最新美国药典-微生物检测

〈61〉非无菌产品的微生物检测：微生物计数检测法生长促进试验和计数方法的适用性概述在供试品存在的情况下，必须确立检测微生物的试验能力。

如果引入了可能影响试验结果的在测试性能或产品方面的变更，则必须确认其适用性。

供试菌株的制备使用供试菌株的标准化稳定悬浮液或者按照以下所述制备。

使用菌种保存技术（种子批系统）以便用于接种的可萌发微生物从最初的主种子批不超过五代。

按照表1中的描述，分别培养每种细菌和真菌供试菌株。

表1.供试微生物的制备和使用用pH 7.0的氯化钠-蛋白胨缓冲溶液或pH7.2的磷酸盐缓冲液配制供试悬浮液；为使黑曲霉孢子悬浮，可将0.05%的聚山梨醇酯80加入该缓冲液中。

这些悬浮液需在2个小时之内使用，或存放在2o～8o条件下24小时内使用。

作为制备并稀释黑曲霉或枯草杆菌营养细胞的新鲜悬浮液的替代方法，可制备稳定的孢子悬浮液，然后将适量的孢子悬浮液用于试验接种。

稳定的孢子悬浮液可在2o～8o下保存，保存期经过时间验证。

阴性对照为了确认试验的条件，用所选的稀释液替代供试品阴性对照。

必须没有微生物的生长。

培养基的生长促进对每一批已制备好的培养基和每一批从脱水培养基或根据描述的组分制备出来的培养基进行测试。

在部分/整个平皿内的大豆酪蛋白消化物肉汤培养基和大豆酪蛋白消化物琼脂培养基中接种少量(不超过100cfu) 表1中指定的微生物，每种微生物均使用单独一部分/整个平皿培养基。

在平皿内的沙氏葡萄糖琼脂培养基中接种少量(不超过100cfu)表1中指定的微生物，每种均使用一个单独平皿的培养基。

按照表１中描述的条件进行培养。

对于固体培养基，所获得的生长与标准化接种体的计算值之间的差异因素不大于2。

对于刚刚制备好的接种体，发生的微生物生长与用此前检验并批准过的培养基批次所得到的微生物生长相当。

如果出现了与此前从上一个经过测试并通过的培养基批次获得的微生物生长相当、清晰可见的微生物生长，则液体培养基适用。

供试品计数法的适用性样品的制备样品制备方法取决于供试品的物理特征。

美国药典USP31无菌检查简介美国药典（United States Pharmacopeia，简称USP）是美国公认的医药行业标准组织，负责制定和发布有关医药品质量的标准和方法。

