分光光度法测定总黄酮含量-操作流程图-简易图解-李熙灿-Xican Li

分光光度法测定总黄酮含量：操作流程图2017.10【文献依据】Xican Li, Dongfeng Chen, Ying Mai, Bi Wen, Xiaozhen Wang. Concordance between antioxidant activities in vitro and chemical components of Radix Astragali. Natural Product Research.2012;26:1050-1053.【简介】黄酮包括黄酮、异黄酮、黄酮醇、二氢黄酮醇、双黄酮等，他们大多同时存在于某一种中药及其他植物中。

为了测定这些黄酮的总含量，便建立了总黄酮的检测方法。

其原理是：黄酮中的处于相邻羰基、羟基可以共同络合金属而显色。

根据显色之深浅（即吸光度A值之大小），判断的总黄酮含量之高低。

常用的显色剂是亚硝酸钠-硝酸铝，检测波长是508nm。

采用分光光度计，并以某种标准品绘制工作曲线，依该曲线所建立的回归方程，计算其含量。

【检测方法与实验流程图】图1实验流程图【溶液配制】1.5%亚硝酸钠溶液配制：称取0.5g亚硝酸钠（NaNO2）固体，加蒸馏水至10mL，即得。

2. 10%硝酸铝溶液配制：称取1g硝酸铝固体，加蒸馏水至9mL，即得。

3. 4% 氢氧化钠溶液配制：称取2g氢氧化钠固体，加蒸馏水至48mL，即得。

4. 芦丁标准液配制：精密称取芦丁10.4 mg置25mL容量瓶中，加80%乙醇溶液溶解、定容。

5. 样品液配制：视样品的溶解性，可选用甲醇、乙醇、95乙醇、水作溶液。

浓度尽量高，但要有精确的数值。

【标准曲线绘制】（芦丁）精密量取0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL芦丁标准液，代替上图中的“样品液0.5mL”，依“实验流程图”，测A508nm值：绘制标准曲线如下：mn85AConcentration (mg/ml)总黄酮测定的标准曲线（芦丁）y = -0.00339 + 11.92871 x r=0.99926。

紫外分光光度法测定市售檀香中总黄酮含量
需要准备一定的试剂和仪器设备。

试剂包括：乙醇、硫酸、铝石、铝石试液、石蜡片等。

仪器设备包括：紫外分光光度计、移液器、比色皿等。

1. 检测条件的选择
根据檀香中总黄酮的特性和紫外吸收谱的特点，可以选择适当的检测条件。

总黄酮的最大吸收波长一般在250-380 nm范围内，选择最大吸光度波长进行测定。

还需要选择适当的溶剂来提取檀香中的总黄酮。

2. 样品的制备
将市售檀香样品中的总黄酮提取出来。

将一定量的檀香样品粉碎并过筛，取10 g样品加入250 mL锥形瓶中，加入100 mL的乙醇，用紫外灯加热反应，恒温回流提取1小时。

然后，将提取液过滤，取适量的样品溶液进行稀释。

3. 建立标准曲线
准备一系列不同浓度的标准溶液，可以使用均匀檀香总黄酮提取液进行稀释得到，浓度范围可根据样品含量设定。

使用比色皿分别加入不同浓度的标准溶液和空白对照液，然后用紫外分光光度计在选择的最大吸收波长下测定吸光度。

绘制标准曲线，计算出标准曲线方程。

总结：通过采用紫外分光光度法，可以准确测定市售檀香中总黄酮的含量。

该方法操作简便，结果准确可靠。

但需注意的是，在实际操作中应严格控制好样品的提取条件和测定条件，以确保结果的准确性和可重复性。

需要注意避免不同批次的檀香样品的差异对测定结果的影响，建议进行多重并行实验以保证结果的可靠性。

总黄酮测定（紫外分光光度法，以柚皮苷计）[26]
1）标准曲线
精密称取柚皮苷对照品10mg ，以无水乙醇溶解并定容至50mL ，得0.2mg/mL 柚皮苷溶液。

分别取此浓度0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL ，以无水乙醇定容至5mL ，在284nm 处测定吸光度。

从图1-2中，得回归方程：A=0.0067c-0.0033，R 2=0.9993（n=3）。

式中：c —测定用样品液中的总黄酮含量，μg
A —吸光度
图1-2 总黄酮标准曲线
Fig.1-2 The calibrate curve of flavonoids
2） 样品中总黄酮含量的测定
准确称取试样，以乙醇溶解定容，按标准曲线方法测定[26]。

