乙型肝炎病毒表面抗体定量测定作业指导书

乙肝病毒表面抗体诊断操作规程
乙肝病毒表面抗体诊断操作规程
一、操作步骤：
1、将试剂盒从冰箱中取出至室温中平衡30分钟后使用。

2、将标本对应微孔按顺序编号。

3、每孔加入待测标本50微升，设阴、阳性对照
各两孔，每孔加入阴性对照（或阳性对照）各1滴，并设空白对照1孔。

4、每孔加入酶结合物1滴，（空白对照孔除外）
充分混匀，封板，置37度孵育30分钟。

5、手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，
静置5秒，甩干，重复5次后拍干。

洗板机洗板：选择洗涤5次程序后拍干。

6、每孔加显色剂A液、B液各1滴，充分混匀，
封板，置37度孵育15分钟。

7、每孔加终止液1滴，混匀。

8、用酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双
波长的酶标仪比色，参考波长630nm），先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。

二、结果判断：
样品OD值/阴性对照平均OD值大于等于2.1判断为阳性，否则为阴性。

阴性对照OD值低于0.05作0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。

三、注意事项：
1、使用前试剂应摇匀，并弃去1～2滴后垂直滴加。

2、封片不能重复使用。

3、结果判断须在反映终止后10分钟内完成。

4、不同批号的试剂不可混用。

5、待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。

6、试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。

HBV-DNA检测（PCR）作业指导书1. 目的：规范本中心对乙型肝炎病毒DNA定量检测的方法细则。

2. 范围：乙型肝炎病毒DNA定量检测。

3. 职责：3.1 检测人员：负责按照本检测细则对被检样品进行检测。

3.2 复核人员：负责对检测操作是否规范以及检测结果是否准确进行复核。

3.3 科室负责人：负责对科室综合管理和检测报告的签发。

4. 方法：实时荧光PCR法5. 仪器：博日FQD-48(M4)荧光定量PCR仪6. 试剂与材料6.1 试剂来源：北京华大吉比爱生物技术有限公司，试剂有效期为12个月。

6.2 材料：PCR所使用的吸管、试管、加样枪头以及微量离心管都应一次性使用。

特别是微量离心管和试管都应为无菌。

6.3 可调移液器（0.5～10ul、10～200ul、100~1000ul）应该用重量法效正后再使用。

7．操作步骤7.1 样本要求：7.1.1、血清：1600rpm20分钟分离全血取血清；7.1.2、血浆：EDTA抗凝剂，1600rpm20分钟，分离血浆。

7.2样本处理7.2.1、待测血清/血浆及对照个100ul，分别加至1.5ml离心管中；7.2.2、再加100ul浓缩液，振荡混匀，13000rmp10分钟，弃上清液；7.2.3、然后加入10ul内参对照品，50ul核酸提取液；7.2.4、100℃干浴或沸水浴10分钟，13000rmp离心10分钟，吸取上清液备用。

7.3扩增试剂准备7.3.1、核酸反应液振荡混匀，2000rpm10秒；7.3.2每管加入反应液25ul；(样本数+1管阴性对照+1管强阳性对照+1管弱阳性对照+4管工作标准品)7.3.3加样：加入处理过的样品个5ul，盖紧管盖，2000rpm10秒。

7.4 PCR 扩增反应程序如下：仪器检测通道选择：HBV发光荧光基团为FAM,淬灭荧光基团为TAMAR荧光素,参考荧光基团为Rox荧光基团。

8. 结果判断：分析软件自动结合,4个定量校准品制定标准曲线，并计算各样品的结果。

乙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书-模板1.目的采用PCR技术、实时荧光探针技术，用于临床血清或血浆标本中的乙型肝炎病毒核酸的定量检测，或用于乙型肝炎的辅助诊断和抗病毒药物治疗中的疗效观察。

