白藜芦醇对肝癌细胞增殖和凋亡影响及其机制

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中药白藜芦醇在胰腺癌中抗癌作用机制的新发现——Src-STAT3信号通路

1、项目名称：中药白藜芦醇在胰腺癌中抗癌作用机制的新发现——Src-STAT3信号通路2、研究前景分析胰腺癌是消化系统恶性程度最高的肿瘤之一，近年来，胰腺癌发病率呈上升趋势，胰腺癌死亡率已居美国恶性肿瘤死亡的第四位，据统计2012年美国的新发胰腺癌病例43920例（男性22090例，女性21830例），预计死亡37390例，发病率和死亡率相当接近[1]。

我们知道，胰腺癌不仅恶性程度高，而且起病隐匿，进展迅速，因此预后极差，五年生存率只有5%～6%。

手术是胰腺癌患者获得长期生存的唯一的手段，然而由于多数患者首次诊断已发生局部或远处转移，只有15%～20%的患者能够获得手术机会，这部分患者中也有80%的患者有可能出现术后转移，发生局部和远处复发者中位生存期分别为7个月和3个月[2-5]。

至今为止，胰腺癌仍然是预后最差的肿瘤之一，也是当前国内外医学界面临的重大难题。

由于胰腺癌可手术切除率低，多数患者采用放疗、化疗或者放化疗联合等治疗手段。

由于胰腺属于腹膜后器官，位置较深，对放射线不敏感，放疗不能明显改善进展期胰腺癌的预后，因此化疗是进展期胰腺癌尤其是已发生远处转移的晚期患者唯一的选择。

氟尿嘧啶（5-FU）是第一种广泛治疗进展期胰腺癌的药物，但总体反应率仅为20%。

吉西他滨是自1997年以来治疗进展期胰腺癌的标准化疗药物，能够缓解病人的临床症状，临床收益率（CBR）为24％，与氟尿嘧啶（5-FU）相比，仅轻微延长中位生存期，从4.4个月延长到5.6个月。

联合化疗增加了细胞毒性，仍未能显著延长中位生存期，近年来胰腺癌对化疗药物的耐药现象也不容忽视。

因此改善化疗的耐药性或寻找新的高效化疗药物是目前医学界重大战略任务。

中药白藜芦醇（Resveratrol,Res）的化学名称为3，4，5-三羟基二苯乙烯，结构类似于雌激素乙菧酚，是一种非黄酮多酚类物质，广泛存在于葡萄、花生，桑葚、虎杖、坚果和多种植物根部，其中以红葡萄皮中含量最为丰富[6,7]。

白黎芦醇对人口腔鳞癌KB细胞增殖和凋亡的影响及其机制_杨征

白黎芦醇对人口腔鳞癌KB 细胞增殖和凋亡的影响及其机制杨征，张斌，米磊(辽宁医学院附属第一医院口腔科，辽宁锦州121001)摘要:目的:探讨白藜芦醇对人口腔鳞癌KB 细胞的增殖及凋亡影响。

方法:应用MTT 比色法检测Res 对KB 细胞体外生长的抑制作用;流式细胞仪测定细胞的周期和凋亡;Hoechst33258荧光染料染色，显示凋亡细胞形态;Western blot方法检测survivin 、Caspase －3、Smac 蛋白的表达。

结果:Res 能以剂量和时间依赖的方式抑制KB 细胞生长，以剂量依赖的方式使KB 细胞周期阻滞在S 期、诱导细胞凋亡;Hoechst33258染色，可见细胞呈明显的凋亡特征;Western blot 方法测得Res 下调KB 细胞的Survivin 蛋白表达水平、增加KB 细胞胞浆的Smac 蛋白含量(P ＜0.01)、同时活化Caspase －3蛋白。

结论:Res 可抑制KB 增殖，使细胞周期呈S 阻滞并可诱导细胞发生凋亡，Survivin 、Caspase －3和Smac 基因参与了Res 诱导KB 细胞凋亡的作用。

