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儿童外周血单个核细胞EB病毒DNA载量检测在病情评估中的临床意义蔡勉珊;方炳雄;黄丽旋;游丽莎;秦泽鸿;谢城【摘要】目的探讨儿童外周血单个核细胞EB病毒(EBV)DNA载量检测在病情评估中的临床意义.方法统计2016年1月～2017年12月本院儿科收治的1171例发热患儿EBV检测阳性率.将符合纳入标准的146例EBV阳性的患儿,分为高病毒载量组和低病毒载量组,分析两组患儿的临床资料和实验室指标.结果以发热为主诉的患儿,EBV阳性率为20.32％,其中7岁以内的儿童比大龄儿童EBV阳性检测率高(P<0.05);高病毒载量组患儿扁桃体炎发生率、淋巴结肿大发生率和外周血异常淋巴细胞比例、淋巴细胞计数、淋巴细胞比例,以及血清中TBA、LD、LDH和CK-MB水平,均比低病毒载量组高(P<0.05);高病毒载量组患儿热退时间和住院天数比低病毒载量组长(P<0.05).结论儿童外周血单个核细胞EB病毒DNA载量检测有助于病情评估,EBV载量可预测患儿的临床转归情况.【期刊名称】《中国医药科学》【年(卷),期】2018(008)014【总页数】5页(P7-11)【关键词】儿童;EBV病毒DNA;外周血单个核细胞;病情评估【作者】蔡勉珊;方炳雄;黄丽旋;游丽莎;秦泽鸿;谢城【作者单位】广东省普宁市人民医院儿科,广东普宁 515300;广东省普宁市人民医院检验科,广东普宁 515300;广东省普宁市人民医院检验科,广东普宁 515300;广东省普宁市人民医院检验科,广东普宁 515300;广东省普宁市人民医院检验科,广东普宁 515300;广东省普宁市人民医院儿科,广东普宁 515300【正文语种】中文【中图分类】R720.5EB 病毒（Epstein-barr virus， EBV）为双链DNA病毒，是一种嗜人B淋巴细胞病毒。
EBV感染是儿科比较常见的一类病毒性传染病，感染时，症状轻重不一，多以扁桃体炎、淋巴结肿大、肝脾肿大为主要临床特征[1-2]。
Mod Diagn Treat现代诊断与治疗2021Jan32（1）艾滋病是由于感染人类免疫缺陷病毒（HIV）而引发的全身性疾病，该疾病可导致人体出现不同程度的免疫缺陷，且随着病程越长，免疫缺陷越严重，因此应早诊断早治疗，以降低疾病损伤［1］。
HIV分为HIV-1型和HIV-2型，以HIV-1为主。
目前临床多采用免疫印迹实验（WB）确诊艾滋患者，但诊断过程中，仍会出现部分不确定感染患者［2］。
根据技术要求，HIV抗体不确定的样本需要结合同时期流行病学资料，并于4周后进行随访检测，且在随访期间，带型患者有进展但是检测结果并不满足阳性标准的患者，仍需随访至第8周，再次检测，整体耗时2个月，时间较长，可能会增加病毒传播风险，同时可能延误患者早期治疗。
当人体被HIV-1感染后，病毒载量随之增加，且会对淋巴系统进行攻击，从而对机体免疫系统造成损伤，而有部分研究学者认为，病毒载量检测可提高HIV-1的检出率［3］。
基于此，本研究选取我院治疗的128例疑似艾滋病患者作为研究对象，旨在分析病毒载量检测对1型艾滋病病毒的诊断价值。
报道如下。
1资料与方法1.1一般资料选取2018年8月~2020年3月我院收治的128例疑似艾滋病患者，所有患者均进行酶联免疫吸附试验、WB检测，不确定患者进行病毒载量检测。
其中男82例、女46例；年龄26~39（32.31±5.80）岁。
