茶叶氨基酸检测方法的研究进展_倪君
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茶叶中游离氨基酸的测定茶叶是一种传统的饮品,具有多种保健功效。
而茶叶中的游离氨基酸是决定茶叶品质的重要因素之一。
本文将探讨茶叶中游离氨基酸的测定方法及其意义。
一、茶叶中游离氨基酸的意义游离氨基酸是构成蛋白质的基本组成部分,也是人体所需的重要营养物质之一。
在茶叶中,游离氨基酸的含量与茶叶的品质有着密切的关系。
茶叶中游离氨基酸的含量高低直接影响着茶叶的口感和香气,也是评价茶叶质量好坏的重要指标之一。
因此,准确测定茶叶中游离氨基酸的含量对于茶叶品质的评价具有重要意义。
常用的测定茶叶中游离氨基酸含量的方法主要有色谱法、高效液相色谱法和光谱法等。
以下将分别介绍这几种方法的原理和步骤。
1. 色谱法色谱法是一种常用的游离氨基酸测定方法。
其原理是利用色谱柱将茶叶样品中的游离氨基酸分离出来,再通过检测器测定其浓度。
具体步骤如下:(1)样品制备:将茶叶样品粉碎并称取适量,加入适量溶剂提取游离氨基酸。
(2)色谱柱分离:将提取得到的茶叶样品溶液注入色谱柱进行分离,根据游离氨基酸的特性选择合适的色谱柱。
(3)浓度测定:通过色谱柱后,游离氨基酸会进入检测器,根据吸光度或荧光强度等参数测定游离氨基酸的浓度。
2. 高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC)是一种常用的分离和测定游离氨基酸的方法。
其原理是利用高效液相色谱仪将茶叶样品中的游离氨基酸分离出来,并通过检测器测定其浓度。
具体步骤如下:(1)样品制备:将茶叶样品粉碎并称取适量,加入适量溶剂提取游离氨基酸。
(2)色谱柱分离:将提取得到的茶叶样品溶液注入高效液相色谱仪进行分离,根据游离氨基酸的特性选择合适的色谱柱。
(3)浓度测定:通过高效液相色谱柱后,游离氨基酸会进入检测器,根据吸光度或荧光强度等参数测定游离氨基酸的浓度。
3. 光谱法光谱法是一种简单快速的游离氨基酸测定方法。
其原理是利用游离氨基酸在特定波长下的吸收特性来测定其浓度。
具体步骤如下:(1)样品制备:将茶叶样品粉碎并称取适量,加入适量溶剂提取游离氨基酸。
安徽农学通报,Anhui Agri. Sci. Bull.2011,17(14)51采摘高度及采制时期对黄山“松谷”毛峰茶叶游离氨基酸含量影响的研究黄志胜1 汪小飞2 刘 昕2 陈国平2 陈 涛2(1黄山松谷茶业有限公司,安徽黄山245700;2黄山学院)摘 要:为了研究采摘高度及采制时期对黄山“松谷”毛峰游离氨基酸含量的影响,采用茚三酮比色法测定黄山“松谷”毛峰中游离氨基酸总量。
结果表明,从采制时期上看,随着采制时期的延迟,游离氨基酸的含量逐渐降低;从采摘高度上来看,随着采摘高度的上升游离氨基酸的含量总体上升,在750m处达到最大。
关键词:黄山“松谷”毛峰;游离氨基酸;采摘高度;采制时期中图分类号 TS272.7 文献标识码 A 文章编号 1007-7731(2011)14-051-003Research on the Influence of Picking Heights and Periods to the Content of Free Amino Acids in Huangshan “SONGGU”Mao Feng TeaHuang Zhisheng et al.