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血清总胆汁酸血清总胆汁酸(TBA)测定1 目的总胆汁酸(TBA)是胆甾醇在肝内分解以及在肠—循环中胆汁酸代谢产物的总称。
又称为初级胆汁酸和二级胆汁酸。
血清胆汁酸水平反应肝实质性损伤，尤其在急性肝炎，慢活肝，酒精性肝损伤和肝硬化时有较灵敏的改变，是肝病实验室诊断的一项重要指标。
2 测定方法循环酶速率法3 原理胆汁酸被3α—羟基类固醇脱氢酶及Thio—NAD特异性氧化，生成3—酮类固醇及Thio—NADH。
此外，生成的3—酮类固醇在3α—羟基类固醇脱氢酶及NADH 存在下,生成胆汁酸和NAD。
如上述，循环往复从而放大微量的胆汁酸量，测定生成的Thio—NADH吸光度的变化，以求得胆汁酸值。
4 标本4.1 静脉抽取病人空腹血，置于洁净干燥试管或含促凝剂的真空管内。
4.2 采血后应立即送到检验科生化室。
04.3 样品收到后立即分离血清，不能及时测定的血清应于2-8C保存。
4.4 严重溶血或脂血的标本不能测定。
5 设备及试剂5.1 日立7600全自动生化仪。
5.2 美康总胆汁酸试剂。
5.3 总胆汁酸试剂应贮存于2—8?冰箱。
6 操作步骤6.1样本的准备:将编好号的样品离心，取血清加入样品杯放到样品盘的规定位置，再把样品盘放到仪器中相应位置。
6.2试剂的检查:每天测定前先检查各种试剂的数量、效期、定标等情况，认无误后方可进行测定。
6.3 操作方法:详见7600生化仪操作手册。
7 校准程序7.1 校准品的准备和储存我室使用的校准品是朗道混合校准品，浓度为一定值校准品，根据批号浓度有一定的差异。
使用时从冰箱中拿出，室温放置一段时间后放入编辑好的架子位置上，根据校准程序进行操作。
7.2 校准条件在室内质控失控，更换仪器主要零配件，进行仪器大保养后和定期校准时均需校准。
7.3 校准程序将液体校准品恢复室温后放置在编辑好的架子位置上。
在calibration界面中选择TBA校准，选择校准方法，再放上校准架子，再点击Start，开始进行校准。
医疗器械产品技术要求编号：总胆汁酸（TBA）测定试剂（盒）（酶循环法）2.性能指标2.1外观试剂应为清澈透明的液体，无沉淀、悬浮物和絮状物。
2.2装量试剂装量的装量应按表1，液体装量的最大允许负偏差应为5%。
2.3试剂空白2.3.1试剂空白吸光度试剂（盒）测试空白样本，在37 ℃±0.1 ℃ 、405 nm 波长、1 cm 光径条件下，试剂空白吸光度应≤0.800 Abs。
2.3.2试剂空白吸光度变化率用试剂（盒）测试空白样本，在37℃ 0.1℃，405 nm 波长、1 cm 光径条件下，试剂空白吸光度变化率≤0.010 Abs/min。
2.4分析灵敏度试剂（盒）测试27.1 μmol/L 的被测物时，吸光度变化率（ΔA/min）≥0.060 Abs/min。
2.5线性区间试剂（盒）线性在(0.00，200.00] μmol/L区间内：a) 线性相关系数r≥0.990；b) (0.00，50.00] μmol/L 区间内，线性绝对偏差应在±5 .00 μmol/L 范围内；(50.00，200.00]μmol/L 区间内，线性相对偏差应在±10%范围内。
2.6精密度2.6.1重复性试剂（盒）测试浓度在（25±5）μmol/L 和（49±10）μmol/L 范围内的样本时，变异系数CV≤4.0%。
2.6.2批间差试剂（盒）测试浓度在（25±5）μmol/L 和（49±10）μmol/L 范围内的样本时，相对极差R≤6.0%。
2.7准确度测可溯源至有证参考物质的校准品，相对偏差 B 在±10%范围内。
血清总胆汁酸循环酶法测定法1. 实验原理胆汁酸会被3α-羟基类固醇脱氢酶（3α-HSD）以及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）特异性地氧化，生成3-酮类固醇以及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）。
生成的3-酮类固醇在3α-羟基类固醇脱氢酶（3α-HSD）及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）存在下，生成胆汁酸及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）。
如上所述，依据循环酶而放大微量的胆汁酸量，测定单位时间内生成的β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）在405nm处的吸光度变化，以求得胆汁酸的浓度。
（胆汁酸会被3α-羟基类固醇脱氢酶及Thio-NAD 特异性地氧化，生成3-酮类固醇及Thio-NADH，此外，生成的3-酮类固醇在3α-羟基类固醇脱氢酶及NADH 存在下，和NAD。
