基因工程试题及答案.doc
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基因工程期末试题及答案一、选择题(每题2分,共20分)1. 基因工程是指利用现代生物技术手段对DNA进行操作和控制的一种技术。
2. 基因工程的主要方法包括基因克隆、PCR、DNA测序等。
3. DNA测序是通过测定DNA序列来确定一个基因的具体结构。
4. 在基因工程中,限制性内切酶用于切割DNA分子,产生特定片段。
5. 基因工程可以产生转基因生物,通过对生物基因进行改造,使其具有特定的特性。
6. CRISPR/Cas9是一种常用的基因编辑工具,可以精确地修改基因组中的特定片段。
7. 基因工程在医学领域可以用于基因治疗,通过修复或替换异常基因,治疗遗传性疾病。
8. 在农业领域,基因工程可以用于改良作物,提高产量和抗病虫害能力。
9. PCR是一种常用的基因扩增技术,可以通过复制DNA片段来放大特定基因。
10. DNA梯度离心是基因工程中常用的分离DNA片段的方法。
二、问答题(每题10分,共30分)1. 请简要介绍基因工程的基本原理和主要方法。
基因工程的基本原理是通过对DNA进行操作和控制来改变生物的遗传性状。
其主要方法包括基因克隆、PCR、DNA测序等。
基因克隆是通过将特定DNA片段放入载体中,然后转化到宿主细胞中,使重组DNA在宿主细胞中大量复制。
PCR是一种基因扩增技术,通过在DNA复制过程中加入特定引物,使特定基因片段在体外大量扩增。
DNA测序是通过测定DNA序列来确定一个基因的具体结构。
2. 什么是转基因生物?请举例说明。
转基因生物是指经过基因工程改造,将外源基因导入到目标生物体中,使其具有新的遗传性状的生物。
例如,将耐旱基因导入水稻,使其具有抗旱能力;将Bt毒素基因导入棉花,使其具有抗虫能力。
3. 基因工程在医学领域有哪些应用?举例说明。
基因工程在医学领域可以用于基因治疗、疫苗研发等。
例如,利用基因工程技术可以修复或替换患者体内异常基因,治疗遗传性疾病。
另外,基因工程也可以用于疫苗研发,通过基因工程技术将病原体的基因导入宿主细胞,产生病原体的抗原蛋白,从而刺激免疫系统产生抗体,用于预防传染病。
高一生物基因工程试题1.下列有关基因工程中运载体的说法,正确的是A.在基因工程的操作中,作为运载体的质粒都是天然质粒B.所有的质粒都可以作为基因工程中的运载体C.质粒是一种独立于细菌染色体外的链状DNA 分子D.作为运载体的质粒DNA分子上应有对重组DNA分子进行鉴定和选择的标记基因【答案】D【解析】在进行基因工程操作中,被用作运载体的质粒是在天然质粒的基础上进行过人工改造的,A错误;具有一至多个限制酶切点、具有标记基因的质粒才可以作为基因工程中的运载体,B错误;质粒是一种独立于细菌染色体外的环状DNA分子,C错误;作为载体的质粒DNA分子上应有对重组DNA进行鉴定和选择的标记基因,而且能在受体细胞中复制并稳定保存,D正确。
【考点】本题考查基因工程操作中的运载体的相关知识。
2.基因工程中不能作为运载体的是A.质粒B.动植物病毒C.细菌D.噬菌体【答案】C【解析】质粒、噬菌体、动植物病毒均可作为基因工程的载体.故选:C【考点】基因工程的原理及技术【名师】“分子运输车”--载体①载体具备的条件:能在受体细胞中复制并稳定保存;具有一至多个限制酶切点,供外源DNA片段插入;具有标记基因,供重组DNA的鉴定和选择.②最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外,并具有自我复制能力的双链环状DNA分子.③其它载体:噬菌体、动植物病毒3.在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中,下列操作错误的是A.用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸B.用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体C.