低渗溶液配制方法

人的外周血淋巴细胞培养及染色体制片方法、染色体组型分析一、实验背景1、Carnoy固定液：固定液的重要特性是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还要能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。

单纯的固定液一般难以达到这些要求，因此在实验中使用两种混合的固定液。

由于Carnoy首先使用的甲醇和冰乙酸混合液而称其为卡诺氏固定液。

Carnoy固定液（甲醇∶冰乙酸=3∶1）每次使用前需临时配制，长时间放置影响固定效果，固定时间15min至24h，冰箱、室温均可。

必要时可改变甲醇和冰乙酸的比例，冰乙酸比例增加，利于细胞膨胀、染色体铺展，但易导致细胞破裂、染色体散失。

2、低渗液（hypotonic solution）低渗液是指渗透压和离子强度均低于正常细胞生理条件的溶液，渗透压低于组织液，与外周血混在一起时，水分迅速进入细胞，使其膨胀，甚至破裂，获得分散良好的染色体分裂象。

常见的低渗液：水、低渗的柠檬酸钠或氯化钠、甘油磷酸钾（0.65mol/L）、氯化钾（0.075mol/L）等。

低渗效果取决于低渗液的化学组成、低渗的温度和处理时间。

低渗处理是凭借反渗透作用使细胞膨胀染色体铺展，同时可使黏附于染色体的核仁物质散开，以便能在一个平面上观察所有染色体形态。

实验室中一般选用0.075mol/L KCl为低渗液，其优点有：①染色体轮廓清楚，可染色性强，染色时间短。

②用于显带染色时能充分显示带型特点。

低渗处理为37℃，25～30min，以预实验条件为准。

2、肝素N-硫酸和艾杜糖醛酸含量较多的一种糖胺聚糖，由D-β-葡糖醛酸(或L-α-艾杜糖醛酸)和N-乙酰氨基葡糖形成重复二糖单位组成的多糖。

肝素是一种抗凝剂，是由二种多糖交替连接而成的多聚体，在体内外都有抗凝血作用。

2、PHA植物血凝素(Phytohaemagglutinin)是一种有丝分裂原，主要用于激活免疫细胞—淋巴细胞。

是一种干扰素诱导剂，不仅可以刺激机体产生白介素-2和干扰素；还可以刺激机体产生非特异性抗体。

一、如何配制1.4%NaHCO3溶液(NaHCO3溶液用SB液表示，葡萄液用GS表示)市场上卖的是5%NaHCO3溶液，而经常使用的是1.4%NaHCO3溶液，采用5%或10%GS 来稀释5%SB成为1.4%SB，下面我们计算一下它们之间(5%SB、5%或10%GS及1.4%SB)的关系：首先，我们把5%SB、1.4%SB及5%或10%GS的密度看成与水的密度一样大，即为1g/ml我们设5%SB为Xml，设5%或10%GS为Yml，那么稀释成的1.4%SB则为（X+Y）ml 依据溶液稀释溶质不变的原则，我们可以列出一个等式：X×5%=（X+Y）×1.4%即为X+Y/X=5%/1.4，我们可以算一下5%除以1.4%等于3.5~3.6之间，为了方便计算，我们取3.5X+Y/X=3.5，那么Y=2.5X根据以上关系，5%SB、5%或10%GS及1.4%SB的比例关系是1 : 2.5 : 3.5例1：有10ml的5%SB，加多少5%或10%GS成为1.4%SB，根据以上的关系加入25ml 的5%或10%GS,即可例2：配制2：1液200ml（如在小儿腹泻中重度脱水小儿应先给予2：1液20ml/Kg，其主要的目的是扩容纠酸）2：1液的组成是2份的0.9%NaCl与1份的1.4%SB那么0.9%NaCl为200ml × 2/3=133ml（为了方便配制取为130ml）1.4%SB为200ml × 1/3=67ml（为了方便配制取为70ml）下面还要配制1.4%SB70ml(采用5%或10%GS来稀释5%SB成为1.4%SB)这个就用到我们上面所讲的，即1.4%SB70ml，需要5%或10%GS（70ml× 2.5/3.5=50ml）、5%SB(70ml× 1/3.5=20ml)成为1.4%SB70ml二、如何配制KCl的量，即保证溶液中的KCl的浓度不能超过0.3%我们来算一下100ml中液体中加入多少ml的10%KCl(注意市场上大多是10%KCL,但是也有15%KCl)，能保证其浓度不超过0.3%与上面的例子一样，我们均把液体的密度看成与水的密度一样大小为1g/ml我们设加入Xml的10%KCl10%X下面我们可以列出一个不等式，即为（100+X）< 0.3%即X<3.092783也就是说如果我们取上面的数值的话的,那么这个100ml溶液中KCl的浓度等于0.3%而3与上面的数值非常相近基本接近于KCl的浓度为0.3%所以我们只需要记住100ml溶液中最多只能加入3ml的10%kCl三、液体的张力的计算：我们把0.9%NaCl、1.4%SB、1.87%的乳酸钠（很少用到）以及0.9%氯化铵（很少用到）的张力计为１（即为等张液），而5%或10%GS虽然是等渗液，但是在体内经过分解为CO2与H2O，所以属于无张力液体。