关键词:白藜芦醇;口腔鳞癌;细胞周期;凋亡;Survivin ;Caspase －3;Smac中图分类号:R2－03文献标识码:B 文章编号:1000－1719(2011)04－0740－03The Research of Anti －Proliferation and Induction of Apoptosis of Resveratrolon Human oral Squamous Cell Carcinoma KB Cells in VitroYANG Zheng ，ZHANG Bin ，MI Lei(Department of Stomatology ，the First Affiliated Hospital of Liaoning Medical College ，Jinzhou 121001，Liaoning ，China )Abstract :Objective :To study the resveratrol on human oral squamous cell carcinoma cells proliferation and apoptosis．Meth-ods :MTT colorimetric assay of KB cell in vitro growth inhibition ;Cell cycle phase distribution and hypodiploid DNA was deter-mined by flow cytometry ;Hoechst33258fluorescent dye staining ，indicating apoptotic cell morphology ;Western －blot method of detection of survivin ，Caspase －3，Smac protein expression．Results :Res able to dose －and time －dependent manner inhibited KB cell growth ;A dose dependent manner makes KB cell cycle arrest in S phase and induce apoptosis ;Hoechst33258staining ，show-ing characteristics of apoptosis cells were significantly ;Western －blot method measured Res down Survivin protein expression in KB cells ，and increase the KB cell cytoplasm Smac protein content (P ＜0．01)，Caspase －3protein was activated．Conclusion :Resinhibits proliferation of KB cell ，the cell cycle arrest was S can induce apoptosis ，Survivin ，Caspase －3and Smac gene involved in apoptosis of KB cell．Key words :Resveratrol ;KB ;cell cycle ;apoptosis ;Survivin ;Caspase －3Smac收稿日期:2010－07－02基金项目:辽宁省教育厅高等学校科学研究项目(L2010315)作者简介:杨征(1972－)，男，辽宁人，住院医师，学士，研究方向:抗瘤药物研究。

白藜芦醇对肿瘤细胞凋亡的影响研究

白藜芦醇对肿瘤细胞凋亡的影响研究白藜芦醇是一种主要存在于葡萄皮、坚果、红酒等食物中的天然物质，近年来，研究表明白藜芦醇对人体有着很多益处，其中包括对癌症的预防和治疗。

白藜芦醇可以通过多种机制发挥抗癌作用，其中之一就是促进肿瘤细胞凋亡。

本文将从白藜芦醇的来源、作用机制以及研究现状等方面对其促进肿瘤细胞凋亡的影响进行探讨。

一、白藜芦醇的来源白藜芦醇是一种天然的多酚类化合物，主要存在于葡萄皮、坚果、红酒等食物中。

通过现代科技手段，也可以通过化学合成的方式得到白藜芦醇，并进行大规模的生产和应用。

相比于化学合成的白藜芦醇，天然来源的白藜芦醇更容易被人体吸收和利用，因此在临床应用中更受欢迎。

二、白藜芦醇促进肿瘤细胞凋亡的作用机制肿瘤细胞凋亡是一种程序性的死亡方式，是控制肿瘤生长、发展和转移的重要途径。

白藜芦醇可以通过多种机制促进肿瘤细胞凋亡，主要包括以下几个方面：1、抑制肿瘤细胞生长白藜芦醇可以通过抑制肿瘤细胞生长来促进其凋亡。

研究表明，白藜芦醇能够下调多种肿瘤细胞增殖相关的基因表达，如细胞周期调控因子、生长因子受体、细胞凋亡相关蛋白等，从而减缓肿瘤细胞的增殖速度，为凋亡的发生提供了先决条件。