无菌检查是USP31中的一个重要章节，它主要用于评估药品、医疗器械和其他与患者直接接触的产品的无菌状态。

本文将介绍无菌检查的定义、方法和注意事项。

无菌检查的定义无菌检查是指对药品或医疗器械进行的一系列检验，以确定其是否存在可繁殖的微生物，从而判断其无菌性。

无菌状态是指在没有任何活体微生物存在的情况下。

对于注射剂、眼药水等需要直接进入体内的产品，无菌状态非常重要，以防止微生物感染和其他不良反应的发生。

无菌检查方法无菌检查的方法有多种，常用的方法包括：厌氧培养方法这种方法用于检测生长于缺氧条件下的微生物。

样品通常放置在厌氧培养基中，然后在恒温条件下培养，观察是否有菌落的形成。

高压蒸气灭菌法这种方法通过将样品暴露在高温高压的环境中，使用蒸汽来灭活可能存在的微生物。

灭菌后，用无菌培养基接种样品，并在一段时间后观察是否有菌落的形成。

过滤方法这种方法通过使用无菌过滤器来过滤样品，将可能存在的微生物滤除。

过滤后，将过滤膜接种在无菌培养基上，观察是否有菌落的形成。

光谱学方法这种方法通过使用紫外线、红外线等光谱技术来检测微生物的存在。

由于微生物具有特有的光谱特征，因此可以通过光谱仪器来进行无菌检查。

注意事项在进行无菌检查时，需要注意以下事项：检测设备的无菌性检测设备（培养皿、培养基等）在使用前应进行无菌处理，以避免外源性微生物的干扰。

常用的处理方法包括高温蒸馏、紫外线照射等。

样品的收集和处理在收集样品时，应注意避免样品与外界环境的接触，以防止样品被外源性微生物污染。

在处理样品时，应采取无菌操作，避免微生物的传播。

结果的解读在进行无菌检查后，需要对结果进行解读。

有菌落的形成通常表示样品存在微生物污染，是不符合无菌要求的。

无菌检查的结果应与相应的标准进行比较，以确定样品是否合格。

61微生物限度检测（MICROBIAL LIMIT TESTS）此章提供方法来检测可能存在的好氧微生物其他制药过程中可能出现的微生物的数量，包括原材料和成品中的。

如果经过验证确认可以得到相同或更好的检测结论，也允许采用自动化的检测方法。

在样品检测过程中须进行无菌操作。

若无特别说明，则“培养（incubate）”一词指在30—35℃的培养箱内培养24至48小时；“生长（growth）”一词用于专门的判定，说明“存在和可能存在活的微生物”。

准备实验 (Preparatory Testing)本章涉及实验结果的有效性取决于：提供的被检测样品本身在实验条件下，被充分证明不会抑制可能存在的微生物的生长。

因此，在准备样品时，需要正规的实验操作和符合要求的实验条件，接种稀释样品到含有以下（微生物）培养物的培养基：金黄色（奥里斯）葡萄球菌（Staphylococcus aureus）,大肠埃希氏菌（Escherichia coli）, 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa), 和沙门氏菌（Salmonella）。

方法如下：将用肉汤培养基培养24小时后的（微生物）不小于10-3稀释的微生物培养物，加1 ml（微生物）培养液到磷酸(盐)缓冲液(pH 7.2)，液体大豆酪蛋白消化物培养基（Fluid Soybean-Casein Digest Medium），或者液体乳糖培养基（Fluid Lactose Medium）。

相应培养基培养失败则需要采取以下方法更改检测程序：（1）增加稀释液体积，检测样品加入量仍维持不变；或者（2）中和一定数量的干扰因子；或者（3）结合（1）、（2）得出适当条件，使接种物得以生长。

以下是一些物质的成分和浓度，该物质及浓度可用于加入培养基、阻止物质发挥抑菌作用：大豆卵磷脂（soy lecithin, 0.5%）或者聚山梨醇酯20（polysorbate 20, 4.0%）。

各国药典微生物方法对比本篇文章旨在比较各国药典中微生物检测方法的不同之处。

微生物检测对于保证药品的质量和安全至关重要，各国药典都提供了相应的指导和标准。

然而，由于各国的文化、法律和技术差异，各国的药典在微生物检测方法上存在一定的差异。

以下将以中括号内的内容为主题，详细介绍各国药典中微生物方法对比。

[美国药典（USP）微生物方法]美国药典（USP）是全球最主要的药典之一，其微生物检测方法有着广泛的应用。

USP推荐的微生物方法主要基于美国食品药品监督管理局（FDA）的要求，主要包括细菌计数、限度测试和特定微生物检测。

其方法的特点在于简单易行、结果可靠且易于验证。

其中，细菌计数方法主要采用菲斯特计数法或冷凝液计数法。

而在限度测试方面，则主要采用的方法是逐级稀释、涂布法和培养法。

USP还明确规定了一些特定微生物的检测方法，如大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌等，其检测方法主要依赖于PCR技术和传统的培养法。