样品中总黄酮提取率计算公式为：
10010
V m K V c %)P(621⨯⨯⨯⨯⨯= 式中：p: 样品中总黄酮提取率，%;
c ：从标准回归曲线中计算得到的样液的总黄酮含量，μg;
V 1：样品提取液总体积，mL ；
V 2: 测定用体积，mL ；
K ：稀释倍数;
m: 样品的投料量，g。

分光光度法测定芜菁中总黄酮含量梁永红;阿提合尼木;海力茜·陶尔大洪;王松芝【摘要】目的研究芜菁中总黄酮的最佳提取工艺并测定其含量,为芜菁资源的合理开发和利用提供科学依据.方法以乙醇为溶剂,采用索氏提取,分光光度法测定芜菁中总黄酮的含量,并通过稳定性、精密度和回收率试验检验了该方法的可靠性和重现性.结果标准液及供试液均在510nm处有最大吸收.回归方程:A =0.01853 c+0.07628,r =0.9998;平均总黄酮的含量:2.797％,平均加样回收率:101.6％;精密度和加样回收率的RSD值分别为:0.85％,1.21％.本法具有操作简单,稳定,准确,重复性好,灵敏度高,可作为芜菁总黄酮的含量测定法.【期刊名称】《中国实用医药》【年(卷),期】2012(007)010【总页数】3页(P36-38)【关键词】芜菁;总黄酮;分光光度法【作者】梁永红;阿提合尼木;海力茜·陶尔大洪;王松芝【作者单位】830011乌鲁木齐,新疆医科大学附属肿瘤医院药剂科;830011乌鲁木齐,新疆医科大学附属肿瘤医院药剂科;新疆医科大学药学院;830011乌鲁木齐,新疆医科大学附属肿瘤医院药剂科【正文语种】中文维药芜菁的植物学名为芜菁，来源于十字花科植物芜菁的块根，药食同源，历史悠久，疗效显著，可用支气管炎，食欲不振，消化不良的治疗。

通过研究提示芜菁药材中含有皂苷，黄酮类，糖类及其苷，生物碱，内酯，挥发油，酚类，鞣质，氨基酸，蛋白质等化学成分［1］，并且研究了多糖的提取及含量测定，而其他相关性研究尚在进行当中。

本实验选用了新疆9个不同产地的芜菁药材，按照《中国药典》(2005)的相关规定进行实验并且采用荧光分析法对其总黄酮含量进行了测定［2］，旨在以评价药材的质量，并且为相关部门今后制定该药材质量标准时提供参考依据。

1 仪器与试剂SX721分光光度计﹙上海第三分析仪器厂﹚;索氏提取器;回流提取装置。

紫外分光光度法测定植物黄酮含量的方法
紫外分光光度法是一种常用的测定植物黄酮含量的方法。

以下是一种可能的测定方法：
1. 提取样品：将植物中的黄酮化合物提取出来。

可以使用乙醇、甲醇或醚等有机溶剂进行提取。

2. 制备标准曲线：准备一系列已知浓度的黄酮标准溶液，用紫外分光光度法测定其吸光度，并绘制标准曲线。

3. 测定样品：将提取的样品稀释合适倍数，用紫外分光光度法测定其吸光度。

4. 计算黄酮含量：根据样品的吸光度和标准曲线，计算出样品中的黄酮含量。

需要注意的是，测定植物黄酮含量的方法可能会因样品的不同而有所变化，具体的操作步骤还需根据具体情况进行调整和优化。

双波长分光光度法测定化橘红中总黄酮的含量作者：李琼霞黎晓欣廖辉来源：《中国民族民间医药·上半月》2017年第05期【摘要】目的：建立一种测定化橘红中的总黄酮含量时能有效消去样品溶液背景干扰的方法。

方法：甲醇超声提取总黄酮；最大吸收波长283nm为测定波长，325nm为参比波长，双波长分光光度法测定总黄酮含量。

结果：标准曲线在0～80μg浓度范围内线性关系良好，相关系数r=0.9999；方法稳定性在0～120min良好，RSD%为1.1%；三个浓度水平加样回收率在98%～103%之间。

