下载文档原格式
2019.102018年笔者对泗阳县运河北片草鱼养殖进行了疫病监测与流行病学调查，并对具有典型症状的发病草鱼进行了病原菌株分离和鉴定，将鉴定出的嗜水气单胞菌进行了常用抗菌药物敏感性试验，旨在为嗜水气单胞菌病原引起的草鱼细菌性疾病有效检验与防控及相对应的有效治疗提供依据。
一、材料与方法1.试验材料(1)2018年4－10月在草鱼养殖场的不同发病塘口，选取具有典型发病症状草鱼进行分离，分离部位为血液，采样时间、地点、症状、API－20E 生化反应编号、菌株种类详细情况见表1。
(2)营养肉汤、营养琼脂、TCBS 琼脂、脱脂奶蔗糖胰蛋白胨琼脂购于北京陆桥。
肠杆菌和其他非苛养革兰氏阴性杆菌鉴定试剂盒(英文名API 20E)购于梅里埃诊断产品(上海嘉合)有限公司。
动物用药敏分析试剂板购于南京菲恩医疗科技有限公司。
2.试验方法细菌分离鉴定和菌株对药物感受性试验在县水产站病害检测无菌操作室内进行。
试验操作遵循《鱼类细菌病检疫技术规程(SC/T 7201.1－2006、SC/T 7201.1－2006)》和梅里埃API－20E 试剂条鉴定及南京菲恩动物用药敏分析试剂板操作流程。
二、试验结果1.嗜水气单胞菌分离及形态特征观察从病鱼血液分离到的嗜水气单胞菌在普通营养琼脂培养基上生长良好，28℃培养18～24小时，形成圆形光滑、边缘整齐、湿润、微凸、微白色菌落，在脱脂奶蔗糖胰蛋白胨琼脂平板上，菌落呈乳白色、微凸、湿润，周围出现清晰的溶蛋白透明圈，革兰氏染色阴性，油镜视野下短杆状。
2.嗜水气单胞菌的氧化酶试验和生理生化鉴定对分离的细菌进行生理生化检测，结果判定为嗜水气单胞菌的具体生理生化特征见表2。
依据《伯杰氏鉴定细菌学手册》(1994)“气单胞菌属细表1菌株分离清单汇总442019.10表312株细菌对8种抗菌药物的最小抑菌浓度(MIC)对照毫克/升菌种间特征鉴别表”对分离到的嗜水气单胞菌进行Ⅰ和Ⅱ分类，并分别命名为Ⅰ－1、Ⅰ－2、Ⅰ－3和Ⅱ－1、Ⅱ－2、Ⅱ－3、Ⅱ－4、Ⅱ－5、Ⅱ－6、Ⅱ－7、Ⅱ－8、Ⅱ－9。
鳖源致病性嗜水气单胞菌的分离与鉴定作者：林锋，刘莉，曹铮，等来源：《湖北农业科学》 2014年第22期林锋，刘莉，曹铮，叶雪平，郝贵杰，盛鹏程（浙江省淡水水产研究所／农业部淡水健康养殖重点实验室，浙江湖州３１３００１）摘要：从患病中华鳖（Ｐｅｌｏｄｉｓｃｕｓｓｉｎｅｎｓｉｓ）肺组织中分离到优势菌１株，进行了表型特征分析和１６ＳｒＤＮＡ序列测定。
结果表明，该菌为气单胞菌属的嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ），通过对健康中华鳖进行人工感染，发现该菌具有致病性；选取２０种常规药敏试纸进行药敏试验，结果表明，该嗜水气单胞菌对庆大霉素、头孢他啶、头孢西丁、链霉素、呋喃妥因敏感，对诺氟沙星、红霉素、阿米卡星、环丙沙星中敏，对其他１１种抗生素具有耐药性。
关键词：鳖（Ｐｅｌｏｄｉｓｃｕｓｓｉｎｅｎｓｉｓ）；嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）；１６ＳｒＤＮＡ；药敏试验中图分类号：Ｓ９４３文献标识码：A文章编号：0439－８114（２０14）22－5487-03ＤＯＩ：１０．１４０８８／ｊ．ｃｎｋｉ．ｉｓｓｎ０４３９－８１１４．２０１４．２２．０40收稿日期：２０１４－０５－２９基金项目：浙江省科技厅项目（２００９Ｃ１２０５６）；浙江省淡水养殖科技创新团队项目（２０１２Ｒ１００２６－１１）作者简介：林锋（１９８０－），男，安徽宁国人，助理研究员，硕士，主要从事水产病原微生物研究，（电话）０５７２－２０４１４０３（电子信箱）ｗｗｌｉｎｆｅｎｇ＠１６３．ｃｏｍ；通讯作者，刘莉，副研究员，主要从事水产动物病害防治研究，（电子信箱）ｌｉｕｌｉ６６５５＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ。
嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）属于弧菌科气单胞菌属，是一种条件性致病菌，广泛存在于淡水、污水、淤泥、土壤和人类粪便中，对水产动物、畜禽和人类均有致病性［１］。