2.范围适用于乙型肝炎病毒核酸（HBV DNA）定量检测（PCR-荧光探针法）。

3.职责3.1操作人员：负责标本制备检测、仪器操作、报告发送。

3.2专业组组长：负责本组耗材的请购，监督本组标本检测、仪器操作、报告发送、质控管理等各方面工作。

3.3实验室主任：负责监督和指导实验室各方面工作。

4.原理采用荧光PCR技术，以HBV基因组中相对保守区为靶区域，设计特异性引物及荧光探针，在样品核酸纯化之后，通过荧光定量PCR对HBV DNA进行扩增，并检测荧光信号，仪器软件系统自动绘制出实时扩增曲线，根据阈循环值（CT）实现对未知样品的检测。

另外，本试剂盒带有内标物质，用于对核酸提取的整个过程进行监控，减少假阴性结果的出现。

5.样品要求5.1适用样品类型：血清或血浆。

5.2样品采集：5.2.1血清用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2:^，注入无菌的真空采血管中（未加抗凝剂），室温（22-25℃）放置30-60min血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5ml灭菌离心管。

5.2.2血浆用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2ml，注入含EDTA （乙二胺四乙酸二钠）抗凝剂的真空采血管，立即轻轻颠倒混匀5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后分离血浆于无菌的1.5ml 灭菌离心管。

5.3样品保存和运送使用专用样品0c冰壶送检，温度约维持在4℃左右。

分离后的血清或血浆可立即用于测试，也可以保存于-20℃待测，保存期为6个月。

5.4拒收样品：拒绝重度溶血样品、肝素抗凝的血浆。

6.仪器和试剂6.1仪器AB7500核酸扩增仪、恒温金属浴、生物安全柜、低温离心机等。

血清乙型肝炎病毒表面抗体检测ELISA1.原理在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗原，配以酶标记抗原（HBsAg-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗体（HBsAb）。

2.标本采集2.1采集前病人准备：受检者应空腹2.2标本种类：血清或血浆2.3标本要求：采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。

3.标本储存：2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。

4.标本运输：密封，室温运输。

5.标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。

6.试剂6.1试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗体诊断试剂盒6.2试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。

6.3包装规格：96Test/Kit6.4试剂盒组成：HBsAb微孔板，HBsAb酶标记抗原，HBsAb阳性对照血清，HBsAb 阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。

6.5试剂储存条件及有效期：2-8℃避光保存，有效期9个月。

7.仪器设备7.1仪器名称：自动酶标仪7.2仪器厂家：Rayto7.3仪器型号：RT-21008.操作步骤8.1平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。

8.2配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。

8.3编号：将微孔条固定于支架，按序编号。

8.4加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50μl 于相应孔中。

8.5加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50μl，轻拍混匀。

8.6温育：置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。

8.7洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。

8.8显色：每孔加入底物A、B各50μl，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。

血清乙型肝炎病毒HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc检测作业指导书1.目的：建立乙型肝炎病毒HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc定性检测标准操作规程，确保检测结果的准确。

2.范围：适用于检验科免疫实验室。

3.规程：3.1标本的收集与准备：3.2用未加抗凝剂的真空抽血管抽取静脉血2ml。

3.3标本完全凝固后才能离心，并分离血清。

3.4如试验8小时内不能完成，血清标本放2~8℃保存。

3..5标本拒收标准：严重脂血、溶血、黄疸。

4、测定原理：本试剂盒采用胶体金标记免疫层析技术，将HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc单项胶体金标记免疫层析检测条组装成联合检测卡。

样品加到检测卡各项加样孔后,再借助毛细作用移行至层析区,于检测区和对照区,胶体金标记颗粒由于抗原抗体反应形成富聚,形成或不形成肉眼可见的胶体金颗粒反应带,从而实现对HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc的检测，并作出存在与否的判定。

HBsAg用双抗体夹心法检测，胶体金标记抗HBs(鼠单抗)与样品中的HBsAg结合形成复合物,再借助毛细作用复合物沿层析条向前移行,与检测线区预包被的抗HBs(鼠单抗)形成“Au-抗HBs(鼠单抗)-HBsAg-抗HBs(鼠单抗)-固相材料”夹心物而凝聚显色。

