第8章病原学诊断与防治-.10PPT课件

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第八章病原学诊断与防治

二、人工被动免疫
人工被动免疫(artificial passtive immunity)：注射人工被动免疫：含有特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白，含有特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白，或细胞因子等免疫制剂，或细胞因子等免疫制剂，使机体即刻获得特异性免疫，因而作用及时。免疫，因而作用及时。但这些免疫物质不是病人自己产生的，故维持时间短。自己产生的，故维持时间短。主要用于治疗或紧急预防。急预防。抗毒素抗菌血清胎盘球蛋白、丙种球蛋白胎盘球蛋白、细胞免疫制剂
病毒的分离培养与鉴定（二病毒的分离培养与鉴定（virus isolation and determination））
（一）病毒的分离方法
选择易感动物及接种部位，动物接种选择易感动物及接种部位，观察发病情况不同病毒选择不同接种部位（绒毛尿囊膜，鸡胚培养不同病毒选择不同接种部位（绒毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最常用。），分离流感病毒最常用尿囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最常用。
病毒在培养细胞中增殖的指标
细胞的变化
细胞病变效应（（1）出现细胞病变效应（CPE）：即某些病毒在）出现细胞病变效应）细胞内增殖引起的特有的细胞病变（细胞变圆、细胞内增殖引起的特有的细胞病变（细胞变圆、聚坏死、脱落等）集、坏死、脱落等）（2）形成细胞融合（多巨核细胞））形成细胞融合（多巨核细胞）（3）形成包涵体：某些病毒在细胞浆或核内增殖）形成包涵体：后形成的嗜酸或嗜碱性的团块状结构。（。（病毒增殖后形成的嗜酸或嗜碱性的团块状结构。（病毒增殖场所）场所）
噬菌体分离细菌素测定分子生物学技术
第二节血清学诊断
人体受致病菌感染后，人体受致病菌感染后，其免疫系统被刺激后发生免疫应答而产生特异性抗体。抗体的量常随感染过程而增多，答而产生特异性抗体。抗体的量常随感染过程而增多，表现为效价（滴度）的升高。因此，表现为效价（滴度）的升高。因此，用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。一般采取病人的血清进行试验，故称为血清学诊断血清学诊断(serological 病人的血清进行试验，故称为血清学诊断 diagnosis)。。血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清标当后者的抗体效价比前者升高大于等于升高大于等于4倍本，当后者的抗体效价比前者升高大于等于倍时方有意义。意义。常用方法：直接凝集试验、凝集试验、沉淀试验、常用方法：直接凝集试验、乳胶凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、中和试验、补体结合试验、中和试验、ELISA。。

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术（三）特异性IgM抗体的检测
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（四）检测病毒核酸 1. 核酸杂交技术
斑点杂交、细胞内原位杂交、DNA印迹杂交、 RNA印迹杂交
2. 核酸扩增技术 PCR、连接酶链反应、反转录PCR 3. 基因芯片技术
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第三节真菌学诊断（一）标本的采集浅部感染真菌的检查：深部感染真菌的检查：标本采集要注意：标本量要足，标本应新
第八章病原学诊断与防治
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第一节细菌学诊断
一、病原菌检测 1. 标本标本采集与送检的原则：（1）据不同疾病以及疾病的不同时期采集
不同标本（2）严格无菌操作，避免标本被污染
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（3）尽可能在疾病早期以及抗菌药物使用前采集标本
（4）采集的标本必须尽快送检，大多数细菌标本可以冷藏送检。
（5）标本作好标记。
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标本采集与送检的原则
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2. 细菌形态与结构检查
（1）显微镜放大法
普通光镜 , 电子显微镜等（2）染色法来自染色剂与细菌细胞质的结合。
最常用的染色剂是盐类。
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尿囊腔、羊膜腔、卵黄囊等。 3. 细胞培养（1）从生长方式可分单层细胞和悬浮细胞培养
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（2）从来源、染色体特征及传代次数分 ① 原代细胞来源于动物、鸡胚或引产人胚组织细胞 ② 二倍体细胞细胞在体外分裂50~100代后仍保持2倍染色
体数目的单层细胞。 ③ 传代细胞系多由癌细胞或2倍体细胞突变而来，能在体外