嗜水气单胞菌作为淡水养殖动物重要的病原菌之一，目前已确定淡水鱼类细菌性败血症、鳖“红底板”病等多种病害是由其所导致的［２，３］，给水产养殖业造成极大的经济损失。
嗜水气单胞菌的分离鉴定及其Hfq功能的研究嗜水气单胞菌的分离鉴定及其Hfq功能的研究引言：嗜水气单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种广泛存在于自然环境中的革兰阴性细菌，也是常见的致病菌之一。
它可以导致多种感染，如肺部感染、尿路感染和伤口感染等。
针对嗜水气单胞菌的研究主要集中在其分离鉴定以及Hfq蛋白在其感染过程中的重要作用。
一、嗜水气单胞菌的分离方法嗜水气单胞菌的分离通常采用无菌手套和标准的微生物培养技术。
首先，选择符合条件的分离来源，如环境纯化水、病人的分泌物或其他可能存在细菌的样品。
然后，取一部分样品加入到含有适宜培养基的培养皿中，通过温度、气氛和pH等条件对其进行适宜的控制。
最后，在菌落出现后，进行形态特征分析和进一步的鉴定实验，如生化试验、抗生素敏感性试验和16S rRNA基因测序等。
二、嗜水气单胞菌的鉴定嗜水气单胞菌的鉴定主要基于其形态特征以及生化试验。
在形态特征方面，嗜水气单胞菌呈革兰阴性的短杆菌形态，染色后可见细胞呈浅紫色，集群生长时形成灰色或蓝色的绿色草状菌落。
在生化试验方面，嗜水气单胞菌可氧化葡萄糖并产生酸，同时产生黄色或琥珀色色素。
此外，嗜水气单胞菌对氧化鹅脂酸和利用麦芽糖的能力也是其鉴定的重要指标。
三、Hfq蛋白在嗜水气单胞菌感染过程中的作用Hfq蛋白是一种高度保守的小RNA结合蛋白，在细菌中起到了重要的作用。
研究发现，嗜水气单胞菌中Hfq蛋白对其感染过程具有重要的调节作用。
首先，Hfq蛋白能够调控外膜蛋白的表达，从而影响细菌对抗宿主免疫的能力。
其次，Hfq蛋白还参与调节嗜水气单胞菌中多种生物膜的形成，如生物膜的黏附、生长和分离等。
此外，研究还发现Hfq蛋白在嗜水气单胞菌中调控了一系列的代谢途径和毒力因子的表达。
四、Hfq功能的研究方法及展望研究Hfq蛋白在嗜水气单胞菌中的功能通常采用基因敲除和过表达等方法。
通过敲除Hfq基因，研究人员可以观察到Hfq蛋白缺失对嗜水气单胞菌生长和毒力因子表达的影响。
嗜水气单胞菌相关基因的筛选及鉴定实验报告1. 引言1.1 概述：本文旨在介绍针对嗜水气单胞菌相关基因的筛选和鉴定实验的研究报告。
嗜水气单胞菌是一种常见于水环境中并具有重要生态功能的微生物。
通过对其相关基因的筛选和鉴定，可深入了解该菌株的遗传特性、代谢途径以及与周围环境的相互作用等方面。
1.2 文章结构：本文主要包括引言、嗜水气单胞菌简介、基因筛选实验设计与方法、基因鉴定结果及分析以及结论与展望等部分。
在引言部分，我们将简要介绍研究背景和目的，并概述后续章节内容。
随后，嗜水气单胞菌简介将详细描述其特点、研究意义以及当前相关研究现状。
基因筛选实验设计与方法将对实验方案、PCR扩增和文库构建步骤以及筛选条件和策略进行说明。
在基因鉴定结果及分析部分，我们将介绍获得的鉴定结果并进行序列比对和功能预测。
最后，我们将在结论与展望部分对实验结果进行总结并展望未来的研究方向。
1.3 目的：本文的目的在于通过筛选和鉴定嗜水气单胞菌相关基因，探究该菌株的遗传特性和代谢途径，并对其在环境中的作用进行深入了解。
这不仅有助于加深对嗜水气单胞菌生物学特性的认识，还为相关领域的研究提供理论支持和实验依据。
希望通过本研究可以拓宽我们对嗜水气单胞菌及其相关基因聚焦研究领域所知的范围，并为今后进一步挖掘和应用这些基因提供新思路和方法。
2. 嗜水气单胞菌简介：2.1 嗜水气单胞菌特点：嗜水气单胞菌（Acinetobacter hydrophila）属于革兰氏阴性杆菌，是一种广泛存在于自然环境中的细菌。
它具有以下主要特点：- 形态特征：嗜水气单胞菌呈革兰氏阴性杆状，并且通常以单胞或成对形式存在。
- 环境适应能力：这种细菌能够在多种环境条件下存活和繁殖，包括土壤、水体和动植物体内等。
它们对温度、盐度和酸碱度等因素具有一定的耐受性。
- 能量代谢：嗜水气单胞菌可以利用各种有机物作为碳源，并通过无机化合物进行能量代谢。
此外，它们还可以产生多种酶类来分解复杂的营养物质。