游离胶体金标记抗HBs(鼠单抗)则在对照线处与羊抗鼠IgG抗体结合而富集显色。

阴性标本则仅在对照线处显色。

结果于30分钟内判定。

抗HBs用双抗原夹心法检测胶体金标记HBsAg与样品中的抗HBs结合形成复合物,再借助毛细作用复合物沿层析条向前移行,与检测线区预包被的HBsAg形成“Au-HBsAg-抗HBs-HBsAg-固相材料”夹心物而凝聚显色。

游离胶体金标记HBsAg则在对照线处与羊抗HBs结合而富集显色。

阴性标本则仅在对照线处显色。

结果于30分钟内判定。

HBeAg用双抗体夹心法检测胶体金标记抗HBe(鼠单抗)与样品中的HBeAg结合形成复合物,再借助毛细作用复合物沿层析条向前移行，与检测线区预包被的抗HBe(鼠单抗)形成“Au-抗HBe(鼠单抗)-HBeAg-抗HBe(鼠单抗)-固相材料”夹心物而凝聚显色。

乙型肝炎表面抗体定量检测1．检验目的检测HBsAb主要是用于监测乙型肝炎疫苗是否有效，HBsAb的出现表明机体具有针对乙肝病毒感染的免疫力和抵抗乙肝病毒的侵入，同时定量检测HBsAb还可以观察急性乙肝恢复的动态情况以及乙型肝炎的流行病学调查（以往是否暴露接触过乙肝病毒）。

2．方法原理采用了美国雅培公司的专利技术——微粒子酶免疫分析（MEIA），即以rHBsAg包被微粒子（M-Ag）与标本中的HBsAb形成M-Ag-Ab 复合物，当复合物被转移到纤维杯上时，微粒子就不可逆地结合到纤维杯表面的玻璃纤维上，加入生物素化HBsAg（Ag-B）形成M-Ag-Ab-Ag-B复合物，再与加入的碱性磷酸酶标记的抗生物素抗体结合，洗去未结合的游离物质，加入底物——四甲基伞形酮磷酸盐，碱性磷酸酶脱去底物的磷酸基而发出荧光，通过MEIA光路元件检测而得到定量结果。

3．性能指标MEIA定量检测HBsAb在0.00-1000mIU/ml的范围内呈线性关系，不精密度CVs为3-8%，检出限>0.1mIU/ml，灵敏度0.1mIU/ml。

4．标本收集4．1标本类型：静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本（抗凝剂可用肝素钠、枸橼酸钠、ACD、CPDA-1或EDTA，抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分析纯，使用的比例以厂家推荐为准）；其他体液如尿液、唾液、精液、羊水、胸水、腹水、乳汁等体液可以作为检测标本，但加热灭活的血清和血库的库存血则不宜作为检测标本。

4．2标本留取：以空腹为宜，收到标本后最好立即离心留取血清或血浆（凝固血应待其充分凝固后收集血清），不能有残留的红细胞、纤维蛋白丝，使用肝素治疗的病人宜在肝素治疗前抽血。

4．3标本保存：留取的标本最好在3小时内检测，不能立即检测的应放臵于2-8℃最长达14天（可以含有凝块但要密闭以防蒸发），或者-10℃最长达14天（不能反复冻融也不能含有凝块和红细胞）。

一、目的：规范乙型肝炎病毒表面抗体测定的标准操作程序，确保乙型肝炎病毒表面抗体测定的结果准确有效。

二、适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的乙型肝炎病毒表面抗体。

三、临床意义乙型病毒性肝炎是一种重要的公众危害性疾病，据估计全球范围内目前大约有3亿乙肝病毒携带者。

感染乙型病毒性肝炎可引起广泛的急、慢性肝脏疾病，流行病学研究已经清楚地表明乙肝病毒与肝细胞癌的发生有联系。

表面抗体(Anti-HBs)是一种保护性抗体，是乙肝感染后痊愈或趋向治愈的象征；全程（3针）疫苗接种结束后1个月检测保护性表面抗体(Anti-HBs) 的浓度，能够判定免疫效果。