1.2纳入与排除标准纳入标准：（1）近3个月内未服用免疫抑制剂等药物；（2）首次检查；（3）患者同意翻阅病历资料。
排除标准：（1）抗病毒药物治疗史；（2）依从性差、无法完全配合检查；（3）无其他免疫系统疾病。
1.3方法HIV抗体检测程序和方法根据《全国艾滋病检测技术规范（2015年修订版）》［4］进行。
1.3.1筛查阳性复试实验分别使用北京金豪公司HIV-1+2抗体和珠海丽珠公司HIV-1+2抗原抗体进行两种不同酶联免疫吸附试验。
操作严格按照试剂盒说明书进行。
艾滋病检测技术HIV-1核酸检测规范1 范围本章规定了HIV-1核酸定性和定量检测（病毒载量）的意义、实验室要求、检测方法、质量控制及结果判定标准，适用于HIV-1核酸的定性检测和定量的测定。
2 核酸检测的意义核酸检测可用于HIV感染诊断、血液筛查、病程评估及抗病毒治疗效果监测。
2.1 感染诊断2.1.1 作为补充试验：用于筛查试验有反应但抗体确证试验不确定或阴性样本的判定；对筛查试验有反应但抗体确证试验不确定或阴性的疑似艾滋病晚期患者需将核酸检测、临床病史和CD4+T淋巴细胞计数检测结果综合判断。
对于抗体筛查试验阴性但免疫功能低下者，也可进行核酸检测，结合临床综合判断。
2.1.2 急性期诊断：对近期有明确流行病学史的个体，包括患有性病或有性病史，有同性和异性性接触不安全性行为，有共用注射器吸毒史，有医源性暴露史，有职业暴露史，HIV/AIDS 患者的配偶或性伴侣，HIV/AIDS 母亲所生子女等，如抗体筛查试验无反应，可通过核酸检测判定是否为急性期感染。
核酸检测结果阴性或低于最低检测限不能排除HIV-1感染。
2.1.3 HIV-1暴露婴儿感染早期诊断HIV-1感染母亲所生小于18个月龄的婴儿，不同时间的两次HIV-1核酸检测均为阳性即可作出诊断。
18个月龄以上儿童诊断与成人相同。
2.2 血液筛查：对献血者及采供血机构的原料血浆进行核酸检测，可及时发现窗口期感染，降低输血的“残余危险度”，减少二代传播。
2.3 抗病毒治疗效果监测HIV感染者和艾滋病病人经抗病毒药物治疗后，定期进行HIV-1病毒载量检测，可判断抗病毒药物治疗的疗效。
病毒载量结果动态分析，对决定是否继续使用原定的治疗方案以及是否需要更改治疗方案起到重要作用。
一般启动抗病毒治疗6个月后应进行病毒载量检测，以监测治疗效果，每年应检测一次。
治疗前进行检测可了解病人的病毒载量基线，有助于评价治疗后效果。
如适时重复检测病毒载量，没有低于检测限，需要考虑治疗是否失败。
东北制药HIV病毒载量检测试剂技术参数
包3-病毒载量试剂（东北制药）
东北制药HIV病毒载量检测试剂技术参数
1.原理和方法：采用磁珠法提取血清或血浆样本中病毒RNA，采用Taqman探针法进行HIV-1的实时荧光定量RT-PCR检测。
2.定量方法：外部标准品定量
3.检测项目：HIV－1RNA定量检测
4.最低检出限：≤50IU/mL（约28copies/mL,置信度≥95%。
）
5.线性范围：2×102~1×109IU/mL
6.特异性：100%。
7.性能指标：Ct值的变异系数＜10%，浓度变异系数＜50%
8.样品类型：血清或血浆
9.样品体积和规格：可选0.2mL、0.4mL；48T/盒
10.样品处理能力：可以同时进行检测8~96个样品
11.检测效率：96个样品的检测时间约为4小时
12.检测亚型：HIV-1A，B，C，D，AE，F，G，AG-GH和O组，共9个亚型
13.抗污染方案：核酸提取及反应体系建立设备：Hamilton Microlab STAR，TECAN EVO全自动液体工作站；核酸扩增设备：ABI7500荧光定量PCR仪。
