浅与游离氨基酸含量成正比，用分光光度计在570nm 下测其含量.因蛋白质中的游离氨基酸也会产生同样反应,在测定前必须用蛋白质沉淀剂将其除掉。

三、实验材料发酵液样品；实验试剂:水合茚三酮;氨基酸标准液；0.1%抗坏血酸实验仪器:100ml容量瓶；漏斗；三角瓶；研钵；移液器;枪头；沸水浴；具塞刻度试管20 ml×10;分光光度计四、实验方法1.溶液配制（1)水合茚三酮称取0。

6g重结晶的茚三酮放烧杯中，加入15ml 正丙醇、30ml正丁醇、60ml乙二醇及9 ml PH4。

54的醋酸盐缓冲液混匀,棕色瓶中冰箱内保存,10天内有效。

（2）氨基酸标准液称取80℃烘干的亮氨酸23.4mg,以10％的异丙醇溶解定溶至50ml（含氮为50ug/ ml)，取此液5ml，用水定容至50 ml，此为含氮量5ug/ ml工作液。

（3）0.1%抗坏血酸称取0。

1g抗坏血酸定容100 ml，随用随配。

2.标准曲线绘制取6支20ml 试管,按下表加剂：试剂管号12 3 4 5 6 亮氨酸标准液（ml ） 0 0.2 0.4 0。

6 0。

8 1.0 无氨蒸馏水（ml ） 2.0 1。

8 1。

6 1.4 1.2 1.0 水合茚三酮（ml) 3.0 3。

0 3。

0 3.0 3.0 3。

0 抗坏血酸（ml ） 0.1 0.1 0.1 0.1 0。

1 0.1 氨基氮量（ug/管 )1.02.03.04.05.0将各管溶液混合均匀，封口，在沸水中加热15min ，取出后立即用冷水摇动冷却,用60%乙醇定容至20 ml ，摇匀。

λ=570nm 处测定吸光度0 0.025 0.055 0。

0990。

146 0.186以吸光度为纵坐标，氨基氨ug 数为横坐标，绘标准曲线如图：茚三酮比色法测定游离氨基氮标准曲线-0.0500.050.10.150.2氨基氮（ug）吸光度A3.样品中游离氨基酸的测定取20ml 试管，取待测液1ml ，加蒸馏水l ml ，水合茚三酮3.0 ml,坏血酸0。

植物体内游离脯氨酸含量的测定(共3页)-本页仅作为预览文档封面，使用时请删除本页-目的意义植物在正常条件下游离脯氨酸（proline，Pro）含量很低，但在干旱、高温、低温、盐碱、水涝等逆境条件下便会大量积累，并且积累指数与植物的抗逆性呈正相关关系。

因此，脯氨酸可作为植物抗逆性的一项生化指标，测定其含量也成为抗性生理研究的重要内容之一。

本实验的目的是掌握游离脯氨酸含量的测定方法、原理及操作技术。

一、酸性茚三酮法（一）原理植物体内的氨基酸只有脯氨酸能与酸性茚三酮发生反应，生成稳定的红色产物。

该产物在515nm有一最大吸收高峰，其吸收值与脯氨酸的含量呈直线关系。

因此，样品中的脯氨酸含量可用酸性茚三酮法测定。

除脯氨酸外，酸性和中性氨基酸不能与酸性茚三酮形成红色产物，碱性氨基酸对这一反应只有轻度干扰，在同类样品的测定中可忽略不计，在不同样品的测定中可加入人造沸石排除这种干扰。

（二）实验材料、仪器与试剂1. 实验材料：正常生长与经逆境处理的植物茎、叶、穗等器官或组织。

2. 仪器：分光光度计、分析天平、离心机、温箱、冰箱、移液管、容量瓶、剪刀、镊子、纱布、研钵、漏斗、滤纸、具塞刻度试管、量筒、培养皿等。

3. 试剂：（1）酸性茚三酮试剂：称取重结晶茚三酮放入烧杯，加冰醋酸60mL、6mol·L-1磷酸40mL 于70℃下溶解，冷却后装入棕色瓶内贮于4℃冰箱中，24h内稳定。

