分光光度法(精)

2005年广东微量元素科学GUANGD0NGWEILIANGYUANSUKEXUE第12卷第8期!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!文章编号：1006-446X（2005）08-0057-03分光光度法测定桂西茶叶中铁的含量王功平1练梦南1黄锁义2百色533000百色533000）（1.右江民族医学院临床医学系，广西2.右江民族医学院化学教研室，广西摘要：茶叶既是食品，又是一味传统医药用的中药，药食同源。

用分光光度法直接测定了茶叶中铁的含量，方法简便、快速、准确，对指导人们合理饮用茶叶进行补铁及进一步开发茶叶提供了可靠的理论依据。

关键词：分光光度法；邻二氮菲；中草药；铁中图分类号：0657.32文献标识码：A茶叶在中药大辞典中有“清头目、除烦渴、化痰、消食、利尿、解毒”的功效。

有“治头痛、目昏、多睡善寐、心烦口渴、食积痰滞、疟、痢”等的论述。

茶叶的疗效作用如下：（1）兴奋提神作用；（2）明目作用；（3）降血压作用；（4）降血脂和抗动脉粥样硬化作用；（5）抗癌抗突变作用；（6）减轻吸烟对人体的毒害作用；（7）利尿作用；（8）止痢和预防便秘作用；（9）防［1］龋齿作用；（10）助消化作用；（11）抗衰老作用；（12）消炎灭菌作用；（13）防辐射作用。

铁作为人体必需的多种微量金属元素中的一种，对人体的健康是十分重要的。

铁是血红蛋白、肌红蛋白、细胞色素及其他酶系统的主要成分，帮助氧的运输，铁还能促进脂肪的氧化。

缺铁可造成贫血并容易疲劳。

在饮用茶叶治病的同时进行补铁是一举两得的方法，所以，茶叶中铁的测定具有很大的营养学意义。

在pH4~6条件下，用盐酸羟胺将三价铁还原为二价铁，二价铁［2］再与邻二氮菲生成桔红色络合物。

用分光光度法测定茶叶中的铁的含量简便、快速、准确。

1实验部分1.1仪器与试剂；FA1104型电子天平（上海天平仪器厂）；722型光栅分光光度计（上海精密仪器有限公司）；80-2离心沉淀器（上海手术器械厂）。

教材1 紫外分光光度法测定蛋白质含量一、实验目的学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理;掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术;掌握TU-1901紫外-可见分光光度计的使用方法并了解此仪器的主要构造。

二、实验原理紫外-可见吸收光谱法又称紫外-可见分光光度法, 它是研究分子吸收190nm ～750nm 波长范围内的吸收光谱，是以溶液中物质分子对光的选择性吸收为基础而建立起来的一类分析方法。

紫外-可见吸收光谱的产生是由于分子的外层价电子跃迁的结果，其吸收光谱为分子光谱，是带光谱。

进行定性:利用紫外-可见吸收光谱法进行定性分析一般采用光谱比较法。

即将未知纯化合物的吸收光谱特征，如吸收峰的数目、位置、相对强度以及吸收峰的形状与已知纯化合物的吸收光谱进行比较。

定量分析: 紫外-可见吸收光谱法进行定量分析的依据是朗伯-比尔定律：A=lgI0/I=εbc ，当入射光波长λ及光程b 一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A 与该物质的浓度c 成正比，即物质在一定波长处的吸光度与它的浓度成线形关系。

因此，通过测定溶液对一定波长入射光的吸光度，就可求出溶液中物质浓度和含量。

由于最大吸收波长λmax 处的摩尔吸收系数最大，通常都是测量λmax 的吸光度，以获得最大灵敏度。

光度分析时，分别将空白溶液和待测溶液装入厚度为b 的两个吸收池中，让一束一定波长的平行单色光非别照射空白和待测溶液，以通过空白溶液的透光强度为I 0，通过待测溶液的透光强度为I ，根据上式，由仪器直接给出I 0与I 之比的对数值即吸光度。

紫外-可见分光光度计:紫外-可见吸收光谱法所采用的仪器称为分光光度计，它的主要部件有五个部分组成，即由光源发出的复合光经过单色器分光后即可获得任一所需波长的平行单色光, 该单色光通过样品池静样品溶液吸收后，通过光照到光电管或光电倍增管等检测器上产生光电流，产生的光电流由信号显示器直接读出吸光度A 。