如上所述，循环往复从而放大微量的胆汁酸量，测定生成的Thio-NADH的吸光度变化，以求得胆汁酸的浓度。
）2. 标本：2.1 病人准备：标本以空腹血清为宜，餐后胆汁酸会升高，应注意采血时间。
2.2类型：血清、肝素或EDTA处理的血浆。
应使用新鲜标本。
标本必须避光保存。
3. 标本存放4℃保存可稳定7天，-20℃保存可稳定3个月。
4. 标本运输常温条件下避光保存运输。
5. 标本拒收标准细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂威特曼总胆汁酸测定试剂盒Good’s缓冲液120mmol/L3a-羟基类固醇脱氢酶(3a-HSD) 12.5 KU/L硫代辅酶(Thio-NAD) 6.1g/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻，试剂2必须避光保存。
6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
血清总胆汁酸测定（循环酶法）标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：血清总胆汁酸测定(缩写TBA)；组合项目申请：血生化中肝功能测定加选本项目。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。
2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定一周，在冰箱中（2～8℃）稳定一个月。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。
2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。
2.3.2不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。
3 方法原理循环酶法。
胆汁酸被3a-羟基类固醇脱氢酶（3a-HSDH）及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）氧化，生成3酮类固醇及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NAD）。
生成的3酮类固醇在3a-羟基类固醇脱氢酶及β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NAD）存在下，生成胆汁酸及β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）。
如此进行循环反应，最后测定生成的β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NAD）的吸光度，求得胆汁酸浓度值。
胆汁酸测定试剂盒（循环酶法）标准化操作规程1 目的规范实验室操作，保证检验工作顺利有效进行特制定此规程。
2 授权操作人经培训且考核通过的实验室检验人员。
3 适用范围本试剂适用于体外定量检测人血清或血浆中胆汁酸的含量。
4 检验方法本试剂盒采用循环酶法测定胆汁酸的含量。
5 检验原理本试剂采用酶分析法测定血清总胆汁酸。
3α-羟基类固醇脱氢酶特异性作用于3α-羟甾族化合物，使之转化为相应的酮类固醇，反应中thio-NAD被还原为thio-NADH。
通过在405nm波长处测定单位时间内吸光度的变化值，可以计算出样品中总胆汁酸的含量。
6 标本要求6.1 样本为空腹患者血清。
样本应及时离心分离，不得使用溶血或被污染的样本。
6.2 样本应避免微生物污染，在2℃～8℃可稳定数月。
7 试剂及配套品7.1试剂来源长春迪瑞医疗科技股份有限公司胆汁酸试剂盒（循环酶法）7.27.3试剂的稳定性与贮存：7.3.1 试剂在2℃~8℃条件下，干燥、避光、密封贮存，有效期为12个月。
7.3.2 试剂开封后在2℃~8℃条件下可稳定30天。
8 实验仪器及性能指标8.1 实验仪器迪瑞CS系列全自动生化分析仪8.2试剂性能指标8.2.1 试剂空白：试剂空白吸光度：A≤0.800。
试剂空白吸光度变化率：△A/min≤0.040。
8.2.2 分析灵敏度：测试1μmol/L被测物时，吸光度变化率（△A/min）＞0.0002。
8.2.3 线性范围：1μmol/L～180μmol/L；线性相关系数r≥0.9900；[1,36]μmol/L区间内，线性绝对偏差应不超过±7.2µmol/L；（36,180]μmol/L区间内，相对偏差不超过±15％。
8.2.4 准确度：比对试验：r≥0.9900；[1，36]μmol/L区间内，绝对偏差不超过±7.2μmol/L，（36，180]μmol/L区间内，相对偏差不超过±15%。