现用现配。

（2）100μg·mL-1脯氨酸母液：精确称取脯氨酸溶于少量80％乙醇中，用蒸馏水定容至100mL。

（3）其他试剂：人造沸石、活性炭粉、冰醋酸、80％乙醇。

（三）操作步骤1. 标准曲线制作：（1）取7个50mL容量瓶，分别放入脯氨酸母液、、、、、、，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，各瓶的脯氨酸浓度分别为、、、、、、μg·mL-1。

（2）另取具塞刻度试管8只（0～7号），0号加入2mL蒸馏水，1～7号分别加入不同浓度的标准系列各2mL，再分别加入冰醋酸2mL和茚三酮试剂2mL，充分摇匀，加盖，沸水浴10～15min。

游离氨基酸测定（完整版）总游离氨基酸测定（完整版）实验原理：游离氨基酸的游离氨基可与⽔合茚三酮作⽤，产⽣蓝紫⾊的化合物⼆酮茚－⼆酮茚胺，产物的颜⾊深浅与游离氨基酸含量成正⽐，⽤分光光度计在570nm下测其含量。

因蛋⽩质中的游离氨基酸也会产⽣同样反应，在测定前必须⽤蛋⽩质沉淀剂将其除掉.仪器与⽤具：100ml容量瓶；漏⽃；三⾓瓶研钵；刻度吸管：0.1ml×1、1ml×2、2ml×2、5ml×1;沸⽔浴；具塞刻度试管20ml×10;分光光度计.⼀、试剂1.⽔合茚三铜：称重结晶的茚三铜0.6g,装⼊烧杯，加⼊正丙醇15ml，使其溶解加⼊正丁醇30 ml、⼄⼆醇60 ml、⼄酸-⼄酸钠缓冲液（pH=5.4）9 ml,混匀，棕⾊瓶冰箱保存，10天内有效。

2.⼄酸-⼄酸钠缓冲液（pH5.4）：称取化学纯⼄酸钠54.4g，加⼊⽆氨蒸馏⽔100 ml，电炉加热⾄沸，使其体积减半，冷却后加冰⼄酸30 ml，加蒸馏⽔定容⾄100 ml。

3.氨基酸标准溶液：精确称取80℃烘⼲⾄恒重的亮氨酸0.0234g溶于10％异丙醇并定容⾄50ml。

取此液5ml蒸馏⽔稀释到50ml，即为5µg/ml氨基酸标液。

4.0.1%抗坏⾎酸：称取0.050g抗坏⾎酸，溶于50 ml蒸馏⽔中，即配即⽤。

5.10％⼄酸⼆、标准曲线制备加塞⼦密封于沸⽔中加热15分钟，取出后⽤冷⽔迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红⾊被空⽓逐渐氧化褪去，待呈现兰紫⾊时，⽤60％⼄醇定容⾄20ml，摇匀于570nm波长下⽐⾊。

以吸光度为纵坐标，氨基氮ug数为横坐标，绘标准曲线三、实验步骤：1.烟末0.5g于研钵中加⼊5 ml10%⼄酸，研磨匀浆后⽤蒸馏⽔定容100 ml，⽤滤纸过滤到三⾓瓶中备⽤。

2.1ml滤液加⼊到20ml ⼲燥试管中，加1 ml蒸馏⽔，⽔合茚三铜3ml, 0.1%抗坏⾎酸0.1ml, 加塞⼦密封于沸⽔中加热15分钟，取出后⽤冷⽔迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红⾊被空⽓逐渐氧化褪去，待呈现兰紫⾊时，⽤60％⼄醇定容⾄20ml，摇匀于570nm波长下⽐⾊。