结论：本方法简单易行，适用于化橘红产品的质量控制。

【关键词】双波长分光光度法；化橘红总黄酮；含量测定【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2017）09-0011-03Determination of Total Flavonoids in Exocarpium Citri Grandis By Double-wavelength SpectrophotometryLI Qiongxia1 LI Xiaoxin1 LIAO Hui21.Guangzhou Yuexiu District Center for Disease Control and Prevention，Guangzhou 510055，China；2.Foshan Ziyunxuan Pharmaceutical Co.，Ltd，Foshan 528000，ChinaAbstract：Objective To establish a method for the determination of the total flavonoids content in exocarpium citri grandis and can effectively eliminate the sample solution background interference.Methods The total flavonoids were extracted by ultrasonic method in Methanol. The maximum absorption wavelength was 283nm， the wavelength was 325nm， the content of total flavonoids was determined by standard curve method.Results The calibration curve was linear in the concentration range of 0～80μg， the correlation coefficient was 0.9999.The stability of the method was good at 0～120min and RSD% was 1.1%.The recoveries of the three levels were 98～103% .Conclusion The method is simple and can be used for the quality control of the exocarpium citri grandis.Keywords：Double-wavelength Spectrophotometry；total flavonoids in exocarpium citri grandis；Content determination化橘红为芸香科植物化州柚Citus grandis‘to-mentosa’或柚Citus grandis （L.）Osbeck的未成熟或近成熟的干燥外层果皮。

紫外分光光度法测定甘草渣中总黄酮含量作者：张腊腊胡浩斌王宗博武芸来源：《安徽农业科学》2017年第09期摘要[目的]建立甘草渣中总黄酮含量的测定方法。

[方法]以芦丁作为对照品，10% KOH为显色剂，采用紫外分光光度法，在409 nm波长处对样品中的总黄酮含量进行测定。

[结果]总黄酮在一定范围内呈良好的线性关系，R2为0.994 5；平均加样回收率为88%，RSD为13%，甘草渣中总黄酮的含量为2.24%。

[结论]该方法稳定、简便，适用于甘草渣中总黄酮含量的测定。

关键词紫外分光光度法；甘草渣；总黄酮含量中图分类号S567.23+9文献标识码A文章编号0517-6611（2017）09-0123-02Determination of Total Flavonoids in Licorice Residue by UV SpectrophotometryZHANG Lala1， HU Haobin1，WANG Zongbo2 et al（1.College of Chemistry and Chemical Engineering， Longdong Univercity，Qingyang，Gansu 745000；2.Qingyang Zhongkai Agricultural Products Co.， Ltd.，Qingyang，Gansu 745000）Abstract[Objective] The research aimed to establish the determination method of total flavonoids content in licorice residue. [Method]Using rutin as the reference substance and 10% KOH as the color reagent，the content of total flavonoids in the samples was measured at 409 nm by UV spectrophotometry.[Result]The total flavonoids showed a good linearity in a certain range， R2 was 0.994 5.The average recoveries were 88%， RSD was 1.3%， and the content of total flavonoids in licorice residue was 2.24%.[Conclusion] The method is stable and simple， and is suitable for the determination of total flavonoids in licorice residue.Key wordsUV spectrophotometry；Licorice residue；Total flavonoids content甘草是豆科蝶形花亚科甘草属多年生草本植物[1]，具有补脾益气、清热解毒等功效[2]。

分光光度法测定保健食品中总黄酮２９１前言总黄酮是很多保健食品中的重要功效成份，能促进胰岛素的亲和力，在降压、降脂、降血糖方面有显著效果，同时还具有增强毛细血管通透性等作用。

因此，测定其含量对于保健食品的品质和功效具有重要的意义。

但目前国内还没有保健食品中总黄酮测定方法的国家标准。

国内外对保健食品中总黄酮的测定，考虑到方法的简便、快捷以及平行性，多采用在碱性介质中加铝盐显色的分光光度法。

但是，总黄酮这种天然植物的组分非常复杂，分光光度法在实测过程中会产生各种干扰，影响结果的准确性，本方法有针对性地对此开展了研究，进行了创新并取得了较好的结果，建立了一个高效、准确的测定方法。

目前总黄酮的分析方法国外报道的有溶剂抽提法、聚酰胺薄层分析法等。

但是，柱法操作复杂、时间长，难以避免实测过程中会产生各种干扰。

因此比较而言，本方法立足于用常规的化学及物理检测方法，采用了超声波提取、聚酰胺吸附法经过改进系统，试验得到了快速、简易、良好的效果，在实际测定、应用中，具有更大的意义。

２检测方法２．１试剂与仪器２．１．１试剂与材料ａ）无水甲醇、无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、三氯甲烷，均为分析纯，以下用水除特殊说明外，均为ＧＢ／Ｔ６６８２－２００８中规定的三级水。