总胆汁酸测定试剂盒（酶循环法）适用范围：本试剂盒与ABBOTT ARCHITECT c4000/c8000/c16000全自动生化分析仪配套使用，用于体外定量测定人血清中总胆汁酸的浓度。
1.1包装规格液体双剂型试剂1（R1）：60mL×2，试剂2（R2）：20mL×2，校准品：2mL×1；试剂1（R1）：53mL×2，试剂2（R2）：20mL×2，校准品：2mL×1；试剂1（R1）：70mL×4，试剂2（R2）：25mL×4，校准品：2mL×1。
1.2主要组成成分1.2.1 试剂1（R1）（液体）Thio-NAD+952.9mg/L1.2.2 试剂2（R2）（液体）NADH6.1g/L3-αHSD12500U/L 1.2.3 校准品（液体）在Mes-HCL缓冲液中添加甘氨胆酸钠，目标浓度：50.0μmol/L。
（每批定值，值有批特异性，详见值单）2.1 外观试剂盒中各组件的外观应满足：2.1.1 试剂1（R1）应为浅黄色透明溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损；2.1.2 试剂2（R2）应为无色透明溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损；2.1.3 校准品应为无色透明溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损。
2.2 净含量液体试剂净含量应不少于标示值。
2.3 试剂空白吸光度在波长405nm（400nm～420nm）处（光径1cm），试剂空白吸光度（A）应≤0.500；试剂空白吸光度变化率（△A/min）≤0.020。
2.4 准确度用中生试剂和已上市同类试剂分别测定40个在线性范围内不同浓度的样本，在[0.0,180.0]μmol/L检测范围内，比对两组数据的相关系数（r）及测值的偏差，要求r≥0.9900；在(10.0,180.0]μmol/L区间内，相对偏差应不超过±15%；在[0.0,10.0]μmol/L区间内，绝对偏差应不超过±1.5μmol/L。
血清总胆汁酸操作程序1.目的规范血清总胆汁酸（TBA）检测试验，确保检测结果准确性和重复性。
2．范围本操作规程适用于生化室工作人员、实习人员、进修人员的操作前培训。
3.术语4．测定原理4．1 测定方法：循环酶法4．2 测定原理：胆汁酸会被3α-羟甾醇脱氢(3α-HSD)以及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD)特异性地氧化，生成3-酮类固醇以及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(Thio-NADH)。
此外生成的3-酮类固醇在3α-羟甾醇脱氢(3α-HSD)及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(Thio-NADH)存在下，生成胆汁酸及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD)。
如上所述，依据循环酶而放大微量的胆汁酸量，测定单位时间内生成的β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(Thio-NADH)在405nm处的吸光度变化，以求的胆汁酸的浓度。
5. 标本采集与处理5．1标本种类：新鲜无溶血血清。
5．2标本采集：见生化标本采集程序。
5.3 标本稳定性：4℃保存可稳定1周，-20℃保存可稳定3个月。
6. 试剂6.1试剂：本科使用浙江伊利康生物工程有限公司试剂盒，为即用式液体双试剂。
试剂内各主要成分如下：试剂成分浓度试剂1 Good’缓冲液80mmol/LThio-NAD 0.95g/L试剂2 Good’缓冲液80mmol/L3α-羟甾醇脱氢13KU/LThio-NADH 6.10g/L防腐剂适量6.2 总胆汁酸校准血清：浙江伊利康生物工程有限公司浓度50μmol/L标准品。
6.3 试剂与校准血清的稳定性：未开瓶的试剂于2~8℃避光保存，可稳定至有效期（12个月）。
如试剂空白吸光度大于0.5即不能使用。
6.4 试剂不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
7. 仪器参数设定AU2700参数设定：科华试剂仪器参数设置参见试剂厂家提供相应仪器设置参数。
8．校准：具体参见临床生化校准程序8.1 校准条件：8.1.1仪器光路系统经过光路保养或更换光源等重要部件后。
总胆汁酸（TBA）测定试剂盒
（酶循环法）
2.1外观和性状
外观和性状应符合表2要求。
表2 试剂盒内各组分的外观性状
2.2试剂空白
2.2.1试剂空白吸光度
