蛋白质的磷酸化修饰是生物体内重要的共价修饰方式之一。蛋白质的磷酸化和去磷酸化这一可逆过程几乎调节着包括细胞的增殖、发育、分化、信号转导、细胞凋亡、神经活动、肌肉收缩及肿瘤发生等过程在内的所有生命活动。目前已知有许多人类疾病是由于某些异常的磷酸化修饰所引起，而有些磷酸化修饰却是某种疾病所导致的后果。在哺乳动物细胞生命周期中，大约有1/3的蛋白质发生过磷酸化修饰；在脊椎动物基因组中，有5%的基因编码的蛋白质是参与磷酸化和去磷酸化过程的蛋白激酶和磷酸（酯）酶。磷酸化修饰本身所具有的简单、灵活、可逆的特性以及磷酸基团的供体ATP的易得性，使得磷酸化修饰被真核细胞所选择接受而成为一种最普遍的调控手段。鉴于磷酸化修饰在生命活动中所具有的重要意义，探索磷酸化修饰过程的奥秘及其对细胞功能的影响已成为众多生物化学家及蛋白组学家所关心的内容。用蛋白质组学的理念和分析方法研究蛋白质磷酸化修饰，可以从整体上观察细胞或组织中磷酸化修饰的状态及其变化，这对以某一种或几种激酶及其产物为研究对象的经典分析方法是一个重要的补充，同时提供了一个全新的研究视角，并由此派生出磷酸化蛋白质组学（phosphoproteomics）这一新概念。在蛋白质组学水平进行磷酸化蛋白质的分析定量研究已引起人们广泛关注，各种技术也相应地发展起来.
1.1 免疫亲和色谱
富集磷酸化蛋白质最简单的方法就是用识别磷酸化氨基酸残基的特异抗体进行免疫共沉淀，从复杂混合物中免疫沉淀出目标蛋白质。目前，仅有酪氨酸磷酸化蛋白质的单克隆抗体可以用来进行有效的免疫共沉淀。这是因为该抗体具有较强的亲和力和特异性，可以有效地免疫沉淀酪氨酸磷酸化的蛋白质。Imam-Sghiouar等人从B-淋巴细胞中通过免疫沉淀获得酪氨酸磷酸化的蛋白质，然后再用二维电泳分离技术并结合质谱分析方法，鉴定出多个与斯科特综合症相关的酪氨酸磷酸化的蛋白质。由于抗磷酸化丝氨酸和苏氨酸抗体的抗原决定簇较小，所以令抗原抗体的结合位点存在空间障碍，特异性较差。因此，目前采用磷酸化丝氨酸/苏氨酸的抗体来富集磷酸化蛋白质的研究相对较
实验题目：牛奶中酪蛋白的提取与分析
实验材料：牛奶
小组成员：
实验时间：
一：实验题目：牛奶中酪蛋白的提取与分析
二：报告撰写者
三、小组成员
实验仪器
温度计、布氏漏斗（*）、pH试纸（*）、抽滤瓶（*）水浴锅、烧杯、量筒、表面皿（*）、电子天平（*）、2个1000ml的容量瓶（*）、2张醋酸纤维薄膜（2cm×8cm 厚度120nm）成品（*）、培养皿9—10cm（*）、毛细管（*）、尺子、铅笔、单面刀片（*）、镊子、普通滤纸（*）、电泳槽、玻璃板8cm×12cm（*）、752型分光光度计（*）、细布（*）0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml的移液管、试管、试管架、
四、实验材料
牛奶（蒙牛特仑苏和伊利金典）
五、实验试剂
特仑苏400ml、金典200ml、1.66g巴比妥（*）、12.76g巴比妥钠（*）、0.5g氨基黑10B（*）、50ml甲醇AR（*）、100ml冰醋酸AR（*） 、95%的乙醇250ml（*)、95%的乙醚100ml（*）、0.2mol/L的乙酸100ml（*）、0.2mol/L的乙酸钠100ml（*）、25g氢氧化钠固体（*）标准酪蛋白、15mg五水硫酸铜（*）、60mg酒石酸钾钠（*）
所需试剂配制方法：
乙醇乙醚混合液的配制：
10ml95%的乙醇
10ml95%的乙醚
乙醇钠缓冲液的配制：
0.2mol/L的乙酸51ml
0.2mol/L的乙酸钠49ml
巴比妥钠缓冲液的配制：
巴比妥1.66g
巴比妥钠12.76g
染色液的配制：
0.5g氨基黑10B
50ml甲醇AR
10ml冰醋酸AR
漂洗液的配制：
45ml95%乙醇AR
5ml冰醋酸AR
蒸馏水
透明液的配制：
25ml的冰醋酸AR
75ml的无水乙醇AR
0.05mol/L氢氧化钠溶液的配制：
16g的氢氧化钠固体定容至1000ml