(Huangshan song gu tea industry co., LTD, Huangshan245700,China)Abstract: In order to research the influence of packing heights and periods to the content of free amino acids in Huangshan“SONGGU”Mao Feng tea, the test uses the Ninhydrin Colorimetric method to determinate the total content of free amino acids in Huangshan Mao Feng tea. The result shows that: from the periods aspect ,with the periods delay, the content of free amino acids in Huangshan Mao Feng tea gradually reduced; from the heights aspect, the higher the picking height, the more the content of free amino acids in Huangshan Mao Feng tea, but it comes to the max, when the height is 750m.Key words: Huangshan“SONGGU”Mao Feng tea; Free amino acids; Picking heights; Picking periods黄山地区云雾缭绕,相对湿度大,天然的高山、温暖的气候以及充沛的雨水为黄山毛峰的生长提供了有利的条件。
茶(Camellia sinensis ),山茶科山茶属植物,是山茶属植物中栽培面积最广和经济效益最高的一个栽培种。
茶是世界上最受欢迎的无酒精饮料之一,是非常重要的经济作物[1],起源于我国西南地区,有文字记载的人工栽培历史已有3000多年[2]。
根据国家统计局数据,2019年我国茶园面积近307万hm 2,采摘面积246万hm 2,茶叶产量达280万t ,干毛茶总产值达2396亿元[3]。
茶叶中茶多酚、氨基酸、咖啡碱、茶多糖、茶黄素和γ-氨基丁酸(GABA )等成分[4],具有降血压、抗癌、基金项目:贵州省普通本科高等学校服务农村产业革命战略行动计划项目(黔教合KY2018085)、贵州大学引进人才科研项目(贵大人基合字[2017]10号)。
作者简介:郜秋艳,女,主要从事茶叶加工与茶叶功能成分综合利用研究。
*通讯作者,E-mail :*******************。
茶叶中γ-氨基丁酸的研究进展郜秋艳,尹杰,张金玉,陈猛,刘建军*贵州大学茶学院,贵州贵阳550025摘要:茶叶中γ-氨基丁酸(GABA )是一种非蛋白质氨基酸,具有抗抑郁、降血压、增强记忆力、抗癌等功效,因此受到较多学者的关注。
文章对近年来茶树中GABA 的代谢机理、富集技术和GABA 对人体健康作用等方面进行综述与展望,以期为系统研究茶叶中GABA 和GABA 茶产品开发提供理论依据。
关键词:茶叶;γ-氨基丁酸;代谢机理;富集技术;生理功能Research Progress on the γ-Aminobutyric Acid in TeaGAO Qiuyan,YIN Jie,ZHANG Jinyu,CHEN Meng,LIU Jianjun *College of Tea Science,Guizhou University,Guiyang 550025,ChinaAbstract:γ-Aminobutyric acid,non-protein amino acid in tea,has multiple health benefits,such as anti-depres-sion,hypotensive action,improving memory and anti-cancer.The benefits of GABA,metabolic mecha-nism of