泗阳县草鱼养殖细菌性病原嗜水气单胞菌分离、鉴定和药敏试验作者：暂无来源：《渔业致富指南》 2019年第18期李晓丽冯龙陈瑜李勇草鱼作为泗阳县传统的优良淡水养殖品种，一直深受广大渔农的欢迎。
但是近年来随着水产集约化养殖的发展，草鱼的养殖放养密度越来越大，人工配合饲料投喂量也越来越多，导致养殖水体的水质日益恶化。
加上渔农防病治病的意识落后，受价格影响的存塘量和环境因素的变化，导致草鱼多种细菌性疾病如烂鳃病、赤皮病和肠炎病等愈加严重，甚至极少数养殖户草鱼养殖全军覆没，损失惨重，严重打击了养殖户的积极性。
经过近三年对泗阳县水产养殖细菌性疾病的研究发现，由嗜水气单胞菌引起的草鱼疾病将近占细菌性疾病的50%。
因此，2018年泗阳县水生动物疫病防控中心对县域内草鱼养殖进行了疫病监测，并对具有代表性特征的病草鱼进行了病菌株分离和鉴定，将鉴定出的嗜水气单胞菌进行了常用抗生素药物敏感性实验，旨在为嗜水气单胞菌病原引起的草鱼细菌性疾病有效检验与防控及相对应的有效治疗提供依据，防止药物的滥用和误用，避免病情的耽误而带来不必要的经济损失。
一、材料与方法1.实验材料（1）2018年5-10月在全县的主要草鱼养殖场的不同发病塘口，选取具有典型特征的病草鱼进行分离，分离部位为血液，具体的采样时间、地点、症状、菌株种类详细情况见表1。
（2）营养肉汤、营养琼脂、TCBS琼脂、脱脂奶蔗糖胰蛋白胨琼脂购于北京路桥。
氧化酶试剂盒购于杭州微生物试剂有限公司，肠杆菌和其他非苛养革兰氏阴性杆菌鉴定试剂盒（比色法）（英文名API 20E）购于梅里埃诊断产品（上海）有限公司，动物用药敏分析试剂板购于南京菲恩医疗科技有限公司。
2.实验方法（1）细菌的分离纯化。
样品先用酒精棉擦拭，用灭菌的注射器抽取血液放于营养汤，置于28℃恒温培养箱中培养18~24小时。
在无菌条件下，用灭菌的接种环取培养液划线接种于普通营养琼脂培养基上，置于28℃恒温培养箱中培养18~24小时。
嗜水气单胞菌的分离与16SrDNA鉴定作者：孙亭亭等来源：《安徽农业科学》2014年第13期摘要 [目的]分离并鉴定鱼嗜水气单胞菌，并构建系统发育分析。
[方法]从云南某鱼场采集发病鱼的病变组织进行细菌分离与培养，并对分离菌株进行初步鉴定、16S rDNA鉴定和系统发育分析。
[结果]分离培养到1株细菌，命名为Ah1305。
经表型鉴定、生化试验及16S rDNA 系统发育分析，鉴定为嗜水气单胞菌。
[结论]该研究可为快捷、准确检测鱼嗜水气单胞引起的疾病提供参考。
关键词嗜水气单胞菌；分离鉴定；16S rDNA中图分类号 S182；Q93-331 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2014）13-03907-04Abstract [Objective] The aim was to isolate and identify Aeromonas hydrophila and establish the phylogeny. [Method] Lesion tissue of fish was collected from a certain farm in Yunnan Province，and then the isolated strain was identified by preliminary identification， 16S rDNA identification and phylogenetic analysis. [Result] The bacteria were isolated and named as Ah1305. Through the morphological identification， biochemical test and 16S rDNA phylogeny analysis， it was identified as Aeromonas hydrophila. [Conclusion] The study can provide reference for quick and accurately test the disease caused by Aeromonas hydrophila.Key words Aeromonas hydrophila； Isolation and identification； 16S rDNA致病性嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）属于气单胞菌科（Aermonadaceae）气单胞菌属（Aeromonas），是革兰氏阴性短杆菌，两端钝圆，直或略弯，单个或成双排列，有极端单鞭毛，固体培养基上有周鞭毛，无荚膜，不形成芽孢，最适生长温度为28 ℃。