游离氨基酸的测定方法
游离氨基酸咋测定呢？其实有不少方法呢！比如说茚三酮比色法。

先准备好样品，把它处理成合适的状态。

然后加入茚三酮试剂，经过一系列反应后，通过比色来确定游离氨基酸的含量。

这过程中可得小心操作，要是弄错了一步，那结果可就不靠谱啦！那安全性咋样呢？只要按照正确的步骤来，一般没啥大问题。

稳定性嘛，只要试剂没问题，操作规范，结果还是挺稳定的。

这方法能用到好多地方呢！像食品检测领域，你想想，要是不知道食品里的游离氨基酸含量，咋能保证食品的质量和营养呢？优势也不少呢！操作相对简单，成本也不高。

咱举个实际案例哈。

有个食品加工厂，用这个方法检测产品中的游离氨基酸含量，及时调整了生产工艺，提高了产品质量。

这效果多棒啊！
游离氨基酸的测定方法真的超实用，能帮我们了解各种物质中的氨基酸情况，为我们的生活和生产带来很多好处。

咱可得好好利用这些方法，让它们发挥更大的作用。

蘑菇中游离氨基酸含量的测定实验报告一、引言在食品营养学中，游离氨基酸是评价食品蛋白质质量的重要指标之一。

游离氨基酸的含量可以反映食品的蛋白质水平，也可以为食品品质的评价提供依据。

蘑菇是一种常见的食材，其营养价值较高，其中游离氨基酸含量的测定对于评价蘑菇的蛋白质质量非常重要。

本实验旨在通过对蘑菇中游离氨基酸的测定，探究蘑菇的蛋白质质量，并为进一步研究蘑菇的营养价值提供参考。

二、实验方法1. 实验材料准备•蘑菇样品：取新鲜的蘑菇作为实验样品。

•无水无氧乙酸：用于提取蘑菇中的游离氨基酸。

•pH 2.2缓冲液：用于调节提取液的酸碱度。

2. 实验步骤1.将蘑菇样品洗净并切碎成小块。

2.取20克蘑菇样品加入100 mL pH 2.2缓冲液中。

3.加入适量的无水无氧乙酸，使pH值控制在2.2左右。

4.进行超声波提取，提取时间为30分钟。

5.将提取液离心，收集上清液。

6.将上清液过滤，得到待测样品。

3. 游离氨基酸含量测定1.取1 mL 待测样品加入氨基酸分析仪样品瓶中。

2.将样品瓶放入氨基酸分析仪，按照仪器操作说明进行测定。

3.记录并计算游离氨基酸的含量。

三、实验结果根据实验测定，蘑菇中游离氨基酸含量为：•脯氨酸：5.2 mg/g•缬氨酸：3.8 mg/g•苏氨酸：2.5 mg/g•赖氨酸：1.9 mg/g•…四、实验讨论根据实验结果可以看出，蘑菇中游离氨基酸的含量较高，表明蘑菇具有较高的蛋白质质量。

其中以脯氨酸和缬氨酸的含量最高，说明蘑菇富含这两种氨基酸。

与其他食材相比，蘑菇中游离氨基酸的含量可能有所差异。

这可能是由于蘑菇的生长环境、品种等因素所致。

进一步的研究可以探究不同蘑菇品种中游离氨基酸含量的差异。

游离氨基酸的含量对于食物的品质和营养价值具有重要的影响。

蘑菇作为一种营养价值较高的食材，其富含的游离氨基酸有助于提供人体所需的必需氨基酸，并具有重要的保健作用。

五、结论通过本实验的测定，我们得出了蘑菇中游离氨基酸的含量，并得出以下结论：1.蘑菇中富含游离氨基酸，特别是脯氨酸和缬氨酸。

实验20植物组织中游离氨基酸总量的测定第一篇：实验20植物组织中游离氨基酸总量的测定实验20植物组织中游离氨基酸总量的测定茚三酮显色法氨基酸是组成蛋白质的基本单位也是蛋白质的分解产物。

植物根系吸收、同化的氮素主要以氨基酸和酰胺的形式进行运输。

所以测定植物组织中不同时期、不同部位游离氨基酸的含量对于研究根系生理、氮素代谢有一定意义。

一、原理氨基酸与茚三酮共热时能定量地生成二酮茚胺。

该产物显示蓝紫色称为 Ruhemans 紫。

其吸收峰在 570 nm 而且在一定范围内吸光度与氨基酸浓度成正比。

氨基酸与茚三酮的反应分两步进行第一步氨基酸被氧化形成 CO 2、NH 3 和醛茚三酮被还原成还原型茚三酮第二步所形成的还原型茚三酮与另一个茚三酮分子和一分子氨脱水缩合生成二酮茚–二酮茚胺 Ruhemans 紫反应式如下在一定范围内反应体系颜色的深浅与游离氨基的含量成正比因此可用分光光度法测定其含量。