GABA in tea plants and enrichment technology of GABA were reviewed in this paper.The aim of this arti-cle is provided theoretical basis for the systematic study of GABA and its application.Keywords:tea,γ-aminobutyric acid (GABA),metabolic mechanism,accumulation,physiological role抗氧化、提高免疫力、增强记忆力等功能[5],深受广大消费者喜爱。
实验三茶叶中氨基酸含量的测定一、分析意义氨基酸,是生物合成蛋白质的基本单位又是蛋白质分解的产物,在生物体内是重要的生物活性物质。
氨基酸是可溶于水的含氮化合物,对茶叶品质有重要的影响,是公认的茶叶呈味物质,也是构成茶叶色香味的重要化学因子。
二、方法原理氨基酸在pH8.04条件下与茚三酮共热,α-氨基酸能与茚三酮反应产生兰紫色缩合物,其反应过程按如下步骤进行:三、样品、试剂与仪器设备1、样品:不同等级绿茶。
2、pH8.04磷酸缓冲液:先配制1/15M磷酸氢二钠和1/15磷酸二氢钾溶液(配制方法同实验二)。
用时取1/15M的KH2PO4溶液5ml、1/15M的Na2HPO4溶液95ml混匀,即为pH8.04磷酸缓冲液。
3、2%茚三酮溶液:称取2g水合茚三酮加50毫升蒸馏水,加氯化亚锡80毫克(SnCl2·2H2O)(AR级),搅拌均匀后,逐渐加水溶解,分次过滤,滤液在暗处放置一昼夜,加水定容至100ml。
4、主要仪器:分光光度计四、测定步骤1、供试液制备(同实验二)2、定量吸取供试液1ml,注入25ml容量瓶中,加0.5mlpH8.04的磷酸缓冲液,和0.5ml的2%茚三酮溶液,置于沸水浴中加热15min,待冷却后加水定容至25ml,10min后于570nm波长处,0.5cm比色杯测定吸光度A值。
3、计算:注:“0.57”——用已知的不同浓度配制的茶氨酸,按上述操作程序测定吸光度,作标准曲线,当吸光度等于1.00时,每1ml供试液中含茶氨酸0.57mg。
注意事项1、比色液在1小时内吸光度较稳定,比色须在该时间内完成,不及放置过久;2、沸水浴中加热15min时容量瓶一定要浸没浴沸水浴中,且打开瓶塞。
测定茶叶中游离氨基酸总量研究采用茚三酮比色法测定茶叶中游离氨基酸总量。
确定采用沸水萃取,以0.2mg/ml的谷氨酸标准溶液在吸取系列工作液后不加水,加入0.5ml的PH8.0的磷酸盐缓冲液和0.5ml2%茚三酮溶液,采用数显电热恒温水浴锅沸水浴15min加热,冷却后蒸馏水定容至25ml,在570nm处测定吸光度。
所得线性方程A=4.312X-0.017,相关系数r=0.99955,回收率达到92.2%左右,精确度为0.8%,试验操作简单,重复性和稳定性良好。
茶叶游离氨基酸茚三酮比色法茶叶中游离氨基酸含量是用来描述茶叶鲜爽程度的一个重要品质指标,还是人体所必需的营养物质,同事对人体疾病的康复和预防起着极重要的保健作用。
测定茶叶中游离氨基酸含量对茶叶的开发利用具有一定的指导意义。
以谷氨酸为标准品,采用分光光度计为测定仪器,探索一种适合于茶叶游离氨基酸含量的分析方法。
本试验对该方法的主要影响因素,精密度和回收率等进行研究,确定了茶叶中游离氨基酸总量的测定方法。
1材料与方法1.1仪器和用具数显电热恒温水浴锅,型号电子分析天平:感量为0.0001g,型号紫外可见分光光度计。
可调式电炉。
1.2试剂和溶液所用试剂应为分析纯(AR),水为蒸馏水。
PH8.0磷酸盐缓冲液:1/15mol/L磷酸氢二钠溶液95ml和1/15mol/L磷酸二氢钾溶液5ml,混匀。
