氨基酸的测定

质谱法测定氨基酸序列
质谱法是一种非常有效的分析方法，可以用于测定氨基酸序列。

下面是质谱法测定氨基酸序列的一般步骤：
1. 样品准备：将待测的蛋白质样品进行消化，将其降解为氨基酸序列。

常用的消化方法包括酸解、碱解和酶解等。

2. 样品纯化：将消化后的氨基酸序列进行纯化，去除其中的杂质，以便后续的质谱分析。

3. 质谱分析：将纯化的氨基酸序列进行质谱分析，得到每个氨基酸的质谱图。

质谱图可以反映每个氨基酸的特征离子峰，通过比对可以确定氨基酸的种类和顺序。

4. 数据处理：对得到的质谱数据进行处理和分析，确定氨基酸序列。

常用的数
据处理方法包括基线校正、背景消除、峰识别和定量分析等。

5. 氨基酸序列解析：根据处理后的数据，解析氨基酸序列。

常用的解析方法包括人工解析和计算机辅助解析等。

6. 结果验证：对解析后的氨基酸序列进行验证，确认其准确性和可靠性。

常用的验证方法包括比对数据库中的已知序列和进行生物学实验等。

质谱法是一种非常有效的测定氨基酸序列的方法，可以广泛应用于蛋白质组学、生物化学、生物制药等领域的研究。

食物中氨基酸的测定方法测定食物中的胱氨酸使用过甲酸氧化-氨基酸自动分析仪法，测定色氨酸使用荧光分光光度法，测定其它氨基酸使用氨基酸自动分析仪法。

一、氨基酸自动分析仪法1.原理食物蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后，与茚三酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。

一份水解液可同时测定天冬，苏，丝，谷，脯，甘，丙，缬，蛋，异亮，亮，酪，苯丙，组，赖和精氨酸等16种氨基酸，其最低检出限为10pmol。

2.适用范围GB/T14965-1994食物中氨基酸的测定方法。

本法适用于食物中的16种氨基酸的测定。

其最低检出限为10pmol。

本方法不适用于蛋白质含量低的水果、蔬菜、饮料和淀粉类食物的测定3.仪器和设备3.1真空泵3.2恒温干燥箱3.3水解管：耐压螺盖玻璃管或硬质玻璃管，体积20～30ml。

用去离子水冲洗干净并烘干。

3.4真空干燥器（温度可调节）3.5氨基酸自动分析仪。

4.试剂全部试剂除注明外均为分析纯，实验用水为去离子水。

4.1浓盐酸：优级纯4.26mol/L盐酸：浓盐酸与水1：1混合而成。

4.3苯酚：需重蒸馏。

4.4混合氨基酸标准液（仪器制造公司出售）：0.0025mol/L4.5缓冲液：4.5.1 pH2.2的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠（Na3C6H5O7.2H2O）和16.5ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至2.24.5.2 pH3.3的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和12ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节至pH至3.3。

4.5.3 pH4.0的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和9ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至4.0。

4.5.4 pH6.4的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和46.8g氯化钠（优级纯）加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至6.4。

氨基酸含量测定一、前言氨基酸是构成蛋白质必不可少的基本单位，对于食品、药物等行业来说，氨基酸含量的测定是一项重要的质量控制工作。

氨基酸含量测定可以用于判断蛋白质的含量、质量以及不同品种之间的比较等方面。

因此，本文旨在介绍氨基酸含量测定的原理、方法及其在实际应用中的应用。

二、原理氨基酸含量测定的原理是利用氨基酸的吸光度和该氨基酸与特定试剂的反应，通过测定吸收光度计的吸光度来计算氨基酸的含量。

一般常见的试剂为二氧化硫，根据氧化剂配合体法，氨基酸与二氧化硫反应生成配位物，该配位物具有明显的吸收峰，通过测定这个吸收峰的强度来计算氨基酸的含量。

三、方法1.试剂和仪器试剂：1) 二氧化硫（SO2）2) 酸性亚硫酸钠（NaHSO3）3) 酸性氯化亚铜（CuCl2）溶液4) 氢氧化钠（NaOH）仪器：1) UV-Visible分光光度计2) 恒温取样器3) 小型离心机2.操作步骤样品的制备：1) 将样品细碎并过筛，取适量的样品称入瓶中；2) 加入1ml 6M HCl和氧化氢，使样品完全溶解；3) 将样品续滴2M NaOH至pH7~7.5。