试剂以蒸馏水为空白时，在波长 405nm，光径 1.0 cm，温度 37℃条件下，吸光度≤0.80。
2.2.2试剂空白吸光度变化率
试剂以蒸馏水为空白时，在波长 405nm，光径 1.0 cm，温度 37℃条件下，吸光度变化率≤0.02。
2.3分析灵敏度
试剂盒测试浓度为10 μmol/L被测物时，吸光度变化率≥0.005。
2.4线性范围
2.4.1试剂盒在2～180 μmol /L区间（范围）内，其回归系数r≥0.9900。
2.4.2相对偏差或绝对偏差应符合表 3 要求。
表3 相对偏差或绝对偏差
2.5精密度
2.5.1试剂盒批内精密度 CV 值应≤5.0%。
2.5.2试剂盒批间相对极差（R）应≤10.0%。
2.6准确度
相对偏差（Bias%）应在参考物质靶值±10%以内。
2.7液体装量
试剂盒不同规格的净含量应不少于其标示量。
总胆汁酸(TBA)测定试剂盒（酶循环法）说明书【产品名称】总胆汁酸(TBA)测定试剂盒（酶循环法）【包装规格】a)试剂1：2×45mL 试剂2：2×15mL b)试剂1：4×60mL 试剂2：4×20mL c)试剂1：2×60mL试剂2：2×20mL【预期用途】用于体外定量测定人体血清中总胆汁酸的含量。
血清中TBA 水平升高见于急性病毒性肝炎、肝硬化、胆汁淤积性胆管炎、慢性活动性肝炎、酒精性肝炎、阻塞性黄疸、肝囊性纤维变性[1]。
【检验原理】胆汁酸被3α-HSD 及THIO-NAD 特异性的氧化，生成3-酮类固及还原型硫代辅酶Ⅰ（THIO －NADH ）。
此外，生成的3－酮类固醇在3α羟基类固醇脱氢酶及还原型硫代辅酶Ⅰ（THIO －NADH ）存在下，生成胆汁酸及氧化型硫代辅酶Ⅰ（THIO －NAD ）。
如上述，据循环酶而放大微量的胆汁酸量，测定在单位时间内生成的还原型硫代辅酶Ⅰ在405nm 处的吸光度变化，可求得样本中总胆汁酸的含量。
【主要组成成分】试剂1主要组分磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液100mmol/L 氧化型硫代辅酶Ⅰ(THIO-NAD)950mg/L还原型辅酶(NADH)6g/L 聚氧乙烯油醇醚适量试剂2主要组分Tris 缓冲液100mmol/L 3α－羟基类固醇脱氢酶(3α－HSDH)12.5KU/L聚氧乙烯油醇醚适量注：不同批号试剂盒中各组分未经试验不可互换。
【储存条件及有效期】贮存于2～8℃，有效期为18个月，生产日期、有效期见标签。
【适用仪器】艾威德AS-420/AS-660/AS-1200；日立HITACHI 7020型/7060型/7180型/7600型/LABOSPECT 008AS 型；贝克曼AU400/AU480/AU640/AU680/AU2700/AU5400/AU5800/AU5811/AU5821；佳能TBA-FX8/TBA-120FR /TBA-2000FR ；罗氏cobas 8000c 702/cobas 8000c 701/cobas 8000c 502；西门子SIEMENS ADVIA 1800/ADVIA 2400；雅培ABBOTT ARCHITECT c8000/ARCHITECT c16000/ARCHITECT ci8200；西森美康SYSMEX BM6010/C ；科华KHB 卓越310/卓越330/卓越400/卓越450/ZY-1200/ZY-1280；迪瑞CS-240/CS-T300/CS-300B/CS-380/CS-400A/CS-400B/CS-600A/CS-600B/CS-800A/CS-800B/CS-1200/CS-1200ISE/CS-1300B/CS-1400；迈瑞MINDRAY BS-220/BS-330/BS-350E/BS-380/BS-390/BS-400/BS-430/BS-600/BS-800/BS-2000M ；颐兰贝ES-200/ES-380/ES-480；赛诺迈德SUNMATIK-9050型；雷杜Chemray 420；英诺华D280；特康TC6010L ；锦瑞GS400；普康6066。
总胆汁酸（TBA）测定试剂盒（酶循环法）适用范围：本产品用于体外定量测定人血清或血浆中总胆汁酸含量。
1.1规格试剂1（R1): 2×60mL、试剂2（R2): 2×20mL；试剂1（R1): 1×60mL、试剂2（R2): 1×20mL；试剂1（R1): 2×300mL、试剂2（R2): 1×200mL；试剂1（R1): 2×45mL、试剂2（R2): 2×15mL；试剂1（R1): 1×300mL、试剂2（R2): 1×100mL；试剂1（R1): 2×60mL、试剂2（R2): 2×20mL；试剂1（R1): 1×18mL、试剂2（R2): 1×6mL；试剂1（R1）:2×75mL、试剂2（R2）: 2×25mL；试剂1（R1）:1×75mL、试剂2（R2）: 1×25mL；试剂1（R1）:2×12mL、试剂2（R2）: 2×4mL；试剂1（R1）:5×12mL、试剂2（R2）: 5×4mL；试剂1（R1）:10×12mL、试剂2（R2）: 10×4mL；试剂1（R1）:20×12mL、试剂2（R2）: 20×4mL；试剂1（R1）:2×15mL、试剂2（R2）: 2×5mL；试剂1（R1）:5×15mL、试剂2（R2）: 5×5mL；试剂1（R1）:10×15mL、试剂2（R2）: 10×5mL；试剂1（R1）:20×15mL、试剂2（R2）: 20×5mL；480测试/盒：【试剂1（R1)：142.4mL、试剂2（R2)：51.2mL】；校准品（选配）：1×1mL。