2%茚三酮溶液:称取水合茚三酮(纯度不低于99%)2g,加50ml水和80mg氯化亚锡搅拌均匀。
分次加少量水溶解,放在暗处,静置一昼夜,过滤后加水定容至100ml。
1.3试验方法1.3.1标准贮备液及标准溶液的配制准确称取100mg谷氨酸(纯度不低于99%)溶于100ml水,定容作为母液。
(1ml含谷氨酸1mg)。
配制成0.1mg/ml,0.2mg/ml,0.3mg/ml,0.4mg/ml,0.5mg/ml浓度的标准溶液。
采用GB/T8314-2002中茶游离氨基酸的测定方法进行测定。
茶叶氨基酸的影响因素与检测方法研究进展作者:马思蕊康玉梅田晓静来源:《农产品加工·上》2019年第10期摘要:氨基酸作为茶清新口感的主要物质,决定了茶的香气和味道,是影响茶叶品质的重要因素。
总结了茶叶中氨基酸的影响因素和氨基酸的检测方法。
关键词:茶叶;氨基酸;检测方法;影响因素;加工;冲泡中图分类号:TS272.7 ; ; 文献标志码:A ; ; doi:10.16693/ki.1671-9646(X).2019.10.015Abstract:Amino acid definitely is the main substance of fresh taste of tea. It determines the aroma and taste of tea and is an important factor affecting the quality of tea. ;This paper summarized the influencing factors of amino acids in tea and the detection methods of amino acids.Key words:tea;amino acid;detection method;influence factor;process;brew茶叶是全球三大饮品之一,也是几千年来国人日常生活中不可缺少的一部分。
茶叶中氨基酸的组成、含量及其降解产物的种类和含量变化将直接影响到茶叶的品质。
而且不同氨基酸组分的呈味特性不同,对茶叶品质的影响程度亦不同[1]。
其中,谷氨酸和天门冬氨酸具有鲜味,茶氨酸具有鲜爽和焦糖香气。
迄今为止,人们已经对茶种、施肥、加工、冲泡条件、贮藏等因素对氨基酸及茶叶品质的影响进行了较多研究。
对目前已有的研究结果大致归纳综述,且对目前已经用于茶叶中氨基酸分析检测的方法、原理及应用展开综述。
1 ; 茶叶中氨基酸的检测方法近年来,许多学者专注于研究氨基酸的检测技术,改进了氨基酸的测定方法,获得了一系列适合茶叶氨基酸的检测方法。
茶叶中氨基酸含量及其对茶叶品质的影响研究茶叶是一种广泛消费的饮品,在世界各地都受到了极高的关注。
茶叶品质的好坏取决于多种因素,其中包括氨基酸含量。
本研究旨在探究茶叶中氨基酸含量的变化以及这些变化对茶叶品质的影响。
一、茶叶中氨基酸的种类和含量茶叶中存在着多种氨基酸,其中主要的有儿茶素、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸等。
这些氨基酸在茶叶的生长过程中会逐渐积累,并且不同品种的茶叶中氨基酸的含量也存在一定的差异。
由于氨基酸对茶叶品质的影响较大,因此研究茶叶中氨基酸的含量就显得尤为重要。
通过采用高效液相色谱法等分析方法,可以准确地测定茶叶中各种氨基酸的含量。
这些分析结果提供了茶叶品质评价的重要依据。
二、茶叶中氨基酸含量与茶叶品质的关系茶叶中氨基酸的含量直接影响着茶叶的口感和香气。
儿茶素是茶叶中含量最高的氨基酸之一,其对茶叶的涩味起到了重要调节作用。
含有较高儿茶素的茶叶往往具有较强的涩味,而含有较低儿茶素的茶叶则更加鲜爽。
此外,天冬氨酸和谷氨酸等氨基酸也是影响茶叶品质的重要因素。