将重组DNA分子导入受体细胞D.用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞【答案】A【解析】限制性核酸内切酶只能切割特定的脱氧核苷酸序列,而烟草花叶病毒的核酸是核糖核酸,A错误;构建基因表达载体时,需要用限制酶切割得到抗除草剂基因和切开载体,再用DNA连接酶将两者连接形成重组DNA,B正确;基因表达载体构建好之后,需要将重组DNA分子导入受体细胞(烟草原生质体),C正确;基因工程的最后一步是目的基因的检测和鉴定,可以用含有除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞,D正确。
基因工程期末考试试题及答案一、选择题1. 基因工程是指:A. 基因的自然突变B. 基因的人工重组C. 基因的自然选择D. 基因的自然淘汰答案:B2. 下列哪项不是基因工程常用的工具酶?A. 限制性内切酶B. DNA连接酶C. 反转录酶D. 聚合酶链反应酶答案:C3. 基因枪技术主要用于:A. 植物基因转化B. 动物基因转化C. 微生物基因转化D. 病毒基因转化答案:A二、填空题1. 基因工程中,常用的载体有________、________和________。
答案:质粒、病毒、人工染色体2. 基因工程中,________是基因表达的调控元件。
答案:启动子三、简答题1. 请简述基因工程的基本步骤。
答案:基因工程的基本步骤包括:目标基因的获取、目标基因与载体的连接、转化宿主细胞、筛选含有重组DNA的宿主细胞、目的基因的表达和检测。
2. 基因工程在医学领域的应用有哪些?答案:基因工程在医学领域的应用包括:生产重组蛋白质药物、基因治疗、疾病诊断、疫苗开发等。
四、论述题1. 论述基因工程对农业生产的影响。
答案:基因工程对农业生产的影响主要体现在以下几个方面:提高作物的抗病虫能力、增强作物的抗逆性、改善作物的营养价值、提高作物的产量和质量、促进农业可持续发展。
2. 基因工程在环境保护中的应用。
答案:基因工程在环境保护中的应用主要包括:开发生物修复技术,用于污染土壤和水体的净化;利用基因工程改造微生物,用于处理工业废水和废气;通过基因工程改良植物,用于重金属污染土壤的修复等。
五、案例分析题1. 某公司利用基因工程技术成功开发了一种抗虫棉,该抗虫棉能够减少农药的使用,降低农业生产成本。
请分析该技术可能带来的社会、经济和环境效益。
答案:该技术可能带来的社会效益包括提高农民的生活质量,减少因农药使用带来的健康风险。
经济效益包括降低农药成本,提高作物产量,增加农民收入。
环境效益包括减少农药对环境的污染,保护生态平衡,促进农业的可持续发展。
生物选修三第一章周测出题人:植秀燊一、单项选择题(本部分共24个小题,每小题2分,共48分。
每小题只有一项选项符合题意)1.在基因工程中,科学家所用的“剪刀”、“针线”和“运载体”分别是指( )A、大肠杆菌病毒、质粒、DNA连接酶B、噬菌体、质粒、DNA连接酶C、DNA限制酶、RNA连接酶、质粒D、DNA限制酶、DNA连接酶、质粒2.基因工程的实质是()A、基因重组B、基因突变C、产生新的蛋白质D、产生新的基因3.下列关于限制酶的说法不正确的是( )A.限制酶存在于各种生物中,尤其在微生物细胞中分布最多B.不同的限制酶识别不同的核苷酸序列C.限制酶能识别不同的核苷酸序列,体现了酶的专一性D.限制酶的作用只是用来提取目的基因4.转基因动物基因时的受体细胞是( )A、受精卵B、精细胞C、卵细胞D、体细胞5.运用现代生物技术的育种方法,将抗菜青虫的Bt基因转移到优质油菜中,培育出转基因抗虫的油菜品种,这一品种在生长过程中能产生特异的杀虫蛋白质,对菜青虫有显著抗性,能大大减轻菜青虫对油菜的危害,提高油菜产量,减少农药使用,据以上信息,下列叙述正确的是( )A、Bt基因的化学成分是蛋白质B、Bt基因中有菜青虫的遗传物质C、转基因抗虫油菜能产生杀虫蛋白是由于具有Bt基因D、转基因抗虫油菜产生的杀虫蛋白是无机物6.