可见光区采用钨灯光源、玻璃吸收池; 紫外光区采用氘灯光源、石英吸收池。

原子吸收分光光度法测定饮用水中的镁含量一、实验目的：1、掌握火焰原子吸收分光光度法的基本原理，初步了解原子吸收测定中存在的干扰类型及消除方法。

2、了解火焰原子吸收光谱仪的基本结构和使用方法。

3、掌握火焰原子吸收分光光度法测定镁的原理、方法和优缺点。

二、基本原理：1、原子吸收定律仪器光源辐射出待测元素的特征谱线（强度为I0），经火焰原子化区被待测元素基态原子所吸收（图2-7），透过光强（In）符合Lanber-Beer定律：In = I0exp(-KnL式中，Kn为频率为n时原子蒸气的吸收系数，L为原子蒸气的厚度，根据经典的爱因斯坦理论，吸收系数的积分与基态原子数目有如下关系：式中，e为电荷，m为电子质量，c为光速，f为振子强度，对某元素指定的谱线，为常数，因此积分吸收与基态原子的浓度成正比，这是原子吸收分析中基本的定量关系。

但是由于原子吸收线半宽为0.001-0.005nm，非常窄，进行波长扫描来求出积分吸收是困难的。

因此在实际应用中，采用锐线光源，测定吸收线中心波长位置的吸收系数K0（峰值吸收系数），由于原子吸收测量的温度不太高，峰值吸收与产生吸收的原子数N也存在线性关系：A = log(I0/I = KLN在原子化一定条件下，产生吸收的原子数N与试样中待测成份的浓度C成正比，即N = KC所以吸收值和试样中待测成份的浓度C成正比：A = KLC上式就是进行原子吸收定量分析的基础。

2、仪器结构原子吸收光谱仪一般分为光源、原子化系统、单色系统（分光系统）、检测系统等四部分构成。

较先进的仪器通常还配有自动记录系统。

火焰原子吸收光谱仪结构示意图3、火焰原子化过程原子吸收测量的是火焰中的基态原子数，因此必须将试样中的待测成份进行原子化，使其成为基态原子。

溶液在火焰中一般经历四个阶段：（1）雾化。

通过气动喷雾形成直径小于10μm的气溶胶。

雾化效率与试液的粘度、密度和表面张力有关。

原子吸收分析的雾化效率为5-10%。

姓名:封德军指导老师:陶明学号:1004010026 班级:2010级化学专业一、实验目的:1、初步熟悉 722型分光光度计的使用方法。

2、熟悉测绘吸收光谱的一般方法。

3、学习如何选择分光光度分析的实验条件二、实验原理 : 1、在 pH =2~9 的溶液中, 邻二氮菲 (phen 与 Fe 2+生成稳定的红色配合物 , 反应方程式为:2Fe 3++2NH2OH.HCl → 2Fe2++N2+H2O+4H++2Cl+, 其最大吸收峰在 515nm 处。

根据朗伯比尔定律: A=Kbc,溶液中浓度与其吸光度之间具有直线关系, 可用标准曲线法测定。

三、实验步骤:1、用吸量管吸取 0.0ml 和 5ml 铁标准使用液分别注入两个 50ml 容量瓶中,加入 1ml 盐酸羟胺溶液, 摇匀。

再加入 2ml 领二氮菲水溶液, 5ml 醋酸钠水溶液,用水稀释至刻度,摇匀,放置 10min 。

2、取两支 1cm 比色皿, 先用蒸馏水清洗 2-3次再用试液润洗 3-4次, 分别将配好的铁标准使用液注入比色皿, 并用镜头纸拭去光洁面的试液。

以试剂空白(即 0.0ml 铁标准溶液为参比溶液,调节分光光度计使其在参比溶液中透光率为 100%。

在 440-570nm 之间,每隔 10nm 测一次吸光度,最后测的在510nm 附近吸光度最大。

在最大吸收峰附近, 每隔 5nm 测量一次吸光度, 即在505nm 与 515nm 处分别测量一次吸光度。

3、显色剂用量的确定:在 7 只 50 ml 容量瓶中,各加 10ml 铁标准溶液和 20ml 盐酸羟胺溶液, 摇匀。

分别加入 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 2.0, 4.0 ml 邻二氮菲溶液,再各加 5.0 ml 乙酸钠溶液, 以水稀释至刻度,摇匀。

放置 10min, 以水为参比,在选定波长下测量各溶液的吸光度。

以显色剂邻二氮菲的体积为横坐标、相应的吸光度为纵坐标,绘制吸光度-显色剂用量曲线,确定显色剂的用量。

分光光度法测定饮料中六偏磷酸钠添加剂[ 11-04-23 13:40:00 ] 编辑：studa20作者：赵希娟李春梅黄承志李原芳【摘要】在pH 8.6的Tris HCl缓冲溶液中，六偏磷酸钠使天青B在溶液中发生聚集,溶液由天蓝色逐渐变为紫色，体系的吸光度降低，光散射增强。

