Hep-2型细胞灵长类肝组织复合片检测抗核抗体的应用

抗核抗体测定及其临床意义【中图分类号】r512.62 【文献标识码】a 【文章编号】1672-3783(2012)09-0099-01抗核抗体又名抗核因子是泛指一类具有抗各种核成分的抗体。

它是一种自身抗体,是自身免疫病实验室检查的重要项目之一。

自1948年发现红斑性狼疮(le)细胞以来,对抗核抗体进行了广泛、深入的研究,但由于核抗原的多样性和复杂性,因此有关它的免疫特性、检查方法以及临床意义等问题还没有完全解决。

抗核抗体的免疫特性抗核抗体是机体在自稳机理失调情况下产生的一种抗自身核抗原的抗体,主要存在于igg,也见于igm、iga甚至igd和ige中。

1 抗核抗体的测定原理将稀释后的待检血清或脑脊液、胸水、腹水等体液标本滴加在含有hep-2细胞和灵长类肝脏的载片反应区上反应，如果被检血清中存在抗细胞抗原成分的抗体，则可以特异性的与抗原基质片hep-2细胞和灵长类肝脏中的抗原成分结合形成抗原抗体复合物，再与兔或羊抗人免疫球蛋白igg荧光素标记抗体反应，然后在荧光显微镜下观察特异性荧光模型。

2 镜下抗核抗体的核型2.1 均质型：细胞核均匀着染荧光，有些核仁部位不着色，分裂期细胞染色体可被染色出现荧光。

与均质型相关的自身抗体主要有抗不溶性dnp，抗组蛋白抗体，抗dsdna抗体也可产生均质性。

高滴度均质型主要见于sle患者，低滴度均质型可见于ra、慢性肝脏疾病、传染性单核细胞增多症或药物诱发的狼疮患者。

2.2 颗粒型（斑点型）：细胞核内出现颗粒状荧光，分裂期细胞染色体无荧光显色。

与斑点型相关的自身抗体涉及抗核糖体核蛋白颗粒抗体，如抗sm、抗ru1rnp、抗ssb／la等抗体。

高滴度的斑点型常见于mctd，同时也见于sle、硬皮病、ss等自身免疫性疾病。

2.3 核周（核膜）型：又称周边型（rim），荧光着色主要显示在细胞核的周边形成荧光环，或在均一的荧光背景上核周边荧光增强；分裂期细胞染色体区出现荧光着色。

抗核抗体的检测方法主要包括间接免疫荧光法、放射免疫法、ELISA测定法和免疫印迹测定法。

以下是这些方法的简要介绍和原理：
1.间接免疫荧光法：此方法是检测抗核抗体的常用方法之一。

原理是将待测标本与细胞底物片（如HEp-2细胞）的相应抗原进行反应，然后加入
荧光素标记的抗人免疫球蛋白抗体（通常为抗IgG抗体），形成抗原-抗体-荧光二抗的复合物。

通过荧光显微镜观察，可以判断待测标本中是否存在针对细胞相关抗原的自身抗体。

2.放射免疫法：此方法常用于检测抗DNA抗体。

原理是用同位素标记DNA，与被检血清中的抗DNA抗体结合，然后通过沉淀和对比沉淀物与上
清液中的放射活性，得到DNA的结合活性。

结合率高于一定值（通常为20%）则判断为阳性。

3.ELISA测定法：即酶联免疫吸附法，是一种常用的固相酶免疫测定方法。

原理是将抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在
固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗去，最后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。

4.免疫印迹测定法：此方法是将混合的抗原作为凝胶电泳分离，然后转印到硝酸纤维素的薄膜上，再用标记抗体进行检测和分析。

以上各种方法都有其特点和适用范围，可以根据实验需求和条件选择合适的方法进行检测。

主管检验师资格考试临床免疫学和免疫检验复习习题第二十四章自身免疫性疾病及其免疫检测（附答案解析）一、A1型题1、可检出RF免疫球蛋白类别的方法是（）。

A、胶乳凝集B、速率散射比浊法C、ELISA法D、电泳法E、TRUST2、RF免疫球蛋白的主要类别是（）。

A、IgGB、IgAC、IgMD、IgEE、IgD3、关于RF描述错误的是（）。

A、以变性IgG为靶抗原的自身抗体B、抗人或动物IgGFab片段的抗体C、与人或动物变性IgG结合D、不与正常IgG发生凝集E、多见于类风湿关节炎患者4、自身抗体的特征不包括（）。

A、是自身免疫性疾病的主要标志B、高效价自身抗体是自身免疫性疾病的特点C、自身抗体是临床确诊的重要依据D、自身抗体是指导临床用药的重要依据E、自身免疫性疾病可不伴有特征性自身抗体谱5、下列哪一种自身免疫病患者最可能检出抗自身IgG抗体（）。

A、恶性贫血B、重症肌无力C、自身免疫性溶血D、类风湿性关节炎E、肺肾出血性综合征6、下列哪种疾病是非器官特异性自身免疫疾病（）。

A、重症肌无力B、慢性甲状腺炎C、慢性溃疡性结肠炎D、系统性红斑狼疮E、特发性血小板减少性紫癜7、不属于自身免疫性溶血性贫血特点的是（）。

A、体内出现抗红细胞自身抗体B、抗人球蛋白试验阳性C、红细胞寿命缩短D、多见于青年男性E、多继发于淋巴系统恶性病、结缔组织病、感染和药物应用后8、以下叙述正确的是（）。