水母发光蛋白由236个氨基酸构成,其中Asp、Gly、Ser构成发光环,现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记,在转基因技术中,这种蛋白质的作用是( )A、促使目的基因导入宿主细胞中B、促使目的基因在宿主细胞中复制C、使目的基因容易被检测出来D、使目的基因容易成功表达7.下列与基因工程无关的是( )A、培养利用“工程菌”生产胰岛素B、基因治疗C、蛋白质工程D、杂交育种8.上海医学遗传研究所成功培育出第一头携带白蛋白的转基因牛,他们还研究出一种可大大提高基因表达水平的新方法,使转基因动物乳汁中的药物蛋白含量提高30多倍,转基因动物是指()A.提供基因的动物B.基因组中增加外源基因的动物C.能产生白蛋白的动物D.能表达基因信息的动物9.治疗白化病、苯丙酮尿症等人类遗传疾病的根本途径是()A、口服化学药物B、注射化学药物C、利用辐射或药物诱发致病基因突变D、采取基因疗法替换致病基因10.当前医学上,蛋白质工程药物正逐步取代第一代基因工程多肽蛋白质类替代治疗剂,则基因工程药物与蛋白质工程药物的区别是()A、都与天然产物完全相同B、都与天然产物不相同C、基因工程药物与天然产物完全相同,蛋白质工程药物与天然产物不相同D、基因工程药物与天然产物不相同,蛋白质工程药物与天然产物完全相同11.有关基因工程的成果及应用的说法不正确的是()①、用基因工程方法培育的抗虫植物和能抗病毒的植物②、基因工程在畜牧业上应用的主要目的是培育体型巨大、品质优良的动物③、任何一种假单孢杆菌都能分解四种石油成分,所以假单孢杆菌是“超级菌”④、基因工程在农业上的应用主要是培育高产、稳产、品质优良和具有抗逆性的农作物A.①②B.③④C.②③D.②④12.下图所示限制酶切割基因分子的过程,从图中可知,该限制酶能识别的碱基序列和切点是( )A.CTTAAG,切点在C和T之间 B.CTTAAG,切点在G和A之间C.GAATTC,切点在G和A之间 D.GAATTC,切点在C和T之间13.科学家通过基因工程的方法,能使马铃薯块茎含有人奶蛋白。
基因工程原理练习题及其答案一、填空题1.基因工程是70年代发展起来的遗传学的一个分支学科。
2.基因工程的两个基本特点是:(1)分子水平上的操作,(2)细胞水平上的表达3.基因克隆中三个基本要点是:克隆基因的类型;受体的选择;载体的选择4.通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段,可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的限制性酶切图谱。
5.限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的,第一个大写字母取自属名的第一个字母,第二、三两个字母取自_种名的前两个字母,第四个字母则用株名表示。
6.部分酶切可采取的措施有:(1)减少酶量;(2)缩短反应时间;(3)增大反应体积等。
7.第一个分离的限制性内切核酸酶是EcoK;而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_ EcoRl。
8.限制性内切核酸酶BsuRI和HaeⅢ的来源不同,但识别的序列都是GGCC,它们属于异源同工酶。
9.DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_枯草杆菌蛋白酶切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段,具有两种酶活性:(1) 5'-3'合成酶的活性;(2) 3'-5'外切核酸酶的活性。
10.为了防止DNA的自身环化,可用碱性磷酸酶去双链DNA_5’端的磷酸基团。
11.EGTA是_Ca2+_离子螯合剂。
12.测序酶是修饰了的T7 DNA聚合酶,它只有_ 5'-3'合成酶的活性,而没有3'-5'外切酶的活性。
