临床病原学检查研究51页PPT

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那些有正常菌群寄居的腔道分泌物，涂片镜检虽不 能确定诊断，但对进一步检出的步骤、采用的方法 和分离鉴定病原体所需培养基有重要提示作用，如 在米泔水样便的悬滴片动力检查，发现有运动活泼 的鱼群样弧菌，常提示弧菌科细菌感(thiosulfatecitrate-bile saltssucrose，TCBS)选择培养基。组织标本和疱疹分泌 物涂片经瑞特染色后，查见多核巨细胞和核内嗜酸 性包涵体可早期诊断疱疹病毒感染。临床上不常规 应用电镜检查，但对某些病毒感染有确诊价值，如 婴幼儿急性胃肠炎腹泻粪便电镜下查见车轮状的双 层衣壳病毒颗粒即可诊断为轮状病毒感染。常用的 电镜技术有超薄切片标本电镜观察、负染标本电镜 观察和免疫电镜技术。
临床病原学检查
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不同病原体(细菌、螺旋体、支原体、放线菌、
衣原体、立克次体、病毒、真菌、原虫、蠕虫)
所致感染性疾病的实验诊断方法各有其特点，
但几乎都遵循以下基本原则：①正确、规范采
集和运送标本；②通过直接显微镜查见病原体
或检出病原体抗原成分；③借助分子生物学的
方法检测病原体核酸；④利用免疫学方法检测
机体对病原体抗原成分产生的免疫产物；⑤对
病原体进行分离与鉴定。在完成病原体的检出
和鉴定任务后，结合病人的病史、症状或体征，
快速作出诊断。并积极参与临床选择抗微生物
药物，指导和监控微生物的治疗方案，避免耐
药菌株的产生。
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标本采集和运送 ：
根据各种病原体所致感染性疾病的病程确定 标本采集的时间、部位和种类。所有采集的 标本均置于无菌或清洁容器中，不能接触消 毒剂和抗菌药物。 标本必须注明姓名、年 龄、性别、采集日期、临床诊断、检验项目 等。标本采集后应按要求处理，立即送往病 原学实验室，对于烈性传染病材料的运送需 专人护送。

（一）血清抗链球菌溶血素“O”试 验
链球菌溶血素“O” 是一种A群溶血性链球菌的 毒素，属蛋白质，能溶解红细胞，杀伤白细胞和血 小板，它具有抗原性，可使人产生相应抗体，称抗 链球菌溶血素“O” （anti-streptolysin “O” ,ASO） ，也叫抗O或ASO。
一般当机体受到A群溶血性链球菌感染2-3周， 血清中出现抗O，这种抗体滴度直至病愈后数月到 半年才下降至正常水平。
一、肝炎标志物的检测： 1．甲型肝炎病毒标志物的检测
（1）甲型肝炎病毒抗原和RNA测定： ELISA和RT-PCR法
（2）甲型肝炎病毒抗体测定：ELISA （3）甲型肝炎病毒抗体IgM阳性表明机体
正在感染甲肝，它是早期诊断甲肝的 特异性指标。而IgG阳性提示既往感 染，可作为流行病学调查的指标。
HAV 病毒图谱
乙肝血清转换图
HBsAg HBsAb HBeAg HBeAb HBcAb
1+ -
--
2+ - + -
3+ - + -
4+ -
-+
5-
-
-+
6-
-
--
7- + - +
8- + - -
9- + - -
10 + + + -
- 携带者 - 急性感染早期,HBV复制活跃 + 急性或慢性感染,复制活跃 + 急性或慢性感染,复制减弱或停止 + 既往感染,未出现表抗,窗口期 + 既往感染,未出现表抗,窗口期 + 恢复期 + 恢复期 - 病后或接种疫苗后获得性免疫 + 不同亚型的感染