标准溶液制备：将前列腺酸溶液定为含有氨基酸100μg/ml的标准溶液，并用氢氧化钠调至pH7~7.5。

反应溶液的制备：1) 取1ml标准溶液，加入2ml0.1M NaHSO3溶液，均匀混合；2) 加入0.05ml 0.3% w/v CuCl2溶液，混合，并加入2ml3M NaOH；3) 用恒温取样器将反应溶液恒温于37℃。

反应光谱测定：1) 以反应溶液A0的吸光度为零点，在325nm波长处记录各个样品的吸光度；2) 在温度控制下，对反应溶液建立光谱，以每分钟一个波长的扫描模式记录吸光度；3) 在反应6~8分钟时，将反应液离心，将清液移出，并过滤。

数据处理：得到的吸光度值（A）除以样品的光程，得到透过率（T），以此计算出氨基酸的含量。

四、应用氨基酸含量测定对于食品、药物等行业的质量控制非常重要。

氨基酸测定方法一、引言氨基酸是构成蛋白质的基本单位，因此对于蛋白质的研究和分析，氨基酸的测定是非常重要的。

目前，常用的氨基酸测定方法主要有色氨酸法、二硫化物法、硫酸铜法、乙醇胺法、二甲基乙二胺法等。

本文将从样品处理、试剂配制、实验步骤和数据处理等方面详细介绍氨基酸测定方法。

二、样品处理1. 样品收集：选择适当的组织或液体样品进行采集，如血清、尿液等。

2. 样品预处理：根据不同样品特点进行预处理，如尿液中可加入少量硝酸使其变为无色透明状态。

3. 样品保存：在低温条件下保存样品以避免其蛋白质降解。

三、试剂配制1. 氢氧化钠溶液：取固体氢氧化钠加入去离子水中搅拌至完全溶解。

2. 硫代乙酰胺溶液：取固体硫代乙酰胺加入去离子水中搅拌至完全溶解。

3. 氨基酸标准溶液：将各种氨基酸按照一定比例加入去离子水中，调节pH值至7.0左右。

4. 还原剂：取固体羟肟酸钠加入去离子水中搅拌至完全溶解。

四、实验步骤1. 样品处理：取适量的样品加入硫代乙酰胺溶液中，混合均匀后放置于60℃恒温水浴中反应20分钟。

2. 加入还原剂：将还原剂加入反应体系中，混合均匀后再次放置于60℃恒温水浴中反应20分钟。

3. 加入氢氧化钠溶液：将氢氧化钠溶液加入反应体系中，混合均匀后放置于60℃恒温水浴中反应30分钟。

4. 加入试剂：取适量的氨基酸标准溶液和待测样品分别加入反应体系中，混合均匀后放置于室温下静置10分钟。

5. 测定吸光度：使用分光光度计在570nm波长下测定反应体系的吸光度值。

五、数据处理1. 绘制标准曲线：将不同浓度的氨基酸标准溶液分别测定吸光度值，绘制标准曲线。

2. 计算待测样品中氨基酸含量：根据待测样品的吸光度值和标准曲线计算其中氨基酸含量。

3. 数据统计分析：对实验数据进行统计分析，如平均值、方差等。

六、注意事项1. 实验过程中要注意卫生和安全，避免试剂进入眼睛和口腔。

2. 样品处理时要避免过度稀释或过度浓缩，以保证实验结果的准确性。

一、实验目的1. 了解氨基酸的基本性质和分类。

2. 掌握氨基酸的测定方法，包括茚三酮比色法和纸层析法。

3. 通过实验，学会运用化学分析方法测定氨基酸的含量。

二、实验原理氨基酸是构成蛋白质的基本单位，具有酸碱两性。

在酸性条件下，氨基酸可以与茚三酮反应生成紫色产物，通过比色法测定氨基酸含量。

纸层析法是一种分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，通过分析氨基酸在层析纸上的迁移距离，可以判断氨基酸的种类。