1、计算补液总量：轻度脱水：90-120ml/kg;中度脱水：120-150ml/kg;重度脱水:150- 180ml/kg.2、补充低渗性脱水累积损失量：用2/3张的4：3：2液（4份盐：3份糖：2份碱）3、补充等滲性脱水累积损失量、补充各种脱水继续损失量与生理需要量：用1/2张的3：2：1液（3份糖：2份盐：1份碱）4、记住——盐：碱始终为2：1(这里―碱‖指的是1.4%SB)这样一来才与血浆中的钠氯之比相近，以免输注过多使血氯过高。

糖为5%-10%的GS，盐为NS（0.9%NaCl）,碱为5%NaHCO3(稀释为1.4%NaHCO3方法：5%碱量除以4，剩下的用糖补足。

例如：100ml5%碱稀释为1.4%碱：100/4=25，100-25=75，即为25ml5%碱+75ml糖)5、补钾：每100ml液体量中10%KCl总量不超过3ml,使钾浓度小于千分之三。

6、扩容：2：1等张含钠液（2份盐：1份碱）按20ml/kg计算，30分钟内滴完。

7、累积损失量在第一个8小时补足，为1/2总量。

液体疗法基本原则―一、二、三、四‖·一个计划一个24小时计划·二个步骤补充累积损失量，维持补液。

·三个确定定量，定性，定速度和步骤。

·四句话先快后慢，先盐后糖，见尿补钾，随时调整。

注射用水是禁忌直接由静脉输入的，因其无渗透张力，输入静脉可使RBC膨胀、破裂，引起急性溶血。

（1）非电解质溶液：常用的有5％GS和10％GS，主要供给水分（由呼吸、皮肤所蒸发的（不显性丢失）及排尿丢失的）和供应部分热量，并可纠正体液高渗状态，但不能用其补充体液丢失。

5％GS为等渗溶液，10％GS为高渗溶液，但输入体内后不久葡萄糖被氧化成二氧化碳和水，同时供给能量，或转变成糖原储存于肝、肌细胞内，不起到维持血浆渗透压作用。

（注：10％GS 比5％GS供给更多热量，虽其渗透压比5%GS高1倍，如由静脉缓慢滴入，Glucose迅速被血液稀释,并被代谢，其效果基本与5％GS 类似。

红细胞渗透脆性试验[实验目的]：学习测定红细胞渗透脆性的方法[实验原理]：将红细胞放置于等渗溶液中，红细胞的形态不发生改变。

放置于高渗和低渗盐溶液中红细胞的形态均出现改变，置于高渗液中，红细胞出现皱缩；置于低渗液中则发生膨胀，最后破裂，细胞内容物溢入血浆或溶液，这种现象称为溶血。

将血液滴入不同浓度的低渗盐溶液中，可以检查红细胞对低渗溶液的抵抗力。

开始出现溶血现象的低渗盐溶液浓度，为该血液红细胞的最小抵抗力（约0.40%~0.45%NaCl 溶液），而完全溶血则为该血液红细胞的最大抵抗力（约0.30%~-0.45%NaCl溶液）。

