实验室常用溶液配制
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实验室常用溶液配制
实验室常用溶液的配置
Amp+/Kan+:贮存液浓度为50mg/mL
称取500mg于10mL超纯水中溶解，抽滤后1mL分装到离心管中，于-30℃冻存
X-gal：贮存浓度为20mg/mL
称取20mg X-gal溶于1mL二甲基甲酰胺中，-30℃中用锡箔纸包裹后避光保存，不需要过滤除菌
IPTG：贮存浓度为0.84mol/L
称取2g IPTG溶于8mL超纯水中，用水定容到10mL，用0.22um的一次性滤过器过滤除菌，1mL分装到离心管中并于-30℃保存
CaCl2：贮存浓度为1mol/L
称取1.11g CaCl （或者CaCl:2H2O 1.4698g）溶于8mL超纯水中，定容到10mL，用0,22um的一次性滤过器过滤除菌，1mL分装到离心管中，并于-30℃保存
LB培养基：
胰蛋白胨（Tyrtone）10g/L
酵母提取物（Yeast Extraction）5g/L
氯化钠10/L
根据经验用NaOH调节PH为7.2-7.6，然后高压蒸汽灭菌，注意及时从灭菌锅中取出
无DNA酶的RNA酶：
将胰RNA酶（RNA酶A）溶于10mmol/L Tris-Cl（PH7.5）、15mmol/L NaCl 中，配成10mg/mL 的浓度，于100℃加热15min，缓慢冷却至室温，分装成小份保存于-20℃
Bradford 贮存液
95%乙醇100mL
88%磷酸200mL
G 250 0.35g 室温下可储存，一般4℃
Bradford 工作液
Bradford贮存液30mL
双蒸水425mL
95%乙醇15mL
88%磷酸30mL
储存于4℃
超声破碎缓冲液
KCl 300 mM 22.37 g
KH2PO450 mM 6.81 g
EDTA 1 mM 0.292 g (EDTA-2Na-2H2O) 0.372 g
定容至1 L，调pH至8.0
包涵体洗涤液
KCl 300 mM 22.37 g
KH2PO4 50 mM 6.81 g
EDTA 5 mM 1.46 g (EDTA-2Na-2H2O) 1.86 g
尿素 2 M 120 g
Triton X-100 0.5% 5 ml
脱氧胆酸钠盐0.1% 1 g
定容到1 L 调pH至8.0
匀浆缓冲液（pH=7.5）
成分：
20mM HEPES 0.002mol=0.476g 加入0.952g
1.5mM MgCl20.00015mol=0.0036g 加入0.0072g
0.2mM EDTA 0.00002mol=0.00584g 加入0.01168g
0.1M NaCl 0.01mol=0. 58g 加入1.16g
0.5mM 钒酸钠0.00005mol=0.0092g 加入0.0184g
加100mL水进行溶解，NaOH调pH至7.5
0.2mM DTT 总体积500μL加入0.1μL
0.4mM PMSF 总体积500μL加入20μL 1%SDS 加入50μL 10% SDS
其中DTT和PMSF匀浆之前加入，SDS匀浆之后离心之前加入
DTT配成1M母液，溶于0.01M乙酸钠（pH=5.2）中，过滤除菌
PMSF配成10mM母液，溶于异丙醇
10*PBS
NaCl 80.0669 g
KCl 2.0129 g
Na2HPO414.1960 g
KH2PO4 2.4496 g
水定容至1L，使用时稀释10倍，用NaOH调pH至7.4
Start with 800 mL of distilled water to dissolve all salts. Adjust
the pH to 7.4 with HCl. Add distilled water to a total volume of 1
liter. The resultant 1x PBS should have a final concentration of 10
mM PO43?, 137 mM NaCl, and 2.7 mM KCl
If used in cell culturing, the solution can be dispensed into
aliquots and sterilized by autoclaving (20 min, 121°C, liquid cycle).
Sterilization may not be necessary depending on its use. PBS can
be stored at room temperature or in the fridge. However,
concentrated stock solutions may precipitate when cooled and
should be
kept at room temperature until precipitate has completely
dissolved before use.
