结肠炎大鼠模型

免疫法复制大鼠溃疡性结肠炎实验模型之探析溃疡性结肠炎的发生与免疫因素有着密切联系，用免疫法复制大鼠溃疡性结肠炎实验模型可与溃疡性结肠炎患者身体的病理变化更接近。

本法需要一定的设备、条件及相应的技术，实验周期长，但重复性好，较适合用于抗溃疡性结肠炎新药的筛选。

标签：免疫法；溃疡性结肠炎；模型动物实验是现代医学和生命科学研究的一个重要基础和支柱，在实验动物身上复制人类疾病，是促进医学科学发展的重要途径之一，可为医学理论以及治疗和预防疾病的研究提供必不可少的资料和研究方法。

目前复制溃疡性结肠炎动物模型的方法有多种，但尚未有一种模型与溃疡性结肠炎患者在致病因素、病理生理过程、免疫反应、临床表现、治疗手段等诸方面完全相同。

但本病的发生与免疫因素最为密切，因此我们在实验时采取了免疫与局部刺激相结合的造模方法，这样使动物模型与溃疡性结肠炎患者身体的病理变化更接近，使实验研究更靠近临床，更具有说服力。

兹就免疫法复制大鼠溃疡性结肠炎实验模型浅析如下：1免疫法造模的意义最新的研究表明溃疡性结肠炎的发生是患者遗传背景、免疫系统、肠粘膜、肠道菌群及环境等多方面交互作用的结果[1]。

除遗传及肠道菌群因素外，肠粘膜免疫系统在该病的发病机制中便占核心地位。

正常的非炎性肠粘膜的促炎细胞因子与抗炎细胞因子能保持完美的平衡，从而既能对抗肠道内病原体又不至因非致病性抗原产生过激的免疫学反应。

但是在溃疡性结肠炎患者的肠粘膜中，这种平衡则被打破而倾向于促炎反应之侧，最终导致疾病的发生。

因此现代医学实验研究中若采用免疫法复制溃疡性结肠炎病变模型，可最大程度上还原其病理本质，提高相关实验研究的科学价值。

2造膜方法[2] [3] [4]大鼠首次每只足趾内注射抗原（异体结肠粘膜）3mg，并于第10、17、24、31天分别于足趾、背部、腹股沟、腹腔内注射抗原6mg（末次注射不加福氏佐剂）。

然后取血，用凝集法测定抗体，确定抗体产生后，对模型大鼠用乌拉坦麻醉（0.4ml/100g），并进行下列操作（处理前禁食24小时）。

结肠炎动物模型具体步骤及方法原型物种人来源三硝基苯磺酸钠(TNBS)导致的结肠炎模式动物品系SPF级SD大鼠，健康，6~8W，雄性，体重为180g-200g。

实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。

实验周期4-6 weeks建模方法模型制作方法：动物造模当日计为实验第1天，各组动物造模前禁食不禁水24 h，乙醚吸入麻醉，将一直径2.0 mm、长约12 cm的塑胶管由肛门轻缓插入大鼠体内深约8 cm，缓慢注入一定浓度的TNBS的乙醇溶液，1 min之内完成。

灌药完毕后，缓慢拔出塑胶管，用手捏住肛门，提起大鼠尾部，持续倒置3min，避免造模试剂流出，使造模剂充分渗入大鼠肠腔内。

对照组动物使用等体积的生理盐水，按上述同样操作进行灌肠。

各组动物均正常饲养。

TNBS的乙醇溶液（将体积分数为5%的TNBS水溶液与无水乙醇以体积2:1混合）现配现用。

应用用于结肠炎药物的研发和机理的研究1. 一般情况观察及体重记录一般观察：观察各组动物的情况，若出现意外症状，记录情况并及时反馈；记录可能出现的死亡率。

体重：从给药前一天开始，每三天称量并记录各组动物体重，直至给药结束，绘制体重变化曲线。

实验过程中体重共记录10次体重统计、变化曲线作图。

2. 肠组织取材及大体评分：各组动物安乐死后，解剖时截取自肛门向上的整段结肠组织测量结肠长度进行宏观评价：各个结肠组织带标尺拍照，记录原始的大体形态，依照评分标准进行评分。

结肠组织大体评分标准如下：0分无损伤1分充血但没有溃疡2分充血而且肠壁变厚但没有溃疡3分有一处小溃疡，最长径约0-1cm4分溃疡较大，最长径约1-2cm5分溃疡较大，最长径>2cm对应以上评分标准，记录每份结肠组织的具体评分。