[欧洲药典（Ph. Eur.）微生物方法]欧洲药典（Ph. Eur.）是欧洲地区药典的统一标准，其微生物方法与美国药典存在一定的差异。

Ph. Eur.对微生物检测也有着详细的规定，包括细菌计数、限度测试和特定微生物检测。

在细菌计数方面，Ph. Eur.主要采用薄膜过滤法或蔗糖凝胶法。

而在限度测试方面，Ph. Eur.则主要采用稀释平板法、滚珠法和过滤膜方法。

与USP 不同的是，Ph. Eur.也明确规定了一些特定微生物的检测方法，如霉菌和酵母菌等。

这些检测方法涵盖了PCR技术、酶联免疫吸附试验（ELISA）和传统的培养法。

[中国药典（ChP）微生物方法]中国药典（ChP）是中国主要的药典标准，其微生物方法也存在一定的特点。

ChP的微生物检测主要分为总菌落计数、限度测试和特定微生物检测。

与美欧药典不同的是，ChP对微生物检测方法的规定相对较为简洁。

在细菌计数方面，ChP主要采用的方法有薄膜过滤法、落下法和滚珠法等。

微生物检测非无菌供试品的微生物检测：微生物计数检测修改：生长促进实验，计数方法的适应性以及阴性对照概论在供试品存在的情况下发现微生物检验能力必须被确定。

如果检验过程中发生变更或者供试品变更，且这些变更可能影响检验结果，适应性必须被确认。

检验菌株的准备使用稳定的标准菌悬液或者按照下面所述备制。

使用菌种保存技术（种子批系统），以便用于接种的可萌发微生物从最初的主种子批开始不超过5代。

每种细菌和霉菌菌株的生长分别按照表一中的描述进行。

表一测试微生物的备制和使用使用pH7.0的缓冲氯化钠蛋白胨溶液或者pH7.2的磷酸盐缓冲溶液备制测试菌悬液；备制黑曲霉孢子悬浮液时，0.05%的聚山梨脂80可以被添加到缓冲液中。

测试菌悬液应在两小时内使用，或者在2-8℃的条件下24小时内使用。

也可以通过制备并稀释枯草芽胞杆菌营养细胞的新鲜悬液进行替代，制备稳定的胞子悬液，在接种测试中使用适当体积的胞子菌悬液，稳定的胞子悬液在2-8℃保存，保存期是经过验证的。

阴性对照为了确定检测条件，用选择好的稀释液代替测试备制来进行阴性对照。

必须没有微生物的生长。

当按照供试品检测中的描述进行检验时，也需要进行阴性对照。

如果阴性对照不合格需要进行调查。

培养基的生长促进检测每个批次的已经备制好的培养基以及通过脱水培养基或者描述的配料备制的每个批次的培养基。

在部分/盘大豆酪蛋白消化肉汤培养基以及大豆酪蛋白消化琼脂上接种少量（不超过100CFU）微生物，按表一中所示，每一种微生物应使用单独一部分/一盘培养基。

在沙氏葡萄糖琼脂上接种少量（不超过100CFU）微生物，按表一中所示，每一种微生物应使用单独的一盘培养基。

按照表一中所述的条件进行接种。

固体培养基的生长通过一个不大于2的系数的调节必须不能与标准接种体计算得到的数值有区别。

新鲜备制的接种体微生物的生长应与上一批通过检测的培养基的生长情形相同。

如果肉眼能清晰看到的微生物的生长与上一批通过检测的培养基的生长情形相同的话，液体培养基是适合的。

第一作者简介：解慧，硕士研究生；研究方向：微生物学。

Ｔｅｌ：０２２ ２３５１３９８３；１３８２０２５５３３６；Ｅ ｍａｉｌ：ｘｉｅｈｕｉ０５ｑｓｄ＠１６３ ｃｏｍ《美国药典》（ＵＳＰ４２ ＮＦ３７２Ｓ）通则＜１２２７＞药品微生物回收的验证解慧，刘洪祥，杨倩，曹晓云（天津市药品检验研究院，天津３０００７０）摘要：《中华人民共和国药典》、美国药典（ＵＳＰ）及欧洲药典（ＥＰ）等均指出具有抑菌性产品的微生物计数、检测、抑菌效力检查或无菌检查，应首先中和其抑菌性，并需对中和抑菌性的方法进行验证。