第八章 病原学诊断
细菌学诊断 病毒学诊断 真菌学诊断
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细菌学诊断
Diagnosis of bacteria
2019/8/27
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细菌学诊断
病原菌检测
细菌学诊断：以检测病原菌及其抗原、产物 病原菌抗原检测
或核酸为目的。
其他检测法：PCR等
血清学诊断：以检测患者血清中特异抗体为目的。
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病原菌检测
复染：碱性美兰
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细菌分离和鉴定
分离培养是微生物学诊 断的金标准，是最可靠的传 统诊断技术。
细菌学诊断
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致病菌的检验程序
细菌学诊断
普通琼脂平板
血平板
标本 选择培养基 观分培察菌离养涂落片性、状染、色溶、血镜性检、色素——初步鉴别
挑取可疑菌落
生化反应测定
纯培养
血清学鉴定
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致病菌的检验程序
培养特征 形态特征 生化试验 血清学试验 动物试验 药物敏感试验
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中和试验 ELISA
风湿热（抗O试验） 广泛用于病原体的诊断和流行病学调查
玻片凝集试验
试管凝集试验
酶联免疫吸附试验
④细菌的快速鉴定
API细菌数值鉴定系统
PCR技术
姬姆萨染色衣原体包涵体
HSV病毒
被支原体感染的精子
梅毒螺旋体
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检测程序
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病毒感染的微生物学检查法
Diagnosis Strategy for Viral Infection
②分离培养
大多数细菌的形态与染色并无显著特异性，因此需要分离培 养。如肠道杆菌均为G-杆菌，菌落形态亦相同。 培养特征：化脓性链球菌---小而透明、溶血环。
②分离培养
• 生化试验：如肠道杆菌进行乳 糖发酵试验。
• 血清学试验：已知抗体测抗原 或已知抗原测病人血清中相应 的抗体。如玻片凝集，鉴定菌 种和型。
体液
体液
体液
粪便
传播途径 粪-口
慢性感染 否 基因组类型 ssRNA
经皮肤/ 经粘膜
是
dsDNA
经皮肤/ 经粘膜
是
ssRNA
经皮肤/ 经粘膜
是
ssRNA
粪-口
否 ssRNA
Hepatitis B Virus
• 乙型肝炎的病原体 • 在全世界广泛流行，估计全球半数以上人
口已被HBV感染过，5%的人口为HBV慢性感 染 • 中国：乙肝高发区，人群HBsAg的检出率达 9.8%
HBV virion
The infectious virion is called the DANE particle.
HBV Viral Genome Organization
HBcAg HBeAg

2019-8-2
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Site and Timing
1. Collect the sample from the correct
anatomic site . eg. a superficial sample of a lesion is
not useful in identifying the cause of a deep wound infection.
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Clinical laboratory or medical laboratory is intended to be inclusive and cover all institutions providing a pathology service or performing tests on specimens from human beings. It is for the biological, microbiological, immunological, chemical, immunohematological, hematological, biophysical, cytological, pathological, or other testing of materials derived from the human body for the purpose of providing information for the
除淋病奈瑟菌保温送检外，所有标本 4℃保存。
2019-8-2
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三、标本的采集和运送
血液标本
采血时间：发热初期和高峰期，已用抗菌 药物治疗者在下次用药前。

•50%感染量（ID50）或50%组织细胞感染量（TCID50）
–不能准确地测定感染性病毒颗粒的数量
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乙型肝炎的病原学诊断
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病毒性肝炎- 背景
病毒性肝炎
Hepatitis Virus
A
E 肠道传播
NANB
BD
C 肠道外传播
F, TTV ? 其他
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病毒性肝炎类型
标本：双份血清标本，恢复期血清抗体效价比急性 期升高≥4倍者方有意义。单份血清效价超过一定 标准才有诊断意义。
种类：凝集试验、沉淀试验、中和试验、补体结合 试验。
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常用的血清学诊断方法
类型
诊断应用举例
直接凝集试验 伤寒和副伤寒（肥达试验）、立克次体（外斐试验）、 钩端螺旋体（显微凝集试验）
• 位于Dane颗粒核心部分和肝细胞核内，在 血清中不易检出游离的HBcAg
• 主要成分是蛋白质 • 刺激机体产生抗-HBc(非保护性抗体) • 在乙肝急性期、恢复期和HBsAg携带者中
常可检出抗-HBc • 抗-HBc IgM常提示病毒处于复制状态
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抗原组成-- HBeAg
• 位于HBV的核心,是一种可溶性蛋白抗原 • HBeAg和Dane颗粒出现相平行，且与DNA多聚酶在血中的消
肝细胞受体结合，从而起到抵抗病毒的作用 • 抗Pre-S1和抗Pre-S2的出现，表示病情好转，趋向
痊愈
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• 患者
– 潜伏期 – 急性期 – 慢性期
传染源
• 无症状HBsAg携带者
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生物传感器技术
生物传感器技术能够实时、快速地检测病原体及其代谢产 物，具有操作简便、灵敏度高等优点，在临床和食品安全 等领域有广泛应用前景。
检测方法的改进与优化
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免疫学检测方法
通过改进免疫学检测方法，提高其灵敏度和特异 性，使其成为快速、准确的病原学检测手段。
分子生物学检测方法
分子生物学检测方法在病原学检测中具有重要地 位，通过优化引物设计和扩增技术等手段，提高 检测的灵敏度和特异性。
样本采集与处理规范
采集样本时应选择适 当的部位和方式，避 免交叉感染和污染。
样本处理时应遵循无 菌操作原则，避免污 染和交叉感染。
采集后的样本应妥善 保存和处理，防止病 原微生物的扩散。
检测操作规范与质量控制
检测操作时应遵循标准操作规程 ，确保检测结果的准确性和可靠
性。
检测过程中应进行质量控制，如 校准仪器、验证试剂等，确保检
通过病原学检测评估疫苗接种效果， 为疫苗研发和接种策略的制定提供依 据。
溯源与传 源和传播途径，为防控措施的制定提 供支持。
食品安全检测
食品中病原体的检测
病原学检测可以检测食品中是否含有病原体，确保食品的安全性 和卫生质量。
食品加工环境的监测
对食品加工环境进行病原学检测，有助于及时发现和控制食品加工 过程中的污染源。
治疗提供依据。
监测耐药性
病原学检测可以监测病原体对抗 菌药物的耐药性，帮助医生选择 敏感的抗菌药物进行治疗，提高
治疗效果。
诊断免疫缺陷
对于免疫缺陷患者，病原学检测 有助于诊断和监测感染，指导医
生制定个性化的治疗方案。
流行病学调查
疫情监测
评估疫苗接种效果
通过病原学检测对疫情进行监测，及 时发现和报告疫情，为控制疫情提供 科学依据。