关于表面抗体与保护力的关系，世界标准未完全统一，目前普遍认为普通人群表面抗体浓度值≥10mIU/ml，就有足够的保护作用；高危人群表面抗体浓度值≥100mIU/ml，具有足够的保护作用。

肝移植、血液透析及免疫抑制等病人定期检测表面抗体浓度值，每次检测值≥ 100mIU/ml为宜。

四、方法原理本产品采用双抗原夹心法原理进行检测。

用表面抗原包被磁微粒，用辣根过氧化物酶标记表面抗原制备酶结合物。

通过免疫反应形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与表面抗体的含量成正比。

五、标本的采集与处理5.1.采用正确医用技术收集血清/血浆样本，推荐对于使用普通管采血的样本，离心前样本应37℃孵育至少1h；对于使用促凝管采血的样本，离心前样本应37℃孵育至少0.5h，离心条件10000g/min，10min；对于使用抗凝管采血的样本，离心条件10000g/min，10min。

抗凝管推荐使用肝素钠作为抗凝剂，避免使用枸橼酸钠和EDTA抗凝剂。

5.2.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。

5.3.溶血或脂血的样本不能用于测定。

5.4.样本收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2~8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。

血清乙型肝炎病毒表面抗体检测（ELISA）1. 原理在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗原，配以酶标记抗原（HBsAg-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗体（HBsAb）。

2. 标本采集2.1 采集前病人准备：随机采血2.2 标本种类：血清或血浆2.3 标本要求：生化管采集病人静脉血3ml（也可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。

3. 标本储存：2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。

4. 标本运输：密封，室温运输。

5. 标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或叠氮钠防腐标本不宜作此项检测。

6. 试剂6.1 试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗体诊断试剂盒6.2 试剂生产厂家：珠海丽珠试剂股份有限公司。

6.3 包装规格：96Test/Kit6.4 试剂盒组成：HBsAb微孔板，HBsAb酶标记抗原，HBsAb阳性对照血清，HBsAb阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。

6.5 试剂储存条件及有效期：2-8℃避光保存，有效期一年。

7.仪器设备7.1自动酶标仪7.1.1仪器型号：RT-60007.1.2仪器厂家：深圳雷杜生命科学股份有限公司7.2洗板机7.2.1仪器型号：RT-31007.2.2仪器厂家：深圳雷杜生命科学股份有限公司8.操作步骤8.1平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。

8.2配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：20稀释后使用。

8.3备板：按需(待测样本数+3)取出微孔条,将微孔条固定于支架,不足一条的部分以废孔补足为一条，注意底部在同一水平。

8.4加样：所有样本均用加样器加50ul。

具体如下：从A1孔开始，依次加临床样本、阳性对照、阴性对照各一孔，最后一孔不加样本，为空白对照。

乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测标准操作规程（PCR-荧光探针法）1.目的: 规范乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测操作流程，保证检测结果的准确性。

2.应用范围: HBV DNA 荧光定量检测。

3.职责:3.1 文件编写：实验室技术员。

3.2 文件审核：实验室主管。

3.3 文件审批：实验室主任。

3.4 执行：PCR实验室所有工作人员。

4. 参考文献：4.1 中山大学达安基因股份有限公司乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）说明书。

4.2 中山大学达安基因股份有限公司核酸扩增荧光检测系统DA7600型使用说明书。

5. 内容：5.1 检测方法：PCR-荧光探针法。

5.2 实验原理：用一对乙型肝炎病毒特异性引物和一条乙型肝炎病毒特异性荧光探针，配以PCR反应液、耐热DNA聚合酶（Taq酶）、核苷酸单体（dNTPs）等成分，通过PCR体外扩增法，即高温变性、低温退火、适温延伸进行DNA扩增，并对PCR全过程进行实时监测，从而定量检测乙型肝炎病毒DNA。