总胆汁酸测定 (循环酶法)Total Bile Acids (TBA)1检验目的本方法用于体外定量测定人血清或血浆总胆汁酸。
2方法第五代循环酶方法，检测采用速率法。
3原理胆汁酸会被3α-羟甾醇脱氢（3α-HSD）以及β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）特异性地氧化，生成3-酮类固醇以及β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）。
此外生成的3-酮类固醇在3α-羟甾醇脱氢（3α-HSD）及β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）存在下，生成胆汁酸及β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）。
如上所述，依据循环酶而放大微量的胆汁酸量，测定单位时间内生成的β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）在405nm处的吸光度变化，以求得胆汁酸的浓度。
4 标本血清、肝素或EDTA处理的血浆。
应使用新鲜标本，标本必须避光保存！标本稳定性：4℃保存可稳定7天，-20℃保存可稳定3个月，不可使用已被污染的标本。
5 试剂5.1在测定时的各组分和浓度试剂1（R1）：952.9 mg/Lβ-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD)Good’s缓冲液120 mmol/L试剂2(R2)：β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型(Thio-NADH) 6.1 g/L3α-羟甾醇脱氢酶(3α-HSD) 12500 mmol/LGood’s缓冲液120 mmol/L表面活性剂，稳定剂适量5.2试剂稳定性与贮存试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻！试剂2必须避光保存。
6 仪器OLYMPUS AU400全自动生化分析仪7测定程序见参数表8 校准品和质控品8.1使用Roche公司提供的Roche多项目定标液对自动分析仪进行校准。
每批样品检测时，使用Roche 公司提供的Roche定标液和控制品进行内部质量控制。
8.2质控物的保存和稳定性：质控物存放于4-8℃可保存一个月，分装存放于-20℃至有效期。
总胆汁酸TBA循环酶速率法作业指导书1、前言试验名称：总胆汁酸测定，英文名称：TBA，方法：循环酶速率法。
本文件适用于安阳鼎城糖尿病医院检验科生化实验室，目的是指导工作人员正确的在科华KHB450全自动生化分析仪上测定血清、血浆样本中的TBA活力，以保证测定结果的准确可靠。
本试验用体外定量测定人血清或血浆样本中TBA的活力。
胆汁酸（bile acids）是胆汁中的主要成份，是消化吸收功能所需的物质，也是胆固醇通过胆汁排泄时的必要成份。
胆汁酸的代谢包括合成、排泌及肝肠循环三个主要环节，以肝脏为中心，涉及到胆道、肠道及门脉系统等途径。
故胆汁酸的代谢紊乱可诱致许多消化系统的疾病，反之许多消化系统的疾病，也能影响胆汁酸的代谢。
急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化等肝实质性损伤时TBA的含量会明显升高。
临床上，本实验列入肝功能实验，常和转氨酶测定、胆红素测定、蛋白测定等实验同时用于肝脏疾病的诊断和功能检测。
2、测定原理本试验测定原理在生化类检验测定原理中较为特殊，其测定原理如下：TBA＋Thio-NAD 3-α-HSD3-酮类固醇＋Thio-NADH 3-酮类固醇＋NADH3-α-HSD TBA＋NAD+在上述反应中如不考虑反应过程反应式可改写为：Thio-NAD＋NADH3-α-HSD TBA Thio-NADH＋NAD+从上述反应式中可以看出，在3-α-HSD过量时，反应的速率仅与TBA的量有关，通过检测Thio-NADH在405nm处吸光度值的变化，即可得出TBA的含量。