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• 结果报告
1. 阳性结果报告: (1) 初级报告 (2) 最终报告
2. 阴性结果报告：
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中枢神经系统感染的细菌学 检查
• 脑脊液为一水样透明液体，存在于脑室 和蛛网膜下腔内。在生理情况下，血液 和脑脊液之间有血脑屏障，阻碍各种微 生物通过血液进入中枢神经系统。正常 人的脑脊液是绝对无菌的。在病理情况 下，血脑屏障受到破坏，病原微生物及 其产物进入脑脊液，引起中枢神经系统 损害。此时在脑脊液中可培养检出病原 微生物 。
their toxins in tissues or in the blood. Systemic disease caused by the spread of the microorganisms via the circulating blood is commonly called SEPTICEMIA. 一过性、间歇性、持续性
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脑膜炎类型
观察物
细菌性的 结核性的 真菌性的 病毒性的
优势白细 胞类型
糖
分裂的多形核 嗜中性粒细胞
单核细胞
很低
低
5-20mg/100ml 20-40mg/100ml
单核细胞
低 20-40mg/ml
蛋白
增高
增高
增高
涂片染色 革兰染色
抗酸染色
印度墨汁
单核细胞
正常 65-70mg/ml
感染早期 轻度增高
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•菌血症时血液中的细菌并不多，通常仅10～20 CFU/ml, 故采血量大阳性率高。 •采血培养应该尽量在使用抗菌药之前进行,在24 h 内采 集2～3 次做血培养(一次静脉采血注入到多个培养瓶中 应视为单份血培养) 。 •对间歇性寒战或发热，应在寒战或体温高峰到来之前 0.51h采集血液，或于寒战或发烧后1h进行。 •标本运送: 采血后应该立即送检,如不能立即送检,需室温 保存或置35 ℃～37 ℃孵箱中,切勿冷藏。

无菌注射器穿刺抽取，置于抗凝与不抗凝无 菌容器中立即送检（或直接注入血培养瓶）。
脓性标本应考虑同时做厌氧培养.
尿液标本的采集
应在用药前或停药3天后留取标本, 并使尿液在膀胱内停留6~8h以上,起床后 第一次尿样阳性率较高.
无菌采集中段尿 如考虑厌氧菌感染，采取膀胱穿刺法采
集标本。 排尿困难者考虑导尿采集标本。
革兰阴性菌主要耐药类型：
ESBLs（+）的肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌及 奇异变形杆菌
持续高产染色体Ⅰ型ß-内酰胺酶(AmpC酶)的 阴沟肠杆菌、产气肠杆菌、弗劳地枸橼酸杆菌、 吲哚阳性变形杆菌、铜绿假单胞菌等
多重耐药的铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、嗜 麦芽窄食单胞菌等
产NDM-1泛耐药肠杆菌科细菌
直接镜检找到病原体，而培养阴性，应考虑有 L细菌、厌氧菌或苛氧菌感染。
病毒分离培养与鉴定的结果评价
必须结合流行病学资料、临床表现、标本来源 及病毒种类加以分析。
从组织、血液以及脑脊液中分离到病毒可明确 诊断。
从呼吸道、肠道等分离到病毒，如该病毒人体 不能长期携带，有诊断价值，如麻疹病毒、流 感病毒等。反之需相应的临床表现，才有病原 学意义，如巨细胞病毒，肠道病毒等。
（一）MRS（耐甲氧西林葡萄球菌）
(methecillin resistance staphylococcus)
MRS的特点是它们都具有一外来基因 mecA，负责编码PBP2a，当PBP2a占 优势时，由于ß-内酰胺类药对其亲和力 低，使得MRS对青霉素类、头孢菌素类、 碳青霉烯、单环内酰胺类、 ß-内酰胺/ ß-内酰胺酶抑制剂类抗生素均耐药。并 提示对氨基糖甙类、大环内酯类、克林 霉素和四环素等多种抗生素耐药。
感染性疾病: