培养基母液的配制

配制2升MS+琼脂0.6%+蔗糖3%的固体培养基，阐述母液配制，培养基配制的全过程（1）母液配制：1确定制备的培养基为MS+琼脂0.6%+蔗糖3%为大量元素培养基，应注意溶解和添加顺序，防止沉淀。

2确定各母液的浓缩倍数，大量母液一般为浓缩10倍有机母液浓缩100倍，即所需配制的大量母液为200ml 微量元素20ml，铁盐20ml，有机元素20ml。

3根据公式：药品称取量（mg）=配方用量x浓缩倍数x母液体积计算出各药品的用量，即琼脂12g、蔗糖60g4用普通天平（1/100）称量药品，称号后的药品要分别放置。

5将药品分别放入烧杯中，分别溶解，经充分溶解后再混匀。

6将混合后的溶液移入容量瓶中，进行定容。

7混合均匀后，将母液转入试剂瓶。

8在试剂瓶上贴上标签，注明母液名称，浓缩和配制日期。

9放入冰箱中低温（2~4度）保存。

（2）培养基的配制：1根据配方计算所需的各母液，琼脂及蔗糖的量分别为大量：200ml 微量20ml 铁盐20ml 有机20ml 琼脂12g 蔗糖60g。

2在容器内装相当于1/3左右的纯水，加入称好的琼脂粉，并将其加热溶解再次加入大量元素、微量元素、铁盐、有机物母液，最后加入称量的蔗糖并搅拌均匀。

3加水定容至2L，再搅拌均匀。

4调整培养基的pH5将配制好的培养基尽快分装。

6将分装后的培养基进行封口7用高压灭菌锅进行灭菌。

现在需要你配制2升MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+琼脂0.6%+蔗糖3%的固体培养基，已知大量元素母液10倍，微量元素母液100倍，铁盐50倍，有机物母液50倍，6-BA母液1mg/ml，NAA母液0.1mg/ml，请你阐述培养基的配制及灭菌的全部过程。

1根据配方计算所需的各母液，琼脂及蔗糖的量分别：为大量元素母液200ml，微量元素20ml，有机物40ml，6-BA4ml，NAA2ml，琼脂12g，60g.2在容器内装相当于1/3左右的纯水，在依次加入称好的琼脂粉，并将其加热溶解再次加入大量元素、微量元素、铁盐、有机物母液，6-BA，NAA，蔗糖。

培养基母液的配制方法一、实验目的1.了解无菌操作2.掌握培养基母液的配制方法二、实验原理配制培养及时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。

三、实验器材和药品器材：电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉。

药品：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、 MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、 ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、 CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、 Na2-EDTA·2H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B6)、盐酸硫胺素 (维生素B1)、甘氨酸。

四、实验步骤1、大量元素母液的配制各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍用天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。

后用蒸馏水定容到 1000ml的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液。

到入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。

配制培养基时，每配1L培养基取此液100ml。

表1 MS培养基大量元素母液制备注意：(1) 配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+、SO42－、Mg 2+和H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。

为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。

特别应将Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。

(2)CaCl2·2H2O要在最后单独加入，在溶解CaCl2·2H2O 时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO2，以防沉淀。

培养基母液的配制植物在自然状态下生长时，具有完整的营养体，是属于自养型的，很多营养物质可以自制，对外界营养条件的要求比较简单,而在离体条件下生长的植物器官、组织和整体植物不同，属于异养型,要求的营养条件十分复杂,因此在人工合成养基的组成和制备上必须全面考虑，满足供应。

一、实验目的配制培养基母液是植物组织培养的基本技术。

当需要连续和大量配制培养基时,如果每次都称量药品、溶解并定容，工作将十分繁琐，因此需要将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成适当的浓缩液。