A、ANA无器官特异性，有种属特异性B、ANA无器官特异性，无种属特异性C、ANA有器官特异性，无种属特异性D、ANA无器官特异性，有种属特异性E、ANA既有器官特异性，又有种属特异性9、下列说法错误的是（）。

A、抗核抗体（ANA）是一组将自身真核细胞的各种细胞核成分作为靶抗原的自身抗体的总称B、ANA的性质主要是IgG，也有IgM、IgA和IgDC、ANA主要存在于血清中，也可存在于胸腔积液、关节滑膜液和尿液中D、ANA阳性一定患有自身免疫性疾病E、正常老年人也可有低效价的ANA10、下列哪种疾病是非器官特异性自身免疫疾病（）。

抗核抗体检测在乙肝患者中的应用价值作者：郑红霞郭飞飞来源：《中国实用医药》2013年第33期【摘要】目的分析乙肝患者血清中抗核抗体（ANA）的阳性率，探讨其临床应用价值。

方法采用间接免疫荧光法（IIF）对90例乙肝患者和90例健康体检者血清中的ANA进行检测，并测定其ALT、AST。

结果 90例乙肝患者中ANA的阳性率为18.9%，荧光模型以核颗粒型为主；ANA阳性组的ALT、AST高于ANA阴性组，差异有统计学意义。

结论 HBV可诱导机体产生低滴度的抗核抗体，自身抗体的产生与肝脏的损伤程度存在一定的相关性。

【关键词】抗核抗体；乙型病毒性肝炎乙肝病毒（HBV）是导致乙型病毒性肝炎的病原体。

近些年的研究表明乙肝患者的肝细胞损伤并不是由HBV直接作用引起的，而是通过诱导机体产生针对HBV的免疫应答引起肝细胞免疫损伤，表现为CD8+CTL对受感染肝细胞的细胞毒效应[1]。

在乙型肝炎的发生和发展过程中可能涉及针对自身抗原的免疫应答。

抗核抗体（antinuclear antibody， ANA）是一组将自身真核细胞的各种成分例如核糖核蛋白、DNA、可提取的核抗原（ENA）和RNA等作为靶抗原的自身抗体的总称，能与所有动物的细胞核发生反应[2， 3]。

随着研究的不断深入，科学家们开始在乙肝患者的血液中发现多种非特异性自身抗体[4]。

为进一步了解自身免疫性抗体在乙肝发生和发展中的临床意义，本研究采用间接免疫荧光（IIF）和免疫印迹法（western blot）检测90例乙肝患者和90例正常人血清中的ANA，探索自身抗体在乙肝发生和发展中的作用。

1 资料与方法1. 1 一般资料本研究选取2012年6月～2013年5月在本院感染科和消化科住院的乙肝患者90例作为实验组，其中男性48例，年龄30～65岁；女性42例，年龄32～63岁。

所有乙肝病例的诊断均符合2000年中华医学会制定的诊断标准。

对照组为来本院体检健康体检者，其中男性45例，年龄29～62岁；女性45例，年龄30～58岁。

抗核抗体谱(IgG)检测标准操作规程1.目的规范抗核抗体谱(IgG)检测，保证结果的准确性。

2.适用范围检验科免疫组工作人员。

3.试剂规格名称与组成型号名称：ANA 谱 1靶抗原：nRNP/Sm，Sm，SS-A，Ro-52，SS-B，Scl-70，Jo-1，CENP B，dsDNA，核小体，组蛋白，核糖体 P 蛋白类型：IgG基质：抗原包被的检测膜条规格：16×01(16)4.预期用途：用于体外定性检测人血清或血浆中的抗 nRNP、Sm、SS-A（天然 SS-A 和 Ro-52）、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENP B、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体P 蛋白和 AMA M2 共 14 种不同抗原 IgG 类抗体。

5.适应症：夏普综合征（MCTD），系统性红斑狼疮（SLE），干燥综合征，进行性系统性硬化症，多肌炎皮肌炎、重叠综合征、局限型进行性系统性硬化症（CREST 综合征），原发性胆汁性肝硬化。

6.临床意义：抗核抗体识别是各种细胞核组分（细胞核的生化成份）[1,2]，包含核酸、细胞核蛋白及核糖蛋白。

可特征性地出现于许多疾病中，尤其是风湿性疾病[3,4,5]。

在炎症性风湿性疾病中，这些抗核抗体的阳性率在 20%到 100%之间，以风湿性关节炎的阳性率最低，在 20%至40%之间。

因此，ANA 鉴别诊断在对个别风湿疾病的确认十分必要，而且对自身免疫性疾病的进一步诊断也很有价值。

[3,6,7,8,9,10,11]风湿疾病—夏普综合征（混合结缔组织病＝MCTD)[8]—系统性红斑狼疮（SLE)[8, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22]—干燥综合征（原发性干燥综合征）[5],—系统性硬化症（系统性硬皮病,SSc)[1, 23],—局限型系统性硬化症（CREST 综合征） [28]—多肌炎/皮肌炎[12,15]—类风湿性关节炎[5]7.主要组成成分：8.储存条件及有效期： 2-8°C 保存，不要冷冻。