可见分光光度法测定大山楂丸中总黄酮的含量

山楂叶总黄酮的测定—分光光度法—科标检测方法名称： 山楂叶—总黄酮的测定—分光光度法应用范围：本方法采用分光光度法测定山楂叶中总黄酮（以无水芦丁计算)的含量。

本方法适用于蔷薇科植物山里红Crataegus pinnatifidaBge.var.major N.E.Br.或山楂Crataegus pinnatifida Bge.的干燥叶。

方法原理： 本品细粉置于索氏提取器中，依次加入三氯甲烷和甲醇提取，蒸干，加稀乙醇溶解，滤过，续滤液中依次加入水、5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液、氢氧化钠试液一定量，摇匀，放置，立即置紫外可见分光光度计, 于波长500nm 处测定吸光度，以无水芦丁（C27H30O16)计算总黄酮含量。

试剂：1. 三氯甲烷2 .5%亚硝酸钠溶液3 .10%硝酸铝溶液4.氢氧化钠试液仪器设备：1. 紫外-可见分光光度计2. 索氏提取器试样制备： 对照品溶液的制备精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品25mg ，置50mL 量瓶中，加乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀。

精密量取20mL ，置50mL 量瓶中，加水至刻度，摇匀，制成每1 mL 中含无水芦丁0.2mg 的溶液。

操作步骤： 1. 标准曲线的绘制精密量取对照品溶液1 mL 、2 mL 、3 mL 、4 mL 、5 mL 、6 mL ，分别置25 mL 量瓶中，各加水至6 mL ，加5%亚硝酸钠溶液1 mL ，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1 mL ，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10 mL ，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，立即照分光光度法，在500nm 波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

2. 供试品的测定取本品细粉1g ，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流提取至提取液无色，弃去三氯甲烷液，药渣挥去三氯甲烷，加甲醇继续提取至无色（约4小时)，提取液蒸干，残渣加稀乙醇溶解，转移至50 mL 量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，作为供试品储备液。

山楂中总黄酮的提取及含量测定（吕培银）一、实验目的1.掌握黄酮类物质的提取方法。

2.掌握分光光度法测定黄酮含量的原理。

二、实验原理山楂富含黄酮类化合物，具有重要的生理活性和药效。

黄酮化合物的母核由C6-C3-C6即A-C-B三个环组成，A环和B环具有芳香化合物的性质，C环具有黄酮化合物的独特性质。

母核中某些位置如C3和C5上含有羟基或具有邻二酚羟基时能与铝、铅等金属离子形成稳定的络合物，这些络合物在光谱上产生明显变化。

黄酮与金属离子的这种作用不仅可以用于鉴别这类成分中羟基的位置，还可以作为进行定量分析的基础。

本实验利用碱性条件下，在亚硝酸盐存在时，硝酸铝与黄酮进行络合反应，生成红色络合物，且在500 nm左右有最大吸收，可利用分光光度法进行测定。

因此，本实验采用索氏提取法提取山楂中的总黄酮，并采用分光光度法对其含量进行测定。

三、实验用品1、仪器：索氏提取器、平底烧瓶、电热套、量筒、试管、容量瓶、移液管、玻璃比色皿、可见分光光度计等。

2、药品：山楂粉末、无水乙醇、芦丁标准品、硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠等。

四、实验内容1、山楂总黄酮的提取精密称取山楂粉末6 g,滤纸包好后置于250 mL索氏提取器中，加60%乙醇150 mL，连续回流提取1-1.5h, 冷却，将提取液转移至250 mL的容量瓶中，将圆底烧瓶润洗3次，60%乙醇定容至刻度线，摇匀，过滤。

取1 mL滤液稀释至10mL,摇匀，即为样品待测溶液。

2、芦丁标准溶液的配制精密称取芦丁20 mg，加入60 mL无水乙醇超声使其溶解后，以蒸馏水定容至100mL，摇匀，即得0.2 mg/mL的芦丁标准液。

3、芦丁标准曲线的制定分别精密吸取芦丁标准液5mL、6mL、7mL、8mL、9mL至10mL容量瓶中，60%乙醇定容后得到浓度为0.10 mg/mL、0.12 mg/mL、0.14 mg/mL、0.16mg/mL 和0.18mg/mL的芦丁系列浓度梯度溶液。