2、促进线粒体质膜通透性转化线粒体是维持细胞生命活动的重要器官，而线粒体膜通透性转化是肿瘤细胞凋亡的重要步骤之一。

研究表明，白藜芦醇可以促进线粒体钙离子通过钙配合物通道进入细胞质，从而引起线粒体膜通透性转化，激活半胱氨酸蛋白酶，导致凋亡的发生。

3、调控Bcl-2家族蛋白Bcl-2家族蛋白是一个重要的调节肿瘤细胞凋亡的蛋白家族，其中Bcl-2和Bax是两个重要代表。

Bcl-2可以抑制肿瘤细胞凋亡，而Bax则能够协调促使肿瘤细胞凋亡。

研究表明，白藜芦醇可以通过调节Bcl-2家族蛋白的表达和活性，从而促进细胞凋亡的发生。

三、白藜芦醇促进肿瘤细胞凋亡的研究现状白藜芦醇作为一种天然的抗癌物质，对于肿瘤细胞凋亡的作用机制及其临床应用研究备受关注。

白藜芦醇对人肝癌细胞转移的影响及其分子机制

白藜芦醇对人肝癌细胞转移的影响及其分子机制黄笛鸣;单汉国;谢文彪【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2013(048)009【摘要】目的观察白藜芦醇的抗肿瘤活性,并探讨其抑制抗血管发生及肿瘤转移的分子机制.方法体外培养HepG2细胞,用12.5、25、50、100 μmol/L的白藜芦醇刺激.小室侵袭实验检测HepG2细胞的迁移与侵袭;Western blot法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、血红素氧合酶1(HO-1)的表达以及NF-κB p65亚基核转位.结果 50 μmol/L白藜芦醇孵育24 h后,其迁移与侵袭率分别降低了37％和33％;Western blot结果显示白藜芦醇能抑制p65核转位;此外,抑制并沉默HO-1表达后,能显著降低MMP的表达.结论白藜芦醇对MMP的表达影响很大程度上与抑制HO-1-NF-κB信号通路活性有关.【总页数】4页(P1071-1074)【作者】黄笛鸣;单汉国;谢文彪【作者单位】南华大学附属第二医院肿瘤外科,衡阳421001;南华大学附属第二医院肿瘤外科,衡阳421001;南华大学附属第二医院肿瘤外科,衡阳421001【正文语种】中文【中图分类】R735.7【相关文献】1.虎杖白藜芦醇对人肝癌HepG-2细胞株增殖和生长周期的影响 [J], 顾生玖;李美波;许有瑞;朱开梅2.重组人血管内皮抑素体外对肝癌HCCLM6细胞转移侵袭的影响 [J], 张鹏海;覃晶;李爱民;丁雪梅;杜阳峰;罗荣城3.白头翁皂苷D联合索拉非尼对人肝癌细胞转移的影响 [J], 贺武斌;苏荣健4.下调N-cadherin表达对裸鼠原位种植人肝癌细胞转移能力的影响 [J], 纪桂宝;游建;黄志勇;占大钱;梁宾勇5.木犀草素与白藜芦醇联合应用对人肝癌细胞凋亡的影响及机制 [J], 乐炜; 王超; 邓波; 章永因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

白藜芦醇抗肺癌作用机制的研究进展

白藜芦醇抗肺癌作用机制的研究进展作者：吴淑莲荣福来源：《中国医学创新》2017年第14期【摘要】综述近5年来白藜芦醇抗肺癌作用机制的研究进展，结果显示，白藜芦醇可通过诱导细胞凋亡、抑制肺癌细胞侵袭与转移、抑制血管生长因子、调节MicroRNA的水平、抗氧化及辅助化疗药物等达到抗肺癌作用。

【关键词】白藜芦醇；肺癌；研究进展Antitumor Mechanisms of Resveratrol in Lung Cancer/WU Shu-lian，RONG Fu.//Medical Innovation of China，2017，14（14）：131-134【Abstract】 Advances in antitumor mechanisms of resveratrol in lung cancer in the recent 5 years were summarized.The results showed that Resveratrol could induce cell apoptosis and suppress lung cancer invasion and metastasis.Moreover，Resveratrol could regulate the expression of vascular endothelial growth factor to inhibit the growth of lung cancer.The antitumor effect of Resveratrol can be achieved by antioxidation，and by regulating the level of MicroRNA and assisting the chemotherapy drugs.【Key words】 Resveratrol； Lung cancer； AdvanceFirst-author’s address：Postgraduate Academy of Guangdong Medical University，Zhanjiang 524000，Chinadoi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.14.035白藜芦醇（Resveratrol，Res），又称为芪三酚，是一种天然多酚类物质， 1940年首次从毛叶藜芦的根部中分离得到的，分子式为C14H12O3，其化学名称为反式-3，4，5-1，2二苯乙烯，广泛存在于葡萄、虎杖、花生中。