《美国药典》通则＜１２２７＞药品微生物回收的验证首次详细阐释了中和方法验证方案的设计和试验结果的判定，对于完善药品微生物检查方法、保证微生物检测结果准确，具有指导意义。

本文将《美国药典》（ＵＳＰ４２ ＮＦ３７２Ｓ）通则＜１２２７＞章节译出，以期为医药界的科研工作者提供参考。

关键词：美国药典；微生物回收验证；抑菌性中图分类号：Ｒ９２１ ２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００９－３６５６（２０２０）－２－０１４６－４ｄｏｉ：１０ １９７７８／ｊ ｃｈｐ ２０２０ ０２ ０１１Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｆｍｉｃｒｏｂｉａｌｒｅｃｏｖｅｒｙｆｒｏｍｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａａｒｔｉｃｌｅｓｉｎｇｅｎｅｒａｌｎｏｔｉｃｅ＜１２２７＞ｏｆＵＳＰ４２ ＮＦ３７２ＳＸＩＥＨｕｉ，ＬＩＵＨｏｎｇｘｉａｎｇ，ＹＡＮＧＱｉａｎ，ＣＡＯＸｉａｏｙｕｎ（ＴｉａｎｊｉｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ，Ｔｉａｎｊｉｎ３０００７０，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｐｒｏｐｅｒｔｙｓｈｏｕｌｄｂｅｎｅｕｔｒａｌｉｚｅｄｆｉｒｓｔｌｙａｎｄｔｈｅｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｍｕｓｔｂｅｖａｌｉｄａｔｅｄｗｈｅｎｔｈｅｔｅｓｔｓｏｆｍｉｃｒｏｂｉａｌｅｎｕｍｅｒａｔｉｏｎ，ｓｐｅｃｉｆｉｅｄｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ，ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓｏｒｓｔｅｒｉｌｉｔｙａｒｅｐｅｒ ｆｏｒｍｅｄｆｏｒａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｐｒｏｄｕｃｔｓａｓｐｅｒＣｈＰ，ＵＳＰａｎｄＥＰ Ｔｈｅｄｅｓｉｇｎｏｆｖａｌｉｄａｔｉｏｎｐｒｏｔｏｃｏｌｏｆｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎｍｅｔｈ ｏｄａｎｄｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｊｕｄｇｅｍｅｎｔａｒｅｄｅｓｃｒｉｂｅｄｉｎｄｅｔａｉｌｓｉｎｔｈｅｇｅｎｅｒａｌｎｏｔｉｃｅ＜１２２７＞（ＶａｌｉｄａｔｉｏｎｏｆＭｉｃｒｏｂｉａｌＲｅ ｃｏｖｅｒｙｆｒｏｍＰｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａＡｒｔｉｃｌｅｓ）ｏｆＵＳＰｆｏｒｔｈｅｆｉｒｓｔｔｉｍｅ Ｔｈａｔｈａｓｔｈｅｇｕｉｄａｎｃｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｎｉｍｐｒｏｖｉｎｇｔｈｅｍｉｃｒｏｂｉａｌｔｅｓｔｍｅｔｈｏｄａｎｄｅｎｓｕｒｉｎｇｔｈｅａｃｃｕｒａｃｙｏｆｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅｇｅｎｅｒａｌｎｏｔｉｃｅ＜１２２７＞ｏｆＵＳＰ４２ ＮＦ３７２Ｓｉｓｔｒａｎｓｌａｔｅｄｔｏｐｒｏｖｉｄｅｔｈｅｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｅｒｓｉｎｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＵＳＰ；ｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｆｍｉｃｒｏｂｉａｌｒｅｃｏｖｅｒｙ；ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｐｒｏｐｅｒｔｙ１　概述本章节为以下检查方法的验证提供指导：制药产品的存活微生物计数法、指示菌或者控制菌检查法及无菌检查法。