金鱼嗜水气单胞菌的分离鉴定及药敏试验周毅;张培培;徐晔;曹洁;孟学平;段宏安【摘要】自病死金鱼肝脏中分离到一株优势菌，对其进行感染试验、培养特性观察、生化特性鉴定及16S rRNA序列分析。
试验结果表明，该分离菌株为嗜水气单胞菌，与已报道的嗜水气单胞菌的16S rRNA序列同源性＞99．3％。
用纸片扩散法进行药敏试验，试验结果显示，该分离株对四环素类、喹诺酮类、磺胺类、头孢呋新、头孢他啶、头孢吡肟等21种药物敏感，对青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、头孢氨苄、林可霉素、麦迪霉素耐药。
本次金鱼发病是由嗜水气单胞菌感染引起，可选用强力霉素、麦迪霉素、复方新诺明、磺胺甲基异恶唑、阿奇霉素、恩诺沙星、诺氟沙星等多种药物进行防治。
%Aeromonas hydrophila is one of the main pathogen of freshwater fish bacterial septicemia .The bacterium was isolated and identified from dead gold fish and drug sensitive tests were performed in order to provide references for the bacterial disease prevention and control in ornamental fish .A dominant bacteria strain was isolated from hepatopancreas of dead Carassius auratus and identified by artificial infection experiment ,cultural characteristics ,physical and chemical characters ,and 16S rRNA sequence analysis .The results showed that the strain was A .hydrophila .Homology of 16S rRNA of the isolated strain and other several A .hydrophila was more than 99 .3% .Drug sensitive test revealed that the isolated strain was highly sensitive to 21 kinds of drugs , including tetracyclines ,quinolones , sulfonamides , cefuroxime ,ceftazidimeand cefepime ,and resistant to penicillinG ,ampicillin ,amoxicillin ,cefalexin , lincomycin and medemycin . Results inthis study showed that many antibiotics (such as doxycycline , midecamycin ,co‐trimoxazole ,sulfamethoxazole ,azithromycin ,enrofloxacin ,and norfloxaci) can be used to control and prevent bacterial disease caused byA .hydrophila in gold fish .