5.3 性能参数：5.3.1 精密度：检测下限为5.0x102IU/ml。

5.3.2 线性范围：1.0x103～1.0x108IU/ml。

5.4 标本采集：由合作单位按照以下要求进行采集5.4.1 标本类型：血清。

5.4.2 标本采集：用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2毫升，注入无菌的干燥玻璃管，室温（22～25℃）放置30～60 min，全血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500 rpm离心5min；吸取上层血清，转移至1.5ml灭菌离心管。

5.4.3 标本保存：标本可立即用于测试，也可以保存于-20℃待测，保存期为6个月，应避免反复冻融。

5.4.4 运送条件：标本运送采用0℃冰壶。

5.4.5 标本拒收标准：污染、严重溶血、脂血类或肝素抗凝剂标本。

5.5 设备和试剂：5.5.1 设备： DA7600荧光定量PCR仪、低速水平离心机、生物安全柜、台式高速离心机、移液器、混匀器、恒温水浴箱/干式恒温器、冰箱（4℃、-20℃）、移动/固定紫外灯、冷冻离心机。

乙型肝炎病毒表面抗体检测（ELISA）1原理在微孔板上预包被被纯化的乙肝表面抗原（HbsAg），配以酶标记抗体（HbsAg-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗体（HBsAb）。

2试剂：2.1试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）2.2试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司2.3包装规格：96Test/Kit2.4试剂盒组成：HbsAg预包被微孔板（包被HbsAg），HbsAb酶标抗体（含HRP标记HbsAg）, HbsAb阳性对照（含HbsAbde 阳性血清），HbsAb阴性对照血清（正常人血清），浓缩洗涤液（PBS-T缓冲液），底物A（含H2O2），底物B（含TMB），终止液（含2M H2SO4），封板膜，自封袋，说明书。

2.5试剂储存条件及有效期：2~8℃避光保存，有效12个月。

3样本采集：取静脉血3-4ml于干净容器中分离出血清或血浆标本，如不及时测定可置于4℃冰箱保存，如长期保存需置于-15至-20℃冻存，并避免样本反复冻融。

高脂血、高胆红素及溶血样本可能会影响试验结果的准确性，建议不使用。

4所需仪器4.1全自动酶免分析仪4.2新鲜蒸馏水或去离子水4.3酶标仪（单波长450nm或双波长450nm/630nm）4.4微量移液器4.5 37℃恒温箱或水浴箱4.6洗板机或洗瓶5检验方法5.1平衡：将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18~25℃），微孔板板开封后，余者即时以自封袋封存。

5.2配液：浓缩洗涤液配置前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水去离子水按1：19稀释后使用。

5.3编号：取所需数量微孔条固定于支架，按序编号。

5.4加样：分别在相应孔中加入50ul阴、阳性对照血清或待测样本。

5.5加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50ul；轻拍混匀。

5.6温育：置37℃温育25min。

5.7洗涤：用洗涤液充分洗涤5次、洗涤后扣干（每次应保持30~60s的浸泡时间）。

乙型肝炎病毒表面抗原测定(绝对定量)标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：乙型肝炎病毒表面抗原测定(HBsAg II quant)；组合项目申请：乙肝病毒项目组合。

临床医生根据乙肝患者抗病毒疗效监测需要提出检验申请。

2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，置含分离胶的真空采血管（黄盖管）。

2.1.2采用电子检验申请单，血标本试管粘贴附患者信息的条形码。

2.1.3标本采集后，通过LIS及标本条形码管理系统记录标本采集时间。

2.1.4标本采集后及时运送至实验诊断中心。

由标本处理中心负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。

2.1.5不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。

2.1.5.2无法确认标本与申请单对应关系的。

2.1.5.3其他如标识涂改、标本试管破裂等。

注：严重溶血或脂浊的标本,应在检验报告中标注标本状况，并建议复查；并在工作日志中记录。

2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。

2.2.2标本保存时间：室温（20℃～25℃）下可稳定一周，普通冰箱中（2℃～8℃）7天，-20℃3个月。

样本可以冻存5次。

为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1d的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。