美国药典微生物检测精要引言微生物检测在药品生产中起着至关重要的作用。

药品的微生物污染可能对患者的健康造成严重威胁。

为了确保药品的安全性、可靠性和有效性，美国药典（United States Pharmacopeia, USP）制定了一系列用于微生物检测的指南和标准。

本文将概述美国药典微生物检测的精要内容。

检测方法目视法目视法是最简单、最常用的微生物检测方法之一。

该方法通过对样品进行肉眼观察，检验人员可以检测到样品中是否存在明显的微生物污染。

目视法的优点是操作简单，不需要特殊的设备和试剂，适用于多种药品和原料的微生物检测。

然而，目视法存在主观性和局限性，无法检测到微生物的低水平污染。

营养物质法营养物质法是一种常用的培养基法。

该方法以适宜的培养基为基础，通过对样品进行培养，利用微生物的生长特性来检测样品中是否存在微生物污染。

营养物质法可以检测到微生物的低水平污染，并且可以进一步鉴定和计数微生物。

然而，营养物质法需要一定的培养时间，且存在一定的培养基选择性和适应性的局限性。

生物化学法生物化学法是一种通过检测微生物代谢产物来判断样品中是否存在微生物污染的方法。

该方法利用微生物的代谢反应，检测样品中的特定代谢产物的存在与否。

生物化学法可以快速、准确地检测微生物污染，并且不受培养基选择性和适应性的限制。

然而，生物化学法需要特定的试剂和设备，并且对检测人员的技术要求较高。

检测标准美国药典对药品的微生物检测制定了一系列的标准和要求。

这些标准主要包括微生物限度试验、总微生物数试验、鉴别试验和特定微生物试验等。

微生物限度试验微生物限度试验旨在确定样品中存在的微生物数量的限度。

该试验要求将样品接种在适当的培养基中，经过一定的培养时间后，观察并计数生长的微生物数量。

美国药典针对不同类型的药品和原料制定了不同的微生物限度指标，以确保药品的微生物安全性。

总微生物数试验总微生物数试验用于确定样品中所有可培养的微生物的数量。

该试验要求将样品接种在适当的培养基中，经过一定的培养时间后，观察并计数生长的微生物数量。

它山之石------ USP29“微生物限度检查法”供大家学习参考，我认为USP29内确实有许多值得我们学习的东西，但在编辑《中国药典》时也要考虑到我国实际情况，本着真正能提高药品质量的目的，如一味地照抄照搬别人的东西，就会出现看看药品标准确实是上去了，体面、拿的出去，但在实际应用时不适宜操作，反而降低了对药品质量的控制。

我认为2005年版、2010年版的《中国药典》微生物限度检查法就是如此，2005版药典执行后就开始需要进行药品的验证工作，相同的药品不同的厂家之间要验证；既是同一厂家由于生产原料厂家的改变也要验证，因此各厂家之间出现了五花八门的都称已经验证的检验方法，有的说该方法可行，有的又说该方法不行，天知道这些验证方法的可信度？同时又出台了执行药典通知：以后未经验证的检品不能下“微生物限度检查符合规定”的结论。

我国有这么多的药品生产厂家，作为我国药品的监督检验单位，对药品检验来说怎样去验证，每做一个检品都去验证，这样的工作量现实吗？到今天药典还没有一个对具体样品经验证后较科学的检验方法或指导性方法。

我认为现行的“微生物限度检查”法参照USP的方法对具体的样品验证，并按经验证后的方法进行检验，这确实有利于微生物的检出率，提升药品检验标准。

但应分步进行：可先放在“药典附录指导性原则”内，然后再要求药品生产企业对自己生产的品种进行验证并报地市级以上药品检验所对该方法再次进行检验审核后，再报药典会汇总、审核，在《中国药典》具体品种项下写入检验方法后再开始实施。