要求拿握植物组织培养培养基母液的配制方法。

二、实验材料仪器冰箱、电子天平(0.0001g)容量瓶: 1000 ml, 500ml、250 ml、100 ml、25 ml广口储液瓶: 500 ml、250ml、50 ml、25 ml烧杯: 1000ml、500ml 、250m、100ml 、50 ml.数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺、标签纸、胶水、记号笔药品50%酒精、95%酒精、1N盐酸(1N盐酸(HC1)的配制:取浓盐酸825ml,加入蒸馏水1000ml,即为IN的HCI)、1 N Na0H(1N氢氧化钠(或氢氧化钾)的配制:称40 gNa0H (或氢氧化钾57.1g)加入蒸馏水100ml ,即为1N的Na0H( IN的K0H)几种常用的培养基所需的大量元素、微量元素、有机物、激素、铁盐等药品、蒸馏水三、实验步骤按照培养基配方，把大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素分类，每一类中各种药品分别称量。

如Ms培养基各种母液的配制步骤如下:1、大量元素母液:包括用量较大的几种化合物，按表中排列顺序，将每种药品的用量扩大10倍，分别称取，分别溶解,然后按照顺序混合在一-起。

如钙盐等易发生沉淀的药品不能混合，应单位定容。

最后加上蒸馏水，定容至1升或500毫升。

在定容时注意用蒸馏水洗净烧杯和玻璃棒以减少误差。

定容后的溶液为大量元素母液，配制培养基时，每配1 L培养基需吸取该母液100 m或502、微量元素母液:因用量少,为了称量精确和方便,常配成100倍或100倍的母液,即每种药品扩大100倍或者1000倍。

培养基母液的配制方法一、实验目的1.了解无菌操作2.掌握培养基母液的配制方法二、实验原理配制培养及时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。

三、实验器材和药品器材：电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉。

药品：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、 Na2-EDTA·2H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B6)、盐酸硫胺素 (维生素B1)、甘氨酸。

四、实验步骤1、大量元素母液的配制各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍用天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。

后用蒸馏水定容到 1000ml的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液。

到入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。

配制培养基时，每配1L培养基取此液100ml。

表1 MS培养基大量元素母液制备序号药品名称培养基浓度（mg/L）扩大10称量(mg)1NH4NO31650165002KNO31900190003CaCl2·2H2O44044004MgSO4·7H2O37037005KH2PO41701700注意：(1) 配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+、SO42－、Mg 2+和H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。

为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。

特别应将Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。

培养基母液配制培养基配制通常先根据各组分性质，配制成较浓的母液（母液浓度为培养基浓度的若干倍如50或100倍），贮存在冰箱中备用，以后配制培养基时根据用量量取。

由于培养基成分较多，如果每配制一次即进行多次称量（不少成分用量较微），不仅会造成较大的误差，而且会增加工作量，因而配制母液可使培养基配制方便准确。

配制大量成分母液通常为原培养基浓度的20、50或100倍，倍数不宜过高。

MS培养基母液及培养基配方法参考表2。

大量成分母液经常将CaCl2·2H2O单独配制保存，以免长期贮存发生沉淀。

若将全部大量成分配在一起时，为防止在混合时发生沉淀，须在各药品充分溶解后，按表1.2中化合物出现顺序混合，氯化钙最后加入，以免与硫酸镁形成沉淀.大量成分称量溶解后，在1000 ml容量瓶中定容，然后移入磨口瓶中，贴上标签，置于普通冰箱（4℃）贮存。

微量元素母液配制时，由于培养基中微量元素用量甚微，浓度为0.l~0.0001mg/l，所以母液浓度宜为原培养基配方中用量的100倍。

一般将微量元素分别称量溶解，定容在1000 ml容量瓶中后贮存在一个细口瓶中，但也有将KI分别配制，单独贮存在棕色瓶中。

配好后，贴上标签，贮存于4℃冰箱。

培养基中的铁盐母液一般单独配制。

目前常用的铁盐为硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二纳的螯合物。

称取Na2-EDTA 3.73 g，FeSO4 ·2H2O 2.78 g，分别溶解（可加热），然后混合定溶于1000 ml容量瓶中。

转入细口瓶，贴上标签，4℃冰箱中保存。

氨基酸和维生素等有机成分母液可配制时，母液浓度通常为原培养基配方的50倍（或100）。

常用氨基酸和维生素为水溶性物质，可用蒸馏水溶解，但叶酸要先用少量稀碱或稀氨水溶解，然后用重蒸馏水定容。

配制好后，转入细口瓶，贴上标签，-20℃（或4℃）冰箱中保存。

植物生长调节物质如生长素类和细胞分裂素类可以根据需要，灵活设计其浓度，一般为 0.01、0.1、0.2、0.5或1 mg/l。

培养基母液的配制方法一、实验目的1.了解无菌操作2.掌握培养基母液的配制方法二、实验原理配制培养及时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。