天冬氨酸对于茶叶的醇香起到了调节作用,而谷氨酸则能够提升茶叶的鲜爽口感。
除了影响茶叶的口感,茶叶中的氨基酸含量还与茶叶的香气相关。
大量的研究表明,氨基酸的含量与茶叶的香气成正相关。
因此,通过控制茶叶中氨基酸的含量,可以调节茶叶的香气,从而提升茶叶的品质。
三、调控茶叶中氨基酸含量的方法在茶叶种植和制作过程中,可以采用多种方法来调控茶叶中的氨基酸含量,从而提高茶叶的品质。
首先,合理的施肥和灌溉可以影响茶叶中氨基酸的积累。
在茶树生长的不同阶段,适当地施加氮肥和有机肥料,能够增加茶叶中氨基酸的积累量。
此外,适宜的灌溉条件也是茶叶中氨基酸含量的保证。
其次,茶叶的制作工艺也能够对茶叶中的氨基酸含量产生影响。
研磨、杀青、烘焙等制作过程中的温度和时间的控制,可以调节茶叶中氨基酸的含量。
高温杀青和烘焙操作会导致茶叶中氨基酸含量的降低,而适宜温度和时间的控制能够保持茶叶中氨基酸的相对稳定。
收稿日期:2007-01-15 修改稿收稿日期:2007-01-24作者简介:倪 君(1982年—),女,江苏镇江人,浙江大学茶学系硕士研究生,从事茶叶品质检验、茶饮料加工工艺方面研究。
茶叶氨基酸检测方法的研究进展倪 君 须海荣(浙江大学茶学系 杭州 310029) 摘 要 氨基酸是构成茶叶滋味的重要组成部分,因此对茶叶中氨基酸的检测是非常必要的。
近年来,氨基酸的分析手段不断更新和发展,本文就学者们对其方法的研究做了综述。
关键词 茶;氨基酸;检测方法 中图分类号:S 571.1;Q 517 文献标识码:A 文章编号:0577-8921(2007)02-063-04Research progressesin the method for determiningthe amino acids in teaNI Jun,X U Hairong(Department of Tea Science ,Z h ej iang Univ ersity ,Hangzh ou 310029)Abstract Amino acid is the impo rta nt component of tea taste .So how to get the precise m ethod for determining it in tea is im por tant .As the metho ds are im prov ed unceasing ly in recent y ea rs,this article giv es a summa ry o f them.Key words tea;amino acid;the method for determining1 前 言茶叶中含有丰富的氨基酸,其中必需氨基酸达到16种。
氨基酸是构成茶叶滋味的重要组成部分。
其含量的多少,成分的组合直接影响茶汤的品质。
这就需要准确快速的氨基酸的检测技术。
近几年,许多学者致力于此项技术,对氨基酸的测定方法进行了改进,得到一系列适合茶叶氨基酸的检测法。
2 氨基酸总量的测定方法氨基酸总量的经典方法有酮量法和茚三酮比色法。
通常,我们采用茚三酮比色法,实验中发现,此法得到的数据重复性不是很高。
夏静和罗守进通过对影响氨基酸测定的提取参数进行正交试验,改进了氨基酸的提取方法。
其最佳浸提方案为:40目(0.45m m )粉碎细度、100℃水、30min 浸提。
该方法提高了结果的稳定性,重复性,同时比原来的提取法节省时间。
随后,他们把按此法提取的液体进行游离氨基酸组份分析,发现此提取法同样适用于氨基酸组分的测定[1]。
3 氨基酸组分的分析方法氨基酸组分分析方法大致可分为纸谱分析法、离子交换树脂柱层析法、薄层层析法、氨基酸自动分析仪测定法、高效液相色谱法[2]。
而茶氨酸因其特殊的理化性质,其测定法又另辟他径,现已出现碱式碳酸铜沉淀法、强酸性阳离子交换树脂层析、柱上层析、薄层扫描、紫外光吸收光谱法、凝胶电泳和质谱,毛细管电泳[3]等检测手段。