13.切口移位(nick translation)法标记DNA的基本原理在于利用DNA聚合酶I 的__5'一3'外切核酸酶和5'一3'合成酶的作用。
14.欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式,通常可采用____ S1核酸酶切割或DNA聚合酶补平。
15.反转录酶除了催化DNA的合成外,还具有__核酸水解酶H的作用,可以将DNA-RNA杂种双链中的_RNA_水解掉。
基因工程考研试题及答案试题:基因工程的基本原理和应用一、选择题(每题2分,共10分)1. 基因工程中常用的运载体是以下哪一项?A. 质粒B. 病毒C. 染色体D. 线粒体答案:A2. 下列哪项不是基因工程的基本步骤?A. 目的基因的获取B. 基因表达载体的构建C. 基因的随机插入D. 转化宿主细胞答案:C3. 在基因工程中,用于连接目的基因和运载体的酶是:A. 限制性内切酶B. DNA连接酶C. 反转录酶D. 聚合酶答案:B4. 基因工程在农业上的应用不包括以下哪项?A. 转基因作物B. 基因治疗C. 抗病抗虫植物D. 改良作物品质答案:B5. 以下哪个不是基因工程的潜在风险?A. 基因污染B. 生物安全C. 伦理问题D. 增加作物产量答案:D二、填空题(每空2分,共10分)6. 基因工程中,________是用来将目的基因插入到运载体中的酶。
答案:限制性内切酶7. 基因工程可以用于生产________,这是一种通过生物合成的具有特定功能的蛋白质。
答案:生物制品8. 基因治疗是一种将________导入到患者体内以治疗遗传性疾病的方法。
答案:正常基因9. 基因工程在环境保护方面的应用包括________和________。
答案:生物修复;污染监测10. 基因工程中,________技术可以用于检测特定基因的存在。
答案:PCR(聚合酶链反应)三、简答题(每题10分,共20分)11. 简述基因工程在医学领域的应用。
答案:基因工程在医学领域的应用主要包括:- 生产重组药物,如胰岛素、生长激素、干扰素等。
- 基因治疗,通过替换、修复或调控致病基因来治疗遗传性疾病。
- 生产疫苗,利用基因工程技术生产的疫苗可以更安全、高效。
- 基因诊断,通过检测特定基因或基因变异来诊断疾病。
12. 阐述基因工程中的限制性内切酶的作用及其重要性。
答案:限制性内切酶在基因工程中的作用是识别特定的DNA序列并在这些序列处切割DNA,产生特定的粘性末端。
基因工程试题及答案解析一、选择题1. 基因工程中常用的限制酶是:A. 蛋白酶B. DNA聚合酶C. 核糖核酸酶D. 限制性核酸内切酶答案:D2. 基因工程中,用于将目的基因导入植物细胞的方法是:A. 电穿孔法B. 显微注射法C. 农杆菌转化法D. 脂质体介导法答案:C3. 下列哪项不是基因工程的基本步骤?A. 目的基因的获取B. 基因表达载体的构建C. 目的基因的扩增D. 目的基因的检测与鉴定答案:C二、填空题1. 基因工程中,常用的运载体有____、____和____。
答案:质粒、噬菌体、动植物病毒2. 基因工程中,常用的筛选标记基因有____、____和____。
答案:抗性基因、荧光蛋白基因、酶基因三、简答题1. 简述基因工程的应用领域。
答案:基因工程的应用领域包括农业、医学、工业、环境保护等。
在农业中,基因工程可以用于培育抗病、抗虫、抗旱等性状的作物;在医学领域,基因工程可以用于生产重组蛋白药物、基因治疗等;在工业上,基因工程可以用于生产酶、疫苗等;在环境保护方面,基因工程可以用于生物修复、污染物降解等。
2. 基因工程中,如何确保目的基因在宿主细胞中正确表达?答案:确保目的基因在宿主细胞中正确表达需要考虑以下几个方面:首先,目的基因需要有合适的启动子和终止子,以确保其在宿主细胞中得到正确转录和终止;其次,需要考虑目的基因的密码子偏好性,以确保其在宿主细胞中能被高效翻译;再次,需要考虑目的基因的稳定性,避免其在宿主细胞中被降解;最后,还需要考虑目的基因产物的后翻译修饰和定位。
四、论述题1. 论述基因工程在医学领域的应用及其可能带来的伦理问题。