对低渗盐溶液的抵抗力小表示红细胞的脆性大，反之表示脆性小，最大抵抗力到最小抵抗力的范围，称脆性范围。

[实验对象]家兔[实验器材]试管架、5 ml试管十支、2 ml吸管两支、注射器、1%NaCl溶液、蒸馏水、枸椽酸钠。

[实验步骤]（一）低渗盐溶液的配制取试管十支，洗净烤干，用玻璃铅笔编号，排在试管架上，参照下表向各试管中加入1%NaCl溶液，然后再加入蒸馏水，每管溶液均2 ml。

试管号1 2 3 4 5 6 7 8 9 10试管蒸馏水（ml）0.60 0.70 0.80 0.90 1.00 1.10 1.20 1.30 1.40 1.50 NaCl浓度（%）0.70 0.65 0.60 0.55 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25（二）枸椽酸钠血的制备家兔颈部解剖，剥离颈总动脉，插管，将血放入烧杯内，烧杯内事先加入3.8%枸椽酸钠溶液，血与枸椽酸钠溶液的比例为9:1，轻摇烧杯使之混匀。

[观察项目]用注射器向每个试管内加入兔血一滴，用拇指堵住试管口，将试管颠倒2~3次（不要用力振荡以免溶血），在室温下静置1小时，然后观察各试管的透明度以判断是否溶血。