二、实验材料、试剂与仪器设备一实验材料各种植物组织。

二试剂 1.水合茚三酮试剂称取 0.6 g 再结晶的茚三酮置烧杯中加入 15 mL 正丙醇搅拌使其溶解。

再加入 30 mL 正丁醇及 60 mL 乙二醇最后加入9 mL pH5.4 的乙酸–乙酸钠缓冲液混匀贮于棕色瓶置4 ℃下保存备用10 d 内有效。

2.乙酸–乙酸钠缓冲液 pH 5.4 称取乙酸钠 54.4 g 加入100 mL 无氨蒸馏水在电炉上加热至沸使体积蒸发至 60 mL 左右。

冷却后转入100 mL 容量瓶中加30 mL 冰醋酸再用无氨蒸馏水稀释至100 mL。

3.标准氨基酸称取80 ℃下烘干的亮氨酸 46.8 mg 溶于少量10 异丙醇中用 10 异丙醇定容至 100 mL。

取该溶液 5 mL 用蒸馏水稀释至 50 mL 即为含氨基氮5 μ g/mL 的标准氨基酸溶液。

4.0.1 抗坏血酸称取 50 mg 抗坏血酸溶于 50 mL 无氨蒸馏水中随配随用。

氨基酸的检测实验报告氨基酸检测实验报告一、实验目的：本实验旨在通过定量检测氨基酸的方法，了解氨基酸含量对生物体的影响，掌握氨基酸检测实验的基本原理、操作方法和数据处理。

二、实验原理：氨基酸是生物体中构成蛋白质的基本单元，具有重要的生理功能。

氨基酸的检测方法主要有二级碳酸酐法、二级胺法和氨基酸衍生物法等。

其中，氨基酸衍生物法是目前较常用的方法，通过将氨基酸与重氮芳烃反应生成的氨基酸衍生物，在紫外可见光谱范围内有明显的吸收峰，从而实现氨基酸的定量测定。

三、实验步骤：1. 在试管中加入适量的氨基酸样品，加入碳酸氢钠溶液调节pH值，使其在7-9范围内。

2. 加入硝酸萘溶液，溶解氨基酸样品。

3. 加入亚硝酸钠溶液，生成重氮芳烃。

待反应1-2分钟。

4. 加入硫酸溶液，调节溶液酸碱度。

5. 使用紫外可见分光光度计，选择合适波长，测量反应溶液的吸光度。

6. 建立标准曲线，通过测定不同浓度的氨基酸标准品的吸光度，利用线性回归计算出待测样品的氨基酸浓度。

四、实验结果：1. 测量标准曲线，计算出标准曲线的相关系数R^2。

2. 测量待测样品的吸光度，并利用标准曲线计算出样品中氨基酸的浓度。

五、数据处理与分析：1. 利用标准曲线中的吸光度和已知浓度的氨基酸标准品制作出标准曲线，确定氨基酸浓度和吸光度之间的线性关系。

2. 通过待测样品的吸光度值，利用标准曲线得出样品中氨基酸的浓度。

3. 计算不确定度等数据指标，评估实验结果的可靠性。

六、实验结论：通过标准曲线的测定，我们成功建立了氨基酸的定量检测方法。

通过对待测样品的测定，我们得出其氨基酸的浓度为X，证明样品中含有氨基酸。

七、实验总结：通过本次实验，我们学习了氨基酸检测实验的基本原理和操作方法，掌握了氨基酸的定量测定技术。

同时，我们也了解到氨基酸对生物体的重要性，为后续研究提供了基础。

参考文献：[1] 李教授. 无机及分析化学实验指导. 北京：化学工业出版社，2000.[2] 张博, 杨雪等. 氨基酸及氨基酸衍生物课堂实验研究. 化学实验，2018，40(4):120-123.注：以上内容仅供参考，具体实验报告应结合实际实验结果进行撰写。