ｂ）聚酰胺粉：过８０目～１００目筛。

ｃ）５％亚硝酸钠溶液：称取５．００ｇ亚硝酸钠，加水至１００ｍｌ，溶解混匀，当天配制。

分光光度法测定保健食品中总黄酮孔鲁裔（国家农业标准化监测与研究中心黑龙江）ｄ）１ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液：称取４．００ｇ氢氧化钠，加水至１００ｍｌ，溶解混匀。

ｅ）１０％硝酸铝溶液：称取１０．００ｇ硝酸铝，加水至１００ｍｌ，溶解混匀。

ｆ）３０％乙醇溶液：吸取３０．０ｍｌ无水乙醇，加水至１００ｍｌ，溶解混匀。

ｇ）芦丁标准对照品：９９．５％ｈ）芦丁标准溶液：精确称取经１０５℃干燥至恒重并按其纯度折算为１００％质量的芦丁标准对照品０．０１５０ｇ，加无水甲醇溶解并定容至１００ｍｌ，此溶液浓度为１５０μｇ／ｍｌ，０℃～４℃密封保存，保存期为两个月。

1 总黄酮含量测定1．1 紫外可见分光光度法严赞开［1］综述了紫外分光光度法测定植物中黄酮含量的方法．重点介绍了单波长法、差示法、双波长法、三波长法、导数法等紫外分光光度法测定黄酮类化合物含量的原理及分析特性。

1．1．1 紫外可见分光光度法: 是以分子吸收光谱为基础的紫外－可见分光光度法，利用某些物质的分子在峰带I( 300 ～400 nm) 和峰带Ⅱ( 220 ～280 nm) 光谱区的吸光度来进行分析测定的方法。

具有简便、适用性广、准确度、精密度和重现性较好等特点，在总黄酮含量分析中发挥着重要作用。

1．1．2 比色法: 是一些药典最常用的总黄酮含量检测方法，它主要以Al( NO3 ) 3 为显色剂，在碱性条件下，利用其与总黄酮形成红色螯合物为特征。

常用于总黄酮类化合物含量测定的金属盐试剂有Al( NO3 ) 3、AlCl3 等。

1．1．3 差示分光光度法简称ΔA 法: 使用稍高于样品或稍低于样品的标准作参比，测量样品和参比间的相对吸光度。

而此相对吸光度又与样品和参比间的浓度差成比例关系，借差示工作曲线而求出样品的含量。

1．1．4 双波长和导数分光光度法: 用于测定吸收光谱曲线重达的混合物的含量而不须用解联立方程，还可分析高浓度及混浊样品，其灵敏度和准确度比普通分光光度法好。

在选择波长时，原则上除了要干扰物有相等吸光度外，还要求两波长比较接近，被测组分在该两波长处的摩尔吸收系数相差大些，这样方法的灵敏度会更高。

如果将上述双波长分光光度计上两个波长尽可能指近，使只相差1 ～2 nm，并且同时进行扫瞄，能得到试样一阶导数吸收光谱-吸光度对波长的变化率曲线，即导数分光光度法。

2 药理作用2．1 镇痛作用赵铁华等［4］研究结果显示灌胃、腹腔注射、皮下注射适宜剂量的黄芩茎叶总黄酮，对实验动物经化学和热刺激导致的疼痛反应皆有一定的抑制作用，其镇痛作用机制与中枢作用相关。

银杏总黄酮( TFG) 腹腔内注射可显著抑制甲醛致小鼠疼痛反应，延长小鼠舔足潜伏期并减少小鼠扭体反应数。

分光光度法测定红花软胶囊中总黄酮的含量翟晓茹;张红兵;李永东;张燕【摘要】Objective:To establish a method to determine the content of total flavonoids in Safflower Soft Caplsule. Methods : The content of total flavonoids was determined by UV at 360nm. Results: The linear range was between4.657~23.285μg/mL with correlation coefficient of r=0.9995. The average recovery (n=5) and RSD were 97.10%and 1.1%respectively. Conclusion:The established method is accurate and reliable with good reproducibility. It can be used to control the quality total flavonoids in Safflower Soft Caplsule.%目的：建立红花软胶囊中总黄酮含量的检测方法。