10%氢氧化钠溶液的配制：
5g的氢氧化钠固体定容至50ml
大连理工大学生物化学-修志龙-综合习题测试二
综合习题测试（二）
一、糖（1）
糖的概念及其分类
糖类的元素组成、化学本质及生物学作用旋光异构
单糖、二糖、寡糖和多糖的结构和性质糖聚合物及其代表和它们的生物学功能糖蛋白的生物活性糖的鉴定原理
一、基本概念
糖的生物学功能、醛糖、酮糖、单糖、寡糖、还原糖、构型、构像、变旋、对映体、异头物、糖苷、糖苷键、氨基糖、肽聚糖、脂多糖、糖蛋白、蛋白聚糖、凝集素二、基本问题
1.常见单糖、寡糖、多糖、糖衍生物及特点；2.单糖的化学性质；
3.还原糖的定性、定量方法；4.糖肽连键的类型；习题
一、判断题
1.[]人体不仅能利用D-葡萄糖而且能利用L-葡萄糖。2.[]同一种单糖的α-型和β-型是对映体。3.[]由于酮类无还原性,所以酮糖亦无还原性。4.[]果糖是左旋的，因此它属于L-构型。
5.[]糖原、淀粉和纤维素分子中都有一个还原端,所以它们都有还原性。6.[]从热力学上讲,葡萄糖的船式构象比椅式构象更稳定。7.[]一切有旋光性的糖都有变旋现象。 8.[]α-淀粉酶和β-淀粉酶的区别在于α-淀粉酶水解α-1,4糖苷键，β-淀粉酶水解β-1,4糖苷键
9.[]糖对于生物体来说所起的作用就是作为能量物质和结构物质。10.[]天然葡萄糖只能以一种构型存在，因此也只有一种旋光度。12.[]构成淀粉,纤维素和半纤维素的基本单位都是葡萄糖.二、填空题
1、糖是具有_____结构的一大类化合物。根据其分子大小可分为_______、_______和______三大类。
2.蔗糖是由一分子______和一分子________组成,它们之间通过_______糖苷键相连。3.糖苷是指糖的___________和醇、酚等化合物失水而形成的缩醛(或缩酮)等形式的化合物。4.糖原和支链淀粉结构上很相似,都由许多_______组成,它们之间通过_______和______两
种糖苷键相连。两者在结构上的主要差别在于糖原分子比支链淀粉________、_______和________。
sds聚丙酰胺凝胶电泳法
一、原理
SDS聚丙酰胺凝胶电泳法（Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis，简称SDS-PAGE）是一种常用的蛋白质分离和定量分析方法。它基于蛋白质在电场作用下的电泳迁移性质，利用聚丙酰胺凝胶作为分离介质，通过SDS对蛋白质进行表面带负电荷的包被，使其在电场中按照分子质量大小进行分离。
二、步骤
1. 制备凝胶：将聚丙酰胺和交联剂加入缓冲液中，搅拌均匀后，倒入凝胶模具中，插入梳子，待凝胶凝固。
2. 样品处理：将待分析的蛋白质样品与SDS-PAGE样品缓冲液混合，再加热至95℃，使样品中的蛋白质与SDS充分结合。
3. 蛋白质分离：将凝固的凝胶取出，放入电泳槽中，注入电泳缓冲液，将样品注入样品孔中，通电进行电泳分离。
4. 染色与成像：电泳结束后，将凝胶取出，进行染色处理，常用的染色剂有Coomassie蓝染液和银染液，然后进行成像。
三、应用
SDS-PAGE广泛应用于生物化学和分子生物学领域，具有以下几个方面的应用：
1. 蛋白质分离与纯化：SDS-PAGE可将复杂的蛋白质混合物按照分子质量大小进行分离，进而可进行纯化和提取目标蛋白质。
2. 蛋白质定量：通过与蛋白质质量标准品进行比较，可以估算待测蛋白质的相对分子质量。
3. 蛋白质组学研究：SDS-PAGE是蛋白质组学研究中最基本的技术手段之一，用于分析复杂蛋白质混合物中的不同蛋白质。
4. 蛋白质结构分析：通过SDS-PAGE与其他技术手段的结合，可以研究蛋白质的结构、功能和相互作用。
总结：SDS-PAGE作为一种常用的蛋白质分离和定量分析方法，在生物化学和分子生物学领域发挥着重要作用。通过该方法，可以分离、纯化和定量各种蛋白质，为后续的研究提供基础数据。同时，SDS-PAGE也为蛋白质组学研究和蛋白质结构分析等提供了重要的技术支持。