白藜芦醇对Hepa1_6肝癌细胞凋亡和ROS的影响

Abstract Objective： To observe the effects of resveratrol on apoptosis and ROS production in murine hepatocarcinoma Hepa 1-6 cells in vitro. Methods： Hepa 1-6 cells were treated with different dose of resveratrol（ 20 μmol / L，40 μmol / L，80 μmol / L） . Cell proliferation was detected with MTT assay at 24 h，48 h and 72 h. Hoechst 33258 staining was used to visualize apoptotic morphology. Cell apoptosis was detected by flow cytometry analysis. Activated caspase-3 was detected by western blot. Intracellular ROS production was observed by 2'，7'-dichlorofluorescin diacetate（ DCF-DA） staining. Results： Compared with the control，upon treatment with 20 ～ 80 μmol / L resveratrol for 24 h，48 h or 72 h，the proliferation of Hepa 1-6 cells was significantly inhibited in a time-dose dependent manner. 20 ～ 80 μmol / L resveratrol also induced apoptosis and apoptotic morphology change in Hepa 1-6 cells accompanied with caspase3 activation and ROS generation. Conclusion： Resveratrol could inhibit cell proliferation，induce apoptosis in murine hepatocarcinoma Hepa1-6 cells，and the mechanism may associated with caspase-3 activation and ROS production.

白藜芦醇抗肝癌作用研究

ｃａｎｃｅｒ．
【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ；ＨＣＣ
原发性肝癌或肝细胞癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一．死亡率高，预后较差。其发生发展是一系列多基
Ｔ— Ｒｅｓ在浓度为４Ｏ～８０Ｉ￣ｍｏｌ／Ｌ时可以抑制ｐ５３阳性的ＨｅｐＧ２细胞的生长，但对于ｐ５３阴性的Ｈｅｐ３Ｂ的生长无明
ｆ关键词】白藜芦醇；肝癌
【中图分类号】Ｒ７３５．７
【文献标识码１Ａ
［文章编号１１６７３－７２１０（２０１３）０２（ｃ）ห้องสมุดไป่ตู้－００２２－０３
Ｒｅｓｅａｒｃｈｏｎｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａｏｆｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ
ｔｙｉｓｈｉｇｈａｎｄｔｈｅｐｒｏｇｎｏｓｉｓｉｓｐｏｏｒ．Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌｉｓａｐｌｅｉｏｔｒｏｐｉｃｐｈｙｔｏａｌｅｘｉｎ，ｗｈｉｃｈｈａｓａｃｅｒｔａｉｎｒｏｌｅｉｎｔｈｅｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ
Ｌ／ＮＣｈｕｎｌｅｉＧＵＯＣｈｕａｎｙｏｎｇ
ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，ｔｈｅＴｅｎｔｈＰｅｏｐｌｅＳＨｏｓｐｉｔａｌＡｉｌｆｉａｔｅｄｔｏＴｏｎ￣ｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０００７２，Ｃｈｉｎａ

氧化白藜芦醇药理作用及其机制研究进展

·综述·氧化白藜芦醇药理作用及其机制研究进展邓宇*1 周黎明2△（1.四川大学华西基础医学与法医学院，四川成都 610041；2.四川大学华西基础医学与法医学院药理学教研室，四川成都 610041）摘要：氧化白藜芦醇是一种来源于植物的天然多酚化合物，早期研究证明其具有抗氧化、抗炎症、抗病毒、抗褐变、神经保护等多种生物活性。