2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置2℃～8℃冰箱内保存7d。

2.3标本采集注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛状态。

2.3.2不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。

3 方法原理用免疫学方法定性测定人血清或血浆中的针对乙肝病毒表面抗原。

采用双抗体夹心法原理，①第一次孵育：将含有样本，两种生物素化的anti-HBsAg单克隆抗体与钌复合体标记的一种anti-HBsAg单克隆抗体和anti-HBsAg多克隆抗体形成一种夹心复合体；②第二次孵育：加入链霉亲合素包被的微粒后抗原，该复合体通过生物素与链霉亲合素的相互作用与结合；③将反应液吸入测量池中，通过电磁作用将磁珠吸附在电极表面，未与磁珠结合的物质通过Procell被去除。

180μL标本+20μl对照试剂 或
· 对于7.0≤COI≤30的有反应性标本
100μl标本+100μl证实试剂
100μl标本+100μl对照试剂 或·
对于COI>30的有反应性标本，标本先用Elecsys通用稀释液作1：20稀释。
100μl稀释的标本+100μl证实试剂
100μl稀释的标本+100μl对照试剂
平行测定PreciControl HBs Ag 2,以便对操作进行核对：
180μl PreciControl HBs Ag 2+20μl证实试剂
180μl PreciControl HBs Ag2+20μl对照试剂
充分混匀，将以上几种反应物15－25度温育30-60分钟或 2－8度温育过夜。
ElecsysHBsAg测定：将预处理标本置于仪器的标本区，记录标识数据。按ElecsysHBsAg试剂操作说明书进行检测。
2.标本要求
Elecsys HBsAg试验重复呈现有反应性的人血清或血浆标本。标本采集和准备与Elecsys HBsAg试验相同。
3.试剂、校准品、质控品和其他所需材料
采用罗氏原装配套试剂。
试剂：
瓶1：证实试剂（黑盖），2瓶，1.3ml。抗HBsAg>200IU/l，人血清。含
防腐剂。
瓶2：对照试剂（白盖），2瓶，1.3ml。人血清,抗HBsAg<3IU/l。含防
· 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。
· 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去。电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。

在Calibration—Status菜单中看定标结果，点Calibration Result键看定标结果，点Reaction Monitor键看每个定标物的反应曲线。
5.2样本检测程序：
单个样本输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点SAVE键，样本号自动累加。
2.标本要求
血清：按标准常规方法采集。
血浆：肝素钠、EDTA-K3或枸橼酸钠抗凝。不要使用肝素锂抗凝血浆。标本在2－8度可稳定5天，-20oC可稳定3个月。标本可冻融6次。有沉淀的标本使用前需离心。加热灭活的标本可使用。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。
标本、定标液和质控品在测定前应预温到室温。
3.试剂、校准品、质控品和其他所需材料
Elecsys HBsAg测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断
11.结果解释
标本的Cutoff指数<1.0判断为HBsAg无反应性，可判定该标本HBsAg阴性，不需进一步的试验。标本的Cutoff指数≥1.0判断为HBsAg有反应性。所有呈现有反应性的标本必须重新测定一次，并且每份标本做二次测定。如果二次均为无反应性，标本可确认为HBsAg阴性。如果二次重复测定中有一次为有反应性，则该标本确认为重复有反应性。重复有反应性的标本必须用中和试验(ElecsysHBsAg证实试验)进行测定。如中和试验阳性,标本判定为HBsAg阳性。
根据目前所知，所有HBsAg测定方法均不能够检测出全部被感染的标本和病人。因此，阴性结果不能绝对排除HBV接触或感染的可能性。有HBV接触史的人，HBsAg阴性可能是因其体内HBsAg含量低于检测下限或抗原对所用抗体无反应性的缘故。