转膜缓冲液（含有SDS）
1L剂量
甘氨酸 2.9g
Tris 5.8g
SDS 0.37g
甲醇200mL
水800mL 10×蛋白电泳缓冲液
1L剂量
Tris 碱(Mr 121.14) 30.2g
甘氨酸(Mr 75.07) 188g
SDS (Mr 288.38) 10 g
加水至1L
用时稀释10倍即可
30％丙稀酰胺
1L 剂量
丙烯酰胺290g
N,N’-亚甲基双丙稀酰胺10g
溶于600ml蒸馏水中，加热至37℃溶解，补足体积至1L，过滤，且pH不大于7.0
1 M Tris-Cl（pH6.8）
60.55 g Tris 碱溶解于400ml 蒸馏水，溶解后调pH值，总体积为500ml
1.5 M Tris-Cl（pH8.8）
90.83g Tris 碱溶解于400ml 蒸馏水，溶解后调pH值，总体积为500ml。加约14.5ml浓盐酸，再调整到500ml体积
1M DTT
用20mL 0.01mol/L 乙酸钠溶液（pH=5.2）溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装
考马斯亮蓝R-250染液
在90mL甲醇：水（1:1）和10mL冰乙酸混合液中溶解0.25g考马斯亮蓝R-250，过滤后室温保存
蛋白酶K（20mg/mL）
灭菌的50 mM Tris（pH 8.0），1.5 mM乙酸钙溶解，配置成浓度为20 mg/mL的溶液，-20℃保存
流式缓冲液PBS+5% FBS+0.02% sodium azide
Water 45 mL 20%叠氮钠50 μL
10*PBS 5 mL
FBS 2.5 mL
文献常见配方：PBS+0.5-1% BSA（5-10% FBS）+0.1%
sodium azide
酸酐
称取50 g重铬酸钾（KCrO4）溶于80mL双蒸水中，90℃中溶解2h，每半小时搅拌促进溶解，溶解完成后，加入1000mL硫酸，分装于2个瓶子中。注意使用过程中，如果其中一瓶的效果不好，不要混合使用。使用5次，就要重配。
滴管
酸酐中浸泡24h，自来水冲洗至无明显可见颜色，自来水正反面各20遍，双蒸水正反面各20遍，复印纸中包裹，烘干，加棉花塞和胶头，单独包装，灭菌，烘干。
双抗（青霉素和链霉素）
0.8 g链霉素和80W U青霉素，一起溶于8ml PBS，单位分别为10^5 ug/ml和10^5 U/ml，然后稀释10倍，分别为10^4 ug/ml和10^4 U/ml，使用时，按照1%加入，分别为100 ug/ml与100
U/ml
培养基I
2% FCS，1%双抗，128uL/40mL肝素钠，RPMI 1640
培养基II
0.1% FCS，1%双抗，128uL/40mL肝素钠，RPMI 1640
完全培养基
10% FCS（5% FCS+5% 鱼血清），1%双抗
LPS
称取2mg LPS溶于1mL PBS中，0.22μm滤膜过滤，硅化离心管，-20℃保存
1*Turk染液
Gentian Violer（结晶紫）50mg Acetic Acid（冰乙酸）5mL
Water 495mL
1%巴比妥钠
1g巴比妥钠溶于100mL的PBS中，充分混匀，避光保存（80
ug/g用量）
诱导小鼠腹腔巨噬细胞所需溶液
硫代硫酸盐肉汤培养基(Thioglycollate broth)：
称取3 g，加入到100 ml纯水中，高温121 ℃灭菌15 min，然后冷却到室温，再重复2次，进行老化操作。此时已经溶解，呈现透明溶液。
冲洗液：
RPMI 1640 +1%双抗
培养基：
RPMI 1640+10% FBS+1%双抗
氯化铵红细胞裂解液（10×的储存液）参考流式中文网
80.2 g NH4Cl (1.5 M)
8.4 g NaHCO3 (100 mM)
3.7 g EDTA二钠(10 mM)
加水至900 ml，然后用1M的HCl或1M的NaOH调节pH值至7.4。最后加水至1升。
该10*的储存液可在4℃保存6个月。
工作液的配制：在使用前蒸馏水稀释10倍即可。（1份储存液加上9份水）。工作液用来裂解红细胞。不能以<10*的浓度储存，否则会形成碳酸铵而失效。
ACK裂解液参考文献Dynamic variation in cycling of
hematopoietic stem cells in steady state and inflammation, JEM,
2011
ACK (Ammonium-Chloride-Potassium) Lysing Buffer
Ammonium Chloride 150 mM Mw 53.5
Potassium Bicarbonate 10 mM Mw 100.1