在优化条件下，在6.0 ×10-7～1.0×10-5 mol/L范围内，天青B在602 nm处的吸光度降低与六偏磷酸钠浓度呈良好的线性关系，检出限(3σ)为 5.3 ×10-7 mol/L。

对浓度为5.0×10-6 mol/L的六偏磷酸钠溶液平行测定11次，其相对标准偏差为 2.5%。

本方法用于饮料中添加剂六偏磷酸钠含量的分析，平均标准加入回收率为99.5%～112.3%，可实现六偏磷酸钠的可视化半定量检测。

【关键词】紫外可见分光光度法，光散射，天青B，六偏磷酸钠1 引言品质改进剂是一类通过保水、粘结、增塑、稠化、增溶及改善流变性能等作用以改进食品的组织结构和口感的添加剂[1]。

六偏磷酸钠是常用的食品级品质改进剂，可用作水分保持剂、品质改良剂、pH调节剂等[2]。

由于六偏磷酸钠中含有微量的杂质元素，如砷、铅及氟化物等，无论是单独使用还是与其它磷酸盐配制成复合磷酸盐使用，都应符合国家标准[3]，而且要注意钙与磷的比例[4]，以免发生因钙、磷不平衡或滥用磷酸盐，对人体健康产生不良影响。

目前，测定磷酸盐添加剂的方法有离子色谱法[5]、原子吸收光度法[6,7]和沉淀法等[3]。

但离子色谱法所用试剂种类多，原子吸收光度法和沉淀法都是间接测定磷酸盐或聚磷酸盐的含量，3种方法均操作繁琐。

本研究表明，在Tris HCl缓冲溶液(pH 8.6)中，六偏磷酸钠使天青B(AB)发生聚集，导致其在602 nm处的吸光度值下降，360 nm左右光散射增强，并在530 nm处出现新的散射峰。

根据其吸光度降低值与六偏磷酸钠浓度在一定范围内呈线性关系，建立了饮料中添加剂六偏磷酸钠含量测定的分光光度方法。

双波长分光光度法的基本原理及应用应用分光光度法对共存组分进行不分离定量测定时,通常采用的方法有双波长法,三波长法,导数光谱法、差谱分析法及多组分分析法等方法,其快速,简便的优点使这些方法在实用分析中得到越来越广泛的应用。

其中以双波长法的应用为最多,该法的准确度和精密度要高于其它方法,是对共存组分不分离定量测定的有效方法之一。

实用中的双波长法主要采用等吸收波长法和系数倍增法两种分析方法,下面就其基本原理和应用作以介绍:一、等吸收波长法1、基本原理图 1是同一组分三个不同浓度供试液的吸收光谱图,经典分光光度法的定量测定通常是在被测组分的最大吸收波长处进行测定,根据兰伯一比耳定律,其吸光度值与被测组分的浓度 C 成正比,即:依(3式测定被测组分 a ,则可完全消除 b 组分的干扰,达到共存组分不分离进行定量测定的目的。

2、影响因素(1测定波长和组合波长的选择应使被测组分的△A 值尽可能大,以增加测定的灵敏度和精确度。

(2测定波长和组合波长应尽可能选择在光谱曲线斜率变化较小的波长处,以减小波长变化对测定结果的影响。

(3干扰组分等吸收波长(组合波长的选择必须精确,只有其△A 值等于零时才能完全消除干扰,否则会引入测定误差。

为此,在实用分析中,都是先配制一个干扰组分b 的供试液,在仪器上准确找出等吸收波长 ,然后再对样品进行测定。

3 应用实例等吸收波长法的一个典型应用实例为收载于《中华人民共和国药典》中的抗菌消炎药复方磺胺甲噁唑片的含量测定。

复方磺胺甲噁唑片中含有磺胺甲噁唑(SMZ 和甲氧苄(TMP 两个成分,其吸收光谱见图 3。

当测定 SMZ 时,选择其最大吸收波长 257nm 为测定波长,可以在干扰组分 TMP 的光谱曲线上 304nm 附近找到等吸收波长为组合波长消除其干扰;当测定 TMP 时,选择 239nm 为测定波长,可以在干扰组分 SMZ 的光谱曲线上 295nm 附近找到等吸收波长为组合波长消除其干扰,分别对 SMZ 和 TMP 进行含量测定。