可编辑修改精选全文完整版【标本的采取和保存】采静脉血2ml,分离血清备用。

也可以使用血浆标本进行检测。

标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐【检验原理】乙肝五项检测卡（胶体金法）采用胶体金免疫层析技术，将五个诊断意义相关的试剂通过一个包装组合在一起，同时进行乙型肝炎病毒五项标志物的检测，在不影响各自性能的情况下，便于客户的储存和使用。

HBsAg金标试条利用双抗体夹心法原理，在玻璃纤维素膜上预包被金标鼠抗HBsAg单抗（AU-SAbI）,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被鼠抗HBsAg单抗（sAb2）和羊抗鼠IgG。

检测阳性样本时，样本中HBsAg与胶体全标记抗体结合形成复合物,在层析作用下复合物沿膜带向前移动，经过检测线时与预包被的抗体结合形成"Au-sAbl-HBsAg-sAb2"夹心物而凝聚显色，游离金标抗体则在对照线处与羊抗鼠I g G结合而富集显色。

阴性样本则仅在对照线处显色。

HBsAb金标试条利用双抗原夹心法原理，在玻璃纤维纸上预包被金标表面抗原（重组抗原）（Au-SAg）,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被（重组抗原）HBsAg和羊抗HBsAg。

检测阳性样本时，样本中HBsAb 与胶体全标记表面抗原结合形成复合物,在层析作用下复合物沿膜带向前移动，经过检测线时与预包破的表面抗原结合形成"Au-sAg-HBsAb-sAg"夹心物而凝聚显色，游离金标抗原则在对照线处与羊抗HBsAg结合而富集显色。

阴性样本则仅在对照线处显色。

HBeAg金标试条利用双抗体夹心法原理，在玻璃纤雄素膜上预包被金标鼠抗HBeAg单抗(Au-eAbl),在硝酸纤维素膜上的检测线和对照线处分别包被鼠抗e单抗(eAb2)和羊抗鼠IgG。

检测时，样本中的eAg可与胶体金标记抗体结合形成免疫复合物，在层析作用下复台物沿膜带移动，经过检测线时与预包被的抗体形成&Ab2-eAg-eAbl-Au”夹心物而凝聚显色;阴性样本仅在对照线处显色。

乙型肝炎病毒表面抗原（乳胶法)1.预期用途乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg)检测试剂（乳胶法）用于定性检测全血/血清/血浆中的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg)。

2.检测原理乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）检测试剂（乳胶法）采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术，试剂含有被预先固定于膜上测试区（T）的抗HBsAg抗体和包被在聚酯膜上的抗HBsAg抗体乳胶联合物,测试时，血液样本滴入试剂加样处，血样本与预包被的乳胶颗粒结合的抗HBsAg抗体反应.然后混合物随之在毛细效应下向上层析。

如是阳性，乳胶抗体在层析过程中先于样本中的HBsAg 结合，随后结合物会被固定在膜上的抗HBsAg抗体结合，在测试区(T）内出现一条红色条带。

这条带是HBsAg抗体- HBsAg—乳胶颗粒的复合物在膜上结合形成的.如是阴性,则测试区内（T）将没有红色条带.无论HBsAg抗原是否存在于样本血样中，一条红色条带都会出现在质控区（C)。

质控区内（C）所显现的红色条带是判定是否有足够样本，层析过程是否正常的标准,同时也是作为试剂的内控标准。

3.主要组成成分乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg）检测试剂（乳胶法)主要原材料包括标记用小鼠抗乙肝表面抗原单克隆抗体、包被用羊抗乙肝表面抗原多克隆抗体抗乙肝表面抗原单克隆抗体、链霉亲和素结合物、生物素、乳胶颗粒、硝酸纤维素膜、聚酯纤维素膜、磷酸盐缓冲液、一次性塑料吸管和50ul采血管。