答案:基因工程在医学领域的应用主要包括生产重组蛋白药物、基因治疗、疾病诊断和基因疫苗等。
重组蛋白药物可以用于治疗糖尿病、侏儒症等疾病;基因治疗可以用于治疗遗传性疾病;疾病诊断可以通过基因检测来实现;基因疫苗可以用于预防某些遗传性疾病。
然而,基因工程的应用也带来了伦理问题,如基因隐私权、基因歧视、基因治疗的安全性和有效性等。
基因工程试题与答案1、转基因动物的安全性问题正面观点:(1)转基因工程是不可阻挡的. 基因工程将影响当代重大的环境问题:人口过剩/污染/生物多样性急剧减退等等. 保护土壤/水/能源成为发展可持续农业的目标。
(2) 转基因食品的功效: 改良植物的食用品质;增加果蔬贮藏、保鲜性能;生产特殊食品——食品疫苗。
(3)迄今为止并没有发现转基因食品危害人体健康和环境的确切证据。
如果转基因生物技术得不到社会支持,这一研究将被扼杀。
反面观点:转基因的潜在危害:转基因动植物安全性评价主要集中在环境安全性,食品安全性以及对人动物健康的影响三方面。
环境安全性分析包括:(1)生存竞争性:转基因植物在生存竞争方面具有的优势可能导致生物多样性的减少,影响了生物多样性;(2)生殖隔离距离:基因不可控制的水平转移的可能性;与近缘野生种的可交配性:外源基因是否会漂流扩散至亲缘野生种中,从而破坏自然生态平衡;(3)对非靶生物的影响:转基因植物花粉通过风,雨,鸟,昆虫,真菌,细菌以至整个生物链传播使外源基因逃逸,从而造成基因污染。
(4)病毒发生异缘重组或异缘包装的可能性:自然界中存在着植物病毒之间的异缘重组。
(5)对农业和生态环境的影响,生态平衡. 如产生超级杂草的可能性;种植抗虫转基因作物后可能使害虫产生免疫并遗传、从而产生更加难以消灭的“超级害虫”;食品安全性:(1)转基因毒性. 如英国发现转基因马铃薯会减弱老鼠免疫系统功能,美国发现转基因玉米会危害蝴蝶幼虫及其相关生态环境;(2)人的毒理反应或过敏反应. 大肠杆菌细胞膜间隙中含有大量的内毒素,痕量的内毒素即可导致人体热原反应。
(3)实质等同性的原则,即某一种生物技术产品或其成分能够与市场上现有的对应产品进行比较。
如果一种转基因产品能够与现存的一种产品进行比较,并且发现具有实质同等性,便能用现产品安全性同种方法对待它。
转基因植物所引入的蛋白对人体可能是异性蛋白质,在部分人中可能发生食物过敏,特别是幼儿和某些过敏体质的人。
高中基因工程试题及答案一、选择题1. 基因工程是指:A. 基因的自然选择B. 基因的人工选择C. 基因的人工重组D. 基因的自然重组答案:C2. 基因工程中常用的载体是:A. 质粒B. 病毒C. 染色体D. 线粒体答案:A3. 基因枪法属于哪种基因转移技术?A. 化学法B. 物理法C. 生物法D. 机械法答案:B4. 以下哪个不是基因工程的步骤?A. 目的基因的获取B. 目的基因的克隆C. 目的基因的表达D. 目的基因的自然选择答案:D5. 基因工程在医学领域的应用不包括:A. 基因治疗B. 基因检测C. 基因编辑D. 基因克隆答案:D二、填空题6. 基因工程的核心技术是________。
答案:重组DNA技术7. 基因工程中常用的受体细胞有________和________。
答案:大肠杆菌、酵母菌8. 基因工程在农业上的应用包括________和________。
答案:转基因作物、基因改良9. 基因工程在环境保护中的应用包括________和________。
答案:生物修复、污染物降解10. 基因工程在工业生产中的应用包括________和________。
答案:生物催化剂、生物制药三、简答题11. 简述基因工程的基本原理。
答案:基因工程的基本原理是利用分子生物学技术,将目的基因从一种生物体中提取出来,然后通过重组DNA技术将其插入到另一种生物体的基因组中,使其在新的宿主细胞中表达,从而获得具有特定性状的生物体或生产特定的生物产品。
12. 基因工程在医学领域有哪些应用?答案:基因工程在医学领域的应用包括基因治疗,通过将正常基因导入患者体内以治疗遗传性疾病;基因检测,用于疾病诊断和风险评估;基因编辑,通过修改基因序列来治疗疾病;以及生产生物药物,如胰岛素、干扰素等。