NAD+ 氧化型β-烟酰胺脲嘌呤二核苷酸NADH还原型β-烟酰胺脲嘌呤二核苷酸Thio-NADH还原型β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸Thio-NAD氧化型β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸3-α-HSD3-α-羟甾醇脱氢酶3、试剂试剂生产商：上海科华公司。
剂型：液体双试剂。
包装量：R1：3*50ml R2：2*25ml注册号：沪食药监械（准）字2011第2400009号。
生化试剂对循环酶法测定血清总胆汁酸的干扰因素分析近年来，酶循环法测定血清总胆汁酸（TBA）已经被临床广泛采用，该法适合于全自动生化分析，操作简便、快速，且检测准确率高，具有灵敏度高、对仪器管道无污染等优点，是应用最广的血清TBA检测方法。
但是应用循环酶法检测血清TBA时，与生化试剂接触后，易产生交叉污染，而导致检测结果的准确率降低。
本试验通过分析其干扰因素及寻求消除干扰的有效措施。
现总结实验结果报告如下：1.资料与方法1.1 标本来源选取血清TBA作为研究项目，血清标本中无溶血、黄疸及脂血。
1.2 仪器选择全自动生化分析仪（贝克曼AU5800）。
1.3 检测试剂检测试剂为澳林常规生化试剂，ALT、GGT、TP TG、UA、TP、LDL-C。
1.4 方法1.4.1仪器准备先浸泡清洗好全自动生化分析仪的配套工具，如对比色杯、搅拌棒、试剂针，并对仪器进行校准，及时更换或调整仪器以达到标准使用要求，以排除仪器本身原因对结果的影响。
1.4.2标本随机收集当天新鲜标本，并制成混合血清，对每一份均进行5次血清单独连续5次TBA测定。
取混合血清，分别各项组合项目UA／TBA，TG／TBA,LDL-C/TBA等组合,各进行5次测定，最后测定TBA水平。
然后对反应杯、试剂针和搅拌棒等进行清洗，按规范要求设置特殊清洗程序。
选择300mlHCL(1M)→300mlNaOH(1M)作为反应杯、试剂针及搅拌棒等用具的清洗，尽可能减少污染。
然后将UA、TG、LDL-C试剂作为标本重新测定TBA，同样为5次，再按特殊清洗程序对各项组合项目进行重测，同样各测定5次，取平均值，做好测定值结果的记录，计算相应的平均值。
1.5 统计学处理本实验数据应用SPSS17.0软件进行统计学分析，计量资料用（x-±s）表示，用t检验计量资料，用χ2检验计数资料，P＜0.05，差异具有统计学意义。
2.结果测定混合血清中血清TBA含量，其平均值为(8.16±0.01)μmol／L。
Thio-NADH酶法检测血清总胆汁酸的方法评价摘要】目的通过对方法学评价试验，选择一种检测血清总胆汁酸的方法。
方法 Thio-NADH黄色发光系统酶循环法检测血清总胆汁酸。
结果本法线性达150mol/L，精密度，批内CV0.98％,0.85％,批间CV4.58％，4.13％，本法与普通酶显示法比较Y=0.903x-1.45 r=0.9955,n=50，配对t检验P＞0.05，胆红素＜830umol/L，血红蛋白＜50g/L,肝素钠＜100mmol/L，枸橼酸钠＜120mmol/L,乳酸＜30mmol/L,抗坏血酸＜280mmol/L,对测定结果无显著干扰。
结论本法线性好，精密度高，结果无明显干扰，对仪器管道、比色杯基本无色素沉着污染，是测定血清总胆汁酸的一种理想方法，值得推广应用。
【关键词】酶循环法血清总胆汁酸（TBA） Thio-NAD本文采用无色素污染的Thio-NADH黄色发光系统酶循环法测定血清总胆汁酸，现将方法评价报导如下。
1 测定原理血清中的胆汁酸（3α-羟类固醇）被3α-羟类固醇脱氢酶（3α-HSD）及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD)特异性地氧化，生成3-酮类固醇及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）。
而生成的3-酮类固醇在3α-HSD及β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（NADH）作用下，生成胆汁酸及β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（NAD）。
如此，血清中微量的胆汁酸在多次酶循环过程中被放大，同时可使生成的Thio-NADH扩增。
在405nm测定Thio-NADH吸光度变化值，即得血清中胆汁酸的含量。
2 材料和方法2.1仪器日立7170-A全自动生化分析仪。
2.2试剂四川迈克生物科技总胆汁酸检测试剂盒。
2.3方法根据试验说明书编制测试参数，反应类型，速率法，反应温度37℃，波长405nm(主波)/660nm（次波）样品5ul，试剂Ⅰ215ul，试剂Ⅱ50ul，延迟时间1min，读数时间4min。