【期刊名称】《水产科学》【年(卷),期】2014(000)006【总页数】6页(P379-384)【关键词】金鱼;嗜水气单胞菌;分离;鉴定;16S rRNA;药敏试验【作者】周毅;张培培;徐晔;曹洁;孟学平;段宏安【作者单位】连云港出入境检验检疫局，江苏连云港 222042;淮海工学院海洋学院，江苏连云港 222005;连云港出入境检验检疫局，江苏连云港 222042;连云港出入境检验检疫局，江苏连云港 222042;淮海工学院海洋学院，江苏连云港222005;连云港出入境检验检疫局，江苏连云港 222042【正文语种】中文【中图分类】S917嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)属弧菌科、气单胞菌属，为革兰氏阴性短杆菌，极端鞭毛，无芽孢，无荚膜，广泛分布于水体环境中[1-3]。
124马来穿山甲源嗜水气单胞菌亚种的分离鉴定及生物学特性分析杜雪晴1，古河祥2，萨家祺1，吴亚江1，侯方晖2，肖嘉杰2，翟俊琼1，陈 武1，邹洁建2（1. 广州动物园，广州市野生动物研究中心，广东广州 510070；2. 广东省野生动物救护中心，广东广州 510520）摘 要：为鉴定马来穿山甲（Manis javanica）腿部致病菌并研究其致病性、耐药性和耐药基因，从救护的1只马来穿山甲腿部溃烂处采集样品，无菌分离培养致病菌，进行形态学观察、革兰氏染色及16S rRNA和gyrB基因测序分析，并开展细菌药敏试验和小鼠致病性试验，随后通过PCR扩增6种毒力基因（rtxA、earA、hlyA、alt、act、epa）及19种耐药基因（5种β-内酰胺酶相关基因、6种氨基糖苷类修饰酶基因、6种氯霉素耐药基因、2种磺胺耐药基因）。
结果显示：分离的1株优势菌为革兰氏阴性短杆菌，经16S rRNA和gyrB基因测序以及序列进化树分析鉴定为嗜水气单胞菌亚种（Aeromonas dhakensis），其gyrB基因序列与马来西亚分离株高度同源，推测此致病菌可能由非法走私的穿山甲从马来西亚携带至我国。
药敏试验显示，其对头孢曲松、头孢克肟、庆大霉素和氧氟沙星等药物敏感，对青霉素、阿莫西林、头孢氨苄、头孢克洛、氯霉素、磺胺甲恶唑、甲氧苄啶和林可霉素耐药。
4种耐药基因tem、aac(3)-II、flor、sul2为阳性，与抗生素耐药表型相符。
4种毒力基因earA、hlyA、alt、act为阳性，小鼠半数致死量为3.75×106 CFU/mL。
根据药敏结果使用敏感抗菌药物治疗穿山甲，其腿部患处有好转。
因此，引起穿山甲腿部溃烂的病原嗜水气单胞菌亚种（Aeromonas dhakensis）可能为国外传入菌株，具有较强的致病性和多重耐药性。
本研究为嗜水气单胞菌的流行病学调查及其感染的防治提供了依据。
关键词：嗜水气单胞菌亚种；马来穿山甲；耐药性；耐药基因；毒力基因中图分类号：S852.23 文献标识码：A 文章编号：1005-944X（2021）04-0124-08DOI：10.3969/j.issn.1005-944X.2021.04.025 开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Isolation and Identification of Aeromonas dhakensis Derived from Manis javanicaand Analysis on Its Biological CharacteristicsDu Xueqing1，Gu Hexiang2，Sa Jiaqi1，Wu Y ajiang1，Hou Fanghui2，Xiao Jiajie2，Zhai Junqiong1，Chen Wu1，Zou Jiejian2（1. Guangzhou Zoo，Guangzhou Wildlife Research Center，Guangzhou，Guangdong 510070，China；2. Guangdong Wildlife Rescue Center，Guangzhou，Guangdong 510520，China）Abstract：In order to identify the pathogenic bacteria in hindlimb muscles of Manis