目前这一步到位的做法，已从2005年版药典实施开始到2010年版的《中国药典》实施，效果到底怎样？我想：从有关专业杂志的相关文章内也可知一、二。

<61> 微生物限度检查本章所提供的检测程序用于测定包括原料药及制剂在内的各种药品中需氧菌数量以及不含有指定的微生物。

如果已有充分的证据证明某种自动化的方法可以给出与本章所提供的方法等效的或更好的实验结果，可以用该方法替代本章所提供的方法。

美国药典微生物检测精要培训小结一微生物实验室规范重要的控制点：无菌技术、培养基控制、菌种控制、设备操作与控制、数据记录与实验室布局和运作、员工培训等。

1无菌技术：防止和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作方法和管理方法。

可通过无菌环境、灭菌、消毒、卫生要求、无菌操作技术等手段来实现。

2培养基：是微生物实验工作的核心。

包括培养基制备、培养基储存、培养基质量控制。

2.1培养基制备2.1.1根据既定的目的选用正确的培养基2.1.2参考生产商的ＣＯＡ和说明书：关于配制、储存和菌种选用等。

2.1.3所用的水应为去离子水或蒸馏水，应记录用量。

2.1.4成分的称量应用校准过的天平，根据称量量的不同选择合适的天平。

使用清洁的容器和工具（<1051>玻璃器皿清洁）以防外来污染和抑制剂。

应记录称量量。

2.1.5加热帮助溶解时应防止过度加热，通常培养基颜色变深说明加热过度了。

2.1.6灭菌条件：●灭菌参数应验证，验证应同时考虑无菌和培养基生长能力●采用高压蒸汽灭菌或过滤灭菌。

湿热灭菌应考虑装载分布，加热速度过慢会使培养基过度加热，通常为121℃15min，此时间是指培养基温度达到121℃后15min。

●保证最低SAL，在无菌和过度加热之间平衡。

●与污染物分开灭菌●消毒结束后，不应在灭菌柜中储存培养基，过度加热会影响培养基颜色、澄清、pH和凝固能力。

2.2培养基储存2.2.1制备培养基的储存●琼脂培养基易受冷冻影响，低于0℃会破坏凝胶结构。

●应避光避热，密封防止水分蒸发（建议使用螺旋盖的瓶子密封，保存时间长）。

2.2.2培养基融化●不能超过一次，以防过度加热或潜在污染。

●融化可采用水浴、流通蒸汽或微波炉加热。

微波炉加热宜采用少量多次，以防过度。

●培养基融化后在40-50℃水浴中储存不应超过8小时，浇制平皿前应擦干以防污染。

2.2.3培养基标示●培养基名称●批号、制备批号●制备日期、有效期2.2.4有效期确定●根据成分、配方、容器、储存条件等确定●有生长能力试验数据支持2.2.5应在验证过的条件下储存2.2.6重要区域环控用培养基必须●双层包装●最终灭菌，否则进行全数培养及用前检查2.2.7根据当地生物危险品安全程序处置过期培养基2.3培养基质控2.3.1灭菌后培养基检查2.3.1.1生长能力●每批制备的培养基均需进行●测试菌种根据药典，供应商说明书及环境中分离得到●测试不合格应进行调查，如无原因，或无有效纠正措施，不得使用该批号2.3.1.2无菌2.3.1.3pH2.3.1.4容器/平皿的完整性2.3.1.5抑制或指示能力2.3.2定期稳定性检查以确认储存有效期3菌种保藏3.1建立标准程序处理、保存菌种，防止污染和特性变化3.2使用前确认菌种身份和纯度3.3根据生产商说明书复苏菌种，使用接种技术3.4-70℃以下或冷冻干燥保存储备菌种，可延长保存周期3.5开启后不要重新冷冻菌种，剩余部分应弃置3.6传代次数（每接种一次即为一代）不超过5次3.7保藏时间根据具体保藏条件确定4设备维护4.1定期校准、保养4.2定期性能检查4.3定期清洁、消毒5实验室布局和运作5.1防止交叉污染5.2活动分区：无菌、环控样品的处理和培养应在无菌环境中进行5.3当发现微生物生长，后续