分光光度法测定阿霉素脂质体中的磷脂含量摘要目的：测定阿霉素脂质体中的磷脂含量。

方法：用乙醇破坏阿霉素脂质体，再用氯仿萃取，在488nm处用硫氰铁铵分光光度法测定。

结果：在5.0～50.0mg.L-1浓度范围内，吸光度与磷脂浓度呈良好的线性关系，平均回收率为99.3%。

线性方程为A=3.846C－0.0057，r=0.999 8。

结论：用硫氰铁铵分光光度法测定阿霉素脂质体中的磷脂含量，其方法简单、快速、灵敏，可用于阿霉素脂质体的质量控制。

关键词阿霉素脂质体；磷脂；分光光度法中分类号R914.1DETERMINATION OF PHOSPHOLIPIDS IN THE LIPOSOME OF ADRIAMYCIN WITH THE SPECTOTROPHOTOMETIC METHODWu Daocheng(Deparment of Pharmaceutical Chemistry, The Fourth Military Medical University,Xi’an 710032)Xi Xiaoli，Hu Jiahui(School of Automation＆Information Engineering Xi'AN University of technologyXi'an710048)Abstract AIM To determine the concentration of phospholipids in the adriamycin liposome.METHODS The sample was broken by ethanol and then extracted by chloroform. The content of phospholipids was measured by Ammorium Ferrothiocyarate Spectrophometric at the wavelength 488nm.RESULTS The experiments showed that the average recoveris of phospholipids was 99.3%,The linear regression equation is A=3.846C-0.0057，r=0.999 8.CONCLUSION This method is simple convenient and sensitive which can be used as the standard of quality.Key words adriamycin liposome;phospholipids;Spectrophometric脂质体是一种天然脂类化合物悬浮在水中形成的具有双层封闭结构的泡囊，作为药物载体具有缓释、低毒及一定的组织靶向性等特点。

紫外可见分光光度法测盐酸普萘洛尔的含量摘要目的通过测定盐酸普萘洛尔片的含量掌握紫外分光光度法的操作。

方法取本品适量，加水振摇使盐酸普萘洛尔溶解，并加甲醇定量稀释，摇匀，照紫外-可见分光光度法，在290nm波长处，测定吸光度，按C16H21NO2·HCl的吸收系数（E1m）为207计算，即得。

关键字紫外分光光度法盐酸普萘洛尔盐酸普萘洛尔片的药理作用：1 普萘洛尔为非选择性竞争抑制肾上腺素β受体阻滞剂。

阻断心脏上的β1、β2受体，拮抗交感神经兴奋和儿茶酚胺作用，降低心脏的收缩力与收缩速度，同时抑制血管平滑肌收缩，降低心肌耗氧量，使缺血心肌的氧供需关系在低水平上恢复平衡，可用于治疗心绞痛。

2 抑制心脏起搏点电位的肾上腺素能兴奋，用于治疗心律失常。

本品亦可通过中枢、肾上腺素能神经元阻滞，抑制肾素释放以及心排出量降低等作用，用于治疗高血压。

3 竞争性拮抗异丙肾上腺素和去甲肾上腺素的作用，阻断β2受体，降低血浆肾素活性。

可致支气管痉挛。

抑制胰岛素分泌，使血糖升高，掩盖低血糖症状，延迟低血糖的恢复。

4 有明显的抗血小板聚集作用，这主要与药物的膜稳定作用及抑制血小板膜Ca2+转运有关。

致癌、致突变和生殖毒性在18个月内，大鼠或小鼠每日给药150mg/kg，为期18个月，无明显毒性反应，无与药物相关的致癌作用。

生殖实验未见与普萘洛尔作用有关的生殖能力损伤。

当给与动物10倍于人用剂量时，显示本品有胚胎毒性。

药物相互作用：1 与抗高血压药物相互作用：本品与利血平合用，可导致体位性低血压、心动过缓、头晕、晕厥。

与单胺氧化酶抑制剂合用，可致极度低血压。

2 与洋地黄合用，可发生房室传导阻滞而使心率减慢，需严密观察。

3 与钙拮抗剂合用，特别是静脉注射维拉帕米，要十分警惕本品对心肌和传导系统的抑制。

4 与肾上腺素、苯福林或拟交感胺类合用，可引起显著高血压、心率过慢，也可出现房室传导阻滞。

5 与异丙肾上腺素或黄嘌呤合用，可使后者疗效减弱。

实验⼗⼀分光光度法测定⽕腿肠中亚硝酸盐的含量（精）实验⼗⼀分光光度法测定⽕腿肠中亚硝酸盐的含量⼀、实验原理样品经沉淀蛋⽩质，除脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化，再与盐酸萘⼄⼆胺偶合形成红⾊染料，通过测定吸光度可与标准进⾏⽐较定量。