可见分光光度法测定大山楂丸中总黄酮的含量实验讨论
大山楂丸中总黄酮的含量可以采用可见分光光度法来测定。

1. 实验目的：测定大山楂丸中总黄酮的含量。

2. 实验原理：可见分光光度法利用物质对可见光的吸收特性来测定物质的浓度。

总黄酮具有一定的吸收特性，可以通过测量吸光度来计算其浓度。

3. 实验步骤：
a. 准备样品：将大山楂丸样品粉碎并称取适量。

b. 提取黄酮：使用适合的溶剂（如乙醇）将黄酮提取出来。

c. 制备标准曲线：准备一系列不同浓度的黄酮标准溶液，然后使用分光光度计分别测量吸光度。

d. 测量样品吸光度：将提取的样品溶液使用分光光度计测量吸光度。

e. 计算黄酮含量：根据标准曲线的吸光度-浓度关系，计算出大山楂丸中总黄酮的含量。

4. 实验结果：根据测量得到的吸光度值和标准曲线，计算出大山楂丸中总黄酮的含量。

5. 实验讨论：
a. 实验方法的准确性和重复性：可以进行重复实验，计算相对标准偏差或百分相对标准偏差来评估方法的准确性和重复性。

b. 实验条件的选择：实验中需要选择合适的波长和溶剂，并对提取方法进行优化，以获得最佳的测量结果。

c. 样品处理的改进：可以尝试不同的提取方法，如其他溶剂或萃取工艺，以提高黄酮的提取效率。

d. 可行性和适用性分析：可以对其他样品进行类似实验，评估方法的适用性和可行性。

大山楂丸中总黄酮的含量测定【摘要】目的建立大山楂丸中总黄酮的含量测定方法。

方法采用分光光度法，以槲皮素为对照品，对其进行络合显色，在510 rnn波长处测定吸收度，从而测定大山楂丸中总黄酮的含量。

结果线性范围在0.020 004〜0.100 02mg • ml-1 (r=0. 999 3)之间，平均回收率为 96. 02%，RSD= 1.22% (n=5 )。

结论该法简便易行、重现性好、结果可靠，可用于该制剂的质量控制。

【关键词】大山楂丸总黄酮分光光度法Abstract：ObjectiveTo establish ultraviolet spectrophotometry for the content determination of Total Flavones in DashanzhaPill. MethodsQuercetin was selected as reference material, and the samples were determined at 510 nm. ResultsThe linear range for quercetin was 0.020 004 〜0.100 02 mg • ml-1 (r= 0.999 3). The recovery rate was 96.02%; RSD= 1.22% (n=5 ). ConclusionThis method is easy to handle with good accuracy and reproducibility, and issuitable for the quality control of Dashanzha Pill.Key words： Dashanzha Pills; Total Flavones; Spectrophotometry大山楂丸由山楂、神曲、麦芽组成，具有开胃消食的功能，用丁•食积内停所致的食欲不振、消化不良、脘腹胀闷。

中药制剂的杂质分为一般杂质和特殊杂质，不属于一般杂质的有 （ ）（2.0分）A、砷盐B、重金属C、酯型生物碱D、灰分E、水分正确答案： C2黄曲霉毒素B1具有毒性和致癌性,但易受紫外线和一些化学物质的破坏,下列试剂不能破坏黄曲霉毒素B1的是 ( )（2.0分）A、次氯酸钠B、高锰酸钾C、氯仿D、过氧化氢正确答案： C3下列属于黄酮类成分的是( )（2.0分）A、槲皮素B、丹皮酚C、大黄素D、梓醇E、麻黄碱正确答案： A检查相对密度和pH值的是 ( )（2.0分）A、酊剂B、糖浆剂C、酒剂D、煎膏剂E、片剂正确答案： B5中药指纹图谱是一种综合的( C )手段（2.0分）A、结构分析B、安全检查C、半定量鉴别D、定量分析E、半定量测定正确答案： C6山楂在中药制剂中若以活血止痛为主,应该测定　类成分的含量（2.0分）A、有机酸B、生物碱C、黄酮D、多糖正确答案： C7有害元素铅镉砷汞铜的测定法有( ) 。