四、论述题13. 论述基因工程的伦理问题及其解决途径。
答案:基因工程的伦理问题主要包括对人类基因组的修改可能带来的未知风险、基因歧视、生物多样性的减少等。
大学基因工程试题及答案一、选择题1. 基因工程中常用的限制酶属于哪一类酶?A. 核酸酶B. 蛋白酶C. 脂肪酶D. 淀粉酶答案:A2. 以下哪个不是基因工程的基本步骤?A. 目的基因的克隆B. 目的基因的表达C. 目的基因的检测D. 目的基因的复制答案:D3. 基因工程中常用的运载体有哪些?A. 质粒B. 噬菌体C. 动植物病毒D. 所有以上答案:D二、填空题1. 基因工程中常用的_________技术可以用于目的基因的检测。
答案:PCR2. 基因工程中,_________是将目的基因导入受体细胞的关键步骤。
答案:转化3. 在基因工程中,_________是将目的基因插入到运载体中形成重组DNA分子的过程。
答案:克隆三、简答题1. 简述基因工程在医学领域的应用。
答案:基因工程在医学领域的应用包括生产重组药物、基因治疗、疾病诊断和疫苗开发等。
2. 描述基因工程中目的基因的克隆过程。
答案:目的基因的克隆过程包括提取目的基因、构建基因文库、筛选含有目的基因的克隆、目的基因的扩增和纯化等步骤。
四、论述题1. 论述基因工程技术在农业中的应用及其可能带来的问题。
答案:基因工程技术在农业中的应用包括改良作物品质、提高作物产量、增强作物抗病虫害能力等。
可能带来的问题包括生态平衡的破坏、基因污染、食品安全问题等。
2. 分析基因工程中目的基因表达调控的重要性及其策略。
答案:目的基因表达调控在基因工程中至关重要,它决定了基因工程产品的功能和产量。
调控策略包括启动子的选择、增强子的应用、转录后调控等。
基因工程试题
一、名词解释(4 ‘*10)
1.基因工程技术:按照人们的愿望,进行严密的设计,通过体外DNA 重组和转移等技术,有目的地改造生物种性,使现有物种在较短的时间内趋于完善,创造出新的生物类型。
2.感受态细胞:受体细胞经一些特殊方法(如CaC12、RbCl (KC1) 等化学试剂)处理后,细胞膜的通透性发生了暂时性改变,成为能允许外源DNA 分子进入的细胞状态。
3.cDNA文库:从组织细胞中分离得到纯化的mRNA,然后以mRNA为模板,利用逆转录酶合成其互补DNA,再复制成双链cDNA片段,与适当载体连接后导入受体菌内,扩增,构建cDNA文库。
4.鸟枪法:指将某种生物体的全基因组或单一染色体切成大小适宜的 DNA 片段,分别连接到载体DNA上,转化受体细胞,形成一套重组兑隆,从中筛选出含有目的基因的期望重组子。
5.SD序列(Shine-Dalgarno):位于翻译起始密码了•上游的6-8个核苷酸序列(5’ UAAGGAGG 3’),它通过识别大肠杆菌核糖体小亚基中的16S rRNA 3’端区域3’ AUUCCUCC 5’并与之专一性结合,将mRNA定位于核糖体上,从而启动翻译。
6.包涵体:胞内高效表达时,工程菌因大景合成异源蛋白质所形成的水不溶性积聚物。
7.复合转座子:是由两个重复序列夹着一个或多个结构基因如某些抗药性基因和其它基因组成。
存在于R因子及其它质粒中。
复合转座子两端的组件由IS和类IS组成。
8.菌落原位杂交:是将菌落或噬菌斑转到固相膜上,原位裂解细胞后使核酸固定在膜上,然后与探针杂交。
用标记的核酸探针,经放射自显影或非放射检测体系,在组织细胞间期染色体上对核酸进行定位和相对定量研究的一种手段。
9.RACE:是一种通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术,是以mRNA 为模板反转录成cDNA第一链后用PCR技术扩增出某个特异位点到3, 或5,端之间未知序列的方法。
10.连续式发酵:即在连续发酵反应器中,细胞的总数和培养液总体积同时维持恒定,前提是由培养液流出所造成的细胞损失正好为细菌分裂所产生的新细胞弥补。
二、简答题(6’ *5)
1、一个理想克隆载体应具备的条件有哪些?