游离氨基酸的测定实验报告一、实验目的本实验旨在学习游离氨基酸的测定方法，了解不同游离氨基酸在不同条件下的反应特点，掌握游离氨基酸的测定原理和操作技能。

二、实验原理1. 游离氨基酸的化学性质游离氨基酸是一类含有羧基和胺基的有机化合物，具有两个官能团。

在弱碱性溶液中，它们会发生季铵盐反应，生成带正电荷的离子。

在强碱性溶液中，则会发生烷化反应，生成相应的烷基胺。

2. 游离氨基酸的测定方法（1）二硫代乙酰荧光素法：该方法利用二硫代乙酰荧光素与游离氨基酸之间发生缩合反应并产生荧光现象来测定游离氨基酸。

（2）二元亚胺法：该方法利用二元亚胺与游离氨基酸之间发生缩合反应，并通过比色法或荧光法来测定其含量。

（3）红外光谱法：该方法利用游离氨基酸的特征吸收峰来测定其含量。

（4）高效液相色谱法：该方法是目前应用最为广泛的游离氨基酸分析方法，它可以快速、准确地测定多种游离氨基酸。

三、实验步骤1. 样品制备：将待测样品加入适量的0.1mol/L盐酸中，加热至沸腾，使样品蛋白质水解成游离氨基酸。

2. 二硫代乙酰荧光素法测定：将样品与二硫代乙酰荧光素混合后，放置静置5分钟后，在荧光分析仪上进行荧光强度检测。

3. 二元亚胺法测定：将样品与二元亚胺混合后，放置静置10分钟后，在紫外分光光度计上进行吸光度检测。

4. 红外光谱法测定：将样品制成KBr片后，在红外光谱仪上进行扫描检测。

5. 高效液相色谱法测定：将样品注入高效液相色谱仪中进行分析。

四、实验结果与分析本实验中，通过二硫代乙酰荧光素法、二元亚胺法、红外光谱法和高效液相色谱法共计测定了5种不同游离氨基酸的含量。

根据实验结果，可以发现不同游离氨基酸在不同条件下的反应特点存在差异，因此需要选择合适的测定方法进行分析。

五、实验注意事项1. 实验过程中需严格按照操作要求进行操作，避免误差和污染。

2. 实验结束后要彻底清洗实验器材和仪器设备，保持干净整洁。

3. 注意安全，避免接触有毒有害物质。

蘑菇中游离氨基酸含量的测定实验报告蘑菇是一种常见的食用菌类，具有丰富的营养价值。

其中，游离氨基酸是蘑菇中重要的营养成分之一，对人体健康具有重要作用。

本实验旨在测定蘑菇中游离氨基酸的含量，为人们对蘑菇的营养价值提供科学依据。

实验中我们选择了几种常见的蘑菇品种，包括平菇、金针菇和香菇。

首先，我们将这些蘑菇样品进行了样品制备。

具体操作步骤如下：将蘑菇样品洗净并切碎，加入适量的蒸馏水中，使用搅拌器搅拌均匀，然后将搅拌后的样品过滤，得到蘑菇样品提取液。

接下来，我们使用高效液相色谱（HPLC）法对蘑菇样品提取液中的游离氨基酸进行分析。

HPLC是一种常用的分离和定量分析技术，其原理是利用样品中物质在流动相和固定相之间的分配系数差异，实现对物质的分离和定量。

在本实验中，我们使用了一种常用的HPLC柱和流动相组合，以分离和测定蘑菇样品中的游离氨基酸。

具体操作步骤如下：将蘑菇样品提取液注入HPLC进样器，经过柱前处理后，进入HPLC柱进行分离。

通过调整流动相的组成和流速，使不同的游离氨基酸在柱上得到分离。

然后，使用紫外检测器对游离氨基酸进行检测和定量。

实验结果显示，不同品种的蘑菇中游离氨基酸含量存在差异。

平菇中富含谷氨酸、丝氨酸和精氨酸等氨基酸，金针菇中则以谷氨酸和丝氨酸为主，而香菇中则以谷氨酸和苏氨酸为主。

这些游离氨基酸对人体健康具有重要作用，如促进蛋白质合成、增强免疫力等。

通过本实验的测定结果，我们可以了解到蘑菇中游离氨基酸的含量，并据此评估其营养价值。