近年来，氧化白藜芦醇被发现还具有抗肿瘤、抗肥胖、抗糖尿病、保护肠黏膜等药理作用。

与此同时，氧化白藜芦醇作为一种药物分子与机体疾病之间的作用机制也被进一步阐明。

本文将总结近五年来氧化白藜芦醇的药理作用及相关机制研究新进展。

关键词：氧化白藜芦醇；药理作用及机制*作者简介：邓宇，男，2017级基础医学本科生，Email:*****************； △通讯作者：周黎明，女，教授，主要从事药理学研究，Email:***************。

1 引言氧化白藜芦醇（反式-2', 3, 4', 5-四羟基二苯乙烯）是一种天然多酚化合物，它最早从一种名为野菠萝蜜（Artocarpus lakoocha ）的桑科植物木芯中分离出来[1]，后被发现其广泛存在于桑科、桃金娘科、买麻藤科等植物的枝叶、根茎之中[2]。

氧化白藜芦醇分子式为C 14H 12O 4，早期研究表明，它具有多种生物学效应，包括抗氧化、抗褐变、抗炎症、抗病原微生物、神经保护等[3]。

同时，氧化白藜芦醇毒副作用小、生物利用度高，具有良好的市场应用价值。

氧化白藜芦醇是白藜芦醇（反式-3, 4', 5-三羟基二苯乙烯）的2'-位羟基化衍生物，但氧化白藜芦醇因在其苯环上多了一个酚羟基而拥有更好的水溶性、更强的自由基清除能力[4]。

不仅如此，氧化白藜芦醇还具有良好的组织穿透性[5]，能够透过血脑屏障，可以迅速在大脑病灶中达到有效浓度[6]。

因此，氧化白藜芦醇有潜力作为一种天然药物应用于未来的医药行业。

白藜芦醇对白血病K562细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

白藜芦醇对白血病K562细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨隋涛;白雪;马立;李青【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2013(53)43【摘要】目的探讨白藜芦醇对白血病K562细胞生长的影响及相关作用机制.方法用不同浓度白藜芦醇作用于K562细胞,CCK-8法观察白藜芦醇对K562细胞生长增殖的影响,AnnexinV-FITC/PI双染法观察白藜芦醇对K562细胞凋亡的影响,PI 染色法观察白藜芦醇对K562细胞周期的影响,Western blot法检测K562细胞中的Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Cyclin D1蛋白.结果白藜芦醇作用后的K562细胞的增殖被抑制并且凋亡增加,呈时间-剂量依赖性;同时,凋亡相关分子Bcl-2、Bcl-xl表达下调,Bax表达上调;白藜芦醇作用K562细胞后,G1期细胞增多,S期细胞减少,细胞周期调节蛋白Cyclin D1表达下降.结论白藜芦醇可抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与下调细胞内Bcl-2、Bcl-xl、Cyclin D1表达并上调Bax的表达有关.【总页数】3页(P12-14)【作者】隋涛;白雪;马立;李青【作者单位】天津市第一中心医院,天津300192;天津市第一中心医院,天津300192;天津市第一中心医院,天津300192;天津市第一中心医院,天津300192【正文语种】中文【中图分类】R733.7【相关文献】1.姬松茸粗多糖对K562细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制探讨 [J], 林祥伟;张苏伟2.微小RNA-132对白血病K562细胞增殖及凋亡的影响 [J], 樊云秀;李建厂;孙维梅;陈博3.上调miR-126表达对白血病K562细胞增殖及凋亡的影响 [J], 丁倩;杨敏4.YAP抑制剂对慢性粒细胞白血病K562细胞增殖、凋亡的影响 [J], 卢洪飞;张敏鸿;杨建琼;罗耀玲5.藤黄酸调控白血病K562细胞GFI-1表达及对细胞增殖和凋亡的影响 [J], 刘晓倩;李依;郭佳丽;吴涛;张素洁;许超平;吴芷静;常伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