三、实验材料与仪器1. 试剂：茚三酮、氨基酸标准品、盐酸、无水乙醇等。

2. 仪器：分光光度计、电子天平、移液器、层析缸、层析滤纸等。

四、实验步骤1. 茚三酮比色法测定氨基酸含量（1）配制标准溶液：准确称取一定量的氨基酸标准品，用无水乙醇溶解，配制成一定浓度的标准溶液。

（2）样品处理：准确称取一定量的待测样品，用盐酸溶解，配制成一定浓度的样品溶液。

（3）反应：将标准溶液和样品溶液分别加入反应管中，加入等量的茚三酮，置于沸水浴中加热5分钟。

（4）比色：用分光光度计在570nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。

（5）计算：根据样品溶液的吸光度，从标准曲线上查得氨基酸含量。

2. 纸层析法分离氨基酸（1）点样：将标准氨基酸和待测样品分别点在层析滤纸的原点处。

（2）层析：将点样的滤纸放入层析缸中，加入适量层析溶剂，使溶剂前沿距离滤纸底部约2cm。

（3）观察：待溶剂前沿到达滤纸底部后，取出滤纸，晾干，观察氨基酸在滤纸上的迁移距离。

（4）分析：根据氨基酸在滤纸上的迁移距离，判断氨基酸的种类。

五、实验结果与分析1. 茚三酮比色法测定氨基酸含量通过实验，得到了标准曲线，根据样品溶液的吸光度，从标准曲线上查得氨基酸含量。

2. 纸层析法分离氨基酸通过实验，得到了标准氨基酸和待测样品在层析滤纸上的迁移距离，分析了氨基酸的种类。

六、实验总结1. 本实验成功掌握了氨基酸的测定方法，包括茚三酮比色法和纸层析法。

2. 通过实验，加深了对氨基酸性质和分类的认识。

4。

1 光度分析法［5] ［6]β-氨基丙酸和茚三酮溶液在弱酸的条件下可以生成蓝紫色物质[7]，其颜色深浅主要与β-氨基丙酸的浓度有关。

因此可利用此显色反应采用比色法定量测量β—氨基丙酸。

我在实验中发现很多因素如浓度、pH 值、反应温度、以及反应时间等对此显色反应有很大的影响.如忽视这些因素会使实验产生很大的误差.就此显色反应的最佳条件我做了初步的探究.4.1。

1试剂的配制：缓冲液的配制:配制pH= 6。

00的NaAc －HAc 缓冲溶液β—氨基丙酸标准溶液的配制：用电子天平准确称取1。

020 g β-氨基丙酸（生化纯）,溶于250ml pH=6.00缓冲溶液中，得到C = 4.080 g/L 标准溶液.茚三酮试剂的配制：称取0.5g 茚三酮溶于100ml 蒸馏水中,得到5g/L 的茚三酮水溶液。

4.1。

2标准曲线的确定分别准确移取0.30ml 、0。

40ml 、0。

50ml 、0.60ml 、0.70ml 、0。

80ml 、0.90ml 、1。

00ml 标准液于8个比色管中，用pH=6.00的缓冲溶液稀释到5.00ml 再加入1ml 茚三酮水溶液充分摇匀，将其放在沸水浴中加热10min 。

冷却到室温，用7230型分光光度计在569nm 下测其吸光度.以吸光度和浓度作一个标准曲线。

4。

1。

3样品的测定稀释待测液于0.24mg/ml-0.73mg/ml,调pH 值到6.00，以相同的反应条件，测其吸光值并与上面的标准曲线对照查出稀释液的浓度，再乘以稀释倍数即为β-氨基丙酸的浓度。