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持续传代，对病毒的敏感性稳定
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（3）病毒在培养细胞中增殖的指标 ① 细胞的变化细胞病变、多核巨细胞、包涵体 ② 红细胞吸附红细胞吸附和红细胞吸附抑制现象 ③ 干扰现象 ④ 细胞代谢的变化
2020/12/612Fra bibliotek（二）病毒的数量与感染性测定（三）新分离病毒的鉴定
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二、血清学诊断
用已知抗原检测病人血清或其它体液中未知抗体及其量的变化，可作为感染性疾病的辅助诊断。
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第二节病毒学诊断
目前常用的病毒学诊断方法包括病毒的分离鉴定、病毒的血清学检查、病毒蛋白和核酸的检测。
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一、标本的采取与送检
原则：
1. 对本身带有杂菌（如咽拭子、粪便）或易受污染的标本，要进行病毒分离培养，应使用抗生素。
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3. 分离和鉴定鉴定的主要内容有：
培养特征、形态特征、生化反应、血清学鉴定、动物试验、药物敏感试验
4. 病原菌抗原的检测常用的细菌学诊断的免疫学技术有：
沉淀反应、协同凝集试验、免疫荧光法、对流免疫电泳、酶免疫测定和免疫印迹技术。
5. 其他检测法
医.学全.在.线
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2. 标本应低温保存并尽快送检。
3. 血清学诊断标本的采取应在发病初期和病后 2~3w内各取1份血清以便对比双份血清抗体效价的动态变化。
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二、病毒的分离与鉴定（一）病毒的分离 1. 动物接种最早的病毒分离方法 2. 鸡胚培养按病毒种类不同接种于不同部位如绒毛尿囊膜、
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第四节特异性预防与治疗（略）

《病原学诊断与防治》PPT课件

寄生虫的诊断
通过粪便检查、血液检查、组织活检等方法进行诊断。
防治方法
使用驱虫药、改善饮食卫生、加强环境卫生等措施。
其他病原体的诊断与防治
其他病原体的诊断
根据不同病原体特点，采用相应的检测方法进行诊断。
防治方法
针对不同病原体采取相应的防治措施，如使用抗真菌药物、抗病毒药物等。
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病原学防治策略与措施
病原体防治新技术研究进展
基因编辑技术
基因编辑技术如CRISPR-Cas9等在病原体防治中具有广泛应用前景，可用于编辑病原体基因、抑制病原体复制或增强宿主免疫应答等。
新型疫苗技术
新型疫苗技术如mRNA疫苗等在病原体防治中具有重要价值，可快速开发针对新型病原体的疫苗，提高疫苗接种覆盖率和保护率。
寄生虫
依赖宿主生存，可引起消化道、神经系统等疾
病。
病原体的传播方式与途径
01
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03
04
空气传播
通过飞沫、尘埃等传播，如流感病毒。
接触传播
通过直接或间接接触传播，如皮肤感染。
食物传播
通过污染的食物或水源传播，如霍乱弧菌。
生物媒介传播
通过昆虫、动物等媒介传播，如疟原虫。
02
病原学诊断方法
03
常见病原体的诊断与防治
细菌的诊断与防治
细菌的诊断
通过细菌培养、显微镜检查、免疫学检测等方法进行诊断。
防治方法
使用抗生素、提高免疫力、改善环境卫生等措施。
病毒的诊断与防治
病毒的诊断
通过病毒分离、抗原检测、核酸检测等方法进行诊断。
防治方法
使用抗病毒药物、疫苗接种、提高免疫力等措施。
寄生虫的诊断与防治

第八章病原学诊断与防治ppt课件

β-内酰胺类大环内酯类氨基糖苷类
按化学结构和性质分类四环类氯霉素类人工合成类其他抗生素类
（二）抗菌药物的主要作用机制
影响细胞膜的功能（多黏菌素）影响细胞壁的合成（青霉素）影响蛋白质的合成（链霉素→30S亚基, 氯霉素→ 50S亚基）
影响核酸代谢
（喹诺酮）
影响细胞壁的合成
青霉素类的抗生素抑制肽聚糖的合成，对生长旺盛的细菌效果明显
8. ③胞质或核内包涵体（inclusion body）的形成
1、CPE
正常细胞
病变细胞
巨细胞病毒感染细胞形成的包涵体 — 猫头鹰眼状
2. 红细胞吸附（hemadsorption, HAd）流感病毒等感染细胞后，由于细胞膜上出现了血凝素（HA），具有吸附脊椎动物（豚鼠、鸡、猴等）红细胞的能力，这一现象称为红细胞吸附。
二、血清学诊断原理：用已知抗原检测患者血清或其他体液中未知抗体及其量的
变化
应用：抗原性较强的致病菌和病程较长的传染病诊断
通常采取双份血清，如果恢复期或1周后血清抗体效价比早期升高 4倍以上时，则可确认为现症感染
常用方法：直接凝集试验（诊断伤寒、副伤寒的肥达试验）
中和试验（诊断链球菌性风湿病的抗O试验）
☆革兰染色法；原理、步骤、意义
☆ 抗酸染色法鞭毛染色等特殊染色法
大肠杆菌
吲哚试验
+
IMViC试验甲基红试验
+
VP试验
—
枸橼酸盐利用试验 —
产气杆菌 — — + +
标本采集
标本送检
初次涂片染色
纯培养后再次涂片染色细菌的分离培养
挑选可疑菌落进行生化，免疫学，分子生物学检测