14.检测平台：核酸提取及反应体系建立设备：Hamilton Microlab STAR，TECAN EVO全自动液体工作站；核酸扩增设备：ABI7500荧光定量PCR仪。
15.注册资格：须提供国食药监械（准）字号注册证。
16.供货计划：按用户要求数量准时分批次供货，到货试剂有效期大于10个月。
艾滋病实验室检测HIV/AIDS 的实验室检测主要包括HIV抗体检测、HIV核酸定性和定量检测、CD4+ T淋巴细胞计数、HIV耐药检测等。
HIV⁃1/2抗体检测是HIV感染诊断的金标准，HIV核酸检测(定性和定量)也用于HIV 感染诊断;HIV 核酸定量(病毒载量)和CD4+ T 淋巴细胞计数是判断疾病进展、临床用药、疗效和预后的两项重要指标;HIV 耐药检测可为HAART方案的选择和更换提供指导。
1.HIV⁃1/2 抗体检测:包括筛查试验和补充试验。
HIV⁃1/2抗体筛查方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、化学发光或免疫荧光试验、快速试验(斑点ELISA和斑点免疫胶体金或胶体硒、免疫层析等)、简单试验(明胶颗粒凝集试验)等。
补充试验方法包括抗体确证试验(免疫印迹法，条带/线性免疫试验和快速试验)和核酸试验(定性和定量)。
筛查试验呈阴性反应可出具HIV⁃1/2抗体阴性报告, 见于未被HIV感染的个体，但窗口期感染者筛查试验也可呈阴性反应。
若呈阳性反应，用原有试剂双份(快速试验)/双孔(化学发光试验或ELISA)或两种试剂进行重复检测，如均呈阴性反应，则报告为HIV抗体阴性;如一阴一阳或均呈阳性反应，需进行补充试验。
补充试验:抗体确证试验无HIV特异性条带产生，报告HIV⁃1/2抗体阴性;出现条带但不满足诊断条件的报告不确定，可进行核酸试验或2~4周后随访，根据核酸试验或随访结果进行判断。
补充试验HIV⁃1/2 抗体阳性者，出具HIV⁃1/2抗体阳性确证报告。
核酸试验:核酸定性检测结果阳性报告HIV⁃1核酸阳性，结果阴性报告HIV⁃1核酸阴性。
病毒载量检测结果低于检测线报告低于检测线;>5 000拷贝/ml 报告检测值;检测线以上但≤5 000拷贝/ml建议重新采样检测，临床医生可结合流行病学史、CD4+、CD8+T淋巴细胞计数或HIV抗体随访检测结果等进行诊断或排除诊断。
2.CD4+T淋巴细胞检测CD4+T淋巴细胞是HIV感染最主要的靶细胞，HIV感染人体后，出现CD4+T淋巴细胞进行性减少，CD4+/CD8+T淋巴细胞比值倒置，细胞免疫功能受损。
新冠病毒的快速诊断试剂与检验方法新冠病毒（COVID-19）自2019年底以来迅速传播，成为全球关注的焦点。
快速且准确的诊断方法对于控制疫情、及时隔离患者和阻断传播链至关重要。
在病毒检测的进程中，快速诊断试剂和检验方法起着关键的作用。
本文将介绍新冠病毒快速诊断试剂和检验方法的最新进展。
一、快速诊断试剂1. RT-PCR（逆转录聚合酶链反应）逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）是目前最常用的新冠病毒检测方法。
它通过提取病毒RNA，利用逆转录酶将RNA转录成DNA，再进行聚合酶链反应，扩增病毒基因片段。
RT-PCR具有高灵敏度和特异性，能够检测患者体内非常低水平的病毒载量。
然而，RT-PCR需要在专门的实验室条件下进行，并且需要几个小时的测试时间，不适用于大规模筛查。