1、试管内下层为混浊红色，上层为无色或淡黄色液体，说明红细胞尚未破坏。

2、试管内下层为混浊红色，上层为透明淡红色，则表明红细胞部分溶解，才出现溶血的低渗盐溶液的浓度，为红细胞的最小抵力（最大脆性）。

制备减数分裂细胞标本低渗处理的操作步骤制备减数分裂细胞标本低渗处理的操作步骤引言：减数分裂是生物体繁殖中一种重要的细胞分裂方式，用于有性生殖的过程中。

为了研究减数分裂的机制和过程，科学家需要制备高质量的减数分裂细胞标本。

在制备减数分裂细胞标本时，低渗处理是一个关键步骤，它可以帮助保持细胞形态和结构的完整性。

下面将详细介绍制备减数分裂细胞标本低渗处理的操作步骤。

一、材料准备1. 细胞培养基：根据实验需要选择适当的培养基，如DMEM或RPMI-1640等。

2. 10% PBS：将PBS溶液稀释至10%浓度。

3. 磷酸缓冲液（PB）：配制1M磷酸二氢钾（KH2PO4）和1M磷酸二氢钠（Na2HPO4）溶液，并按比例混合得到pH为7.4的PB缓冲液。

4. 0.25% 吡啶蓝溶液：将0.25g吡啶蓝溶解在100ml PB缓冲液中。

5. 2% 钾氯化铷（KCl）溶液：将2g KCl溶解在100ml去离子水中。

二、细胞处理1. 细胞收集：将培养皿中的细胞用PBS洗涤一次，然后加入足够的PBS悬浮细胞。

2. 离心：将细胞悬液转移到离心管中，并以1000rpm的速度离心5分钟，倒掉上清液。

3. 固定：用10% PBS缓冲液固定细胞，将固定液滴加到细胞沉淀上，轻轻混匀，静置15分钟。

4. 再次离心：以相同的速度和时间离心，倒掉上清液。

三、低渗处理1. 加入低渗处理缓冲液：向沉淀中加入足够的0.25% 吡啶蓝溶液，使其完全浸泡细胞沉淀。

2. 低渗处理时间：根据实验需要和样本类型确定低渗处理时间。

通常情况下，10-30分钟的低渗处理时间足够保持细胞形态和结构的完整性。

3. 再次离心：以相同的速度和时间离心，倒掉上清液。

四、细胞固定1. 加入固定液：向沉淀中加入足够的2% KCl溶液，使其完全浸泡细胞沉淀。

2. 固定时间：根据实验需要和样本类型确定固定时间。

通常情况下，10-30分钟的固定时间足够保持细胞形态和结构的完整性。

液体张力计算血液作为一种特殊溶液也有一定的渗透压，通常正常值为：280 - - 320m0Sm / L 。

也就是血浆中的溶质摩尔浓度的总合。

任何溶液有一定的浓度就有一定的渗透压，相对于血液比较，高于血浆渗透压的就叫高渗溶液，低于者就叫低渗溶液，在血浆渗透压正常值范围内的当然就是等渗溶液。

任何溶液在进入血液时都要求是等渗的，比如：0 . 9 ％盐水、1 . 4 ％碳酸氢钠、1 . 2 ％氯化钾、5 ％葡萄糖等等。

但是并不是所有的溶液进入血液中都能够维持住本身的渗透压，比如葡萄糖进入体内后很快被代谢掉，渗透压就消失了。

这就引出一个概念：液体的张力。

液体的张力是指溶液进入到体内后能够维持渗透压的能力。

比如 5 ％葡萄糖25Oml + 0 . 9 ％盐水25Oml ，共计5OOml ，我们叫对半液5OOml ，输液之前是等渗溶液，输到体内后葡萄糖被代谢，仅有0 . 9 % 盐水250ml 维持渗透压，所以说对半液是1 / 2 张力液。

就不一一列举了。

0 . 9 ％盐水、1 . 4 ％碳酸氢钠、1 .2 ％氯化钾、5 ％葡萄糖等上述四种液体是我们补液的常用液体，只有葡萄糖被代谢，所以不含张力常用的混合溶液有下列几种：(1)1：1液：是5%葡萄糖溶液1份与0.9%氯化钠1份的混合溶液，其渗透压约为血浆的一半，即1/2张，适合于对单纯性呕吐和继续丢失液量的液体补充。

简便配制方法可用5%葡萄糖500ml加入10%氯化钠溶液20ml即可。

(2)3：2：1液：即3份10%葡萄糖溶液、2份0.9%氯化钠溶液及1份1.87%乳酸钠(或1.4%碳酸氢钠)溶液的混合溶液。

其简单配制方法为：5%葡萄糖溶液500ml加入10%氯化钠溶液15ml及11.2%乳酸钠溶液15ml(5%碳酸氢钠溶液24m)，其张力为1/2张。

(3)3：4：2液(有的单位将混合液的顺序变动为4：3：2溶液)：是3 份10%葡萄糖溶液、4份0.9%氯化钠溶液及2份1.87%(1/6克分子)乳酸钠溶液(或1.4%碳酸氢钠溶液)的混合溶液，总份数为9，其中电解质(有渗透压作用的)占6份，所以是6/9张，简化为2/3张(约相当于血浆渗透压的2/3，即2/3张)。

红细胞渗透脆性试验[实验目的]：学习测定红细胞渗透脆性的方法[实验原理]：将红细胞放置于等渗溶液中，红细胞的形态不发生改变。

放置于高渗和低渗盐溶液中红细胞的形态均出现改变，置于高渗液中，红细胞出现皱缩；置于低渗液中则发生膨胀，最后破裂，细胞内容物溢入血浆或溶液，这种现象称为溶血。

将血液滴入不同浓度的低渗盐溶液中，可以检查红细胞对低渗溶液的抵抗力。

开始出现溶血现象的低渗盐溶液浓度，为该血液红细胞的最小抵抗力（约0.40%~0.45%NaCl 溶液），而完全溶血则为该血液红细胞的最大抵抗力（约0.30%~-0.45%NaCl溶液）。