微生物第八章病原学诊断与防治PPT课件

▪ 用已知的细菌或抗原检测患者体液中有无相应特异性抗体和其效价的动态变化，可作为感染性疾病的辅助诊断。由于一般采取病人血清进行试验，故称为血清学诊断 (serological diagnosis)。
▪ 血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清，当后者的抗体效价比前者升高大于等于4倍时方有意义。
标本
形态结构检查
分离培养与鉴定
病原菌抗原检测其它检测
光镜、电镜、染色法
培养形态生化特征特征反应
血清学动物反应试验
药敏试验
沉淀反应细菌代谢产物
协同凝集
（气相色谱）
免疫荧光 PCR查细菌核酸
对流免疫电泳噬菌体分型
酶免疫测定
细菌素测定
免疫印迹分子生物学技术
二、血清学诊断
▪ 人体受致病菌感染后，免疫系统产生特异性抗体。抗体的量常随病程而增加，表现为效价（滴度）升高。
二、病毒的分离培养与鉴定
（一）病毒的分离动物接种：选择易感动物及适宜接种部位，观察发病情况鸡胚培养：不同病毒选择不同接种部位（绒毛尿囊膜，尿
囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最常用。
细胞培养：分离病毒最常用的方法
（1）原代细胞—来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，对多种病毒敏感，但只能传2-3代。
检测病毒特异性IgM抗体可诊断急性感染。
（四）检测病毒核酸
1 核酸杂交
斑点杂交（dot hybridization）原位杂交（in site hybridization） DNA印迹杂交（Southern blot） RNA印迹杂交（Northern blot）
2 核酸扩增
聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）连接酶链反应（ligase chain reaction，LCR）反转录PCR（Reverse transcrptase PCR，RT-PCR）

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（四）病原菌核酸的检测
* 核酸杂交 * PCR， * 基因芯片（gene chips）
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PCR
检测DNA
RT-PCR
检测RNA
核酸杂交
检测DNA
生物芯片技术 ……
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二、血清学诊断
用已知细菌或特异性抗原检测血清中的未知抗体。
若恢复期或一周后血清抗体效价比早期升高4倍或4倍以上，有诊断意义。如：抗O试验（链球菌性风湿热）
经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量 Study Constantly, And You Will Know Everything. The More
You Know, The More Powerful You Will Be
谢谢大家
荣幸这一路，与你同行
It'S An Honor To Walk With You All The Way
演讲人：XXXXXX 时间：XX年XX月XX日
输入含有特异性抗体的免疫血清、纯化免疫球蛋白抗体或细胞因子等免疫制剂，使机体立即获得特异性免疫力的过程。
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抗毒素 (antitoxin) 血清丙种球蛋白(serum gammaglobulin) 干扰素(interferon，IFN) 白细胞介素(interlukin, IL)
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26
写在最后
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*基因工程疫苗(genetic engineering vaccine)
用基因工程技术将编码病原体保护性抗原的目的基因，导入原核或真核表达系统获得有效表达，用表达的保护性抗原制成的疫苗。如：乙肝病毒（HBsAg）疫苗
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* 重组载体疫苗
将保护性抗原的基因转入减毒的病毒或细
菌（载体）而制成的疫苗。
形态观察
电镜
标
分离
生化反应
菌落形态
本
培
血清学鉴定
养
与
动物试验
鉴
药物敏感试验
定
4
电镜
5
光镜
抗
酸
染
革兰氏染色
色
6
菌落
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生化反应
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血清学试验
（已知抗体检测未知抗原）
玻片凝集
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药敏试验10Fra bibliotek三）病原菌抗原的检测
* EIA（酶免疫技术） * IF（免疫荧光技术） * Western blotting（免疫印迹技术） * 协同凝集试验等
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疫苗
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第一代疫苗第二代疫苗第三代疫苗
死疫苗活疫苗亚单位疫苗基因工程疫苗重组载体疫苗合成肽疫苗
DNA疫苗转基因植物疫苗
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* 亚单位疫苗（subunit vaccine）
利用病原体保护性抗原组分制成的不含核酸、能够诱发机体免疫应答的疫苗。如：肺炎球菌、脑膜炎球菌的荚膜多糖疫苗。
重组载体疫苗是活疫苗，具有和减毒活疫苗相似的特点。
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* 核酸疫苗（DNA 疫苗）
@ 将编码某种抗原蛋白的外源基因与质粒真核表达载体重组，直接注入体内，外源基因在体内表达刺激机体产生免疫应答。
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类毒素
外毒素经0.3%~0.4%甲醛处理后，失去毒性仍保持抗原性的生物制品。
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人工被动免疫(artificial passive immunization)
肥达反应（伤寒副伤寒）
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第二节
细菌感染的特异性预防
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人工主动免疫(artificial active immunization):
将疫苗(vaccine)及类毒素(toxoid)接种于人体，使机体主动产生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施。
主要用于预防：
（一）疫苗 (vaccine) （二）类毒素(toxoid)
第8 章
• 细菌感染的检查方法 • 与防治原则
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第一节细菌感染的诊断
一、病原菌检测
（一）标本：标本的采集与送检的质
量直接关系到病原菌检出的成败。
标本采集与运送原则：早期、无菌、尽快送检
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病原菌检测
细
病
病
菌
原
原
的
菌
菌
分
的
核
离
抗
酸
与
原
鉴
检
定
测
检测
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（二）细菌的分离与鉴定
光镜
菌体形态