2. 抗原快速检测抗原快速检测是一种新兴的检测方法，采用抗原检测试剂盒。
这种试剂盒可以直接检测新冠病毒的抗原，通常使用鼻咽拭子或唾液样本进行检测。
抗原快速检测具有快速、便携和高效的优点，可以在30分钟内提供结果。
它适用于初步的新冠病毒筛查和群体检测，但其灵敏度相对较低，可能会出现假阴性结果。
3. 抗体检测抗体检测是通过检测人体内新冠病毒感染后产生的抗体来确定感染情况。
抗体检测可以通过血清、血浆或其他体液样本进行，可以分为IgM和IgG两种类型。
IgM抗体在感染初期阶段产生，随后逐渐转为IgG抗体，持续时间较长。
抗体检测具有快速、简便和成本低廉的优点，适用于流行病学调查和免疫学研究。
但是，抗体检测在早期感染时的敏感度较低，并且不能直接检测病毒，仅能确定是否感染过病毒。
二、检验方法1. 核酸序列分析核酸序列分析是一种基于新冠病毒基因组的检验方法。
通过分离和提取病毒RNA，对其进行测序和分析，以确定感染者的病毒株类型、变异情况和传播链。
核酸序列分析对于疫情追踪、回溯和监测变异病毒株具有重要意义。
它可以帮助科学家了解病毒传播动态和病毒的演化过程。
病毒载量多久测一次？病毒载量检测是HIV携带者定期需要进行的检测之一，一般情况下，治疗后的感染者，血液中病毒载量都处在一个很低甚至查不出的水平，“四免一关怀”政策下，大部分地区都有每年1次或2次的免费病毒载量检测。
什么是HIV病毒载量感染HIV以后，病毒在体内快速复制，血浆中可检测出病毒RNA(病毒载量)，一般用血浆中每毫升HIVRNA的拷贝数或每毫升国际单位（IU/ml）来表示。
检测结果在“测不到”到一个具体的庞大数字不等，通常情况下若病毒量在100 copies/ml以下是“低病毒载量",100000copies/ml以上“高病毒载量”。
通常在抗病毒治疗开始后半年以内，病毒载量就可以达到查不出的水平，否则就应该咨询你的主治医师是否需要更换药物方案或是否可能存在耐药的情况。
随着抗逆转录病毒药物越来越高效，根据美国卫生和人类服务部(DHHS)在2014年5月1日发布了指导方针，病毒载量被单独用来确定治疗是否有效，不再强调使用CD4计数作为衡量治疗成功的标准。
病毒载量检测的意义CD4计数是直接反映免疫状态的以及间接反映治疗效果的指标，而病毒载量直接反映了血液中的病毒数量以及抗病毒治疗的效果。
HIV病毒载量是衡量治疗效果的金标准，可以借此预测疾病进程，指导治疗方案调整，评估治疗效果等。
也可作为HIV感染诊断的补充试验，用于急性期/窗口期诊断、晚期感染者诊断、HIV感染诊断和小于18个月龄的婴幼儿HIV感染诊断。
作为HIV确证的补充实验之一，在确证试验无法确证HIV，即无HIV特异性条带产生，或出现条带但不满足诊断条件，可进行病毒载量检测，也就是所谓的核酸试验，若出现连续2次核酸检测结果>5 000拷贝/ml，即可作为确证HIV感染的依据。
同时HIV病毒载量检测也是作为新生儿HIV感染的确证手段。
当然，对感染者来说，病毒载量肯定是越低越好！*U=U，病毒载量测不出，不会通过性行为传播HIV 当感染者达到了血液中病毒载量无法检出之时可以获得•更低的HIV感染的发病率和病死率；•更低的非艾滋病相关疾病的发病率和病死率；•重建或者改善免疫功能；•使感染者获得更长的期望寿命，提高生活质量；•减少异常的免疫激活，降低癌症风险，使得CD4/CD8比值趋于正常；•最大程度地抑制病毒复制，减少耐药株产生的可能；•减少HIV的传播、预防母婴传播，阻断由性传播HIV的可能。