的工作应转移至“阳性”区5.4环控设备应放置在待取样区域环境中并小心操作5.5应在受控条件下小心取样6样品处理6.1大部分样品、水或环控样品中的微生物对操作、储存环境敏感6.2减少样品，取样与测试间的时间间隔6.3长时间的转移需确认转移条件对测试及样品的影响6.4在无菌条件下，使用无菌技术取样，即使是非无菌样品6.5取样记录：样品信息、取样日期、送样日期、人员/部门、实验室样品接受及确认7培养基培养时间7.1短于3天，用小时表示7.2长于3天，用天表示（上午、下午，相同时间段）8人员培训8.1每个岗位应有相应培训要求，进行上岗前资质确认9实验室文件9.1微生物人员培训和能力确认（上岗资质）9.2设备验证、校准和维护9.3测试中的设备性能（如温度记录）9.4培养基制备、无菌检查、生长能力测试、选择性测试9.5培养基清单与控制9.6根据程序（ＳＯＰ）进行测试的重要数据9.7数据和计算的确认9.8经ＱＡ人员或相应领导审核过的报告9.9超标结果调查10实验室结果维护10.1检测报告至少应包括：●日期●测试样品●微生物检验人员名字●程序编号●测试结果●偏差（如有）●测试参数（设备、菌种、培养基）●管理人员审核签名10.2数据纠错：错误的地方划一横线，签名和日期，必要时说明原因10.3测试结果●应包含平皿计数结果（如有）●数据分析方法应罗列在相关ＳＯＰ中●对粘贴的图表、数据骑缝签名10.4存档：记录应存档并防止丢失，应有记录留存计划11测试结果解释11.1微生物数据有时不容易解释●与人类相关的微生物群落被广泛的用于许多测试●人员污染是始终被关心的问题●样品或环境中的微生物并非均匀分布●微生物检测可变范围大：可能在+/-0.5log10单位左右11.2不符合的结果可能是由2个原因造成的：实验室错误或产品不符合。

61微生物限度检测（MICROBIAL LIMIT TESTS）此章提供方法来检测可能存在的好氧微生物其他制药过程中可能出现的微生物的数量，包括原材料和成品中的。

如果经过验证确认可以得到相同或更好的检测结论，也允许采用自动化的检测方法。

在样品检测过程中须进行无菌操作。

若无特别说明，则“培养（incubate）”一词指在30—35℃的培养箱内培养24至48小时；“生长（growth）”一词用于专门的判定，说明“存在和可能存在活的微生物”。

准备实验 (Preparatory Testing)本章涉及实验结果的有效性取决于：提供的被检测样品本身在实验条件下，被充分证明不会抑制可能存在的微生物的生长。

因此，在准备样品时，需要正规的实验操作和符合要求的实验条件，接种稀释样品到含有以下（微生物）培养物的培养基：金黄色（奥里斯）葡萄球菌（Staphylococcus aureus）,大肠埃希氏菌（Escherichia coli）, 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa), 和沙门氏菌（Salmonella）。

方法如下：将用肉汤培养基培养24小时后的（微生物）不小于10-3稀释的微生物培养物，加1 ml（微生物）培养液到磷酸(盐)缓冲液(pH 7.2)，液体大豆酪蛋白消化物培养基（Fluid Soybean-Casein Digest Medium），或者液体乳糖培养基（Fluid Lactose Medium）。

相应培养基培养失败则需要采取以下方法更改检测程序：（1）增加稀释液体积，检测样品加入量仍维持不变；或者（2）中和一定数量的干扰因子；或者（3）结合（1）、（2）得出适当条件，使接种物得以生长。

以下是一些物质的成分和浓度，该物质及浓度可用于加入培养基、阻止物质发挥抑菌作用：大豆卵磷脂（soy lecithin, 0.5%）或者聚山梨醇酯20（polysorbate 20, 4.0%）。