javanica and study its pathogenicity，drug resistance and resistant genes，samples were collected from the leg ulcers of one Manis javanica to isolate and culture the bacteria，followed by morphological observation，gram staining，16S rRNA and gyrB gene sequencing，bacterial drug sensitivity test and mouse pathogenicity test as well as amplification of 6 virulence genes（including rtxA，earA，hlyA，alt，act and epa）and 19 resistant genes（including 5β-lactamases genes，6 aminoglycoside-modifying enzymes genes，6 chloramphenicol resistant genes and 2 sulfanilamide resistant genes）. The results showed that one isolated dominant strain was gram-negative brevibacterium，which was identified as Aeromonas dhakensis through 16S rRNA and gyrB gene sequencing and phylogenetic tree analysis. gyrB gene sequence 收稿日期：2021-01-11 修回日期：2021-02-24基金项目：国家林业与草原局濒危野生动物调查监管与行业规范项目（20190921）通信作者：邹洁建。
一株血鹦鹉嗜水气单胞菌的分离鉴定钱晓宇;陈成勋;丁亦玙;毛海涛【摘要】为确诊天津市某水产养殖场血鹦鹉突发传染病病原,并对其进行有效的预防和治疗,本实验对患病血鹦鹉进行了病原的分离鉴定及生物学特性研究.从病灶部位共分离出一株疑似病原菌,经人工感染后发现编号为YW01的分离株具有较高的致病性,临床症状与自然发病症状一致,LD50为9.55×109 cfu/mL.YW01革兰氏染色呈阴性,杆状.16S rRNA基因序列分析结果显示,YW01菌株在系统发育树上与嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)聚类,同源性达到99％.综合生理生化特征、形态学观察、人工感染以及16S rRNA基因序列分析,表明YW01分离株为嗜水气单胞菌.YW01分离株的最适生长pH为7～8,最适生长温度为32℃.在32℃200 r/min条件下的生长周期是:0～4h为生长延迟期,4h～10h为对数生长期,10 h～22 h为稳定期,22 h～48 h为衰亡期.药敏试验表明,YW01分离株对多粘霉素B、阿米卡星、诺氟沙星等高度敏感,对磺胺异恶唑中度敏感,对麦迪霉素、氨苄西林、林可霉素、头孢拉定等不敏感.本研究为该病的防治提供了实验依据.【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2015(037)008【总页数】4页(P604-607)【关键词】血鹦鹉;嗜水气单胞菌;生物学特性;16S rDNA;鉴定【作者】钱晓宇;陈成勋;丁亦玙;毛海涛【作者单位】天津农学院水产学院/天津市水产生态及养殖重点实验室,天津300384;天津农学院水产学院/天津市水产生态及养殖重点实验室,天津300384;天津农学院水产学院/天津市水产生态及养殖重点实验室,天津300384;天津农学院水产学院/天津市水产生态及养殖重点实验室,天津300384【正文语种】中文【中图分类】S852.61嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)是一种典型的人兽共患病病原，可引起人类腹泻和多种水产动物的败血症。