（2.0分）A、红外光谱法B、原子吸收分光光度法C、高效液相色谱法D、毛细管电泳法E、比色法正确答案： B8酸性染料比色法中溶剂pH值设为选择依据是 ( )（2.0分）A、离子对的稳定性B、染料的性质C、离子对的溶解性D、染料的性质及生物碱的性质正确答案： D9减压干燥法适用于下列哪种药物水分的测定( )（2.0分）A、含水分高的药物B、熔点较低的药物C、贵重药物D、水分难以赶出的药物E、含水分低的药物正确答案： C10含量测定定量限要求信噪比是 ( )（2.0分）1:01B、3:01C、5:01D、10:01正确答案： D11下面不属于中药杂质的一般限量检查的是 ( )（2.0分）A、砷盐B、重金属C、pH值D、灰分正确答案： C12紫外-可见分光光度法能测定的中药成分是( C )（2.0分）A、归脾丸中人参皂苷Rg1B、双黄连口服液的黄芩苷C、大山楂丸中总黄酮D、复方丹参片中丹酚酸BE、三黄片中的黄芩苷正确答案： C13熊胆中主要成分是( )（2.0分）A、牛黄酸类B、胆汁酸类胆固醇D、脂肪E、微量元素正确答案： B14下列属于皂苷类成分的是( )（2.0分）A、黄芪甲苷B、丹皮酚C、大黄素D、梓醇E、麻黄碱正确答案： A15建立回归方程的目的是( )（2.0分）A、验证分析方法的精密度B、验证分析方法的线性C、验证分析方法的准确度D、验证分析方法的检测限E、验证分析方法的定量限正确答案： B16易夹带泥沙的须应进行下列哪项检查（）。

部份省区市售山楂饮片总黄酮含量分析
杨志雄;江海燕;卢忠朋;蔡少芳
【期刊名称】《中国民族民间医药》
【年(卷),期】2011(020)011
【摘要】目的:比较不同产地山楂饮片的质量.方法:采用紫外分光光度法测定山楂中总黄酮含量.结果:各地样品中总黄酮的含量在0.187～0.707mg/g之间,槲皮素标准品的线性范围为0.00176～0.00800mg/ml,回归方程Y=66.0744X+0.0171,相关系数r=0.9994,加样回收率为99.11%,RSD为1.23%.结论:该方法简便易行,为广山楂的质量控制提供了实验依据.
【总页数】2页(P26-27)
【作者】杨志雄;江海燕;卢忠朋;蔡少芳
【作者单位】广西区人民医院,广西,南宁,530023;广西中医学院,广西,南宁,530001;广西中医学院,广西,南宁,530001;广西中医学院,广西,南宁,530001
【正文语种】中文
【中图分类】R286.0
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山楂黄酮的含量测定方法一、引言山楂黄酮是一种常见的生物活性成分，具有多种药理作用，例如降脂、保护心脏、抗氧化等。