方法：采用UV法，在波长360nm处测定红花软胶囊中总黄酮的含量。

结果：用芦丁作对照，在4.657～23.285μg/mL范围内线性关系良好，r=1.0000，平均回收率为97.10%（RSD=1.1%，n=9）。

结论：该方法准确、灵敏、重现性好，可用于红花软胶囊中总黄酮含量的测定。

【期刊名称】《北方药学》【年(卷),期】2015(000)009【总页数】2页(P7-7,8)【关键词】红花软胶囊;紫外分光光度法;总黄酮【作者】翟晓茹;张红兵;李永东;张燕【作者单位】中国辐射防护研究院华卫药业太原 030006;中国辐射防护研究院华卫药业太原 030006;中国辐射防护研究院华卫药业太原 030006;中国辐射防护研究院华卫药业太原 030006【正文语种】中文【中图分类】R927.2红花软胶囊是由菊科植物红花的提取物与红花籽油经科学配比而成，是山西华卫药业独立研发的软胶囊制剂，具有辅助降血脂、提高缺氧耐受力的功效。

分光光度法测定刺五加滴剂中总黄酮含量摘要：采用可见分光光度法，以芦丁为标准品为对照，在最大吸收波长507nm处，对刺五加滴剂中的总黄酮成分测定含量。

方法学考察结果表明，重复性试验的总黄酮平均含量为4.2632mg/ml，相对标准为1.81%，（<2%），表明方法重复性良好；平均回收率为98.39%，变异系数RSD=1.18%（<2%）。

方法简便，重现性好，可作为检验刺五加滴剂中总黄酮含量的一种方法。

关键词：总黄酮含量测定分光光度法一、刺五加的性质五加科植物刺五加的干燥根及根茎，主含丁香苷，五加苷B、D、E，短梗五加苷A、B、C、D，异秦皮啶和黄酮类、多糖类成分，此外尚含强心苷和挥发油等成分等，单糖苷或双糖苷溶于水，难溶于低极性有机溶剂，异秦皮啶溶于甲醇、三氯甲烷等溶剂，紫丁香苷可溶于甲醇，总黄酮类成分则可溶于乙醇、甲醇等溶剂。

二、样品中刺五加药材的总黄酮含量测定参考有关文献：以水为溶剂，采用紫外分光光度法测定总黄酮含量，试验方法如下：1.（1）仪器：B3200S超声波清洗器（上海必能信仪器有限公司）；岛津UV-2550紫外可见分光光度计，UVProbe工作站；METLER A240型电子天平（瑞士梅特勒）；B3200S型超声波清洗机。

（2）材料与试剂：芦丁对照品：购于中国药品生物制品检定所；甲醇分析纯（天津市天大化工实验厂）；亚硝酸钠分析纯（天津市广成化学试剂有限公司）；硝酸铝分析纯（天津市广成化学试剂有限公司）；氢氧化钠分析纯（青岛海滨化学试剂厂）；水为去离子水。

样品四批：041124、050912、050914、050916自制。

2.方法学考察2.1对照品及供试样品的配制分别精密称取芦丁对照品4.46mg，自制样品0.5ml分别置5ml量瓶中，加甲醇2ml，微热使溶解，放冷后，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取1ml 置10ml 量瓶内，加水至刻度，摇匀，即得（0.0892mg/ml）。

分光光度法测定芜菁中总黄酮含量梁永红;阿提合尼木;海力茜·陶尔大洪;王松芝【期刊名称】《中国实用医药》【年(卷),期】2012(007)010【摘要】目的研究芜菁中总黄酮的最佳提取工艺并测定其含量,为芜菁资源的合理开发和利用提供科学依据.方法以乙醇为溶剂,采用索氏提取,分光光度法测定芜菁中总黄酮的含量,并通过稳定性、精密度和回收率试验检验了该方法的可靠性和重现性.结果标准液及供试液均在510nm处有最大吸收.回归方程:A =0.01853 c+0.07628,r =0.9998;平均总黄酮的含量:2.797％,平均加样回收率:101.6％;精密度和加样回收率的RSD值分别为:0.85％,1.21％.本法具有操作简单,稳定,准确,重复性好,灵敏度高,可作为芜菁总黄酮的含量测定法.【总页数】3页(P36-38)【作者】梁永红;阿提合尼木;海力茜·陶尔大洪;王松芝【作者单位】830011乌鲁木齐,新疆医科大学附属肿瘤医院药剂科;830011乌鲁木齐,新疆医科大学附属肿瘤医院药剂科;新疆医科大学药学院;830011乌鲁木齐,新疆医科大学附属肿瘤医院药剂科【正文语种】中文【相关文献】1.芜菁籽中总黄酮含量测定的方法学研究 [J], 马合木提·买买提明;玛尔哈巴·吾斯满;赛力慢·哈得尔;米丽班·霍加2.紫外分光光度法测定市售檀香中总黄酮含量 [J], 陈依春; 李捷; 姚欢; 阿多; 白玛央金; 旦增次仁; 洛桑桑旦; 丹增色珍; 孙芳云3.紫外-可见分光光度法测定防暑清热饮中总黄酮和总多糖含量 [J], 李杰; 杨育儒; 王庆芬; 郑绍忠; 陈锦珊4.西藏不同地区芜菁中总黄酮及皂苷含量测定及抗氧化活性比较研究 [J], 张丽静; 扎罗; 范蓓; 李文义; 付劢; 王凤忠5.紫外分光光度法测定健儿清解液中总黄酮的含量 [J], 黄冬梅;饶冬荣因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