⼆、试剂与仪器（1）试剂亚铁氰化钾溶液：称取10.6gK4Fe(CN)6 .3H2O溶于⽔定容100mL.⼄酸锌溶液：称取11g Zn(CHCOO)2 .2H2O加1.5mL冰⼄酸，溶于⽔定容50mL。

饱和硼砂溶液：称取5g NaB4O7 . 10H2O溶于100mL热⽔中，冷却备⽤。

20%盐酸：取54mL浓盐酸加⽔45mL。

0.4%对氨基苯磺酸：称取0.4g对氨基苯磺酸溶于100mL20%盐酸中。

200ug/mL亚硝酸钠标准液：精密称取0.1000g经硅胶⼲燥24⼩时的亚硝酸钠（GR），加⽔溶解后，定容500mL。

5.0ug/mL亚硝酸钠标准使⽤液：吸取亚硝酸钠标准液5.0mL于500mL容量瓶中⽤重蒸馏⽔定容。

（2）仪器电炉电热恒温⽔浴锅玻棒漏⽃铁架台烧杯（50mL、200mL、500mL 各2个）；容量瓶（250ml1个）；吸管（2mL,5mL,10mL,50mL各1⽀）；⽐⾊管（50mL10⽀）三、实验操作（1）样品处理称取3g左右⽕腿肠于50mL烧杯中，加⼊饱和硼砂溶液6.3mL，以玻棒搅匀，⽤70℃左右的重蒸馏⽔约100mL将其洗⼊250mL 的容量瓶中，置于沸⽔浴中加热15分钟，取出，⼀边转动⼀边加⼊5mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加⼊5mL⼄酸锌溶液以沉淀蛋⽩质。

定容，混匀，静置半⼩时，除去上层脂肪，过滤，弃去初滤液30mL，收集滤液备⽤。

（2）绘制标准曲线吸取0.00,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00,1.20mL 亚硝酸钠标准使⽤液，分别置⼊7⽀50mL ⽐⾊管中，各加⼊0.4%对氨基苯磺酸2mL,混匀，静置3-5分钟后各加⼊1.00mL 0.2%盐酸萘⼄⼆胺溶液，加⽔⾄刻度，混匀，静置15分钟，⽤2cm ⽐⾊⽫，以零管调零，于538nm 处测量吸光度，以亚硝酸钠含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

浊度的测定——分光光度法本方法适用于循环冷却水中浊度的测定，其范围0～45度。

1 方法原理六次甲基四按与硫酸肼聚合，形成为不溶于水的大分子盐类混悬液，以此作为浊度标准溶液，在一定条件下与水样浊度相比较，用分光光度法测定。

2 干扰及消除水样应无碎屑及易沉降的颗粒。

器皿不清洁及水中溶解的空气泡会影响测定结果。

3 试剂3.1 标准浊度贮备液3.1.1 溶液A：称取1.0000g硫酸肼﹝（NH2）2H2SO4﹞用水溶解，移入100mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。

3.1.2 溶液B：称取10.000g六次甲基四胺﹝（CH2）6N4﹞，用水溶解，移入100mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。

3.1.3 吸取25mL溶液A和25mL溶液B，移入500mL容量瓶中，摇匀后，在25±3℃静置24h，然后稀释至刻度，摇匀。

此混悬液的浊度为400度，可使用1个月。

3.2 标准浊度混悬液吸取50mL上述贮备液于200mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。

此标准浊度混悬液为100度。

3.3 无浊度水将蒸馏水通过0.2µm滤膜过滤，收集于用过滤水洗涤二次的烧瓶中。

4 仪器4.1 分光光度计。

4.2 50mL比色管。

5 试验步骤5.1 标准曲线的绘制分别吸取100mg/L混悬液2.5，5.0，7.5，10.0，12.5，15.0，17.5，20.0，22.5mL于9只50mL 比色管中，用水稀释至刻度，摇匀。

以上各液的浊度分别为5，10，15，20，25，30，35，40，45度L。

在分光光度计上于420nm处，用3cm比色皿，以水作参比，测定上述各溶液的吸光度。

以吸光度为纵坐标，以浊度为横坐标，绘制标准曲线。

5.2 水样的测定吸取摇匀未经过滤的水样50mL （无气泡，如浊度超过100度可酌情少取，用水稀释至50mL ）于50mL 比色管中，用3cm 比色皿，以蒸馏水作参比，在与标准曲线相同的条件下测其吸光度，在标准曲线上查得相应的水样浊度。