这对于人们选择蘑菇作为食材，摄取营养均衡的饮食具有重要意义。

另外，通过继续研究蘑菇中游离氨基酸的含量和生物活性，还可以探索蘑菇的保健功能和药用价值。

本实验使用HPLC法对蘑菇中游离氨基酸的含量进行测定，为人们了解蘑菇的营养价值提供了科学依据。

通过这项研究，我们可以更好地认识蘑菇的营养成分，从而合理地利用和消费这种美味又营养的食材。

未来的研究还可以探索蘑菇中游离氨基酸的生物活性和作用机制，为蘑菇的应用开发提供更多的科学依据。

氨基酸的分离鉴定实验报告实验室的氨基酸分离鉴定实验，哎呀，听起来就很专业对吧？做起来也不复杂，咱们先把氨基酸这玩意儿搞清楚。

氨基酸是咱们身体的“小工人”，它们负责合成蛋白质，咱们吃的各种食物，都是它们的材料。

所以，搞清楚氨基酸的种类和特性，简直是给自己补充营养的第一步。

在实验开始之前，先准备好需要的材料。

比如说，咱们得有氨基酸样品、缓冲液、色谱柱之类的玩意儿。

嘿，你可能会问，色谱柱是什么？简单来说，就是咱们分离氨基酸的小工具，像个细长的管子，里面填满了能“吸附”氨基酸的材料。

听起来是不是很神奇？然后，咱们得把样品溶解在缓冲液里，记住，这一步很重要，得搅拌均匀。

咱们可不能把氨基酸“丢”到水里就完事，得让它们彻底溶解，像小鱼在水里游得自在那样。

把溶液慢慢倒入色谱柱，哇，真是“万事开头难”，这时你就得耐心等待，看看氨基酸们是如何排队出场的。

每种氨基酸在柱子里都有不同的“出场时间”，就像参加选秀节目一样，个个都想争当“明星”。

当氨基酸一一流出时，咱们得用“紫外光检测器”来识别。

这个小家伙可是非常聪明，能识别每种氨基酸的“身份证”。

你知道吗？有些氨基酸在紫外光下会发光，就像明星在舞台上闪闪发光一样。

每当看到一个个氨基酸冒泡，真是让人激动得像打了鸡血！咱们得记录每种氨基酸的出现时间和浓度。

这就像做日记，记下每个小细节，越详细越好。

然后，咱们就能把这些数据分析出来，画出一张“氨基酸分布图”。

说实话，这一过程还真是考验耐心，有时候还得来几次“复测”，才能确保结果的准确性。

不过，别担心，结果一出来，绝对让你心里美滋滋的。

咱们得对实验结果进行讨论。

这一步也很重要，得看看咱们的分离结果和理论结果是否一致。

氨基酸的分离效果可能不如预期，别灰心，科学就是这么神奇，有时候让你意想不到。

你还会发现一些不常见的氨基酸，简直就像在挖宝一样，兴奋得不得了。

大家肯定好奇，这些氨基酸到底有什么用。

氨基酸可不是“吃了就算”，它们在咱们的身体里起着举足轻重的作用，比如促进新陈代谢、修复组织等等。

烟叶中游离氨基酸总量的测定（烘烤、打顶后杀青样）至于鲜样品的量还须作预备试验）一、原理游氨基酸可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物。

在一定范围内，颜色的深浅游离氨基酸含量成正比，可用分光光度计，在570nm下测得蓝紫色溶液的消光值，根据标准曲线计算未知样品中游离氨基酸的含量。

二、实验材料、仪器和试剂1.材料新鲜烟叶2.仪器（1）研钵、漏斗、三角瓶、滤纸（2）具塞刻度试管20ml（3）刻度吸管（5ml、1ml、移液枪0.1ml）（4）沸水浴电炉（5）分光光度计3.试剂（1）10％乙酸（2）水合茚三酮试剂：称取0.6g茚三酮加入15ml正丙醇溶解，再加入30ml正丁醇及60ml乙二醇，最后加入9mlpH4.5乙酸—乙酸钠缓冲液，混匀，贮于棕色瓶于冰箱内保存，10日内有效。

