该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。 样品加样位置和体积不受限制；
学反应。 蛋白质印迹最常用的探针是酶联抗体（HRP酶或AP酶）。
最常用的蛋白定量方法是凯氏定氮法， Lowry Folin法、考马斯亮蓝法、紫外分光光度法等。 带电粒子在电场中向与自身电荷相反的电极移动的现象称为电泳。 生物分子的特点是有专一的活性，如酶与底物的结合，抗原与抗体，激素与受体，糖与凝集素……等。 而可用于ELISA的抗体则有些是识别氨基酸序列特异性，有些是识别构像特异性。 配体特异性结合 重点 为减少非特异性干扰，需对固相载体进行处理，即用一种与待测物不反应的物质如蛋白质、核酸、吐温20等封闭载体上印迹以外的剩余吸附点（该 过程称为封闭），使探针仅与印迹物起反应，且不吸附到载体上。
Ve，即可从图中得到样品的分子量。
SDS-PAGE与凝胶过滤法是互补的
• 凝胶过滤法测得的是蛋白质四级结构（如果它有的话） 的分子量；
• SDS-PAGE测得的是蛋白质亚基的分子量； • 在有2-巯基乙醇（或DTT）存在时，SDS-PAGE可测得
蛋白质每条多肽链的分子量。 • 综合应用这两种方法，可得到待测蛋白质结构的许多信
平衡离子：H+, Na+, Cl-, OH-
基本液中） 3. 洗脱：穿透峰，洗脱峰
4. 收集、鉴定
离子交换层析有两种洗脱方式
• 分步洗脱：用间断地递增的不同离子强度的流动相分 次洗脱样品蛋白的方法；
• 梯度洗脱：连续改变流动相离子强度的方法。
变性和复性
• 原理：蛋白质在一定的理化条件下失去原 有的空间结构、生物学功能及部分理化特 性等称为变性。当变性条件去除后恢复原 有的空间结构及生物学功能即为复性。
• 方法：尿素变性复性从包涵体中纯化 原核表达蛋白