4.1.4 标准曲线的测定结果β-氨基丙酸浓度在0.24mg/ml —0.73mg/ml 范围内与茚三酮水溶液反应，颜色表现出由浅蓝到深蓝的递增变化。

用茚三酮比色法测得的一组数据得到的标准曲线如图1：吸光度加入标液体积(ml)图 1 标准曲线的测定Fig 1 Determination of the standard curve注:在沸水中加热10min ，β—氨基丙酸标准溶液5ml 、茚三酮水溶液1ml 、缓冲溶液pH=6.004.1。

氨基酸常用的检测方法和原理氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于研究蛋白质结构和功能具有重要意义。

因此，准确、快速地检测氨基酸的方法和原理是科学研究和实际应用中的关键问题之一。

本文将介绍几种常用的氨基酸检测方法及其原理。

一、纸层析法纸层析法是一种简单、快速的氨基酸检测方法。

其原理是根据氨基酸在纸上的迁移速度差异来分离和检测氨基酸。

首先，将待测样品与色谱溶剂混合，然后将混合液滴在纸上，待溶剂上升至一定高度后，根据不同氨基酸的迁移距离和颜色变化，可以判断样品中是否含有特定的氨基酸。

二、高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是一种精确、灵敏的氨基酸检测方法。

其原理是利用氨基酸在液相中的分配系数差异来实现分离和检测。

首先，将待测样品通过色谱柱进行分离，然后通过检测器检测样品中各种氨基酸的浓度。

由于不同氨基酸的分配系数不同，它们在色谱柱中的停留时间也不同，从而实现了氨基酸的分离和检测。

三、毛细管电泳法毛细管电泳法是一种高效、快速的氨基酸检测方法。

其原理是利用氨基酸在电场作用下在毛细管中的迁移速度差异来实现分离和检测。

首先，将待测样品注入毛细管中，然后施加电场，通过检测器检测样品中各种氨基酸的浓度。

由于不同氨基酸的电荷性质和大小不同，它们在电场作用下的迁移速度也不同，从而实现了氨基酸的分离和检测。

四、质谱法质谱法是一种高精确度、高灵敏度的氨基酸检测方法。

其原理是利用氨基酸分子在质谱仪中的质量-电荷比差异来实现分离和检测。

首先，将待测样品通过质谱仪进行分离，然后通过检测器检测样品中各种氨基酸的质量-电荷比。

由于不同氨基酸的分子量不同，它们在质谱仪中的质量-电荷比也不同，从而实现了氨基酸的分离和检测。

纸层析法、高效液相色谱法、毛细管电泳法和质谱法是常用的氨基酸检测方法。

每种方法都有其独特的原理和优势，可以根据实际需要选择合适的方法进行氨基酸的检测。

这些方法的应用不仅在科学研究中具有重要意义，也在食品、医药等领域有着广泛的应用前景。

氨基酸总量测定方法咱今儿就来讲讲氨基酸总量测定方法，这可是个很有意思的事儿呢！你想想啊，氨基酸就像是我们身体里的小宝贝，它们的数量和状态对我们可重要啦！要说测定氨基酸总量，那方法可不少呢。