本文对最常用的两种茶叶氨基酸组分测定方法(氨基酸自动分析仪法,高效液相色谱法)以及80年代发展起来的毛细管电泳法进行了概述。
3.1 氨基酸自动分析仪法氨基酸自动分析仪法是利用先进的仪器进行组分测定的方法。
其测定分析程序又可分为两种,首先是采用测定茶氨酸的专用测定程序,这一测定方法最为常用。
其优点是:所用的Na +,盐洗脱缓冲液价格便宜,而且国内有售,其分析结果可以满足一般工作,缺点一是不能一次性分离茶氨酸和其他18种氨 茶 叶 Jo urnal of Tea 2007,33(2):63~66 基酸,需采用二次分离[4]。
二是不能分离检测出包括谷氨酰胺,天门冬酰胺在内的酰胺类物质[5]。
其次是生理体液法。
根据夏静,李布青的实验报道,采用生理体液改进程序,在氨基酸自动分析仪上测定茶叶中游离氨基酸,不仅分离检测出28种氨基酸,而且很好的分离了茶氨酸和谷氨酰胺。
但是,此法试剂昂贵,检测过程中手续较繁锁,适用于有特殊需要的科研课题。
关于生理体液法,至今只此一篇,尚无其它相关研究。
目前,在中国市场上销售的氨基酸分析仪主要是日本的日立公司和英国的安玛西亚公司生产的产品[6]。
王宝王宣,张金龙等人使用日立公司生产的氨基酸分析仪8800和英国安玛西亚公司生产的31系列氨基酸分析仪这两种仪器对同一种样品在不同的实验室进行氨基酸分析对比,得到的数据运用t检验,结果表明两种仪器测的值不存在显著性差异。
因氨基酸自动分析仪法不必采用氨基酸衍生的方法,而是直接用离子交换柱对其分离,从而避免了由于衍生所造成的测定误差,所以能更好地分析茶叶中氨基酸组成。
总的来说,氨基酸自动分析仪法结果准确,快速,但是仪器比较昂贵、试剂消耗较大。
3.2 高效液相色谱法(HPLC)此法的基本原理是利用预柱衍生试剂将氨基酸衍生为具有荧光性的衍生物,再通过检测器来测定氨基酸。
该技术的关键是选择有效的衍生试剂。
由于不同氨基酸的结构和化学性质有较大的差异,因此要定量制备适于荧光分析的所有氨基酸衍生物有一定困难。
70年代80年代初期较为普遍使用的衍生试剂为丹黄酰氯(DN S-CL)和邻苯二甲醛(O PA)[7],这2种方法各有不同的优缺点。
DN S-CL对胱氨酸及含胱氨酸短肽检测较好,缺点是衍生化的时间长,操作过程中应注意衍生产物严密避光,以消除紫外线的干扰[8];且当某一氨基酸的浓度较低时,不能有效进行衍生反应,从而使一些氨基酸的检测结果严重失真。
而O PA作为衍生试剂时,虽然衍生反应非常快速,但有较强的选择性,只能用于一级氨基酸的衍生,且衍生物的稳定性较差。
1983年,S.E inarsso n.L引入了氯甲酸芴甲脂(FM OC)预柱衍生试剂,此衍生剂的最大优点是一级和二级氨基酸均可有效地被衍生,衍生物有很强地萤光性和稳定性(在室温下能存放13天不被分解),同时在缓冲液衍生时间不到1分钟,过量地衍生试剂可用乙醚或戊烷去除,对测定无干扰[7]。
此法的缺点是:操作略繁,需用戊烷提取FM OC—AA,以避免自发性水解[8]。
随着氨基酸专用衍生剂和专用分析柱的发展, HPLC测定法发展很快。
其中AccQ.Tag方法是Waters公司1994年专为柱前衍生HPLC分析氨基酸而开发的创新方法,是目前最优秀的衍生剂。
因其具有衍生步骤简单、操作方便、生成的衍生物稳定等特点,得到广泛应用。
该法适应于氨基酸注射液、口服液及各种水解氨基酸样品的分析[9]。
朱旗,施兆鹏等人首次把此法应用于茶叶氨基酸的测定。
从其测定的图谱看,该方法能够较好地分离茶叶氨基酸组分,色谱图形较好。
但该方法有两个方面不同于氨基酸自动分析仪的分析结果。
一是氨基酸出峰顺序。