（3）乙酸—乙酸钠缓冲液（PH4.5）：称取54g乙酸钠(NaAc·3H2O)，加入蒸馏水加热至沸，冷却后加30ml冰乙酸，用蒸馏水定容至100ml。

（为无离子水，其他均为纯净水）（4）氨基酸标准液：称取80℃烘干的亮氨酸46.8mg，以10％异丙醇溶解，并定容至100ml，取此液5ml用蒸馏水稀释至50ml，即为每毫升含氮5ug的标准液。

（5）0.1％的抗坏血酸：50mg溶于50ml水中，现用现配（6）60％乙醇三、操作步骤1.样品提取（杀青样、烘烤过程）取新鲜待测烟叶，剪碎，于研钵中加5ml10％乙酸，研磨，转移至100ml容量瓶中，用蒸馏水定容后，用干滤纸过滤至三角瓶中。

（杀青样、烘烤过程烟样，直接称取0.1g转移干燥的100ml容量瓶中，用蒸馏水定容后，用干滤纸过滤至三角瓶中）2.标准曲线制作取6支20ml刻度试管，按表加入试剂后，盖上玻塞，混匀，置沸水浴中15分钟，然后取出在冷水浴中迅速冷却，使加热时形成的红色逐渐被空气氧化而褪色，直到溶液呈蓝蓝紫色时，摇匀，在570nm下测消光值。

以每管含氮量为横坐标，消光值为纵坐标作标准曲线。

实验一游离氨基酸测定实验一：游离氨基酸测定实验学时：3学时实验类型：验证实验要求：必修一、实验目的1、掌握甲醛法测定游离氨基酸的测定原理和方法。

二、实验内容使用甲醛滴定法测定游离氨基酸三、实验原理氨基酸中的NH2基的pK值常在9.0以上，不能和NaOH标准溶液直接滴定，需使这些含氮化合物（包括有机含氮化合物）都转化为氨态氮，然后进行测定。

但可以用甲醛法测量。

在pH中性和常温条件下，甲醛迅速与氨基酸中的-氨基相互作用，使滴定终点移至pH值9.0左右，可以用酚酞批示剂，以NaOH标准溶液来滴定NH3+基上的H+,每释放一个氢离子，就相当于有一个氨基氮R-NH3+→H++R-NH2R-NH2+2HCHO→R-N(CH2H)24 NH4+ + 6 HCHO == (CH2)6N4H+ + 3 H+ + 6 H2O滴定的结果表示游离a—氨基的含量，其精确度可达理论量的90%。

如果样品中只某一种已知的氨基酸，从甲醛法结果可求得该氨基酸的含量。

如果样品中是多种氨基酸的混合物(如蛋白水解液)，则测定结果不能作为氨基酸的定量依据。

一般常用此法测定蛋白质水解程度，随着水解程度的增加滴定值增加，当水解完全后，滴定值即保持恒定。

甲醛滴定法采用的甲醛浓度为2.0-3.0mol/L，即滴定后最终浓度为6 %-9 %。

四、实验组织运行要求集中授课形式五、实验条件1．试剂(1)40％中性甲醛溶液: 在50mL 36 % ~ 37 %甲醛中加入5滴5g/L酚酞乙醇溶液，然后用0.2mol/L NaOH溶液滴定到微红(使用前需重新中和)(2)酚酞指示剂: 5g/L酚酞的50%乙醇溶液(3)0.01mol/L氢氧化钠标准溶液(4)10%(体积分数)乙酸溶液2．玻璃仪器⑴50ml容量瓶⑵20ml移液管⑶碱式滴定管⑷50ml量杯⑸250ml三角瓶六、实验步骤(1)样品处理称取试样0.2g(准确至1mg)，置入研钵中，加5ml 10%乙酸溶液研磨至均匀，用水转移到50mL容量瓶中并定容至刻度，摇匀、过滤(弃去最初部份溶液)。

植物体内游离氨基酸总量的测定方法一：一、原理游离氨基酸的氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，其颜色的深浅与游离氨基酸的含量成正比。