就好像我们要去一个地方，有好多条路可以走。

比如说茚三酮比色法，这就像是走一条大家都比较熟悉的大道，可靠又实用。

把样品和茚三酮试剂一混合，经过一系列反应，就能通过颜色的变化来大致知道氨基酸的量啦。

这多神奇呀！还有甲醛滴定法，这就好比是找到了一个特别的窍门。

利用甲醛和氨基酸的反应，然后通过滴定来确定数量。

是不是感觉很有意思呢？就像解开一个小小的谜题。

再说说电位滴定法吧，这就像是有个特别精准的仪器在帮我们把关，能非常准确地测量出氨基酸的量呢。

那我们在实际操作的时候可得注意一些小细节哦！就像做饭要掌握好火候一样，不能马虎。

比如试剂的选择，一定要挑质量好的呀，不然怎么能得出准确的结果呢？还有操作步骤，一步都不能错哦，不然就像走在路上迷路了一样。

你说，要是我们不认真对待这些方法，那不是就像闭着眼睛走路吗？能走到目的地才怪呢！所以呀，我们得好好琢磨这些方法，就像对待宝贝一样。

在测定的过程中，每一个环节都很关键呢。

从样品的处理到最后的数据分析，都需要我们细心再细心。

这可不是闹着玩的事儿呀！而且呀，不同的样品可能需要不同的方法来测定氨基酸总量呢。

这就好像不同的人穿不同的衣服才合适一样。

你总不能给一个大人穿小孩的衣服吧？总之呢，氨基酸总量测定方法是个很有学问的事儿，我们可得好好研究研究。

只有这样，我们才能真正了解氨基酸的奥秘，才能更好地为我们的健康服务呀！这可不是开玩笑的哦！。

氨基酸测定方法一、引言氨基酸是构成蛋白质的基本组成单位，对于生命体的生长和发育起着重要的作用。

因此，准确测定氨基酸的含量和组成对于研究蛋白质结构和功能具有重要意义。

本文将介绍一些常用的氨基酸测定方法，包括色谱法、光谱法和化学法等。

二、色谱法测定氨基酸2.1 气相色谱法气相色谱法是测定氨基酸含量和组成的常用方法之一。

该方法通过将氨基酸样品转化为易挥发的衍生物，然后使用气相色谱仪进行分析。

气相色谱法具有分离效果好、灵敏度高和操作简便等优点。

2.1.1 衍生化反应在气相色谱法中，常用的氨基酸衍生化反应包括酯化、酰化和取代反应等。

这些反应能够将氨基酸转化为易挥发的衍生物，便于后续的气相色谱分析。

2.1.2 气相色谱仪气相色谱仪是进行气相色谱分析的关键设备。

它由进样系统、色谱柱和检测器等部分组成。

进样系统用于将样品引入色谱柱，色谱柱用于分离氨基酸衍生物，检测器用于检测分离后的化合物。

2.2 液相色谱法液相色谱法也是测定氨基酸含量和组成的常用方法之一。

该方法通过将氨基酸样品溶解在溶剂中，然后使用液相色谱仪进行分析。

液相色谱法具有分离效果好、灵敏度高和选择性强等优点。

2.2.1 色谱柱选择在液相色谱法中，选择合适的色谱柱对于分离氨基酸非常重要。

常用的色谱柱包括离子交换柱、反相柱和手性柱等。

不同的色谱柱具有不同的分离机理和选择性，可以根据需要选择合适的色谱柱。

2.2.2 梯度洗脱条件在液相色谱法中，通过调整洗脱溶剂的组成和流速等参数，可以实现对氨基酸的有效分离。

梯度洗脱条件可以根据氨基酸的亲水性和极性等特性进行优化。

三、光谱法测定氨基酸3.1 紫外-可见光谱法紫外-可见光谱法是测定氨基酸含量和组成的常用方法之一。

该方法通过测量氨基酸在紫外-可见光波段的吸收特性，来推断其含量和组成。

紫外-可见光谱法具有操作简便、灵敏度高和选择性强等优点。

3.1.1 吸收峰特征不同氨基酸在紫外-可见光谱中具有不同的吸收峰特征。

通过测量氨基酸的吸收峰强度和位置，可以推断其含量和组成。

肥料中氨基酸的测定方法
肥料中氨基酸的测定方法主要有酸水解法、碱水解法、酸提取法等。

1. 酸水解法：分为常规水解法和氧化水解法。

常规水解法适用于检测除含硫氨基酸（如胱氨酸、蛋氨酸等）以外的蛋白水解氨基酸；氧化水解法以偏重亚硫酸钠为氧化终止剂来检测除酪氨酸以外的蛋白水解氨基酸。

另外，以氢溴酸作为终止剂时，可以检测除酪氨酸、苯丙胺细算和组氨酸以外的蛋白水解氨基酸。

2. 碱水解法：只适用于检测色氨酸。

3. 酸提取法：用于检测游离氨基酸、赖氨酸、蛋氨酸含量。

4. 利用反相液相色谱法来检测饲料中氨基酸含量也逐渐成为普通手段。

5. 其他化学方法如2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS法）、1-氟-2，4-二硝基苯法（FDNB法）、2-氯-3，5-二硝基吡啶法（CNPY法）等也可用于测定赖氨酸。