对低渗盐溶液的抵抗力小表示红细胞的脆性大，反之表示脆性小，最大抵抗力到最小抵抗力的范围，称脆性范围。

[实验对象]家兔[实验器材]试管架、5 ml试管十支、2 ml吸管两支、注射器、1%NaCl溶液、蒸馏水、枸椽酸钠。

[实验步骤]（一）低渗盐溶液的配制取试管十支，洗净烤干，用玻璃铅笔编号，排在试管架上，参照下表向各试管中加入1%NaCl溶液，然后再加入蒸馏水，每管溶液均2 ml。

蒸馏水（ml）0.60 0.70 0.80 0.90 1.00 1.10 1.20 1.30 1.40 1.50 NaCl浓度（%）0.70 0.65 0.60 0.55 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25（二）枸椽酸钠血的制备家兔颈部解剖，剥离颈总动脉，插管，将血放入烧杯内，烧杯内事先加入3.8%枸椽酸钠溶液，血与枸椽酸钠溶液的比例为9:1，轻摇烧杯使之混匀。

[观察项目]用注射器向每个试管内加入兔血一滴，用拇指堵住试管口，将试管颠倒2~3次（不要用力振荡以免溶血），在室温下静置1小时，然后观察各试管的透明度以判断是否溶血。

1、试管内下层为混浊红色，上层为无色或淡黄色液体，说明红细胞尚未破坏。

2、试管内下层为混浊红色，上层为透明淡红色，则表明红细胞部分溶解，才出现溶血的低渗盐溶液的浓度，为红细胞的最小抵力（最大脆性）。

1. 了解渗透脆性实验的原理和操作方法；2. 掌握渗透脆性实验在临床医学中的应用；3. 通过实验观察不同浓度低渗溶液对红细胞渗透脆性的影响。

二、实验原理渗透脆性实验是检测红细胞对不同浓度低渗溶液的抵抗力，即红细胞的渗透脆性。

在低渗盐溶液中，水分子通过渗透作用进入红细胞，导致红细胞膨胀、破裂，最终发生溶血。

红细胞的渗透脆性越高，其抵抗力越低，越容易发生溶血。

三、实验材料与仪器1. 材料：新鲜血液、生理盐水、不同浓度的低渗溶液（如0.9%、0.7%、0.6%氯化钠溶液）、试管、试管架、离心机、滴管、移液器等；2. 仪器：显微镜、恒温水浴箱、电子天平、计时器等。

四、实验步骤1. 配制不同浓度的低渗溶液：取生理盐水，分别加入一定量的氯化钠，配制成0.9%、0.7%、0.6%的氯化钠溶液；2. 制备红细胞悬液：取新鲜血液，加入适量的生理盐水，混匀后离心，取上清液即为红细胞悬液；3. 将红细胞悬液分别加入不同浓度的低渗溶液中，每管1ml；4. 将试管置于37℃恒温水浴箱中孵育2小时；5. 取出试管，观察红细胞溶血情况，记录溶血开始和完全溶血时的氯化钠浓度；6. 重复实验，取平均值。

五、实验结果1. 在0.9%氯化钠溶液中，红细胞未发生溶血；2. 在0.7%氯化钠溶液中，红细胞开始溶血，溶血开始浓度为0.7%；3. 在0.6%氯化钠溶液中，红细胞完全溶血，溶血完全浓度为0.6%。

根据实验结果，可以得出以下结论：1. 红细胞在低渗盐溶液中，随着氯化钠浓度的降低，其渗透脆性逐渐增加；2. 在0.7%氯化钠溶液中，红细胞开始溶血，说明该溶液为红细胞的最小抵抗力；3. 在0.6%氯化钠溶液中，红细胞完全溶血，说明该溶液为红细胞的最大抵抗力。