答:⑴分子较小,可携带比较大的DNA片段。
(2)能独立于染色体而进行自主复制并且是高效的复制。
(3)要有尽可能多种限制酶的切割位点,但每一种限制酶又要最少的切割位点(多克隆位点multiple cloning sites, MCS)。
(4)右适合的标记,易于选择。
(5)有时还要求载体要能启动外源基因进行转录及表达,并且尽可能是尚效的表达。
(6)从安全角度考虑,要求载体不能随便转移,仅限于在某些实验室内特殊菌种内才可复制等等.
2、DNA的体外重组克隆的转化方法有哪些?
答:Ca2+诱导转化;PEG介导的细菌原生质体转化;电穿孔驱动的完整细胞转化;接合转化;A -噬菌体的转染。
3、DNA重组克隆有哪些操作?
答:目的基因的提取,载体的选择,酶切位点的选择,受体细胞的选择,目的基因与载体的连接,将重组载体导入受体细胞,重组子的选择,产物的鉴定。
4、如何有效提高外源基因的表达效率?
答.•提高启动子强度;缩短启动子同克隆基因间距离;高效的翻译起始序列;高效的转绿终止区;提高质粒的拷贝数及稳定性;体外诱导;构建融合蛋G或分泌蛋白。
5、导致异源重组蛋白在大肠杆菌细胞中不稳定性的主要原因什么?
答:(1)大肠杆菌缺乏针对异源重组蛋白的拆叠复性和翻译后加工系统。
(2)大肠杆菌不具备真核生物细胞完善的亚细胞结构以及众多基因表达产物的稳定因子。
(3)高效表达的异源重组蛋白在大肠杆菌细胞中形成高浓度微环境, 致
使蛋白分子间的相互作用增强
三、论述题(15’ *2)
1.分析比较琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳的异同点?
答:同:①原理相同。
琼脂糖、聚丙烯酰胺均为无反应活性的稳定支持介质,可降低对流运动,故使电场中的分子电泳迁移率仅与分子的摩擦系数成反比。
在一定电场强度下,DNA分子的迁移率取决于核酸分子的大小和构象。
②凝胶浓度的高低影响凝胶介质孔隙大小;浓度越高,空隙越小,其分辨能力也就越强;反之,浓度降低,空隙就增大,其分辨能力也就随之减弱。
异:琼脂糖凝胶分辨DNA片段的范围为O2.Kb-5OKb之间;而聚丙烯酰胺分辨DNA片段的范围为l-1000bp,分离小片段效果最好,分辨率极高,相差lbp的DNA也可分开。
2、简述PCR的原理和主要反应过程。
答:PCR原理:变性温度下,DNA双链变性双螺旋解开成单链DNA, 在退火温度中人工合成的特异引物根据碱基互补配对原则与单链DNA 特异结合,然后在DNA聚合酶的作用下,在延伸温度下不同的脱氧核苷酸按照碱基互补配对原则在引物的引导下合成与模板DNA互补的新链,实现DNA的扩增。
步骤:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94Q C左右一定时问后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;
②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度
降至4(T60Q C左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
③引物的延伸:DNA模板-引物结合物在DNA聚合酶的作用下,于72°C左右,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链,重复循环就可获得更多的,半保留复制链,,而且这种新链又可成为下次循环的模板。
每完成一个循环需2〜4分钟,2〜3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。