准确测定山楂黄酮的含量对研究其药理作用和开发药物具有重要意义。

本文将介绍几种常用的山楂黄酮含量测定方法，并从中挑选最适合的方法进行深入探讨。

本文按照从简单到复杂的顺序进行讲解，帮助读者更好地理解山楂黄酮的含量测定。

二、常用的测定方法1. 薄层色谱法薄层色谱法是一种简单、快速的分离和测定方法。

其基本原理是将样品溶液均匀涂在薄层色谱板上，放入含有适量溶剂的瓶中，让溶剂沿着色谱板向上移动，通过观察刻线上的斑点来确定山楂黄酮的含量。

这种方法操作简单、成本低廉，但缺点是分离效果较差，测定结果的准确性有限。

2. 高效液相色谱法高效液相色谱法是一种精确测定山楂黄酮含量的常用方法。

基本原理是将样品溶液注射到高效液相色谱仪中，通过不同溶剂的流动和固定相的作用，分离出山楂黄酮与其他成分，最后通过检测器对山楂黄酮进行定量。

这种方法具有分离效果好、准确性高等优点，但需要专用设备和较长的分析时间。

3. 比色法比色法是一种常用的快速测定山楂黄酮含量的方法，该方法通过测量山楂黄酮在特定波长下的吸光度来定量。

具体操作时，将山楂黄酮溶液和试剂混合后，根据试剂与山楂黄酮的反应产生的色素的吸光度变化来确定山楂黄酮的含量。

这种方法操作简便、快速，但需要选取合适的试剂和波长，并且对样品的前处理要求比较高。

三、选择最适合的方法进行探讨根据上述介绍，山楂黄酮的含量测定方法可以选择薄层色谱法、高效液相色谱法和比色法。

考虑到测定过程中的准确性和实用性，我们选择高效液相色谱法进行深入探讨。

高效液相色谱法是目前应用广泛的山楂黄酮含量测定方法之一。

其优势在于分离效果好、准确性高，并且可以同时测定多个成分，适用于复杂样品的分析。

高效液相色谱仪的使用越来越普及，使得该方法更加便捷和可行。

在使用高效液相色谱法测定山楂黄酮含量时，我们需要选择合适的柱和固定相，优化流动相的组成和流速，并确定适当的检测波长。

荧光分光光度法测定大山楂丸中黄酮类化合物的含量王海燕;贾宝秀;臧晴晴【期刊名称】《中国医院用药评价与分析》【年(卷),期】2014(000)008【摘要】OBJECTIVE:To determine the content of total flavonoids in Crataegi Bolus by spectrofluorimetry. METHODS:The content of the total flavonoids in Crataegi Bolus was determined by spectrofluorimetry with quercetin as reference substance with wavelength of fluorescence excitation/emission of 281/352 nm,slit width of excitation/emission of 5 nm and the fluorescence spectra of 300-500 nm. The influential factors such as acidity,surfactant,temperature,reaction time and the concentration of alumi-num ion were investigated to optimize the experimental conditions. RESULTS:The maximum and stable fluorescence intensity was obtained in acid medium of hydrochloric acid in the absence of surfactant under room temperature with reaction time of 30 min and aluminum ion concentration of 2×10-4 mol/L. Fluorescence intensity(F)and the quercetin concentration(c)were in good linear re-lationship when the concentration of quercetin was between 0.2 × 10-5 and 1.5 × 10-5 mol/L. The detection limit of this method was 2.4 × 10-8 mol/L. The average contents of the total flavonoids in three batches of Crataegi Bolus were 25.45 mg/g,27.85 mg/g and 25.13 mg/g,respectively,which were basically in conformity with those determined by the method specified in China Phamacopoe-ia.CONCLUSIONS:The method is simple,rapid and accurate and thus it is applicable for determination of the total flavonoids in Crataegi Bolus.%目的：建立一种新的测定大山楂丸中黄酮类化合物的荧光分光光度法。

可见分光光度法测定⼤⼭楂丸中总黄酮的含量实验五可见分光光度法测定⼤⼭楂丸中总黄酮的含量⼀、⽬的要求1、掌握⽤分光光度法测定中药制剂中总黄酮含量。

2、掌握可见分光光度计的使⽤⽅法。

⼆、基本原理⼤⼭楂丸由⼭楂、神曲和麦芽组成，主要功能为开胃消⾷，其中⼭楂主要成分为有机酸、黄酮类及多种维⽣素。

黄酮类化合物具有邻⼆酚羟基，或3，5位羟基结构，可与铝盐、铅盐、镁盐等⾦属盐类试剂反应，⽣成有⾊配合物，可⽤可见分光光度法测定其含量。

本实验利⽤黄酮类化合物在亚硝酸钠的碱性溶液中，与Al3+产⽣⾼灵敏度的橙红⾊配合物（λmax=510nm），从⽽⽤可见分光光度法（⽐⾊法）测定⼤⼭楂丸中总黄酮的含量。

三、仪器与试药1、可见分光光度计、分析天平、索⽒提取器。

2、⼄醇（A.R）、5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液、1mol/l氢氧化钠溶液。

3、槲⽪素（中国药品⽣物制品检定所）。

4、⼤⼭楂丸（市售品）。

四、操作步骤1、标准液的配制：精密称取槲⽪素对照品20mg，置100ml容量瓶中，加95%⼄醇50ml使溶解，然后加50%⼄醇稀释⾄刻度，即得0.2mg/ml的对照品溶液。

2、标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置于10ml容量瓶中，各加50%⼄醇溶液使成5ml，精密加⼊5%亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟，加⼊10%硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，再放置6分钟，加⼊1%氢氧化钠溶液4ml，分别⽤50%⼄醇稀释⾄刻度，摇匀，放置15分钟。

以第⼀瓶作空⽩，⽤可见分光光度计在510nm处测其吸收度，作A-C标准曲线（或计算其回归⽅程）。

3、样品液的制备：精密称取120℃⼲燥2⼩时的⼤⼭楂丸6.5g，置索⽒提取器中，⽤95%⼄醇125ml回流提取1.5⼩时，将提取液移⾄250ml容量瓶中，补加蒸馏⽔⾄刻度，摇匀即得。