评分标准参考文献：Wallace JL, Keenan CM. An orally active inhibitro of leukotriene synthesis accelerates healing in a rat model of colitis. Am J Physiol,1990 258:G527-G5343.3 结肠组织病理染色：组织做以下处理：每个结肠均分成3段，每个动物取材的位置要尽量一致（不管剪切位置是否有病理损伤尽量保持一致）。

基金项目:甘肃省教育厅基金资助项目(编号:103002)。

作者简介:王小莲(1974—),女,讲师,甘肃省张掖医学高等专科学校(张掖　734000)。

溃疡性结肠炎大鼠模型研究进展王小莲 关键词:溃疡性结肠炎;动物模型;综述中图分类号:R574162　文献标识码:A 文章编号:1000-7156(2011)03-0054-03 溃疡性结肠炎(UC )又称非特异性溃疡性结肠炎,是一种病因不明的大肠黏膜的慢性炎症和溃疡性病变。

建立理想的动物模型对于阐明该病的病因、病变发展规律以及有效的防治有重要意义。

UC 动物模型的制备方法,除了常用的经典方法如乙酸造模法、角叉菜胶法等化学方法,近年来,出现了许多新的造模方法,在发病机制上更接近于自然患病。

现将制作UC 动物模型方法综述如下。

1　化学造模法111　乙酸造模法:Cetinkaya A[2]将乙酸注入大鼠结肠,然后以019%NaCl 溶液冲洗2次。

造模后大鼠出现腹泻、血便,第3天病变达高峰期,病变以远端结肠为主,多在1周内消失。

该模型的不足之处在于结肠炎症以急性单纯性黏膜炎症为主,病情进展和愈合迅速。

目前主要用于UC 急性炎症发作期药物治疗的疗效观察和评价黏膜愈合机制。

112　角叉菜胶造模法:大鼠自由饮用3%角叉菜胶溶液2周后出现UC 症状,3周后肉眼可见盲肠、结肠、直肠出现针尖大小的溃疡和出血点。

组织学可见隐窝脓肿、变形,黏膜溃疡形成,黏膜和黏膜下层炎性细胞渗出。

该模型的特点是病变局限于结直肠,造模过程中粪便含菌量升高。

该模型的优点是持续时间长,急性期3～6周,持续6～8周,停止饮用角叉菜胶后炎症持续1～2周。

缺点是模型动物多用豚鼠,成本较高,周期较长。

113　葡聚糖硫酸钠(DSS ):BALB /c 小鼠自由饮用5%DSS溶液5天,造成急性UC 模型。

急性模型表现为体重下降、腹泻、血便,溃疡多出现于远端结肠。

产生的细胞因子主要为白细胞介素(I L )-12、干扰素(I F N )-γ、I L -1、肿瘤坏死因子(T NF )-α等。

抗凝治疗在TNBS诱导的大鼠实验性结肠炎模型中的作用
结肠炎是一种常见的炎症性肠道疾病，其主要特征是结肠黏膜的慢性炎症和溃疡形成。

目前，抗凝治疗已经被广泛应用于心血管疾病等病症中，然而其在结肠炎治疗中的作用尚不清楚。

为了探究抗凝治疗在结肠炎中的作用，我们使用TNBS（三硝基苯磺酰氯）诱导的大鼠实验性结肠炎模型进行了实验研究。

首先，我们随机将大鼠分为两组，分别为抗凝治疗组和对照组。

接着，我们通过肛门给予大鼠TNBS诱导结肠炎。

在治疗组中，我们给予大鼠抗凝药物，而对照组则不进行任何治疗。

在治疗结束后，我们对大鼠进行了结肠镜检查，并收集了血液和组织样本。

经过观察，我们发现抗凝治疗组的大鼠结肠炎症状明显减轻，与对照组相比，其结肠镜下显示的炎症程度和溃疡面积明显减少。

同时，在抗凝治疗组中，大鼠血液中的炎症指标如C-反应蛋白（CRP）和白细胞计数也显著降低。

此外，我们还观察到抗凝治疗组的大鼠结肠黏膜组织中炎症细胞浸润减少，结肠黏膜屏障功能得到改善。

这些结果提示抗凝治疗在TNBS诱导的大鼠实验性结肠炎模型中具有抗炎作用。

抗凝药物可能通过减少炎症细胞浸润和改善结肠黏膜屏障功能来减轻结肠炎症状。

然而，我们的研究还存在一些局限性，例如我们没有对抗凝治疗的机制进行深入研究。

总之，我们的研究结果表明抗凝治疗在TNBS诱导的大鼠实验性结肠炎模型中具有抗炎作用。

这为进一步研究抗凝治疗在结肠炎中的应用提供了初步的实验依据。

希望通过进一步的研究，我们能够深入了解抗凝治疗在结肠炎治疗中的机制，并为结肠炎患者的临床治疗提供新的思路和方法。