氨基酸自动分析仪分析茶叶氨基酸的出峰顺序为:天-苏-丝-谷-脯-甘-丙-半胱-缬-蛋-异亮-亮-酪-苯丙-赖-氨-组-精,而由AccQ. Tag法分析氨基酸的出峰顺序为:天-丝-谷-甘-组-精-苏-丙-脯-茶-胱-酪-缬-蛋-赖-异亮-亮-苯丙;二是氨基酸组分的含量有所不同,在AccQ.Tag方法的检测中,含量较高的五种氨基酸为:茶-蛋-谷-天-丝,而氨基酸自动分析仪的检测结果为:茶-谷-天-精-丝。
这种现象出现的具体原因还有待今后研究[10]。
陈悦娇等研究了邻苯二甲醛(O PA)衍生-荧光光度计测定游离氨基酸量的检测方法。
OPA在β-巯基乙醇(β-M C E)存在下与第一级氨基酸迅速反应生成1-硫代-2-烷基异吲哚,此生成物具有荧光,从而利用荧光光度法测定游离氨基酸含量。
其结果表明其相对荧光强度与浓度有较显著的线性关系,同时也有较好的精密度和准确性。
此法实验工艺条件简单,容易控制,灵敏度高。
但也存在一定的缺点:不能与带有仲胺基团的脯氨酸或羟脯氨酸反应,必要时需配合其它技术(如与FM OC等衍生剂连用)[11]。
此后,朱松,王洪新还研究了O PA柱前自动衍生-紫外检测茶氨酸的HPLC法。
条件为:Hy persil ODS C18柱,洗脱液为醋酸钠和甲醇混合液,剃度洗脱,检测波长338nm,茶氨酸在0.05~ 1.00mg/m l 范围内浓度与峰面积线性相关系数达到0.9998,平均回收率为98.5%。
该法处理简单、快速、定量准确和重复性好,对操作无特殊要求[12]。
随着检测器的发展和研究技术的进步,纷纷有研究者建立了不经衍生的HPLC测定茶氨酸的方法。
2005年,李银花,刘仲华等建立未衍生化高效液相色谱-蒸发光散射检测器(ELSD)测定茶叶中茶氨酸的方法。
ELSD是一种高灵敏,多用途的蒸发光64 茶 叶33卷散射检测器,它消除了溶剂的干扰和因温度变化引起的基线漂移,即使用梯度洗脱也不会产生基线漂移。
它的检测不依赖于样品分子中的官能团,只要其挥发性低于流动相的物质都可以测定。
克服了HPLC法常遇到的问题。
而且ELSD检测器的雾化器和漂移管易于清洗,死体积小,灵敏度高。
这种测定方法的色谱条件为:Polaris-C18(250mm×4.6 m m)色谱柱,含0.1%(体积分数)三氟乙酸的水和0.1%(体积分数)三氟乙酸的乙腈作梯度洗脱,流速0.5ml/min,蒸发光散射检测器为ELSD-2000。
测定结果:茶氨酸浓度在0.062~0.450mg/ml内,峰面积线性关系良好,均回收率为97.5%[13]。
2006年,施倩,陈林,张正竹等人又研究了光电二级管阵列检测器(PDAD)结合HPLC测定L-茶氨酸的方法。
PDAD是新近出现的一种光学多通道检测器,它可以对每个洗脱组分进行光谱扫描,经计算机处理后,得到光谱和色谱结合的三维图谱。
其中吸收光谱用于定性分析(确证是否是单一纯物质),色谱用于定量分析。
该方法常用于复杂样品(如生物样品、中草药)的定性定量分析。
实验者先利用PDAD 的检测特性,确定了茶氨酸的紫外吸收波长范围及最大吸收波长,然后以三氟乙酸水溶液为流动相,用C18柱,反相色谱柱进行分离,建立了6大茶类未衍生化L-茶氨酸的高效液相色谱分析方法。
结果表明, L-茶氨酸的紫外吸收波长范围在190~240nm之间,且在199nm具有最大吸收峰。
在0.02~ 1.00 m g/m l范围内,L-茶氨酸峰面积与浓度之间有良好的线性关系,相关系数r=0.9991[14]。
同年,唐仕荣,宋慧等人建立了一套快速、高效、准确的未衍生化分析茶氨酸的HPLC法。
该法以乙腈-磷酸水溶液作流动相,用C18反相柱分离,紫外检测器检测,样品不需要浓缩、富集等预处理,直接进样分析,茶氨酸的保留时间6.5min,与其他色谱峰分离良好,茶氨酸在0.02mg/ml~0.20mg/ml浓度范围内线性关系良好,相关系数r=0.9998,加样回收率为98.59%(n=5),检测重现性良好,定量准确[15]。