白藜芦醇对γδT细胞增殖和杀伤肝癌细胞的增强作用

白藜芦醇对γδT细胞增殖和杀伤肝癌细胞的增强作用1.江苏省沭阳医院消化科宿迁223600;2.南京中医学院南京 210023摘要 [目的]：探讨白藜芦醇对人外周血γδT细胞体外增殖及该细胞对肝癌细胞SMMC-7721细胞活性的影响。

[方法]：分离健康人外周血单个核细胞（PBMC），放入含有IL-2、帕米膦酸的RPMI 1640培养基中培养并诱导γδT细胞，实验组给予白藜芦醇共同培养，对照组不加药物，在此基础上，两组均加入肝癌细胞SMMC-7721作为靶细胞，继续培养。

在培养第10d后，用台盼蓝染色计数细胞，采用流式细胞术检测各组γδT细胞的纯度及其颗粒酶B和CD107a、穿孔素的表达；用CCK-8试剂盒检测γδT细胞对肝癌细胞SMMC-7721的体外杀伤效应。

[结果]：两组γδT细胞纯度均达到70%以上，实验组γδT细胞较对照组（p＜0.01）纯度显著高；且实验组γδT细胞扩增倍数穿孔数、CD107a和颗粒酶B的表达及对肝癌细胞SMMC-7721的杀伤效应均显著高于对照组（p＜0.01）。

[结论]：白藜芦醇能促进γδT细胞增殖并可能通过上调颗粒酶B和穿孔素的表达增强其对肝癌细胞SMMC-7721细胞的杀伤效应。

关键词：白藜芦醇；γδT细胞；肝癌细胞SMMC-7721；杀伤效应原发性肝癌是严重危害人类健康的主要恶性肿瘤之一，死亡率高，预后极差[1]。

肝癌的发病涉及多个因素和环节，其发生和发展是一个多基因，多阶段的变化过程，而其侵袭，转移及术后复发是影响疗效和预后的重要因素。

近年来的研究发现，肝癌在演变过程中可以受到某些药物的控制。

肝癌对多种化疗药物不敏感或者很快耐受，并且化疗毒副作用大，因此，寻求低毒高效的天然植物成分防治肝癌成为近年研究的热点[2]。

1 材料与方法1.1 材料rhIL-2购自厦门特宝生物工程公司；从sigma公司购买白藜芦醇、Brefeldin A、帕米膦酸；购买自Gibco公司RPMI-1640和新生牛血清培养基；从BD公司购买鼠抗人FITC标记的PerCP-Cy5.5标记的anti-CD3、anti-γδTCR、APC标记的anti-IFN-γ；采购自eBioscience公司PE标记的PE标记的anti-Granzyme B（颗粒酶B）、anti-Perforin（穿孔素）、APC标记的anti-CD107a；购买自Invitrogen公司Fix&Perm细胞破膜试剂盒；从碧云天生物技术公司购买CCK-8试剂盒购；自中国科学院上海生命科学研究所细胞资源中心采购肝癌细胞SMMC-7721；流式细胞仪购自美国BD公司；购置自Heraeus公司的CO2培养箱。

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白藜芦醇对肝癌细胞增殖和凋亡影响及其机制*戴维奇徐凌王锋卫巍沈杰黄银实杨丽娟何姗姗郭传勇△（同济大学附属第十人民医院消化内科上海200072）摘要目的：研究白藜芦醇（resveratrol ，Res ）对肝癌细胞LM3周期及凋亡的影响并探讨其可能的分子机制。

方法：分别用50、100、150、200μmol/L 浓度的Res 作用LM3肝癌细胞24、48和72h ，CCK-8测定Res 对细胞的增殖作用；分别以相同剂量的DMSO 及无处理的LM3细胞为随机和空白对照，观察150μmol/L Res 作用72小时后对肿瘤细胞周期及凋亡的影响；Real time-PCR 及Western blot 分析Res 对LM3细胞中Bak 和Bcl-2mRNA 及蛋白表达的影响。