免疫复合型溃疡性结肠炎大鼠模型的实验研究康宜兵;吕永慧;吴宇金;钟志勇;武昕【摘要】目的建立免疫复合型溃疡性结肠炎大鼠模型并探讨其应用价值.方法 20只SD大鼠,随机分为正常对照A组10只、模型组10只.模型组用大鼠颈、背部皮下注射抗原乳化液,第23天,造模组大鼠TNBS灌肠.空白对照组以生理盐水灌肠,比较各组大便的性状、便血程度、体重下降情况,并进行组织学观察.结果 UC模型大鼠体重减轻,体重增长缓慢(P＞0.05).血清IL-10水平降低(P＜0.05).大便的性状评分、CMDI评分均升高(P＜0.01).结论免疫复合型溃疡性结肠炎大鼠模型,该模型成功率高,重复性好,且模型的病变机制与人类UC相符,是较为理想的溃疡性结肠炎动物模型.【期刊名称】《云南中医中药杂志》【年(卷),期】2015(036)010【总页数】3页(P55-57)【关键词】溃疡性结肠炎;大鼠;动物模型【作者】康宜兵;吕永慧;吴宇金;钟志勇;武昕【作者单位】广东省广州市中医医院,广东广州510000;广东省广州市中医医院,广东广州510000;广东省广州市中医医院,广东广州510000;广东省医学实验动物中心,广东广州510000;广东省医学实验动物中心,广东广州510000【正文语种】中文【中图分类】R285溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)是一种主要累及直肠、结肠黏膜的慢性非特异性炎症。

在动物试验模型的研究方面，近年来开展的UC的实验动物模型有化学诱导模型、免疫致敏模型、细胞移植模型和基因敲除模型等，其中TNBS 诱导、单纯免疫法及免疫复合法3种UC大鼠模型较为常用。

免疫复合法模型的致病机制是在全身致敏的基础上给TNBS，导致迟发性变态反应造成肠黏膜的损伤，达到全身免疫异常与局部炎症病变的结合。

虽然制作方法稍复杂，但免疫复合法重复性好，病变更类似人UC，持续时间长，是较理想的造模方法。

免疫复合法模型病变累及全结肠以及末段回肠，溃疡病变可维持8周以上，12周后有愈合倾向，但仍可见结肠壁增厚及炎性细胞浸润[1]。

结肠炎大鼠模型————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：4.1 材料与方法4.1.1 材料（一）实验试剂2，4，6-三硝基苯磺酸购于Sigma 公司（二）实验仪器同第三章；FCOM-6124 型半自动生化分析仪，德国倍肯公司（三）实验日粮组成与营养水平基础日粮按照NRC(1998)营养标准配制，如表4-1。

（四）实验动物SD 大鼠购于哈尔滨医科大学实验动物中心。

4.1.2 方法（一）实验动物分组与处理选取体重220±10 g 的SD 大鼠400 只，雌雄各半，分别采用醋酸和TNBS/乙醇两种方法复制大鼠结肠炎模型。

动物饲养于空调室内，室温20±2℃，相对湿度40%-50%，基础日粮如表4-1，颗粒饲料喂养，自由饮水。

将大鼠随机分为4 组：Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组。

Ⅰ组和Ⅱ组造模前饲喂4 周鱼油（0.5%的鱼油）后，Ⅰ组继续饲喂含0.5%鱼油日粮，而Ⅱ组饲喂基础日粮；Ⅲ组在造模后饲喂含0.5%鱼油日粮，而Ⅳ组造模后饲喂基础日粮。

（二）大鼠结肠炎模型的建立通过广泛文献检索和多次预实验结果，我们选取醋酸和2，4，6-三硝基苯磺酸/乙醇灌肠法两种方法建立结肠炎大鼠实验模型。

醋酸模型的建立参考文献[140-142]，大鼠禁食不禁水24h，乙醚轻微麻醉后，用外径为2mm的硅胶管插入大鼠肛门内约8cm，经管内注入10%的醋酸溶液2ml，10-20s 后注入生理盐水5ml以消除醋酸的作用，自然清醒后放回笼内正常饲养。

TNBS/乙醇模型的建立参考文献[143]复制大鼠结肠炎模型，大鼠禁食不禁水24h，乙醚轻微麻醉后，用外径为2mm 的硅胶管插入大鼠肛门内约8cm，经管内注入TNBS/50%乙醇溶液0.85ml，倒立30s，捏紧肛门平放5min 即可，自然清醒后放回笼内正常饲养，实验期为28d。

（三）样品的采集与处理分别于模型复制成功第24h、7d、14d 和28d 后称重、无菌采取血液后处死大鼠。