6. 染料结合法可用于测定样品中蛋白质的碱性氨基酸，包括赖氨酸、精氨酸和组氨酸。

如果先将样品用丙酸酐处理，丙酸酐便将赖氨酸的-NH2的酰化掩蔽，使其失去了和染料结合的能力。

然后分别测定酰化前后的DBC值，计算出差值就可得到赖氨酸的含量。

不同方法的适用范围不同，测定结果可能因具体方法而有所差异。

实际操作中，应根据具体情况选择合适的方法进行测定。

氨基酸定量测定的方法氨基酸定量测定有好几种超酷的方法呢。

茚三酮比色法，这方法步骤挺有趣的。

先把含有氨基酸的样品处理好，让它变成适合测定的状态，就像给它梳妆打扮一番似的。

然后加入茚三酮试剂，在特定的温度和时间下反应。

反应完了，就可以用比色计来测定吸光度啦。

这过程中要特别注意温度和反应时间哦，稍有偏差，就像厨师做菜火候没掌握好一样，结果可能就差之千里了。

在安全性方面，茚三酮试剂本身没有特别大的危险，只要正常操作就好，稳定性呢，只要按照规定的条件来，还是比较可靠的。

它的应用场景可广了，在食品检测中经常用到，能快速知道食品中氨基酸的含量。

优势就是操作相对简单，设备要求也不是特别高。

比如说在检测牛奶中的氨基酸含量时，能很快得出大概的结果，这对保证牛奶的质量多重要啊！难道你不觉得这很厉害吗？高效液相色谱法（HPLC）也是个很牛的方法。

要先把氨基酸进行衍生化处理，这一步就像给氨基酸穿上一件特殊的衣服，方便后续检测。

然后把处理好的样品注入高效液相色谱仪，设定好各种参数，像流速、柱温这些。

这时候仪器就开始工作啦，把不同的氨基酸分离开来并进行定量。

这里面的注意事项可不少呢，衍生化试剂的选择和操作一定要谨慎，不然就可能搞砸整个实验。

从安全性来讲，一些衍生化试剂可能有点小危险，要小心使用，就像走钢丝一样得小心翼翼。

稳定性方面，只要仪器正常运行，数据的稳定性还是不错的。

在生物制药领域，HPLC可是大显身手，能精确测定药物中的氨基酸组成。

它的优势就是准确性高，就像神枪手打靶一样准。

拿一种新型的生物药来说，用HPLC测定其中的氨基酸含量，能保证药物的质量和效果，这多棒啊！还有氨基酸分析仪法。

这方法专门针对氨基酸测定设计的呢。

把样品处理好后直接放进氨基酸分析仪。

分析仪就像一个超级侦探，能把各种氨基酸都找出来并定量。

操作过程中要保证样品的纯净度，要是样品里有杂质，就像沙子混进米饭里一样讨厌。

安全性上，只要按照操作规程来，没有太大问题。

氨基酸的含量测定方法
氨基酸的含量可以用不同的方法进行测定，以下是其中几种常用的方法：
1. 紫外吸收法（UV法）：氨基酸分子中存在芳香族环和烯烃键，可以吸收紫外光，根据吸收的强度来确定氨基酸的浓度。

2. 高效液相色谱法（HPLC法）：这是一种常用的测定氨基酸含量的方法，通过将样品中的氨基酸溶解后注入液相色谱仪中，利用氨基酸在不同条件下的保留时间和峰面积来测定其含量。