4。

储存条件和有效期原包装应储存于4—30℃，阴凉避光干燥处，忌冷冻.有效期24个月。

5.样本要求1.试剂适用于检测全血、血清和学将样本。

2.样本应收集于洁净、干燥的容器中，可采用肝素、EDTA—钾或柠檬酸三钠作为抗凝剂。

3。

检测时应使用未溶血的样本，严重溶血的样本必须重新采集血样。

4。

样本收集后应尽可能马上使用，不可在室温下长时间存放。

6.检验方法检测前须完整仔细阅读说明书，并将试剂和样本恢复至室温，试剂应在铝箔袋撕口后1小时内使用，如在温度高于30℃、空气相对湿度大于85％的环境下应极可能即开即用。

血清乙型肝炎病毒表面抗体检测作业指导书（ELISA）1. 原理在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗原，配以酶标记抗原（HBsAg-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗体（HBsAb）。

2. 标本采集2.1 采集前病人准备：受检者应空腹2.2 标本种类：血清或血浆2.3 标本要求：采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。

3. 标本储存：2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。

4. 标本运输：密封，室温运输。

5. 标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。

剂试6.6.1 试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗体诊断试剂盒6.2 试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。

6.3 包装规格：96Test/Kit6.4 试剂盒组成：HBsAb微孔板，HBsAb酶标记抗原，HBsAb阳性对照血清，HBsAb 阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。

6.5 试剂储存条件及有效期：2-8℃避光保存，有效期9个月。

7. 仪器设备7.1 仪器名称：自动酶标仪7.2 仪器厂家：KHB7.3 仪器型号：ST3608. 操作步骤8.1 平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。

应体晶有如（匀摇分充前制配液涤洗缩浓：液配8.2充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。

8.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。

8.4 加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50?l于相应孔中。

8.5 加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50?l，轻拍混匀。

8.6 温育：置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。

8.7 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。

8.8 显色：每孔加入底物A、B各50?l，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。

乙肝表面抗体检测标准化操作实验室名称项目编号制定日期瑞慈医院检验科乙肝表面抗体1. 检测项目名称乙肝表面抗体2. 检测原理雅培公司的乙肝表面抗体分析采用微粒子酶免疫法。

3. 试剂3.1 品牌：AUSAB3.2 试剂贮存和稳定性储存要求：试剂盒要求在2~80C保存未开封的试剂在冰箱或分析仪上可保存30天。

4. 仪器Abbott AXSYM5. 测定操作过程详见仪器操作程序。

5.1 失控措施复查质控值，分析原因（仪器、试剂、质控品、水、温度等），并记录纠正过程。

5.2 测定详见Abbott AXSYM项目操作步骤，可根据不同的条形码信息自动进行检测主要仪器参数如下：分析项目 AUSAB分析类型 MEIA单位mIU/ml;定标方法2或6点定标5.3 定标：5.3.1 定标液：雅培公司提供5.3.2 定标频率：使用新批号试剂须重新定标根据质控情况按需要重新定标5.4 质控：5.4.1 质控品：雅培公司提供5.4.2 质控值：质控值应在建立的的质控范围内质控值范围应适应各实验室的具体需要5.5 测定范围半定量分析5.6 检测完毕，血标本置于4~80C冰箱内保存7天，以备复查。

6. 参考范围：6.1 当检测值为0-10时, 为阴性。

6.2 当检测值大于10时，为reactive，提示AUSAB阳性。

7. 结果解释：AUSAB为HBV的中和抗体，有清除HBV，防止再感染的作用。

一般在恢复期出现，提示感染终止，注射过乙肝疫苗者也可为阳性。

8. 病人准备和标本要求8.1 血标本血清：静脉抽血3ml于普通血清管内，分离血清。

稳定性：2~8℃稳定5天，-20℃可稳定4周8.2 标本核对制度：标本号与申请但单号不符的标本或明显污染的标本不予接收9. 注意事项9.1 试剂于2-8℃贮存，使用前避免摇动而产生气泡。

9.2 采集标本时注意避免溶血。

9.3 标本检测前须充分震荡混匀操作人员部门主管质量负责人姓名日期。