七、实验讨论1. 渗透脆性实验在临床医学中具有重要的应用价值，可以用于检测和诊断某些溶血性疾病，如遗传性球形细胞增多症、自身免疫性溶血性贫血等；2. 本实验结果与理论相符，说明实验方法可靠；3. 实验过程中，应注意操作规范，避免人为误差。

常规补液常识制定补液计划应考虑三个基本问题：1、补多少2、补什么3、怎么补补液呈现疗效的标志：口渴减轻，神色转佳，生命体征平稳，尿量增多，浅静脉充盈及皮肤弹性改善。

24小时内补液内容包括1、每日生理需要量2、额外损失量（全部补充）3、已丧失量（先补计算量的1/2）4、纠正酸碱平衡失调5、补钾临床常用的液体1、等渗溶液：（1）5％GNS（含5％葡萄糖，含0.9％NaCl）（2）0.9％NaCl（NS）（3）平衡盐溶液：1.86％乳酸钠和复方氯化钠溶液（1：2配制）2、葡萄糖水：（1）5％GS （2）10％GS（3）25％GS （4）50％GS补液计算方法1、每日生理需要量：5％ GNS 500ml5－10％ GS 1500ml10％KCl 30ml2、额外损失量：（应从入院后计算，全部补给）（1）发热：（正常37℃）体温每升高1℃补3－5ml/Kg （按4ml/Kg计算）5％GNS 及5％GS (或10％GS) 各1/2（2）出汗：中度（湿透一套衬衣裤）补 500ml重度（湿透二套衬衣裤）补1000ml5％GNS及5％GS(或10％GS)各1/2（3）胃肠液：补给其损失重量其中2/3为5％GNS，1/3为5－10％GS每损失1000ml应补10％KCl10ml。

大量胆汁胰液丢失，注意必要时补碱。

（4）气管切开蒸发损失：每日补5－10％GS1000ml3、补充已丧失量：（先补1/2量）（1）估计失水程度a、轻度：按失水占体重4％计算b、中度：按失水占体重6％计算c、重度：按失水占体重7％计算（2）糖盐（5％GNS）及糖水（5－10％GS）的分配a、等渗性缺水：（血清Na135－145mmol/L）用5％GNS及5－10％GS各补1/2b、高渗性缺水：（血清Na》145mmol/L）全部用5－10％GS来补充c、低渗性缺水：1、轻度（血清Na》130mmol/L）2、中度（血清Na120－130mmol/L）3、重度（血清Na《120mmol/L）均按如下公式计算：补Na（mmol）量＝（142－血Na测定值）x体重kgx0.6（女性x0.50）并按17mmolNa→1gNaCl计出补NaCl的量，先补1/2量；一般缺钠可5%GNS或NS补给，余下水量用5－1余下用5％GNS来补充；（5％NaCl100ml含5gNaCl，5％GNS或NS1000ml含9gNaCl）4、纠正代谢性酸中毒：HCO3低于16mmol/L才补碱补5％NaHCO3（mmol）＝（27－HCO3测定值）x体重kgx0.21ml5％NaHCO3→0.6mmolHCO3由于NaHCO3中含钠，所以补液重量中应扣除含相应钠量的5％GNS（100mL5%NaHCO3所含的钠约相当于400ml5％GNS中的钠量）5、补钾：补钾包括：a、每日生理需要量10％KCl30mlb、额外损失量：胃肠液1000ml补10％KCl10ml等c、低钾血症:没有可靠公式计算一般补10％KCl10－30ml总补钾量＝a＋b＋c原则：a、能口服，则口服b、24小时补钾重量《8gc、补钾浓度《0.3％d、补钾速度《80滴/分钟二、补液注意事项1、各种补液公式只作参考，并非绝对法则，治疗中应密切注意病情变化，及时调节用药，补液速度和总补液量。