4、含量测定：精密量取提取液1ml，按上述标准曲线制备⽅法进⾏测定，并由标准曲线或回归⽅程计算样品中总黄酮的含量。

中药制剂分析实验实验一中药制剂的显微鉴别一、实验目的熟悉中药制剂的常规分析方法—显微鉴别法。

二、实验原理通过用显微镜来观察中药制剂中保留有原药材的组织、细胞或内含物等显微特征，从而鉴别制剂的处方组成。

三、仪器与试药1、显微镜、载玻片、盖玻片、酒精灯、乳钵、镲镜纸、小镊子、小刀。

2、水合氯醛试液、甘油醋酸试液、稀甘油（AR）。

3、牛黄解毒片、蛇胆川贝散、银翘解毒片、六味地黄丸（市售品）。

四、实验步骤（一）牛黄解毒片显微鉴别操作方法：取本品片心，研成粉末，取少许，置载玻片上，滴加适量水合氯醛试液，透化后加稀甘油1滴，盖上盖玻片，用吸水纸吸干周围透出液，置显微镜下观察。

1、草酸钙簇晶大，直径60～140μm；2、不规则碎块金黄色或橙黄色，有光泽。

（二）银翘解毒片显微鉴别操作方法：取本品粉末少许，置载玻片上用水合氯醛试液装片，透化后加稀甘油1滴，盖上盖玻片，置显微镜下观察：1、花粉粒黄色，类球形，直径54～68μm，有三孔沟；表面具细密短刺及圆粒状皱纹。

2、草酸钙簇晶成片，直径5～17μm，存在于薄壁细胞中。

3、联结乳管直径14～25μm，含淡黄色颗粒状物。

（三）六味地黄丸显微鉴别操作方法：取本品适量，采取适当方法解离后，取少许，观察淀粉粒和不规则分枝状团块用甘油醋酸试液装片，其他用水合氯醛试液透化后滴加适量稀甘油，置显微镜下观察。

1、淀粉粒三角状卵形或矩圆形，直径24～40μm，脐点短缝状或人字状。

2、不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛试液溶化，菌丝无色，直径4～6μm。

3、薄壁组织灰棕色至黑棕色，细胞多皱缩，内含棕色核状物。

4、草酸钙簇晶存在于无色薄壁细胞中，有时数个排列成行。

5、果皮表皮细胞橙黄色，表面观类多角形，垂周壁略连珠状增厚。

6、薄壁细胞类圆形，有椭圆形纹孔，集成纹孔群。

五、实验结果六、思考题1．试述你观察到的显微特征各代表何种中药材？2．通过以上4种中成药的显微鉴别，请你总结出中成药显微鉴别的方法及注意事项。

紫外可见分光光度法测定注射用山楂总黄酮中总黄酮的含量【摘要】目的建立测定注射用山楂总黄酮中总黄酮的含量的方法。

方法采用紫外可见分光光度法，检测波长为500nm，无水芦丁为对照品。

结果芦丁在8.12～48.72μg/ml范围内呈良好的线性关系，r=0.9998（n=6），平均回收率为100.0%，RSD=0.13%（n=6）。

结论所用方法灵敏、准确、重现性好、结果可靠，可用于注射用山楂总黄酮中总黄酮的含量测定。

【关键词】注射用山楂总黄酮；总黄酮；紫外可见分光光度法；含量测定山楂总黄酮即山楂叶总黄酮，是从山楂叶中提取的黄酮类化合物的总称，目前从山楂总黄酮中分离出的单体有三十多种，有牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、牡荆素、金丝桃苷、槲皮素等。

山楂叶中的黄酮类化合物的药理作用有很多方面，例如对心、脑血管疾病有确切明显的疗效，山楂总黄酮对心绞痛、冠心病、心律失常、脑供血不足、脑动脉硬化症、脑血栓、老年性痴呆及各种脑损伤后遗症可产生积极的预防和治疗作用。

1.仪器与试药TU-1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；AE240电子天平（瑞士梅特勒公司）；所用试剂均为色谱纯。

2.方法与结果2.1线性关系考察对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品约10.08mg，置50ml容量瓶中，加乙醇适量使溶解，用乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

（每1ml含无水芦丁0.2030mg）[1]。

标准曲线的制备精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置25ml容量瓶中，各加水至6ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，使摇匀放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置20分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（中国药典2010年版一部附录V A），在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、测试溶液中对照品浓度为横坐标绘制标准曲线。