结果：Res 体外能明显抑制肝癌细胞LM3的生长增殖，在一定范围内呈现作用浓度（F=101.183，P ＜0.001）和时间依赖性（F=192.371，P ＜0.001）；150μmol/L Res 作用72小时后能显著减缓肝癌细胞LM3的周期转换（P ＜0.001），并诱导明显的细胞凋亡效应（P ＜0.001）；进一步的检测发现Res 作用LM3细胞后，Bak mRNA （P=0.002，0.007）及蛋白（P =0.004，0.01）表达增强，而Bcl-2mRNA （P=0.027，0.007）及蛋白（P =0.001，0.001）表达出现显著下降。

结论：Res 可能通过对Bak 及Bcl-2表达的调节来抑制肝癌细胞LM3的增殖，并诱导其细胞凋亡。

关键词：肿瘤；周期；Bcl-2；Bak 中图分类号：R735.7，R285.6文献标识码：A 文章编号：1673-6273（2012）01-16-04Effects of Resveratrol on Cell Cycle and Apoptosis of Hepatocellular Carcinoma Cells and its Possible Mechanism*DAI Wei-qi,XU Ling,WANG Feng,WEI Wei,SHEN Jie,HUANG Yin-shi,YANG Li-juan,HE Shan-shan,GUO Chuan-yong △（Tong Ji University,Department of Gastroenterology,Tenth People's Hospital,Shanghai,200072）ABSTRACT Objective:To investigate the effect of resveratrol (Res)on cell cycle and apoptosis of hepatocellular carcinoma LM3cells and the possible molecular mechanisms.Methods:Cell counting kit-8(CCK-8)assay was used to examine the effect on cell prolifer-ation of hepatocellular carcinoma LM3cells treated by Res with the concentration of 50μmol/L for 24and 72hours;LM3cells were treated by DMSO or no treatment as randomized and blank control,and then were detected.The expression of Bak and Bcl-2mRNA and protein in LM3cells treated by Res were evaluated by Real-time PCR and western blot,respectively.Results:Res inhibited the prolifera-tion of LM3cells in time-dependent manner （F=101.183，P ＜0.001）and concentration-dependent manner （F=192.371，P ＜0.001）in vit-ro.It was found that Res could accelerate cells cycle transition and induce apoptosis after treatment by Res at 150μmol/L for 72hours.The expression of Bak mRNA (P=0.002，0.007)and protein （P =0.004，0.01）were obviously up-regulated on treated LM3cells,while the expression of Bcl-2mRNA （P=0.027，0.007）and protein （P =0.001，0.001）decreased remarkably.Conclusion:Res can not only in-hibit proliferation of LM3cells but also induce cellular apoptosis through accommodating the expression of Bak and Bcl-2.Key words:Carcinoma;cycle;Bcl-2;BakChinese Library Classification(CLC):R735.7,R285.6Document code:A Article ID:1673-6273(2012)01-16-04*基金项目：国家自然科学基金(81072005)。

上海市科委基金(0941*******)作者简介：戴维奇(1985-)，男，硕士生；E-mail ：dai_yue@ △通讯作者：郭传勇，E-mail ：guochuanyong@ （收稿日期：2011-07-12接受日期：2011-08-06）前言原发性肝癌（primary liver cancer,PLC ）包括肝细胞癌（hep-atocellular carcinoma,HCC ）、肝胆管细胞癌（cholangiocarcino-ma ）、肝细胞及胆管混合癌等几种类型，PLC 是我国高发肿瘤，位于恶性肿瘤病死率第二位，这其中又以乙型肝炎病毒感染后的肝细胞癌为主[1]。