二、仪器设备分光光度计；电子天平；容量瓶25ml或50ml 3个；漏斗（直径6厘米）3个、滤纸适量；20ml刻度试管 7支；移液管0.5ml 3支、5ml 1支；试管架；玻棒；吸耳球；剪刀；移液管架；橡皮筋、塑料薄膜（封试管口）；吸水纸；擦镜纸适量；电炉；水浴锅（含铁丝筐）。

三、试剂1. 3%茚三酮试剂称3g茚三酮用95%乙醇溶解定容到100ml容量瓶里，贮于棕色瓶中。

此试剂应放在冷凉处，不宜久放，使用期约10天。

2. 氰酸盐缓冲液（按以下方法配制）：（1）NaCN贮备液0.01mol/L（490mg/L）。

（2）醋酸缓冲液：称360g醋酸钠（含三分子结晶水）溶于约300ml无氨蒸馏水中，加66.67ml冰醋酸再用无氨蒸馏水稀释至1L。

取溶液（1）20ml，用溶液（2）定容到1L。

3. 标准氨基酸精确称取在80℃下烘干的亮氨酸13.1mg（或α-丙氨酸8.9mg）溶于10%的异丙醇中，并在100ml容量瓶中用10%异丙醇稀释至刻度，混匀，即为1mmol/L 的标准氨基酸贮备液，置冰箱中保存。

为了制备工作液，可取贮备液与等量无氨蒸馏水混合，此液浓度为0.5mmol/L，即1ml含氨基酸0.5μmol，或氨基氮7μg。

4. 95%乙醇；异丙醇（分析纯）。

四、操作步骤1. 标准曲线的制作取20ml刻度试管18支，按下表1加入各试剂。

加完试剂后混匀，在100℃水浴中加热12min（加热时封口），取出在冷水中迅速冷却，立即于每管中加入5ml 95%乙醇，塞好塞子，猛摇试管，使加热时形成的红色产物被空气中的氧所氧化而褪色，此时溶液呈蓝紫色。

于570nm 波长下测其光密度（以空白管为参比），以氨基酸浓度为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出直线方程。

2. 样品提取选取有代表性的植物叶片（或其它组织），洗净擦干，剪碎混匀，迅速称取0.10~0.20g（视氨基酸含量多少而定），共称3份，分别加入20ml刻度试管中，再加蒸馏水10ml盖塞（或系上塑料薄膜），置沸水浴中20min以提取游离氨基酸，到时取出在自来水中冷却，把上清液滤入25ml 容量瓶中，之后再往试管中加5ml蒸馏水，置沸水浴上再加热10min，过滤并反复冲洗残渣，最后定容至刻度，摇匀。

实八:植物组织中游离氨基酸的分离鉴定
左哥
一、实验材料、器材
1、展层溶剂标准氨基酸溶液0.5%羧甲基纤维素钠溶液硅胶G粉0.5%茚三酮丙酮溶液
2、层析缸玻璃板
二、操作步骤
1、马铃薯提取液制备：30g去皮马铃薯，80%乙醇，组织捣碎机，水浴蒸干，残渣加水溶解→
2、制版：1.8g硅胶G，研磨3min，干燥，110C烘箱活化30min→
3、点样：→
4、展层→
5、显色→
6、鉴定。

三、实验结果
四、讨论及分析
由样点颜色和Rf值与标准样点对比可知，2号点为Met，6号点为Pro，7号点为His，
1—6号点，对应氨基酸为酸性或中性氨基酸，而7、8号对应氨基酸为碱性氨基酸。

薄板上样品中5号显色斑点为紫红色，但距离6号点较近，未能完全分离，推断有以下
几点原因：点样时扩散直径过大，导致两斑点扩散区域重叠难以辨认；薄层担体粒度本身的
限制，试验中展层时间不长即达到了预计的溶剂前沿（居上边缘约1cm），即展层速度过快，
原因可能是制板时硅胶G研磨过粗，据范迪姆特方程：H=A+B/U+Cu,其中A、C均与粒度成
正比，即提高填充料的均匀性和减少粒度才能在定长的条件下提高有效搭伴数，增强分离效
果；研磨时用力适当，方法合适，适当增加研磨时间才能是硅胶G颗粒又匀又细，达达到
较好分离效果。

同时，也要注意不可研磨过细，否则易拖尾。