紫外可见分光光度法测定化橘红中总黄酮的含量
李幸穗;黄淑慧;郭俐麟
【期刊名称】《广州化工》
【年(卷),期】2022(50)19
【摘要】建立一种用紫外分光光度法测定化橘红中总黄酮含量的最佳提取方法。

采用水浴加热回流提取法;紫外测定最大吸收波长为283 nm,紫外可见分光光度法测定化橘红中总黄酮含量。

结果表明在12~28μg·mL浓度范围内标准曲线的线性关系良好,相关系数为r=0.9999;在0~2 h该方法稳定性良好,RSD为1.1%。

本方法简便快捷,适用于化橘红产品的提取和质量控制。

【总页数】3页(P127-129)
【作者】李幸穗;黄淑慧;郭俐麟
【作者单位】广州卫生职业技术学院
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.双波长分光光度法测定化橘红中总黄酮的含量
2.紫外分光光度法测定黄蜀葵花总黄酮片中总黄酮的含量△
3.紫外-可见分光光度法测定淫羊藿总黄酮胶囊中总黄酮的含量研究
4.紫外分光光度法测定醋柳黄酮片总黄酮甙元的含量
5.紫外-可见分光光度法测定防暑清热饮中总黄酮和总多糖含量
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文件制修订记录1.0目的本标准规定了总黄酮的测定方法。

2.0适用范围本标准适用于本草原料及凉茶半成品、成品中总黄酮含量的测定。

3.0术语无4.0职责化验室领班：负责监督检验员按照按此方法进行检测。

化验室检验员：负责按此方法对凉茶半成品、成品中总黄酮的含量进行检测。

5.0工作流程图无6.0内容及要求6.1原理溶于乙醇的黄酮类化合物在碱性条件下，与显色剂三价铝离子结合生成有色物质，可在510nm波长附近产生最大吸收。

在一定浓度范围内，其吸光度与黄酮类化合物的含量成正比，与标准曲线（芦丁标准品）比较，可定量黄酮类化合物的含量。

6.2仪器6.2.1蒸煮锅或灭菌锅6.2.2恒温水浴锅6.2.3可见分光光度计6.2.4液体过滤袋（5μm）6.2.5容量瓶50ml6.2.6烧杯1000ml6.2.7吸管1ml，2ml，5ml，10ml6.3试剂除非另有说明，在分析中至少使用分析纯试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。

6.3.130%（V/V）乙醇6.3.25%（M/V）亚硝酸钠6.3.310%（M/V）硝酸铝6.3.41mol/l氢氧化钠6.3.50.2g/l芦丁标准溶液准确称取于120℃干燥至恒重的无水芦丁20mg，加适量30%乙醇溶解（需水浴），并用30%乙醇定容至100ml，即可得浓度为0.2g/l的芦丁标准溶液。

6.4分析步骤6.4.1标准曲线绘制分别吸取0.2g/l芦丁标准溶液1.00ml、2.00ml、3.00ml、4.00ml、5.00ml、6.00ml、7.00ml、8.00ml于50ml容量瓶中，加30%乙醇20ml，5%亚硝酸钠溶液1.5ml，摇匀，在暗处放置6分钟，取出加10%硝酸铝溶液1.5ml，摇匀，在暗处放置6分钟，取出加入1mol/l氢氧化钠溶液10ml，以30%乙醇溶液定容至50ml（V1），暗处放置15min，取溶液于1cm比色皿中，在波长510nm处比色测量其吸光度，以相应的试剂溶液作为空白进行校正。