因此，针对能够明显抑制原发性肝细胞肿瘤的药物研究就显得十分重要。

白藜芦醇（Resveratrol,Res ）是1940年首次从毛叶黎芦的根部分离得到的非黄酮类多酚化合物。

Res 在新鲜葡萄皮中含量较高，在中药植物虎杖中含量最为丰富。

因Res 具有抗炎、抗氧化、抑制血小板聚集、保护心血管、鳌合自由基等作用，长期以来一直广泛用于心血管病的防治中。

最近研究表明Res 可显著抑制多种人类肿瘤细胞的生长增殖[2-6]，本研究主要通过白藜芦醇处理肝癌细胞株LM3，观察白藜芦醇对肝癌细胞增殖及凋亡的影响，检测相关基因及蛋白的变化情况，以期阐明白藜芦醇抗肿瘤的可能机制。

1材料与方法1.1细胞和主要试剂人肝细胞癌细胞株LM3(购自美国ATCC 公司)；Res(纯度>99.9％)(Sigma)用二甲基亚(DMSO)溶解后配成100mmol ／L的储存浓度；CCK-8试剂盒购自Dojindo 公司；引物序列由上海生工生物工程公司合成；兔抗人B 细胞淋巴瘤因子2（B-cell leukemia/lymphoma 2,Bcl-2）抗体、兔抗人Bcl-2同源拮抗物（Bcl-2homologous antagonist/killer,Bak ）抗体及鼠抗人β-actin 抗体均购自Santa Cruz 公司；Bradford 蛋白含量检测试剂盒购自南京凯基生物公司。

1.2细胞增殖活性检测1.2.1LM3细胞培养及Res 处理将LM3细胞置于含10％小牛血清、100U/mL 青霉素、100μg/mL 链霉素的High glucose DMEM 培养基中，移入CO 2培养箱内，于37℃、5％CO 2及饱和湿度条件下培养。

取对数生长期细胞用胰蛋白酶消化，按照1×103个细胞/孔接种到96孔板，细胞贴壁后，按照50、100、150、200μmol ／L 浓度梯度加入Res ，每个浓度重复3孔，分别设置24、48、72h 作为实验终止时间点。

以未添加Res 的LM3作为对照细胞。

1.2.2CCK-8法检测在不同浓度Res 作用不同时间后的LM3细胞培养液中加入10μl CCK-8试剂(5g/L)，继续培养4h 后吸去上清液，酶标仪测定光密度值(OD450nm)。

按公式细胞增殖抑制率(％)=(1-Res 作用细胞OD ／对照细胞OD )×100％计算细胞增殖抑制率。

以Res 浓度为横坐标，细胞增殖抑制率为纵坐标，绘制LM3细胞在不同浓度Res 作用下的量一效曲线。

1.3细胞周期和凋亡检测1.3.1制备Res 作用72h 后的LM3细胞用150μmol/L Res 作用LM3细胞72h 后，收集细胞(Res 加药组)，PBS 洗涤2次，加入70％乙醇固定，4℃过夜。

以未经任何处理的LM3细胞作为空白对照组，以相同剂量DMSO 处理的LM3细胞作为阴性对照组。

1.3.2流式细胞仪检测①细胞周期测定：收集三组LM3细胞，PBS 洗涤2次，加入70％乙醇固定，4℃过夜。

加入50g/mL 碘化丙啶(propidium iodide ，PI)250μL ，1mg/mL RNase 10μL ，避光30min ，流式细胞仪测定细胞周期。

②细胞凋亡检测：首先用150μmol/L Res 处理LM3细胞72h 后，收集细胞，PBS 洗2次，加入70％乙醇固定，4℃过夜。

用l ×binding Buffer 调节细胞浓度为1×106/mL ，取100L 细胞加入5μl Annexin-V 和5μl PI ，混匀后避光室温反应15min ，加400μl binding Buffer ，流式细胞仪检测细胞凋亡。

1.4Real-time PCR以150μmol/L Res 作用LM3细胞为实验组，未经任何处理的LM3细胞作为空白对照组，相同剂量DMSO 处理的LM3细胞作为阴性对照组，培养72小时后，分别收集3组细胞，提取总RNA 并且逆转录其cDNA ，利用SYBR Green Ⅰ通过实时定量PCR ，检测凋亡相关基因Bcl-2，Bak 的mRNA 表达情况。