3. 伯里特法：伯里特试剂能与氨基酸发生比色反应，该方法适用于测定含有酪蛋白、皮质素等色泽较重的氨基酸的含量。

4. 显色法：该方法将氨基酸和特定试剂反应，生成显色产物，根据产物的颜色深浅来测定氨基酸含量。

常用的显色试剂有二。

蛋白质与氨基酸的测定
蛋白质测定可以采用以下方法：
1. 比色法：常用的比色剂有布鲁姆甘蓝G、伯胺蓝、硫酸铜-法明斯试剂等。

比色法的原理是蛋白质与比色剂形成复合物，复合物的颜色与蛋白质的含量成正比。

2. 生物学方法：通过测定蛋白质在生物体中所起的生物学作用，如酶活性、免疫反应等来定量测定蛋白质的含量。

3. 尿素-二元酸法：通过加入细胞膜清洗液中的尿素和二元酸，并利用这两种化合物对蛋白质的溶解性，然后根据其溶解度定量测定蛋白质的含量。

氨基酸的测定可以采用以下方法：
1. 比色法：在酸性条件下，氨基酸与2,4-二硝基苯肼、2,4-二硝基苯胺等发生磺酰化反应，形成淡棕色的产物，比色法根据产物的吸光度来定量测定氨基酸的含量。

2. 二级结构破坏法：通过加热和高浓度酸的处理，使蛋白质的二级结构破坏，进而测定其中的氨基酸含量。

3. 比重法：在油水分离流程中，用比重法分离出有机相，然后加入酸性溶液，
氨基酸与酸反应，形成有颜色的产物，根据产物的吸光度来定量测定氨基酸的含量。

氨基酸总量(氨态氮)的测定（甲醛滴定法）一、单指示剂甲醛滴定法：(一)原理：氨基酸具有酸、碱两重性质，因为氨基酸含有-COOH 基显示酸性，又含有-NH2基显示碱性。

由于这二个基的相互作用，使氨基酸成为中性的内盐。

当加入甲醛溶液时，-NH2与甲醛结合，其碱性消失，破坏内盐的存在，就可用碱来滴定-COOH基，以间接方法测定氨基酸的量，反应式可能以下面三种形式存在。

（二）试剂(1) 40%中性甲醛溶液(2) 0.1%麝香草酚酞乙醇溶液。

(3) 0.100N氢氧化钠标准溶液。

(三)操作步骤：称取一定量样品(约含20毫克左右的氨基酸)于烧杯中(如为固体加水50毫升)，加2-3滴指示剂，用0.100N NaOH溶液滴定至淡蓝色。

加入中性甲醛20毫升，摇匀，静置1分钟，此时蓝色应消失。

再用0.100N NaOH溶液滴定至淡蓝色。

记录两次滴定所消耗的碱液毫升数，用下述公式计算计算：氨基酸态氮(％)=( N V×0.014×100)/W式中：N：NaOH标准溶液当量浓渡。

V：NaOH标准溶液消耗的总量(m1)W：样品溶液相当样品重量(克)。

0.014：氮的毫克当量。

三、双指示剂甲醛滴定法：(一)原理：与单色法相同，只是在此法中使用了两种指示剂。

从分析结果看，双指示剂甲醛滴定法与亚硝酸氮气容量法(此法操作复杂，不作介绍)相近单色滴定法稍偏低，主要因为单指示剂甲醛滴定法是以氨基酸溶液PH值作为麝香草酚酞的终点。

PH值在9.2，而双指示剂是以氨基酸溶液的PH值作为中性红的终点，PH值为7.0，从理论计算看，双色滴定法较为准确。

(二)试剂：(1) 40%中性甲醛溶液(2) 0.1%麝香草酚酞乙醇溶液。

(3) 0.100N氢氧化钠标准溶液。

(4) 0.1%中性红(50%乙醇溶液)(三)操作步骤：取相同的两份样品，分别注入100毫升三角烧瓶中，一份加入中性红指示剂2-3滴，用0.100N NaOH溶液滴定终点(由红变琥珀色)，记录用量，另一份加入麝香草酚酞3滴和中性甲醛20毫升，摇匀，以0.100N NaOH准溶液滴定至淡蓝色。