三、实验器材和药品器材：电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉。

药品：NH4NO、KNO3CaCI2 •2H2O MgS04・ 7H2Q KH2PO、KI、H3BO3MnSO44H2O ZnSO4•7H2ONa2MoO4?H2O CuSO45H2OCoCI2 •6H2OFeSO4 7H2O Na2-EDTA・ 2H2O肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇（维生素B6）、盐酸硫胺素（维生素B1）、甘氨酸。

四、实验步骤1 、大量元素母液的配制各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍用天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。

后用蒸馏水定容到1000ml的容量瓶中,即为10倍的大量元素母液。

到入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。

配制培养基时，每配1L培养基取此液100ml。

表1 MS培养基大量元素母液制备注意:(1)配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+ SO42-、Mg 2+和H2PO4-等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。

为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。

特别应将Ca2+、SO42—、Mg2十和H2PO4 一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。

(2)CaCI2 • 2H2O 要在最后单独加入，在溶解 CaCI2 • 2H2O 时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的 CO2以防沉淀。

另外，CaCI2 • 2H2O 放 入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出。

2、微量元素母液的配制MS 培养基的微量元素无机盐由7种化合物(除Fe )组成。

一、MS培养基母液的配制注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。

2．微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。

3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。

4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。

5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。

1．制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。

2．称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。

．生长调节剂母液配制：为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。

不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。

培养基母液配制培养基配制通常先根据各组分性质, 配制成较浓的母液（母液浓度为培养基浓度的若干倍如50或100倍）, 贮存在冰箱中备用, 以后配制培养基时根据用量量取。

由于培养基成分较多, 如果每配制一次即进行多次称量（不少成分用量较微）, 不仅会造成较大的误差, 而且会增加工作量, 因而配制母液可使培养基配制方便准确。

配制大量成分母液通常为原培养基浓度的20、50或100倍, 倍数不宜过高。

MS培养基母液及培养基配方法参考表2。

大量成分母液经常将CaCl2·2H2O单独配制保存, 以免长期贮存发生沉淀。

若将全部大量成分配在一起时, 为防止在混合时发生沉淀, 须在各药品充分溶解后, 按表中化合物出现顺序混合, 氯化钙最后加入, 以免与硫酸镁形成沉淀.大量成分称量溶解后, 在1000 ml容量瓶中定容, 然后移入磨口瓶中, 贴上标签, 置于普通冰箱（4℃）贮存。

微量元素母液配制时, 由于培养基中微量元素用量甚微, 浓度为~l, 所以母液浓度宜为原培养基配方中用量的100倍。

一般将微量元素分别称量溶解, 定容在1000 ml容量瓶中后贮存在一个细口瓶中, 但也有将KI分别配制, 单独贮存在棕色瓶中。

配好后, 贴上标签, 贮存于4℃冰箱。

培养基中的铁盐母液一般单独配制。

目前常用的铁盐为硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二纳的螯合物。

称取Na2-EDTA g, FeSO4 ·2H2O g, 分别溶解（可加热）, 然后混合定溶于1000 ml容量瓶中。

转入细口瓶, 贴上标签, 4℃冰箱中保存。

氨基酸和维生素等有机成分母液可配制时, 母液浓度通常为原培养基配方的50倍（或100）。

常用氨基酸和维生素为水溶性物质, 可用蒸馏水溶解, 但叶酸要先用少量稀碱或稀氨水溶解, 然后用重蒸馏水定容。

配制好后, 转入细口瓶, 贴上标签, -20℃（或4℃）冰箱中保存。

植物生长调节物质如生长素类和细胞分裂素类可以根据需要, 灵活设计其浓度, 一般为、、、或1 mg/l。