实验五可见分光光度法测定大山楂丸中总黄酮的含量一、目的要求1、掌握用分光光度法测定中药制剂中总黄酮含量。

2、掌握可见分光光度计的使用方法。

二、基本原理大山楂丸由山楂、神曲和麦芽组成，主要功能为开胃消食，其中山楂主要成分为有机酸、黄酮类及多种维生素。

黄酮类化合物具有邻二酚羟基，或3，5位羟基结构，可与铝盐、铅盐、镁盐等金属盐类试剂反应，生成有色配合物，可用可见分光光度法测定其含量。

本实验利用黄酮类化合物在亚硝酸钠的碱性溶液中，与Al3+产生高灵敏度的橙红色配合物（λmax=510nm），从而用可见分光光度法（比色法）测定大山楂丸中总黄酮的含量。

三、仪器与试药1、可见分光光度计、分析天平、索氏提取器。

2、乙醇（A.R）、5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液、1mol/l氢氧化钠溶液。

3、槲皮素（中国药品生物制品检定所）。

4、大山楂丸（市售品）。

四、操作步骤1、标准液的配制：精密称取槲皮素对照品20mg，置100ml容量瓶中，加95%乙醇50ml使溶解，然后加50%乙醇稀释至刻度，即得0.2mg/ml的对照品溶液。

2、标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置于10ml容量瓶中，各加50%乙醇溶液使成5ml，精密加入5%亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟，加入10%硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，再放置6分钟，加入1%氢氧化钠溶液4ml，分别用50%乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15分钟。

以第一瓶作空白，用可见分光光度计在510nm处测其吸收度，作A-C标准曲线（或计算其回归方程）。

3、样品液的制备：精密称取120℃干燥2小时的大山楂丸6.5g，置索氏提取器中，用95%乙醇125ml回流提取1.5小时，将提取液移至250ml容量瓶中，补加蒸馏水至刻度，摇匀即得。

4、含量测定：精密量取提取液1ml，按上述标准曲线制备方法进行测定，并由标准曲线或回归方程计算样品中总黄酮的含量。

山楂叶片中黄酮类物质的提取工艺与检测一 实验目的1 复习可见分光光度计的使用2 学习超声波提取成分的方法3 掌握利用分光光度计测定含量的方法 二 实验原理1 黄酮含量的测定采用亚硝酸钠－硝酸铝分光光度法，在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下，黄酮类化合物与铝盐生成鳌合物，加入氢氧化钠溶液后显橙红色，即先用亚硝酸钠还原黄酮，再加硝酸铝络合，最后加氢氧化钠溶液使黄酮类化合物开环，生成2－羟基查耳酮而显色，然后使用可见分光光度计在510 nm 波长处定量测定。

2 超声波提取超声波技术是利用超声波产生的强烈振动、空化作用、粉碎作用，将植物中的活性成分提取到溶剂中去。

植物组织中存在的大量水分和微小气泡正好使得超声波的空化作用极易产生，从而使细胞膜的结构受到破坏，提高和改善了组织细胞的通透性，有利于有机物质的溶出。

超声波媒介中传播引起位于路径上的质点进入振动状态，由此触发出强大的加速度引起一种复杂有力的机械搅拌作用。

由于植物组织引起超声波的吸收而使超声波的动能转化为热能，使得植物组织内部温度升高，有利于有机成分的溶出。

该法提取率高、节省溶剂、缩短提取时间、副产物少、简化操作步骤，能达到比常规提取更理想的效果。

三 主要仪器与试剂 1 主要试剂芦丁对照品（购自中国药品生物制品检定所）,硝酸铝（Al(NO3)3.9H2O,分析纯）,亚硝酸钠(分析纯),氢氧化钠（分析纯）,无水乙醇（分析纯，天津大茂化学试剂厂）,山楂叶片（采摘于本校校园）。

2 主要仪器FA1064N 型电子天平（上海精密科学仪器有限公司）SK8200HP 超声清洗器（59 KHz ，220 V ，500 W ，功率可调范围为40%-100%，上海科导超生仪器有限公司）UV-2550紫外可见分光光度计（日本岛津公司）循环水式多用真空泵（SHB-III ，郑州长城科工贸有限公司） 四 实验内容1 对照品溶液的配置准确称取芦丁对照品0.0124 g 于100 mL 烧杯中，加入10mL 无水乙醇溶解，再加入10mL 蒸馏水，然后将溶液定量转移至50 mL 容量瓶中，再用50%乙醇定容至刻度，摇匀，避光保存。